大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外培养和鉴定

目的 建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的改良体外原代培养法，并比较其鉴定方法的优劣。方法 ＡＴ－Ⅱ分离、用胰蛋白酶消化地并用ＩｇＧ包被的培养瓶粘附纯化，原代培养后通过鞣酸多彩、碱性磷酸酶（Ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）、肺表面活必不知所措霜关蛋白Ａ（ＳＰ－Ａ（）免疫组化三种染色法和电镜鉴定ＡＴ－Ⅱ。结果 胰酶消化加ＩｇＧ粘附纯化后所得的ＡＴ－Ⅱ纯度为９０％。ＡＫ 色鉴定     

急进高原大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构与肺泡液体清除率变化

目的 研究急进高原肺损伤大鼠肺脏超微结构及肺泡液体清除率(alveolar liquid clearance,ALC)的变化规律,并探讨二者间的内在关系.方法 将大鼠暴露于高原低氧环境,分别于1、24、48、72 h测定基础ALC,取病理切片观察肺脏超微结构的变化.并对上述结果进行相关分析.结果 急进高原大鼠暴露于高原低氧24 h后ALC (22.60±3.41％)与正常大鼠ALC(41.14±9.36％)比较有明显变化(P＜0.05),内皮细胞出现损伤,而上皮细胞无明显结构变化;48 h时ALC(25.28±6.30％)明显降低(P＜0.05),肺泡上皮细胞的结构和上皮细胞间的紧密连接并无明显损伤;72 h ALC(45.52±10.05％)无明显变化(P＞0.05),但肺泡上皮细胞结构被破坏.结论 高原低氧致急进大鼠ALC降低,但肺泡上皮屏障结构无明显改变,提示急进高原大鼠肺泡内液体的储积与钠水通道有关.     

吸入石英粉尘对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

对大鼠吸入石英粉尘后肺泡Ⅱ型上皮细胞（Ｔ＿Ⅱ）的变化进行了形态学观察和定量分析。９个月的实验结果表明，石英粉尘导致Ｔ＿Ⅱ增生，且呈双相反应，染尘结束后０～４周、和９个月为两个增生高峰期。Ｔ＿Ⅱ胞浆内板层体（ＬＢ）数量增多，肺泡腔内含大士游离ＬＢ，管样髓磷脂。提示增生Ｔ＿Ⅱ合成和分泌表面活性物质的功能增强。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺移植中的作用及其进展

随着医学的迅速发展 ,大器官的移植 (如肺移植等 )已成为世界医学研究的热点。到 90年代末 ,全世界已进行肺移植的患者达 35 0 0多人 ,1年存活率为 93% ,5年存活率为 4 0 % ,最长存活时间为 10年 ,显示了肺移植的诱人前景。但是 ,与其它器官移植一样 ,肺移植中同样存在移植肺的保存、缺血再灌注、术后感染、急慢性排斥反应等。1　肺移植与肺泡Ⅱ型上皮细胞[1]目前认为 ,脏器获取前血液动力学的不稳定状态、移植肺再灌注、术后感染、排斥都是导致肺移植后高死亡率的原因。肺移植后肺功能障碍、肺部免疫力低下和存活期较短的重要原因是肺部感…     

急性呼吸窘迫综合征大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构观察

目的 观察急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构。方法 建立大鼠油酸性ARDS模型，对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化，电镜鉴定并观察超微结构的变化。结果 电镜下ARDS大鼠Ⅱ型上皮细胞胞质内板层小体排空明显而致空泡化。结论 分离纯化细胞后更易观察到Ⅱ型细胞的形态学改变，板层小体的变化最为突出提示肺泡Ⅱ型上皮细胞在ARDS中可能起重要作用。     

肺纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞的影响及相关机制的探讨

目的:探讨肺间质纤维化形成过程中肺泡Ⅱ型上皮细胞对肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达的影响和调控作用机制.方法:28只SD大鼠随机分为平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型,生理盐水组气管内注射等量生理盐水.分别于7,28天各处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组3只及生理盐水组3只提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,平阳霉素组6只提取肺成纤维细胞,分别进行培养.至2种细胞到亚汇合状态时,实验组即:用平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h;对照组即:用生理盐水组肺泡Ⅱ型上皮细胞上清液培养平阳霉素组肺成纤维细胞48h,然后用半定量RT-PCR法检测肺成纤维细胞FSP1,TGF-β,HGFmRNA表达量的变化.平阳霉素组及生理盐水组各余1只用作HE染色.结果:(1)实验组7天,28天FSP1mRNA,TGF-βmRNA,HGFmRNA表达均高于对照组(P＜0.01),(2)第7,28天实验组FSP1mRNA,TGF-βmRNA表达无明显差别(P＞0.05),实验组28天HGFmRNA表达高于第7天(P＜0.01).结论:平阳霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞能够促进肺成纤维细胞FSP1mRNA、TGF-βmRNA的表达,能够促进纤维化的进展.     

钌红染色对研究肺泡Ⅱ型上皮细胞的价值

目的 观察钌红染色方法对博莱霉素（BLM）肺损伤早期肺表面活性物质（PS）的超微结构的效果。方法 BLM气管内滴注制作大鼠肺损伤模型，分为3，7，14和28d组，用钌红行肺组织标本染色，观察PS的改变与肺泡Ⅱ型上皮细胞（AT－Ⅱ）结构变化间的关系。结果 注药后各组均可见PS层丧失连续、均匀绒状结构，脱落入肺泡腔或聚集成块或散落于肺泡腔内，以3d组较为明显。钌红阳性表面层的厚度与对照组比较，3d组较厚（P＜0．01），且染色深，7及14d组无明显差别，28d组较淡薄（P＜0．01）。相应的3及7d组可见AT－Ⅱ变性坏死，甚至崩解，以3d组较明显。各组均可见AT－Ⅱ增生，以7d组较明显。板层小体3d组数量减少，并呈空泡状。7d组开始增多，以14及28d组较为明显。14d组可见有AT－Ⅱ转化为AT－I，并逐渐伸展、粘附子裸露基底膜。结论 钌红染色法可敏感显示BLM损伤AT－Ⅱ后PS的形态特征而直接反映AT－Ⅱ增殖活性的变化。     

内毒素对鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞钠泵的影响及机制

目的观察内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)钠泵的影响。方法 ATⅡ细胞成功分离纯化后随机分为两组:①对照组(PBS);②LPS组(1μg/mL)药物干预4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基mRNA的表达;免疫组化法检测钠泵α1、β1亚基蛋白的表达;用高效液相法测定细胞ATP、ADP、AMP和腺嘌呤核苷酸总量(TAN),间接测得钠泵的活性。结果 RT-PCR结果显示:LPS组α1、β1亚基的mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05);酶活性检测结果显示:LPS组钠泵活性较对照组明显增高(P<0.05);免疫组化结果显示:ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基蛋白均有表达,各组亚基蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论内毒素能下调ATⅡ细胞钠泵α1、β1亚基的mRNA表达,应激调节钠泵活性,但对蛋白表达无明显影响,提示钠泵的变化可能与内毒素性肺损伤有关。     

吸入石英粉尘对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

对大鼠吸入石英粉尘后肺泡Ⅱ型上皮细胞（Ｔ１）的变化进行了形态学观察和定量分析。９个月的实验结果表明，石英粉尘导致Ｔ，增生，且呈双相反应，染尘结束后０￣４周、和９个月为两个增生高峰期。Ｔ；胞浆内板层体（ＬＢ）数量增多，肺泡腔内含大量游离ＬＢ，管样髓磷脂。提示增生Ｔ；合成和分泌表面活性物质的功能增强。     

肺纤维化形成过程中大鼠成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的:研究在平阳霉素诱导的大鼠肺纤维化形成过程中肺成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响。方法:先将大鼠分成平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉素组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模型(平阳霉素3mg/kg),生理盐水组气管内注射等量生理盐水,分别于7,28 d处死平阳霉素组大鼠10只,生理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组及生理盐水组各取3只提取肺成纤维细胞,平阳霉素组6只提取大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,分别进行培养。待两种细胞均已贴壁后,再进行如下分组即:①实验组:用平阳霉素组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h;②对照组:用生理盐水组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h。用半定量RT-PCR法检测实验组和对照组中肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-A、TGF-β及HGF mRNA表达的变化。结果:①SP-A mRNA和HGF mRNA的表达实验组低于对照组(P相似文献   

体外循环血清对培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的研究

目的 探讨体外循环（ＣＰＢ）血清对肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的损伤作用。方法 原代培养大鼠ＡＴ－Ⅱ,并与ＣＰＢ血清共同孵育后观察其形态及生化指标变化和还原型谷胱甘肽（Ｒ－ＧＳＨ）的保护作用。结果 培养液中ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＡＫＰ增加,细胞凋亡率上升,Ｒ－ＧＳＨ能减轻细胞损伤。结论 ＣＰＢ血清能直接损伤ＡＴ－Ⅱ,氧自由基可能是主要原因,这可能是术中肺表面活性物质减少的重要原因。Ｒ－ＧＳＨ在体外能     

不同体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外生长状态的影响

目的:探讨不同氧体积分数状态下,胎鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cell,AECⅡ)体外生长状态的变化.方法:原代培养胎鼠AECⅡ并用电镜鉴定;建立氧体积分数0.95组(95%O2)、氧体积分数0.4组(40%O2)和空气组(21%O2)3种氧化损伤性细胞模型,各自暴露12、...     

Ru486对胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞的影响

为研究糖皮质激素的可能作用位点，以分离培养的肺Ⅱ型上皮细胞为主要材料，通过板层小体染色的方法，观察Ｒｕ４８６对该细胞的影响，结果显示，无血清培液中Ｒｕ４８６１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ至培养第１ｄ或１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ培养至第３ｄ时均使Ⅱ型细胞出现坏现象，但加入地塞米松（ＤＥＸ）１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ４ｈ后再用Ｒｕ４８６则坏死现象消失，由此从形态学角度证实了肺Ⅱ型上皮细胞具有糖皮质激素受体，Ｒｕ４８６是通过     

肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究进展

 肺泡Ⅱ-型上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cell,AT2)是构成哺乳类动物肺泡上皮的主要细胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物质的主要细胞。近年来研究发现其合成和分泌功能受多种体液及环境因素的影响和调控,并涉及多种相关基因、蛋白及信号通路。AT2具有增殖、分化及修复功能,其异常转分化可能与肺纤维化及肿瘤发生有关。AT2在维持肺泡内液体平衡中发挥重要作用,并受多种体液与炎症因子调控,可能参与肺损伤和肺水肿的病理过程。AT2参与固有免疫及免疫调节机制,可向T细胞呈递抗原并调节T细胞的分化。对肺泡Ⅱ 型上皮细胞功能的研究有助于理解肺泡生理功能和多种肺部疾病的发病和病理过程,对其功能调节机制的研究在多种肺部疾病的防治中有临床应用前景。     

体外膜肺治疗呼吸功能衰竭的实验研究

目的　通过体外膜肺治疗Ⅱ型呼吸功能衰竭。方法　随机选择 8条成年杂种犬制成Ⅱ型呼衰模型。采用颈静脉—颈动脉转流方式 ,与人工膜肺连接治疗低氧、高碳酸血症。分别于转流前 ,转流 30′、6 0′、90′及 12 0′采取血标本进行血气分析。结果　动脉血氧饱和度平均达 94% ,动脉血氧分压PaO2 上升至 15 2± 2 1kPa ,动脉血二氧化碳分压PaO2 由转流前 11.8± 0 .5kPa ,降为 6 .9± 0 .4kPa。结论　体外膜肺能有效治疗Ⅱ型呼衰     

组蛋白修饰对COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞趋化因子表达的影响

目的探讨COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)炎症因子表达是否与组蛋白修饰有关。方法熏烟法建立大鼠COPD模型。取大鼠肺组织进行病理观察,提取AECⅡ进行碱性磷酸酶染色鉴定和电镜鉴定;实时定量PCR检测AECⅡ三种趋化因子:单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、IL-8及巨噬细胞炎性蛋白2α(MIP-2α)的mRNA表达;Westernblot检测组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)蛋白表达;染色质免疫共沉淀(ChIP)检测趋化因子启动子区组蛋白H3、H4乙酰化和H4K9甲基化修饰情况。结果 COPD组IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA表达较正常对照组分别增加4.48倍、3.14倍、2.83倍;COPD组AECⅡ细胞HDAC2蛋白表达较正常对照组降低(0.25±0.15比0.66±0.15,P0.05),且HDAC2的下降程度与IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA表达增高程度呈负相关(r值分别为-0.960、-0.914、-0.928,P均0.05)。COPD组趋化因子基因启动子区H3、H4乙酰化水平较正常对照组均升高,H4K9甲基化水平则降低(P均0.05)。结论 COPD模型大鼠AECⅡ的IL-8、MCP-1、MIP-2α三种趋化因子基因表达增加,HDAC2介导的组蛋白修饰在COPD炎症反应中发挥重要作用。     

周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞早期凋亡现象

目的 应用细胞力学的方法探讨周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞,并观察其早期凋亡现象.方法 周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,首先观察细胞在不同机械力作用下的凋亡情况,分为对照组和机械牵张组(5%、15%、30%应力,0.5 Hz,机械牵张4 h).然后给予细胞应力15%、0.5 Hz、机械牵张0～8 h,观察在不同时间点的细胞凋亡.最后给予细胞应力15%,周期性牵张4 h,牵张频率分别为0、0.2、0.5和1 Hz,观察不同周期频率的机械牵张时细胞凋亡情况.采用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 周期性牵张肺泡上皮细胞A549、0.5 Hz和机械牵张4 h后,细胞早期凋亡随着牵张应力的增加而增加.当给予细胞15%应力和0.5 Hz的机械牵张后,随着牵张时间的延长,早期凋亡细胞的比率增加.给予细胞15%应力,周期性牵张4 h,随着牵张频率的增加早期凋亡的细胞也显著增加.结论 机械应力刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞可导致细胞凋亡,这在细胞力学水平为机械通气所致肺损伤提供了实验依据.     

周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞早期凋亡现象

目的应用细胞力学的方法探讨周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞,并观察其早期凋亡现象。方法周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,首先观察细胞在不同机械力作用下的凋亡情况,分为对照组和机械牵张组(5%、15%、30%应力,0.5 Hz,机械牵张4 h)。然后给予细胞应力15%、0.5 Hz、机械牵张0~8 h,观察在不同时间点的细胞凋亡。最后给予细胞应力15%,周期性牵张4 h,牵张频率分别为0、0.2、0.5和1 Hz,观察不同周期频率的机械牵张时细胞凋亡情况。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果周期性牵张肺泡上皮细胞A549、0.5 Hz和机械牵张4 h后,细胞早期凋亡随着牵张应力的增加而增加。当给予细胞15%应力和0.5 Hz的机械牵张后,随着牵张时间的延长,早期凋亡细胞的比率增加。给予细胞15%应力,周期性牵张4 h,随着牵张频率的增加早期凋亡的细胞也显著增加。结论机械应力刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞可导致细胞凋亡,这在细胞力学水平为机械通气所致肺损伤提供了实验依据。     

利多卡因对哮喘大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞影响的实验观察

目的:探讨利多卡因对哮喘大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)的影响.方法:用卵白蛋白(OVA)制备Wi star大鼠哮喘模型并用利多卡因雾化吸入进行干预.采用硝酸还原酶法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中一氧化氮(NO)浓度;分离和纯化AT-Ⅱ,利用吖啶橙(AO)荧光染色法检测AT-Ⅱ细胞的损伤率,并与NO浓度进行相关分析.结果:哮喘组BALF中N0浓度显著高于正常对照组(P＜0.01)和利多卡因组(P＜0.05);哮喘组AT-Ⅱ细胞损伤率分别高于正常对照组(P＜0.01)和利多卡因组(P＜0.05);BALF中N0浓度与AT-Ⅱ细胞损伤率呈显著正相关(r=-0.903,P＜0.01).结论:哮喘时AT-Ⅱ细胞损伤增加与体内NO的合成和释放增多有关,而利多卡因有降低BALF中N0水平及AT-Ⅱ细胞保护作用.