酶标抗体的制备及细胞内病毒和立克次体抗原的检出

用三种不同方法提取的抗体IgG与辣根过氧化物酶按戊二醛一步法和二步法制备酶标抗体。酶标抗体经免疫化学和免疫组织化学鉴定,初步认为可供光学显微镜检出细胞内病毒和立克次体抗原应用。乙型脑炎病毒感染小白鼠脑石蜡切片间接法酶标抗体染色的结果表明:脑干神经核和皮层海马回等部位的感染神经元的胞体、轴突及树突内均可检出棕黄色颗粒样抗原-抗体反应沉淀物。斑点热立克次体自然感染蜱血淋巴涂片的直接法和间接法酶标抗体染色均显示阳性反应。     

山西省215例自然流产患者心磷脂抗体及抗β2糖蛋白抗体分析

目的 对山西省215例自然流产患者进行抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)及抗β2糖蛋白抗体(anti-beta 2-glycoproteinⅠantibody,aβ2-GPⅠ)分析,探讨两神抗体与自然流产的相关性.方法215例自然流产患者与100例健康对照者分为两组,采用间接酶联免疫法分别检测IgG型和IgM型ACA以及aβ2-GPⅠ,并用多因素logistic回归分析其相关性.结果IgG型ACA、IgM型ACA和aβ2-GPⅠ、年龄、有无用药史及有无家族史与自然流产的发生有关,未发现相对体质量与自然流产的发生相关.多因素logistic回归分析显示,IgG型ACA、aβ2-GPⅠ、用药史及家族史与自然流产相关.结论ACA和aβ2-GPⅠ与自然流产关系密切,两类抗体联合检测有助于该疾病诊断.     

兔抗鼠单克隆乙型肝炎核心抗体独特型的研究

自从提出免疫网络学说以来,抗独特型(anti-idio-type,简称抗Id)的研究受到重视。我们用小鼠单克佳抗-HB_c(MC抗-HB_c)IgG及其Fab片段免疫家兔进行特异性抗Id制备。为了连续观察免疫过程中动物产生抗Id的状况,建立了两种特异检测抗Id的方法,即ELISA中和法和抗原-抗体结合抑制法,来测定一系列稀释的待检兔血清中抗Id水平。前法系在待检兔血清中加入正常Balb/c小鼠(NBM)IgG中和掉抗同种型和同种异型抗体从而单独检出抗Id,如不加中和抗原即可检出抗鼠IgG/Fab的总抗体水平;后法是将待检标本与酶标记Id抗体共同温育,如标本中存在抗Id即可抑制Id抗体与抗原HB。Ag的结合。用兔抗鼠IgG做对照试验证实上述两法可以排除抗同种型和同     

碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶标技术的建立及应用

碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶标技术是近10年来发展起来的一种免疫酶标记新技术,它属于不标记抗体桥法,即以APAAP复合物及桥联二抗替代了一般间接免疫酶技术中的酶标抗体。该技术因具有较多的优点,近年来应用逐渐广泛并日益受到重视。然而,建立桥联酶标技术对其中的抗酶抗体纯度要求较高,抗酶抗体与酶结合形成的复合物必须     

“桥抗体”对酶免疫分析的影响

在对 T-2毒素检测的 ELISA 研究中,T2-HS(T2-琥珀酸半酯)与 BSA 或 PLL联接,前者(T2-C_4-BSA)为免疫原,后者(T2-C_4-PLL)为检测抗原。在进行 ELISA 时,将 T2-C_4-PLL 包被于微板,并与兔抗 T-2抗体和标准 T-2样品一起保温。T-2抗体结合量用酶(HRP)标羊抗兔 IgG 与酶底物反应进行测定。在此情况下,我们不仅观察到抗 T-2抗体及抗 BSA 抗体,而且还有抗“-C_4-”抗体(即“桥抗体”)存在,同时发现“桥抗体”对T-2检测的灵敏度有明显干扰,甚至使 ELISA 不能进行。如以 T2-C_2-TT 代替 T2-C_4-PLL为检测抗原,由于“-C_4-”桥的排除,“桥抗体”的干扰也明显减弱。     

自身免疫性甲状腺疾病患者抗甲状腺球蛋白独特型抗体的临床研究

研究对象均为我院与南京鼓楼医院确诊的甲亢、桥本氏甲状腺炎(HT)、甲减和甲状腺腺瘤患者。检测前血清预先用等容积50g/LPEG6000处理,40℃过夜后1600×g离心20min,取上清用于自身抗体的独特型抗体(ATG-Ab_2)检测。操作按ELISA法。用鼠抗人甲状腺球蛋白(TG)单抗包板,依次加处理过的待测血清上清,酶标记抗人IgG和底物溶液,呈色后于492nm波长测A值,以正常对照(年龄和性别与     

北京、长治和宜昌等地区不同年龄组巨细胞病毒抗体的调查

本文用ELISA法检测了北京郊区、长治郊区和宜昌市等地区不同年龄组正常人群中的巨细胞病毒(CMV_(IgG)抗体).北京CMV_(IgG)抗体标化阳性率为92.3%,GMT为1∶1661.6;长治为89.2%,GMT为1∶749.9;宜昌为98.3%,GMT为1∶1448.2.经相对数标化阳性率的比较宜昌高于北京和长治;宜昌与长治之间差异不显著(P>0.05);北京与长治更无差异(P>0.05);但宜昌与长治相比差异显著(P<0.01),此证实CMV的感染在我国相当普遍.     

某型潜艇舱室微生物气溶胶污染状况与艇员卫生健康的相关性分析

目的评价某型潜艇长航后舱室微生物气溶胶污染状况对艇员身体健康造成的影响。方法 (1)富集长航前后舱室空气样本, 分析其气载微生物构成变化。(2)采用随机抽样法对长航后31名艇员进行9种病原菌IgM抗体和曲霉菌IgG抗体检测;对30名艇员长航前后血清IgG、IgA、IgM及白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-8、炎症蛋白-10(IP-10)进行配对检测。结果 (1)潜艇长航前可培养微生物分类为21个属56个种, 长航后为37个属80个种;长航后丝状真菌和革兰氏阴性杆菌占比明显增加;长航前后均未检测到呼吸道病毒、支原体、衣原体、嗜肺军团菌核酸。(2)长航后艇员血清IgG和IgA水平较长航前显著升高(P<0.01);血清IL-2和IL-8水平降低, IL-4和IP-10水平升高, 各组分变化均有统计学意义(P<0.05);长航后肺炎支原体IgM抗体阳性率为21.62%, 乙型流感病毒IgM抗体阳性率为5.41%, 副流感病毒IgM抗体阳性率为2.70%, 曲霉菌IgG抗体阳性率为16.67%。结论某型潜艇长航后舱室气载微生物种群的生物多样性增加, 以真菌和革兰氏阴性杆菌增加为...     

基因工程技术制备抗IL-2蛋白抗体Fab片段及其鉴定方法的建立

目的利用基因工程技术制备人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab抗体片段,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的IL-2蛋白从人天然噬菌体抗体库中筛选出表达抗IL-2蛋白Fab抗体片段的阳性克隆,酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了抗IL-2蛋白的Fab段抗体,在SDS-PAGE中形成47kD的条带,Western blot证明为抗人Fab段抗体;ELISA证实该抗体片段具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与牛血清白蛋白、IL-4无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab片段,构建了一种制备基因工程抗体的有效途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。     

SARS 25例临床诊断患者血浆特异性抗体和病毒的动态检测

目的 动态检测SARS患者血浆特异性IgM和IgG以及SARS冠状病毒(SARS-CoV)的变化规律。方法 用酶联吸附免疫法对25例145份SARS临床诊断患者血浆特异性IgM和IgG进行定性检测,用RT-PCR对其中114份血浆进行SARS-CoV定性检测。结果 IgM和IgG抗体的阳性样本检出率分别为49．0％(71／145)和54．5％(79／145),阳性患者检出率均为84．0％(21／25),两种抗体大多在发病第2～4周产生,前5周检出率相近,均呈上升趋势,以后IgM抗体检出率开始下降,IgG抗体检出率则继续上升。血浆SAPS-CoV阳性样本检出率为15．8％(18／114),阳性患者检出率为40．0％(10／25),多为发病后4周内采集的样本,抗体检测阴性或初次阳性。结论 血浆特异性抗体以及SARS-CoV检测可作为SARS的确诊依据;抗体产生后大多数病人血浆病毒很快转阴,但有个别病人在抗体产生2～3周后仍能在血浆中检测到病毒序列。     

严重急性呼吸综合征康复者冠状病毒特异性抗体定量检测与分析

目的　检测SARS患者体内冠状病毒特异性抗体IgG、IgM的含量。方法　抽取 2 2例SARS康复者不同康复时期的血液 ,经病毒灭活后分离血清 ,用ELISA法对SARS病毒特异性抗体IgG、IgM进行检测。结果　IgG类抗体在所有康复者体内都呈阳性 ,且检测到康复 71天的患者该类抗体仍然没有衰减 ;IgM类抗体在康复 5 0天的部分患者 (5 / 2 2 ,2 2 73%)中仍呈阳性 ,而在 6 5天时则全部为阴性。对照组 2 2例 ,两类抗体全部为阴性。结论　可能所有SARS康复者体内都产生了冠状病毒特异的IgG类抗体 ,并且这种抗体可能持续较长时间。     

应用抗生物素-生物素系统进行增强化学发光的实验研究

抗生物素-生物素系统(ABS)在酶联免疫吸附试验中的应用,使ELISA法检测的灵敏度明显提高。化学发光免疫测定法(CLIA)是在70年代末发展起来的一种可与放射免疫测定(RIA)相媲美的非放射性免疫学技术,本研究将ABS与增强化学发光酶免疫试验相结合,建立起了抗生物素-生物素增强发光酶免疫试验法(Avidin-Biotin Complex Enhanced Chemilumines-cent Assay),简称(ABC-ECLIA)的实验方法。 一、材料与方法以聚苯乙烯小管条(天津产)为载体,人IgG为检测模型,用双抗体夹心法进行测定,具体步骤为:以5mg/L(5μg/ml)的羊抗人IgG0.20ml/孔包被载体,4℃冰箱过夜,经洗涤→标准人IgG,在37℃下1h洗涤→生物素化羊抗人IgG,再经37℃洗涤30min→ABC复合物,37℃洗涤15min,最后一次洗涤     

微量酶联法检测IgM抗体在肾综合征出血热病人早期诊断中的应用

对肾综合征出血热(Haemorrhagic fever with renal syndrome以下简称出血热,HFRS),虽可用免疫荧光技术作病毒病原特异性诊断,但不够简便、敏感。于1983年我们用微量酶联免疫吸附试验(简称酶联,ELISA),间接法检测出血热病人血清中特异性IgG抗体(65例),与免疫荧光技术相比,不仅简便,还可提高诊断效果。但检测IgG抗体增长,多适用于流行病学调查,要解决临床诊断,则不够及时,需要建立在症状出现后短时间内,能从血清中检出IgM抗体的方法。为此,我们采用微量酶联免疫抗IgM固相法,检测101例出血热病人急性期血清     

EgM123免疫犬血清抗体监测

【目的】探索EgM家族重组蛋白（EgM123）与弗氏佐剂结合免疫犬后血清抗体变化规律。【方法】利用间接ELISA法检测免疫组与对照组血清特异性抗体（IgG）的变化规律，并以Western—blotting方法进行验证。【结果】ELISA实验结果经统计学方法分析显示，不中和免疫组与对照组血清抗体时，特异性抗体IgG差异不...     

SARS恢复期患者特异性IgG抗体滴度观察与分析

目的探讨SARS恢复期患者特异性IgG抗体滴度水平及变化趋势,完善SARS感染后免疫的资料。方法采用口。ISA法检测23例SARS患者发病后6个月、12个月2个时间点血清中特异性IgG抗体滴度。以单克隆抗体标记23例患者的PBMC,用流式细胞仪检测HLA-A2的阳性率。结果6个月时IgG抗体滴度的最高值为1：160阳性(4／23),最低值为1：10阴性(1／23),平均滴度为1：57;12个月时IgG抗体的最高滴度仅为1：80阳性(6／23),最低值为1：10阴性(2／23),平均滴度为1：27。2个时间点抗体滴度之间的差异有统计学意义(P=0．002)。23例患者中HLA-A2阳性14例,阳性率60．9％。结论SARS恢复期患者的抗体滴度在半年以后已呈现明显的下降趋势,目前所依据的SARS-IgG抗体诊断标准是合理可行的。HLA-A2抗原肽疫苗可以治疗和预防50％左右的SARS病毒感染。     

抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用聚合人血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0-Ag骨髓瘤细胞融和,以4种酶联法进行筛选,并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3株分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。经多次传代,结果稳定。接种Balb/c小鼠腹腔后,腹水均为抗前S(2)阳性,效阶达8万。免疫球蛋白为鼠IgG1型。用其初步纯化的IgG酶标记物,以双抗体夹心法检测了乙肝病人血清中前S(2)蛋白,结果较满意,认为可在临床上推广使用。     

两种酶联免疫法检测SARS病毒特异性抗体的比较

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)是由新型冠状病毒引起的以呼吸道传播为主的急性传染病。目前用于检测SARS病原抗体的酶联免疫吸附 (ELISA)法是世界卫生组织 (WHO)推荐的临床检测抗体的主要方法。ELISA法测抗体又分为间接法和双抗原夹心法 ,本文就这两种方法的检测情况进行了比较。1　材料与方法1 1　血清标本　按常法分别抽取 2 0例健康人 ,2 0例发热非SARS患者和 87例住院不同时期的SARS患者静脉血 ,2h内离心分离血清 ,— 2 0℃冻存 ,1周内检测抗SARS病毒特异性抗体。1 2　试剂　间接ELISA法使…     

1207例输血前检查中四项结果分析

笔者2002年1月～2003年12月,对1207名输血前病人做了乙肝两对半、丙肝抗体(抗—HCV)艾滋病抗体(抗—HIV)和梅毒(TP)进行了检查,现将检查结果报告如下: 1 对象和方法 1.1 检测对象本院2002年1月～2003年12月拟输血病人1207人。 1.2 仪器试剂①仪器AnothTH3(瑞士)酶标分析仪,②试剂乙肝两对半、TP(厦门新创产品),抗—HCV、抗—HIV(北京金豪产品)。     

浅谈免疫组织化学技术的标准化

组织化学技术由F.VRaspail始创于1826年,距今171年。免疫组织(细胞)化学技术由R.R.ACoom’s首创于1950年,距今50年,其技术为免疫荧光技术。1967年NaKne’s用过氧化物酶标记抗体进行抗原抗体免疫组化,从而建立了免疫酶标技术。自1950年以来免疫组化有如下技术方法:免疫荧光组织化学法、免疫金—银组织化学和抗原抗体体内示踪技术法。在免疫酶标技术中又有直接法,即抗原抗体直接反应显色。间接法,即“两步法”,以几种酶标的二抗和抗原结合物的免疫反应。“三步法”即是过氧化酶复合物的PAP法。90年代以后随着技术改进,     

酶联免疫吸附试验检测乙脑病毒抗原的研究Ⅰ实验方法的建立(摘要)

本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双夹心法,通过影响因素、实验条件的研究,建立了检测乙脑病毒抗原的实验方法。 通过测定,最适条件是包被抗体(差速离心提纯抗原免疫豚鼠抗乙脑病毒IgG)和第二抗体(差速离心抗原免疫家兔抗IgG)浓度为10μg/ml,羊抗兔酶结合物浓度1:30000,抗原抗体作用时间2小时,温度37℃。曾用鱼精蛋白-硫乙二醇半提纯乙脑病毒抗原免疫