G-CSF干预对老龄慢性脑缺血大鼠模型认知改善与胶质细胞可塑性的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)干预后,慢性脑缺血老龄鼠学习记忆功能改善与海马胶质细胞可塑性改变的相关性.方法 12月龄雄性SD大鼠2VO术后饲养3个月,构建15月龄的2VO慢性脑缺血老龄鼠模型.分为2VO/G-CSF组(n=10)、2VO/NS组(n=7),Sham组(n=10).采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,通过免疫组化和图像分析技术检测海马CA1区胶质细胞的数目及胞质突起长度.结果 水迷宫实验:2VO/NS组逃逸时间显著长于Sham组和2VO/G-CSF组(P＜0.01);2VO/NS组大鼠在平台象限的停留时间少于Sham组(P＜0.01)和2VO/G-CSF组(P＜0.05);2VO/NS组大鼠跨过平台区域的次数少于Sham组和2VO/G-CSF组(P＜0.01).HE染色发现G-CSF干预后海马CA1区锥体细胞排列层数增加,胞体增大.免疫组化染色:2VO/NS组海马CA1区GFAP阳性细胞少于Sham组和2VO/G-CSF组(P＜0.05).2VO/NS组大鼠GFAP阳性细胞胞质突起长度低于Sham组和2VO/G-CSF组(P＜0.05).认知功能与胶质细胞可塑性的相关分析:2VO/NS组、Sham组及2VO/G-CSF组海马CA1区胶质细胞的数量、胞质突起长度与空间记忆能力均呈正相关(P＜0.05).结论 慢性脑缺血可致老龄鼠的空间学习记忆能力明显受损,G-CSF可诱导海马锥体细胞增生及胶质细胞可塑性改变,有效改善空间学习记忆功能.其中,胶质细胞可塑性改变与空间记忆功能改善密切相关.     

促红细胞生成素对慢性脑缺血大鼠认知障碍及海马星形胶质细胞的影响

目的 观察促红细胞生成素干预后慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆功能及海马星形胶质细胞的变化.方法 结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,治疗组术后给予EP01 000 U/kg腹腔内注射5d.术后第8周时3组大鼠Morris水迷宫测试后断头取脑做免疫组化检测观察CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 缺血组水迷宫表现同假手术组和EPO治疗组相比有显著差异(P＜0.01).EPO干预能改善慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆能力(P＜0.01).缺血组海马CA1区GFAP表达较假手术组相比明显增多,而EPO组海马CA1区GFAP表达同缺血组相比明显降低(P＜0.01).海马CA1区GFAP阳性细胞数与学习记忆能力呈负相关.结论 EPO能显著改善慢性脑缺血大鼠认知障碍,机制可能与减少海马星形胶质细胞增生有关.     

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马组织学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构CA1区神经元组织学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用光镜和电镜观察制备标本海马结构神经元的变化。结果快速老化小鼠对照小鼠(SAMR1)海马CA1区锥体细胞排列较整齐、均匀,胞膜完整,染色质分布均匀,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清楚,细胞器清晰可见。SAMP8组海马CA1区可见锥体细胞稀疏、排列紊乱,大部分神经元肿胀、空化,出现凋亡细胞,很多胞核固缩深染,胶质细胞增多,有较多脂褐素沉积。低、中、高浓度MT3组海马CA1区锥体细胞较空白对照组结构较清晰,排列较整齐均匀。神经元核基质呈轻度空化改变,胞质内都可见线粒体、粗面内质网及脂褐素,胶质细胞减少。高浓度MT3组的超微结构最接近于SAMR1组,但仍处于老化状态。结论 SAMP8海马有组织结构和超微结构的改变。MT3对SAMP8海马锥体细胞有保护的作用。     

姜黄素对Aβ诱导的老年痴呆大鼠海马胶质纤维酸蛋白表达的影响

目的通过观察姜黄素对Aβ1～40诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠空间学习记忆能力及海马区星形胶质细胞胶质纤维酸蛋白(GFAP)表达的影响,探讨姜黄素的作用机制。方法选择健康SD大鼠48只,分为空白对照组、AD对照组、姜黄素给药组,每组16只。Aβ1～40诱导大鼠认知障碍模型,采用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力。采用免疫组织化学方法检测GFAP蛋白表达,RT-PCR检测GFAP mRNA表达。结果姜黄素干预后AD大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05);与空白对照组相比,AD对照组大鼠脑组织海马区可见星形胶质细胞GFAP表达明显增多(P<0.05),姜黄素给药组大鼠脑组织海马区GFAP mRNA及免疫阳性细胞表达较AD对照组下降(P<0.05)。结论姜黄素能够改善Aβ1～40诱导的AD模型大鼠空间学习记忆障碍,其机制可能与降低GFAP的表达和抑制星形胶质细胞活性有关。     

全脑缺血再灌注小鼠额叶、海马区神经元损伤的病理研究

目的 探讨全脑缺血再灌注小鼠中枢神经细胞损伤情况。方法 采用重复阻断小鼠双侧颈总动脉并尾部放血（放血量小于体重的6％）再灌注的方式，建立了小鼠卒中模型。在此模型基础上，采用病理学技术，对脑缺血再灌注后小鼠额叶、海马区脑组织形态变化变化进行观察。结果 重复缺血再灌注1d神经细胞间质水肿，胞核浓染、固缩，再灌注3d，额叶皮层少量胶质细胞增生；海马可见颗粒细胞呈空泡样变性。缺血再灌注7d，皮层多量的小胶质细胞增生聚集成堆；海马CA1区锥体细胞变性，且部分坏死。缺血再灌注28d，皮层神经细胞明显减少；海马CA1、CA3区锥体细胞大量缺失、变性、坏死，齿状回颗粒细胞变性呈空泡样。结论 脑缺血再灌流中存在迟发性神经元死亡。     

雌激素对小鼠大脑中动脉缺血后海马星形胶质细胞变化的研究

目的探讨雌激素对小鼠大脑中动脉缺血后海马星形胶质细胞动态变化的影响。方法雄性昆明小鼠108只随机分为雌激素组(术前7d按体质量0.1ml/10g每日定时腹腔注射17β雌二醇)54只和对照组(腹腔注射生理盐水)54只,2组均行永久性右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)术,分别于MCAO术后3、6、12、24、48和72h取材,TTC染色法观察2组小鼠脑缺血部位及范围;苏木精-伊红染色观察海马神经元的变化;免疫组织化学法观察海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达变化。结果雌激素组术后各时间点脑梗死体积明显低于对照组(P0.05,P0.01),以缺血12h最为明显[(31.50±3.36)%vs (54.50±5.68)%,P=0.019]。2组海马神经元损伤程度随缺血时间的延长而加重,且相同时间点,雌激素组缺血侧海马神经元损伤程度均较对照组轻。2组双侧海马各区GFAP阳性细胞表达均随缺血时间延长而增多(P0.05);除CA3区缺血6h时,雌激素组缺血侧GFAP阳性细胞表达均较对照组增多(P0.05),突触增粗延长,树突棘分布较密集。结论雌激素对小鼠局灶性脑缺血具有神经保护作用,可刺激星形胶质细胞突触的发生,减轻缺血后神经元损伤,从而减小脑梗死体积。     

脑心通胶囊对血管性痴呆大鼠行为学及海马组织的作用

目的观察脑心通胶囊对血管性痴呆（VD）模型大鼠行为学及海马组织形态学的作用。方法采用大脑中动脉闭塞法（MCAO）制作VD动物模型；跳台试验测定大鼠学习记忆成绩取脑组织作冰冻切片，HE染色，观察大鼠海马形态学改变。结果跳台实验中，与假手术组比较，模型组大鼠存在着明显的学习记忆障碍；与模型组比较。中药组、西药组大鼠学习记忆能力得到改善，且两组相比无统计学意义。光镜观察显示，假手术组大鼠海马CA1区锥体细胞排列紧密整齐，无明显神经元脱失；模型组大鼠海马CA1区锥体细胞排列稀疏、紊乱，神经元脱失明显，可见胶质细胞增生，中、西药治疗组可明显减轻大鼠CA1区海马神经元脱失现象，使锥体细胞形态较正常，排列较整齐，接近假手术组。结论脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠有治疗作用．     

盐酸多奈哌齐对淀粉样蛋白致痴呆树鼩的治疗作用

目的探讨盐酸多奈哌齐对树鼩侧脑室内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞及成熟神经细胞的影响。方法采用GFAP和NeuN免疫组织化学方法检测各组树鼩大脑皮质和海马CA1、CA3、DG区星形胶质细胞和成熟神经元的表达。结果模型组树鼩额叶皮质和海马区GFAP阳性星形胶质细胞数明显高于对照组(P<0.01);治疗组海马(P<0.01)和皮质(P<0.05)GFAP阳性细胞数明显低于模型组。模型组树鼩额叶皮质和海马区NeuN阳性成熟神经元数明显少于对照组(P<0.01);治疗组树鼩海马CA1、CA3区(P<0.05)和额叶皮质(P<0.01)NeuN阳性成熟神经元明显多于模型组。结论盐酸多奈哌齐能抑制Aβ_(1~40)引起的树鼩星形胶质细胞的活化,减轻Aβ对成熟神经元的损伤。     

缬沙坦对慢性脑缺血大鼠的脑保护作用

目的探讨血管紧张素ⅡAT1受体拮抗剂缬沙坦对慢性脑缺血损害的保护作用.方法采用双侧颈总动脉永久性结扎并剪断制作慢性脑缺血动物模型,39只Wistar大鼠随机分为3组:对照组、单纯缺血组、缺血治疗组.术后12 w测定其认知能力、观察海马CA1区的超微结构及GFAP免疫阳性细胞的表达.结果单纯缺血组认知能力明显下降;海马CA1区神经元大量坏死、突触及髓鞘结构严重损害;GFAP免疫阳性细胞大量表达;缺血治疗组以上变化明显减轻.结论缬沙坦对慢性脑缺血损伤有保护作用.     

三磷酸胞苷二钠对局灶性脑缺血大鼠海马CA3神经元影响的形态学观察

目的　研究三磷酸胞苷二钠 (CTP)对局灶性脑缺血大鼠海马 CA3区神经元形态学的影响。方法　选取 SD大鼠 60只 ,随机分为脑缺血自然恢复组、药物干预组和假手术对照组。采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型 ,应用 HE染色方法观察海马 CA3区神经元形态学的变化。结果　给予 CTP干预后 ,脑缺血大鼠海马 CA3区完整锥体细胞数目与自然恢复组相比明显增多。结论　 CTP具有支持神经元存活 ,增加神经元的抗缺血能力 ,促进半暗带区神经细胞功能的恢复。     

银杏叶提取物对慢性脑低灌注大鼠认知功能的影响

目的观察银杏叶提取物(EGB)对慢性脑低灌注大鼠认知功能的影响,及对海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基-D-门冬氨酸受体-2B(NMDAR-2B)表达的调节作用,探讨EGB保护认知功能的可能机制。方法将34只Wistar大鼠随机分为正常对照组(6只)、模型组(6只)、EGB高剂量组(8只)、EGB低剂量组(8只)和石杉碱甲组(6只)。采用Morris水迷宫系统检测各组大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学法观察大鼠海马CA1区BDNF和NMDAR-2B的表达。结果永久性结扎双侧颈总动脉术后第1个月时,各组大鼠学习记忆能力比较,差异无统计学意义(P0.05);术后第2个月时,与模型组比较,其他4组学习记忆能力明显下降,差异有统计学意义(P0.01),海马CA1区BDNF和NMDAR-2B表达明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论海马CA1区BDNF和NMDAR-2B表达降低可能是大鼠认知功能障碍的诱因之一。EGB和石杉碱甲在改善慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍方面具有同等效应。     

NG-硝基精氨酸甲酯对慢性脑缺血大鼠记忆及诱导型一氧化氮合酶的影响

目的研究一氧化氮合酶抑制剂——NG-硝基-L-精氨酸甲酯（L—NAME）对慢性脑缺血大鼠学习空间记忆能力及海马区诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法3—4个月龄健康雄性Wistar大鼠54只,随机分为假手术组、模型组及L—NAME组,每组18只。采用双侧颈总动脉永久结扎法制备慢性脑缺血大鼠模型。L—NAME组在造模后第3周开始每日给予L—NAME（20mg·k-1·d-1配入每日饮用水中）。造模后2、4、6个月,利用Morris水迷宫方法检测各组大鼠学习空间记忆能力;观察海马区的组织病理学改变和iNOS的表达。结果①造模后2、4、6个月,模型组、L—NAME组的逃避潜伏期、搜索路径长度均比假手术组明显增多,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）,L—NAME组比模型组明显缩短（P〈0．01,P〈0．05）。②HE染色显示,模型组和L．NAME组随着缺血时间的延长,海马区的锥体细胞损伤程度逐渐加重;L—NAME组各相应时间点损伤程度较模型组明显减轻。③模型组和L—NAME组海马CA1区iNOS阳性细胞数目随着缺血时间的延长而逐渐增多,均高于假手术组（P〈0．01,P〈0．05）;与模型组比较,L—NAME组的iNOS阳性细胞数目相对减少（P〈0．01,P〈0．05）。结论L—NAME可减轻慢性脑缺血所致的脑组织损伤,改善脑缺血所致的进行性学习空间记忆能力的下降;其可能的机制为通过抑制iNOS的表达而发挥神经保护作用。     

3-硝基丙酸诱导沙土鼠脑缺血耐受时海马区胶质纤维酸性蛋白的表达

目的　观察 3 硝基丙酸 (3 nitropropionicacid ,3 NPA)预处理后缺血再灌注不同时间海马区胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)分布、表达的动态变化 ,探讨其与 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法　阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型 ,应用免疫组织化学方法观察星形胶质细胞的反应。结果　GFAP的分布随再灌注时间而变化 ,GFAP阳性星形胶质细胞在海马CA1区主要分布于多形细胞层、辐状层、腔隙层、分子层。 3 NPA预处理后脑缺血再灌注 3dGFAP表达增强 ,7、14d维持在较高水平 ,2 8d时有所下降 ,但与对照组比较仍保持在较高水平。结论　 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受中 ,GFAP的表达增强保持在较高水平 ,表明星形胶质细胞增生、活化可能与 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受有关。     

慢性低灌注大鼠影像与病理对照研究

目的观察慢性低灌注大鼠影像学特征,确定头颅MRI特征、海马的容积测量与相对应的组织病理学改变之间的关系。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为缺血组(30只)和假手术组(30只)。利用Morris水迷宫方法检测术后1、2、3、4、5个月大鼠的记忆功能;分别行头颅MRI检查与海马容积测量,通过HE染色,光镜观察大鼠海马CA1区神经细胞的形态学变化。结果与假手术组比较,缺血组大鼠记忆功能障碍在造模后2个月即出现,逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少(P0.01)。缺血1个月时海马CA1区可见神经元减少。双侧颈总动脉结扎术后3个月头颅MRI显示,长期慢性脑缺血后海马体积缩小。结论慢性低灌注大鼠认知功能降低,可能与海马缺血损害有关。海马的影像学改变相对滞后于病理改变。     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠学习记忆和海马N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的观察补阳还五汤对血管性痴呆(VaD)大鼠海马CA1区N甲基D-天冬氨酸受体表达及长时程增强(LTP)的影响及机制。方法选择SD大鼠144只,随机分为假手术组、VaD模型组(模型组)、尼莫地平组和补阳还五汤组,每组36只。采用四血管阻断法制备VaD大鼠模型。Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能,大鼠海马CA3-CA1区记录海马CA1区LTP,免疫组织化学、Western blot法和实时荧光定量PCR检测大鼠海马NR1、NR2A、NR2B蛋白和mRNA表达的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长和平均探索次数减少(P<0.05),大鼠海马CA1区LTP明显降低(P<0.05),CA1区NR1、NR2A、NR2B蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤组、尼莫地平组大鼠学习、记忆成绩明显提高(P<0.05),海马CA1区NR1、NR2A、NR2B蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可上调脑缺血再灌注海马CA1区脑组织NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达,促进LTP,进而改善VaD大鼠学习记忆能力。     

丁苯酞对慢性低灌注后神经血管单元的保护作用

目的　研究丁苯酞对慢性低灌注后神经血管单元是否有保护作用。方法　雄性Wistar大鼠48只随机分为假手术组、缺血模型组和丁苯酞组。缺血模型组与丁苯酞组大鼠结扎双侧颈总动脉。电镜观察神经血管单元的超微结构改变。结果　与缺血模型组相比,丁苯酞组低灌注后血管内皮细胞周围肿胀减轻,神经元线粒体嵴断裂程度减轻,神经血管单元微环境较好。结论　丁苯酞对慢性低灌注后神经血管单元有保护作用。     

Nobiletin对慢性低灌注损伤后小鼠脑海马神经血管单元的影响

目的观察川陈皮素(NOB)对小鼠慢性脑低灌注(CCH)模型海马区神经血管单元各主要组分的保护作用。方法昆明小鼠随机分为对照组、模型组和NOB高、低剂量处理组各10只,模型组和NOB处理组进行双侧颈总动脉结扎,对照组不结扎。术后2 w进行旷场实验及Y迷宫检测学习记忆功能,Western印迹法测定小鼠海马区神经元生长相关蛋白(GAP)-43、突触素(SYN)、水通道蛋白(AQP)4表达,检测海马神经细胞可塑性及血脑屏障功能。结果与模型组相比,NOB处理组自由活动无显著差异,其中高剂量组探索能力显著增强,逃避潜伏期显著减短(P<0.05);NOB处理组均显著增加海马区GAP-43、SYN、AQP4及Claudin-5表达(P<0.05)。结论NOB可通过对海马的神经血管单元各组分的保护作用,改善CCH所致小鼠学习记忆功能受损。     

犬尿氨酸通路相关物质在大鼠慢性脑低灌注致认知障碍中的作用

目的观察慢性脑低灌注大鼠海马组织中干扰素-γ、TNF-α、诱导型NO合酶(iNOS)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸(KYN)的表达,探讨慢性脑低灌注致认知功能损害大鼠海马组织中KYN通路相关代谢产物的变化特点。方法选择Wistar大鼠30只,随机分为假手术组15只和双侧颈总动脉永久性结扎组(2VO组)15只。制作慢性脑低灌注大鼠模型,Morris水迷宫检测2VO大鼠空间学习与记忆能力变化,免疫组织化学检测大鼠海马CA1区iNOS、干扰素-γ和TNF-α的表达,ELISA法检测IDO及KYN的水平。结果与假手术组比较,2VO组大鼠第3天开始逃避潜伏期明显延长,平台象限游泳距离百分比明显减少,iNOS、干扰素-γ及TNF-α阳性表达,IDO和KYN水平明显升高[(4.73±0.21)ng/ml vs(0.89±0.06)ng/ml和(1.55±0.12)ng/ml vs(0.19±0.02)ng/ml,P<0.05]。结论慢性脑灌注大鼠的病理生理过程包含着炎性反应,而炎性反应的发生很可能刺激了IDO和KYN的高表达,KYN和IDO的蓄积有可能参与其导致认知障碍的过程。     

氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠海马GFAP、NeuN表达的影响

目的探讨氟西汀对癫痫合并抑郁大鼠海马齿状回胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)表达的影响。方法SPF级SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、氟西汀低、中、高剂量组各12只。模型组和对照组给予等剂量生理盐水,1次/d,腹腔注射;氟西汀低、中、高剂量组给予氟西汀(5.0、7.5、10.0 mg/kg),1次/d,腹腔注射。治疗28 d,采用强迫游泳实验和旷场实验测试大鼠行为学表现,采用免疫组化、RT-PCR检测海马GFAP、NeuN表达。结果造模后,与对照组相比,模型组、氟西汀低、中、高剂量组不动时间延长,垂直运动次数、水平运动次数明显下降(P<0.05)。干预后,模型组不动时间明显长于对照组,垂直运动次数、水平运动次数明显低于对照组(P<0.01);与模型组相比,氟西汀低、中、高剂量组不动时间缩短,垂直运动次数、水平运动次数明显增加(P<0.05);尤其是氟西汀高剂量组,较氟西汀低、中剂量组相比有统计学意义(P<0.05)。免疫组化、RT-PCR显示,与对照组相比,模型组GFAP表达明显增加、NeuN表达明显下降(P<0.05);与模型组相比,氟西汀低、中、高剂量组GFAP表达明显下降、NeuN表达明显增加(P<0.05);尤其是氟西汀高剂量组,较氟西汀低、中剂量组相比有统计学意义(P<0.05)。结论氟西汀可能通过改变海马区GFAP、NeuN表达,并呈剂量依赖性,发挥神经保护作用,改善癫痫合并抑郁大鼠抑郁症状。