As2O3对KM3细胞端粒酶及其逆转录酶作用的研究

为了探讨三氧化二砷(As2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3的作用及其可能机制，用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率，用光镜、透射电镜观察形态变化，用DNA电泳观察As2O3诱导KM3细胞凋亡，用流式细胞仪检测细胞周期的变化，用TRAP-PCR-EUSA法检测As2O3作用KM3细胞后的端粒酶活性变化，并用半定量RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)的表达水平。结果表明：As2O3抑制KM3细胞的生长，具有诱导细胞凋亡的作用；As2O3阻滞细胞于G2期；As2O3可抑制KM3细胞的端粒酶活性和hTERTmRNA的表达，且hTERTmRNA下降趋势与端粒酶活性相一致。结论：端粒酶及其逆转录酶活性的下调可能在As2O3诱导KM3细胞凋亡的过程中起了重要作用。     

三氧化二砷、人参皂甙和β榄香烯对K562细胞株端粒-端粒酶系统作用机制的研究

本研究目的是探索三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯等几种药物在不同浓度作用时对K562细胞株端粒长度和端粒酶活性的调节及抑制作用，并研究上述药物抗白血病的作用机制，为寻求治疗急性白血病的新方法奠定基础。用3组不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯与人类红白血病细胞株K562共培养，采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性，Southem blot法检测端粒长度。观察上述药物对K562细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。结果表明：①经人参皂甙、三氧化二砷及β榄香烯作用后，K562细胞株端粒酶活性下降，下降程度呈浓度、时间依赖性，在一定浓度及作用时间后端粒酶呈阴性。②三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯作用后K562细胞的存活率下降，且抑制作用呈浓度、时间依赖性。③三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯作用于K562细胞72小时后，端粒长度略有延长。结论：①三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯均能抑制K562细胞的端粒酶活性，抑制作用呈浓度、时间依赖性。抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一。②三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯均能抑制K562细胞的生长，抑制作用呈浓度、时间依赖性。③抑制端粒酶活性后，K562细胞的端粒长度略有延长。本研究结果提示除了端粒酶以外，白血病细胞可能存在其他的端粒长度调节机制。     

三氧化二砷诱导MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控研究

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导人类骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型（MDS—RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控机制，采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP—ELISA）检测端粒酶活性；RT—PCR法检测端粒酶逆转录酶（hTERT）、TRF1（TTAGGG repeat binding factor 1）、TRF2（TTAGGG repeat binding factor 2）、bcl-2、bax等基因mRNA水平的表达；磷脂酰丝氨酸（PS）转位等方法检测细胞凋亡，结果表明：1—8μmol／L As2O3诱导MUTZ-1细胞凋亡呈时间、浓度依赖关系。在该浓度范围内，As2O3可下调细胞端粒酶活性。且端粒酶活性下调与凋亡细胞阳性率呈明显负相关（r=一0．938，P=0．018）。MUTZ-1细胞经As，01作用后，hTERT基因mRNA表达下调，并与端粒酶活性变化呈正相关（r=0．783，P=0.022），但As2O3对TRF1及TRF2基因mRNA表达没有明显影响.MUTZ-1细胞端粒酶活性受抑制同时，伴有bcl-2 mRNA表达下调及bcl-2／bax比值下降结论：As2O3可能通过抑制细胞端粒酶活性及hTERT表达，诱导MUTZ-1细胞凋亡。As2O3抑制MUTZ-1细胞端粒酶活性可能是诱导该凋亡机制之一。     

三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯联合环磷酰胺对K562细胞株端粒-端粒酶系统的作用

本研究探索三氧化二砷、人参皂甙、B榄香烯单独及联合环磷酰胺应用对K562细胞株端粒长度和端粒酶活性的调节作用，探讨上述药物抗白血病的作用机制。用不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙及B榄香烯单独及联合环磷酰胺与人类红白血病细胞株K562共培养，采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性、Southern杂交法检测端粒长度。观察上述药物对K562细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。结果表明：①经人参皂甙、三氧化二砷、B榄香烯及环磷酰胺作用后，K562细胞株端粒酶活性下降，下降程度呈浓度时间依赖性。当与环磷酰胺联合应用后，下降程度更明显。②三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯作用后K562细胞的存活率下降，且抑制作用呈浓度、时间依赖性。当与环磷酰胺联合应用后，抑制作用更明显。③三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯及环磷酰胺作用于K562细胞株72小时后，端粒长度略有延长。结论：三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯及环磷酰胺均能抑制K562细胞株的生长及端粒酶活性，抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一；三氧化二砷、人参皂甙、β榄香烯与环磷酰胺联合应用后抑制作用增强；联合环磷酰胺可望降低上述药物的给药浓度。抑制端粒酶活性后，K562细胞株的端粒长度略有延长，提示除了端粒酶以外，白血病细胞可能存在其他的端粒长度调节机制。     

三氧化二砷对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响

目的研究三氧化二砷(AsO3)对人宫颈癌Hela细胞的体外生长的影响，初步探讨其作用机制。方法MTT比色法检测细胞生长抑制作用。光镜下观察细胞凋亡形态学的变化。流式细胞术检测各期细胞分布及细胞凋亡率。结果三氧化二砷能以浓度依赖和时间依赖方式显著抑制Hela细胞生长，阻滞Hela细胞于C2／M期，并诱导凋亡。结论三氧化二砷可显著抑制Hela细胞的体外生长，诱导凋亡可能是其作用机制之一。     

AZT对白血病细胞株KG-1a细胞增殖和端粒酶活性的影响

本研究探索端粒酶抑制剂3’-叠氮-2’,3’-脱氧胸腺核苷(AZT)对人急性髓系白血病细胞株KG-1a细胞增殖和端粒酶活性的影响。用MTT法检测不同浓度AZT分别作用24、48、72 h时KG-1a细胞增殖水平;流式细胞术检测AZT对KG-1a细胞周期及细胞凋亡的影响;TRAP-PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性;RT-PCR法检测细胞端粒逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。结果表明,AZT能抑制KG-1a细胞增殖,抑制作用具有时间和浓度依赖性;随AZT浓度的增加,处于S期的细胞数目减少,G2/M期细胞数目增加,且出现凋亡峰;AZT作用后实验组细胞的端粒酶活性降低,hTERT-mRNA表达下降,下调程度与AZT浓度呈正相关。结论:AZT在体外能明显抑制KG-1a细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制与降低端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。     

亚硒酸钠和三氧化二砷诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡机制的比较

为比较亚硒酸钠（Na2SeO3）和三氧化二砷（As2O3）诱导NB4细胞凋亡的作用机制，本研究应用MTT实验、DNA琼脂糖电泳，细胞内DNA含量检测研究细胞生长抑制和细胞凋亡，用化学发光法，化学比色法检测细胞内活性氧和还原型谷胱甘肽，用流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位，结果显示：5μmol/L亚硒酸钠和1μmol/L三氧化二砷作用24小时后均能诱导NB4细胞凋亡。在诱导细胞凋亡的过程中，亚硒酸钠和三氧化二砷组均伴有细胞内活性氧水平的提高和线粒体膜电位下降，但在亚硒酸钠组还伴有细胞内还原型谷胱甘肽下降，用N乙酰半胱氨酸提高细胞内还原型谷胱甘肽后，增强了硒诱导NB4细胞细胞和氧化应激的作用，但是抑制了砷诱导细胞凋亡和氧化应激的作用。结论：亚硒酸钠和三氧化二砷同样可以诱导NB4细胞的凋亡，但是二的作用机制可能存在差异。     

罗格列酮诱导白血病NB4细胞凋亡的作用及机制探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)时白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的RGZ(20-80 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用RT-PCR法检测PPARγ的表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.应用Western blot检测60 μmol/L的RGZ作用不同时间后凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平,同时检测不同浓度药物作用不同时间后Caspase-3活性的变化.结果:40μmol/L以上的RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.RGZ在诱导细胞凋亡的同时.PPARγmRNA的表达水平逐渐升高.而凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平显著下降.Western blot结果还显示Caspase-3被活化出现20 kD亚单位片段.结论:RGZ可以通过PPARγ信号途径抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,下调凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平以及激活Casapse-3可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌和白血病细胞系凋亡的调控作用

为了观察化疗药物三尖杉酯碱（HRT），长春新碱（VCR）和依托泊苷（VP-16）抑制肝癌细胞系SMMC7721和白血病细胞系K562细胞增殖，促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶（ERK）磷酸化蛋白表达水平的变化。应用MTT，流式细胞术，端粒重复序列扩增法（TRAP），生物发光分析及Western印迹等方法进行了检测和分析，研究结果发现，一定浓度的化疗药物作用24小时后，可以抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡；在同样作用条件下，端粒酶活性和磷酸化ERK1/2的表达也受到一定程度的抑制，其中以HRT的作用最明显，结论：HRT，VCR和VP-16可能是通过抑制Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号传导通路，降低ERK活性，减少ERK1/2靶基因的转录活化，间接下调端粒酶活性这一共同的作用机制而发挥作用的；细胞凋亡是端粒持续缺失的结果。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞的影响

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后，观察细胞形态变化，检测细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端合成，从而抑制胃癌细胞的增殖。     

三氧化二砷对HL-60细胞和人白血病裸鼠移植瘤模型的作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其对HL-60细胞皮下移植瘤裸鼠的抗瘤作用和药物毒性。方法:不同浓度的As2O3处理HL-60细胞24h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,Hochest33342染色、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。建立皮下移植瘤裸鼠模型,随机分入对照组和As2O3组,比较两组的抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化。结果:As2O3可有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其中在5～50!mol/L浓度范围内表现出明显的剂量依赖性抑制效应。同时可显著抑制HL-60细胞皮下移植瘤的生长,并延长荷瘤裸鼠的生存时间,对裸鼠一般状况和体重无不良影响。结论:As2O3在体外和体内均可显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,且无明显毒副作用。     

As2O3对乳腺癌细胞系MDA—MB-435s作用的研究

目的：探讨不同浓度三氧化二砷（As2O3）对人乳腺癌细胞系MDA—MB-435s的生长抑制作用及其机理。方法：不同浓度As2O3作用于体外培养细胞MDA—MB-435s，采用MTT法检测细胞生长，倒置显微镜观察细胞形态，并通过DNA梯状电泳和TUNEL检测凋亡。结果：As2O3剂量依赖性抑制细胞生长；观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变；琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡DNA梯状条带；As2O3作用组的凋亡指数明显高于阴性对照组（P〈0．05）。结论：As2O3具有抑制乳腺癌MDA—MB-435s细胞生长的作用，其机理与诱导细胞凋亡有关。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞系SKOV3细胞凋亡的作用和机制

目的观察三氧化二砷(ATO)诱导人卵巢癌细胞系SKOV3细胞的凋亡作用和凋亡通路分子caspase 3、PARP,凋亡相关蛋白p-AKT、AKT蛋白表达的变化。方法分别用不同剂量的三氧化二砷作用人卵巢癌细胞系SKOV3细胞,应用MTT比色法检测培养48 h的细胞存活率,应用流式细胞仪测定培养48 h细胞凋亡的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白caspase 3、PARP和凋亡相关蛋白p-AKT、AKT的表达情况。结果 MTT示三氧化二砷能明显抑制SKOV3细胞增殖;流式细胞术显示三氧化二砷诱导SKOV3细胞凋亡,且具有明显的剂量依赖性;Western blotting检测发现药物能显著下调caspase 3、PARP、p-AKT的表达水平。结论三氧化二砷能显著抑制人卵巢癌细胞系SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,激活凋亡通路分子caspase 3、PARP,下调p-AKT蛋白表达水平,这可能是三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞SKOV3细胞凋亡的作用机制。     

三氧化二砷对HL-60细胞及NB4细胞端粒酶活性的调节

目的 了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对ＨＬ－６０细胞及ＮＢ４细胞端粒酶活性的调节作用。方法 利用透射电镜、流式细胞仪、半定量端粒重复扩增、－银染色等手段,检测细胞的分化、凋亡,ｂｃｌ－２表达及端粒酶活性。结果 低浓度Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０及ＮＢ４细胞的诱导分化作用不及全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）,但对其端粒酶活性的下调作用却比ＡＴＲＡ强烈和迅速。较高浓度Ａｓ２Ｏ３在有效诱导两种细胞凋亡过程中,伴随粒酶活     

一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响

背景：近年来有将三氧化二砷试用于T细胞肿瘤的有效报道,但未见其治疗机制的相关研究。目的：检测三氧化二砷对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制增殖、诱导凋亡及细胞周期的影响。方法：分别采用MTT、PI单标记流式细胞术和TUNEL法检测2,5,10μmol/L的三氧化二砷干预24,48,72h,对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响,及其凋亡相关基因bcl-2及血管内皮细胞生长因子基因表达的变化。结果与结论：在一定的浓度范围内,三氧化二砷对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调血管内皮细胞生长因子基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用;三氧化二砷可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2～M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关。三氧化二砷对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用呈时间剂量依赖性。     

三氧化二砷对NB4及Jurkat细胞系端粒酶活性的抑制效应

为了探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞系NB4及Jurkat细胞端粒酶活性的调节作用和机制，采用MTT、基因组DNA电泳、蛋白／DNA双参数流式细胞术，端粒重复扩增(TRAP)-SYBR Green I染色及RT—PCR等方法研究了As2O3对两种细胞的增殖及端粒酶活性的影响。研究发现，随着As2O3作用时间的延长，NB4及Jurkat细胞增殖明显受到抑制，DNA电泳出现“梯状”条带；流式细胞术检出亚Gl峰，细胞周期阻滞于Gl和G2／M期，端粒酶活性显著降低，部分细胞周期及凋亡相关的调控蛋白的表达发生变化。结论：As2O3在抑制NB4及Jurkat细胞增殖和诱导其凋亡过程中导致端粒酶的活性下调，细胞周期及凋亡相关蛋白的表达改变可能参与了部分作用机制。