蝎毒组分Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的：观察蝎毒组分Ⅰ(SV-Ⅰ)对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。方法：卵巢癌细胞SKOV3分为空白对照组和SV-Ⅰ处理组(终浓度分别为200、400、800 mg•L^-1)，采用MTT法检测SV-Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长抑制率，集落形成法检测肿瘤细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：200、400和800 mg•L^-1-1组, SKOV3细胞集落数分别为57.00±6.16和48.00±4.11，明显低于对照组（84.00±5.29）(P<0.01)；与空白对照组比较，400 mg•L^-1组SKOV3细胞S期细胞数明显减少（P<0.01），G₂+M期细胞明显增多 (P<0.01)， 800 mg•L^-1组SKOV3细胞G₂+M期细胞数明显减少（P<0.01），G₁期细胞数有增多趋势；与空白对照组比较，400 和800 mg•L^-1组SKOV3凋亡细胞数明显增加（P<0.01）。结论：在一定浓度范围内蝎SV-Ⅰ可明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长，其机制与SV-Ⅰ抑制SKOV3细胞DNA合成、诱导SKOV3细胞发生G₂+M和G₁期阻滞及诱导SKOV3细胞凋亡有关。     

他莫昔芬联合顺铂对人卵巢癌细胞HO-8910增殖抑制作用的研究

目的:验证他莫昔芬(TAM)和顺铂(DDP)两种药物联合应用抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖作用的有效性,为卵巢癌的内分泌治疗和化学治疗联合应用提供理论依据。方法:以体外培养的HO-8910细胞为研究对象,不同剂量的TAM和DDP联合作用于HO-8910细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;免疫组化SP法检测PCNA在细胞中的表达;流式细胞仪PI染色法分析细胞周期分布的改变,并用AV-PI双染色法检测TAM联合DDP对细胞凋亡的影响。结果:TAM和DDP联合用药组与阳性对照组相比,大剂量TAM合用不同剂量的DDP组及中剂量TAM合用大剂量DDP(3.3μmol/L)组,细胞生长抑制率有显著性差异(P<0.05);TAM浓度≥1.0μmol/L合用不同剂量的DDP时PCNA表达阳性率有显著性差异(P<0.05);TAM使G1期细胞抑制,DDP作用于G1期细胞,G1期减少,细胞阻滞于S期;TAM和DDP联合应用时随着药物浓度增加凋亡指数逐渐增大。联合用药组组间比较,大剂量TAM合用小剂量DDP(1.7μmol/L)组与中剂量TAM合用大剂量DDP(3.3μmol/L)组间细胞生长抑制率及PCNA表达阳性率无显著性差异(P>0.05)。结论:TAM和DDP联合用药可有效抑制人卵巢癌细胞HO-8910细胞生长及增殖。     

性激素及促性腺激素对卵巢癌细胞株HO-8910体外生长的调控

目的:探讨雌二醇(E2)、孕酮(P)及卵泡刺激素(FSH)对人卵巢癌细胞株HO-8910细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,光镜和电镜进行形态学观察,终末脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)计数凋亡细胞,流式细胞仪间接免疫荧光技术检测细胞内bcl-2蛋白的表达.结果:1×10-12mol/L E2和10ng/mlFSH作用48h能显著促进癌细胞增殖,E2和FSH分别使S期和G2/M期细胞比例增加.P浓度为1×10-7～1×10-5mol/L时,作用24、48、72h均明显抑制HO-8910细胞的增殖,并具有剂量依赖性.P作用后C0/G1期细胞增加,并伴随凋亡率升高,凋亡细胞计数明显多于对照组,光镜和电镜可观察到细胞凋亡的形态学改变;细胞内bcl-2蛋白检测显示,P能降调bcl-2蛋白表达.结论:卵巢癌细胞株HO-8910的生长受到生殖激素的调控,低浓度E2和高浓度FSH具有促癌细胞增殖作用,P则对癌细胞的生长产生明显的抑制效应.P的这种抗癌作用与诱导细胞凋亡有关,抗凋亡基因bcl-2蛋白表达下降可能是诱发细胞凋亡的机理之一.     

槲皮素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨槲皮素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖与凋亡的作用.方法 MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡;流式细胞仪检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果 槲皮素对HO-8910细胞有增殖抑制作用,呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测结果分析,实验组G1/G0期上升,S期和G2/M期下降,细胞凋亡率上升;流式细胞术结果显示,槲皮素使Bel-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论 槲皮素在体外能抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,阻止细胞由G1/G0期向S期和G2/M期移行并诱导细胞凋亡,其诱导HO-8910细胞凋亡的机制可能与上调促调亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bel-2表达有关.     

巴豆生物碱抑制卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究

目的 了解巴豆生物碱诱导人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期、凋亡效果,以及凋亡与增殖细胞核抗原(PCNA)表达之间的关系.方法 将浓度分别为50、100和150 μg/ml的巴豆生物碱作用于人卵巢癌细胞HO-8910细胞后,采用流式细胞术检测巴豆生物碱对人卵巢癌细胞HO-8910细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡;采用倒置显微镜及免疫组织化学法对凋亡调节基因PCNA表达进行检测.结果 巴豆生物碱作用48 h后,倒置显微镜下可见细胞皱缩、出芽及少量凋亡小体形成.应用不同剂量的巴豆生物碱(50～150 μg/ml)分别作用于 HO-8910 细胞 24、48、72 h后,巴豆生物碱抑制了HO-8910细胞增殖,并呈现剂量、时间依赖性.随着巴豆生物碱的作用时间延长,G0/G1期细胞比例明显下降,而较多的细胞阻滞于G2/M期.巴豆生物碱的作用浓度从50 μg/ml增至150 μg/ml,则平均细胞凋亡率从2.13%上升为21.89%.结论 巴豆生物碱可以通过时间依赖性和剂量依赖性方式,促使细胞G2/M 期阻滞和抑制细胞有丝分裂,从而诱导人卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡.由于PCNA在G1～S期进程过度中起着重要作用,PCNA 表达的下调也导致细胞周期进程被阻抑.巴豆生物碱作用24 h,随浓度的升高,PCNA阳性细胞百分率逐渐降低.     

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响.方法 实验分3个组：siR-NA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞.于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况.结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降（P＜ 0.05）;Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调.结论 导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞sur-vivin蛋白表达量下降.     

生殖激素对卵巢癌细胞株H0-8910体外生长的调控

目的:探讨雌二醇(F2)、孕酮(P)及卵泡刺激素(FSH)对人卵巢癌细胞株H0-8910细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法:选用人卵巢癌细胞株H0-8910进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪(FCM)测定细胞周期和凋亡率,透射电子显微镜进行形态学观察,终未脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)计数凋亡细胞,FCM间接免疫荧光技术检测细胞内bcl-2蛋白的表达.结果:1×10-12mol/L E2和10ng/ml FSH作用48h能显著促进癌细胞增殖,E2和FSH分别使S期和G2/M期细胞比例增加.P浓度为1×10-7～1×10-5mol/L时,作用24、48、72h均明显抑制HO-8910细胞的增殖,并具有剂量依赖性.P作用后G0/G1期细胞增加,并伴随凋亡率升高,凋亡细胞计数明显多于对照组,电镜可观察到细胞凋亡的形态学改变;细胞内bcl-2蛋白检测显示,P能降调bcl-2蛋白表达.结论:卵巢癌细胞株HO-8910的生长受到生殖激素的调控,低浓度E2和高浓度FSH具有促癌细胞增殖作用,P则对癌细胞的生长产生明显的抑制效应.P的这种抗癌作用与诱导细胞凋亡有关,抗调亡某因bcl-2蛋白表达下降可能是诱发细胞凋亡的机理之一.     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对CNE-2Z细胞生长周期和p53表达的影响.方法采用流式细胞仪双标法.结果APBMV处理CNE-2Z细胞48h后,进入S期的细胞明显减少,处于G1期和G2期的细胞明显增多,APBMV16mg/L处理CNE-2Z细胞48h后,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为59.7%、32.3%和7.9%,空白对照组的百分比分别为53.3%、45.2%和1.5%,二者比较差异有显著性(P<0.01或P<0.001).空白对照组CNE-2Z细胞P53蛋白24h和48h表达量处于较高水平(27.23±0.93)和(31.67±1.75),经APBMV处理24h或48h后,P53蛋白表达量明显下降,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论APBMV能够阻止CNE-2Z细胞周期的移行,并抑制抑癌基因p53的表达.     

ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的探讨ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖及凋亡作用的影响。方法将不同质量浓度的ghrelin(400、500、600、700、800ng·mL-1)与人卵巢癌细胞株HO-8910共同培养,采用MTT法检测细胞增殖的抑制率,Tunel法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达。结果ghrelin≥600ng·mL-1时对HO-8910细胞增殖的抑制率具有显著作用(P<0.05)。600ng·mL-1质量浓度的ghrelin作用于HO-8910细胞20min后,细胞凋亡、p-ERK1/2的灰度值均显著减少(均P<0.05)。结论 ghrelin能抑制人卵巢癌细胞株HO-8910增殖、促进其凋亡;ERK1/2可能参与了ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910作用的过程。 更多还原     

蝎毒对B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用

目的：观察蝎毒（scorpion venom, SV）及其分离组分对小鼠B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用。方法：采用MTT法检测肿瘤细胞存活率,集落形成法检测肿瘤细胞增殖, 采用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果：400和800 mg•L^-1的SV可明显抑制B16黑色素瘤细胞生长 (P<0.01或P<0.05)。蝎毒组分（SV-Ⅰ、SV-Ⅱ 和SV-Ⅲ）在浓度为200、400 及800 mg•L^-1时,对B16细胞生长有明显的抑制作用 (P<0.05~P<0.01);在400和800 mg•L^-1 时,可使G₀/G₁期细胞数明显减少 (P<0.05~P<0.01),G₂+M期细胞明显增多(P<0.05~P<0.01),S期细胞呈降低趋势,而SV对细胞周期进程未见明显影响。当SV、SV-Ⅰ、SV-Ⅱ及SV-Ⅲ的浓度为400和800 mg•L^-1时, 对B16细胞集落形成均有明显的抑制作用 (P<0.01)。结论：在一定浓度范围内蝎毒及其组分对B16黑色素瘤细胞的存活与增殖均有明显的抑制作用,纯化后各组分的抑瘤作用优于蝎毒,但其抑制作用低于阳性对照丝裂霉素 (Mitomycin-c, MMC) 组。提示蝎毒引起细胞周期进程改变可能是其抑瘤作用的机制之一。     

染料木黄酮诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的实验研究

目的研究染料木黄酮对人HO-8910卵巢癌细胞的抑制效应和诱导凋亡作用,探讨其机制。方法将不同浓度的染料木黄酮作用于人HO-8910卵巢癌细胞,利用MTT法检测其有效作用浓度,分别采用瑞氏染色、TUNEL、流式细胞仪观察和检测HO-8910细胞凋亡情况。结果MTT法测得其IC50值为28.63 mg/L,浓度为8~128 mg/L的染料木黄酮具有诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡的作用,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论染料木黄酮具有抗卵巢癌作用,其重要作用机制之一是诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡。     

葡萄糖调节蛋白78在卵巢癌侵袭转移中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在卵巢癌侵袭转移中的作用。方法免疫组织化学法检测60例卵巢浆液性癌和40例卵巢浆液性囊腺瘤组织中GRP78的表达情况,Western blotting法检测GRP78的表达水平,分析GRP78的表达与卵巢浆液性癌临床病理指标之间的关系。采用Transwell小室法检测HO-8910细胞和HO-8910PM细胞侵袭、迁移能力;分别使用shRNA-GRP78干扰和pcDNA-GRP78过表达GRP78检测HO-8910PM细胞和HO-8910细胞侵袭、迁移能力的变化。结果免疫组织化学结果显示,GRP78在卵巢浆液性癌组织中的阳性表达率为90%,明显高于卵巢浆液性囊腺瘤的25%（P＜0.01）。GRP78在卵巢浆液性癌组织中表达水平高于卵巢浆液性囊腺瘤组织。GRP78表达水平高的卵巢浆液性癌病人,临床病理分级、分期更高,糖类抗原125水平更高,且发生淋巴结转移、盆腔转移、盆腔外转移的病人比例更高（P＜0.01）。体外研究结果显示,GRP78在高转移潜能的HO-8910PM细胞中的表达明显高于低转移潜能的HO-8910细胞（P＜0.01）。在HO-8910细胞中过表达GRP78可明显促进细胞的侵袭、迁移能力,而在HO-8910PM细胞中干扰GRP78的表达可明显降低细胞的侵袭、迁移潜能（P＜0.01）。结论卵巢癌组织中GRP78可促进卵巢癌细胞的侵袭、迁移能力。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对体外培养人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响。方法:选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养至对数生长期,以0~80μmol/L姜黄素(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)分别处理HO-8910细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞凋亡率的影响;免疫组化法检测PCNA在细胞中的表达,评价细胞的增殖状态。结果:姜黄素对HO-8910细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。姜黄素作用24h随浓度的升高PCNA阳性表达逐渐降低。流式细胞仪分析证实随着浓度的升高细胞凋亡率和膜受损率均提高。结论:姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡。     

广西眼镜蛇毒细胞毒素对人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞的抑制作用研究

目的：研究广西眼镜蛇毒细胞毒不对体外培养的人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞株的抑制作用。方法：通过SephadexG-50,GM-Sepharose,CL-6B柱层析从广西眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素,应用四素氮唑蓝（MTT）法测定其对人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞株的体外细胞毒作用及其最效关系,并与粗毒的抑瘤作用进行比较,结果：从广西眼镜蛇毒中分离到一种细胞毒素（CTX CM－5）,其对体外培养的人卵巢癌细胞和宫颈癌细胞株的抑制作用呈明显的剂量依赖关系。抑制率随剂是增加而呈迅速上升培养的人卵巢 细胞和宫颈癌细胞株具有较强的抑制作用。     

二氢杨梅素诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡及机制研究

目的二氢杨梅素体外对人卵巢癌HO-8910细胞生长、凋亡的影响,及其作用机制的探讨。方法体外培养HO-8910细胞,以不同浓度(10、20、40 μmol/L)的二氢杨梅素作用于HO-8910细胞,MTT法及CCK-8法检测对细胞生长的抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡情况;Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、ERK、p-ERK蛋白表达情况。结果MTT和CCK-8结果均显示二氢杨梅素可浓度依赖性地抑制HO-8910细胞的生长;流式细胞仪结果显示二氢杨梅素可浓度依赖性促进HO-8910细胞凋亡;Hoechst 33258荧光染色结果显示,二氢杨梅素作用后的HO-8910细胞呈现典型凋亡形态学改变;Western blotting结果显示二氢杨梅素可上调HO-8910细胞Caspase-3和Bax水平,下调Bcl-2、ERK、p-ERK水平(P < 0.05)。结论二氢杨梅素具有抗人卵巢癌HO-8910细胞活性的作用,并诱导其凋亡,其作用机制与调控ERK/MAPK信号通路有关。     

替拉扎明联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的研究替拉扎明（TPZ）联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂（LY294002）对人卵巢癌细胞株的体外抑制作用。方法乏氧及空气条件下,TPZ单用及联合LY294002在不同药物浓度下分别作用于人卵巢癌细胞株H08910PM和OVCAR-3,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法评价其抑癌效果。结果在乏氧及空气条件下单独使用TPZ对H08910PM的IC50分别为40．6μmol／L和53．0μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为65．9μmol／L和97．4μmol／L;乏氧及空气条件下TPZ联用LY294002,对H08910PM的IC50分别为22．7μmol／L和31．5μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为49.1μmol／L和51．0μmol／L。结论TPZ对人卵巢癌细胞株有抑制作用,抑癌效果在乏氧条件下高于空气条件（P〈0．01）;LY294002对TPZ有协同作用,与TPZ单独用药相比,二者联用显著降低了TPZ对癌细胞的IC50（P〈0．01）。     

整体可视化卵巢癌原位及转移动物模型的建立

目的建立整体可视化卵巢癌原位及转移动物模型,实时观察卵巢癌发展、转移的规律。方法将pEGFP-N1表达质粒转染入人卵巢癌细胞株HO-8910中,建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的卵巢癌细胞株pEGFP-N1/HO-8910,裸鼠皮下接种pEGFP-N1/HO-8910细胞,利用肿瘤细胞表达EGFP的特点,借助整体荧光成像系统,并利用IPP5.0软件采集、分析卵巢癌细胞发出的荧光信号,实时观察卵巢癌细胞在裸鼠皮下的生长情况,利用卵巢癌外科原位手术移植方法建立卵巢癌原位及转移动物模型,应用病理学方法对卵巢癌原位及转移动物模型进行评价和鉴定。结果卵巢癌细胞pEGFP-N1/HO-8910稳定、高效表达EGFP。皮下接种pEGFP-N1/HO-8910细胞后,可以在动物活体外实时观察肿瘤的皮下生长情况,并进行定量分析,利用外科原位移植的方法建立的卵巢癌原位动物模型,成功率达到100%。手术后2周,裸鼠卵巢原位成瘤未发现有转移情况,6周后处死的裸鼠中,有2只(33.3%)发生腹腔转移(癌灶转移到了肠管),在这2只裸鼠中有1只同时出现肝转移。通过病理学方法验证了可视化模型的可靠性。结论整体可视化卵巢癌动物原位及转移模型是研究卵巢癌发展及转移的可靠有效的观察模型。     

双氢青蒿素对卵巢癌细胞株H0-8910的作用及Akt表达的影响

目的观察双氢青蒿素（DHA）对卵巢癌细胞株H0-8910裸鼠皮下移植瘤的作及p-Akt表达,探讨其机制。方法将H0-8910细胞注入裸鼠,建立裸鼠移植瘤模型,观察干预后各组移植瘤抑瘤率,免疫组化检测p-Akt的活性变化。结果①病理学观察见细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。②DHA对裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,并具有浓度依赖性。③免疫组化检测p-Akt活性发现随着双氢青蒿素剂量的增加p-Akt表达减弱。结论双氢青蒿素对人卵巢癌细胞株HO-8910裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,其机制与下调p-Akt的表达可能有关。     

地塞米松和TGFβ1对人卵巢癌HO-8910细胞中PAI-1表达的影响

目的观察地塞米松(Dex)和转化生长因子β1(TGFβ1)对人卵巢癌HO-8910细胞中Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达的影响,探讨其在卵巢癌的发生发展中可能发挥的作用。方法将HO-8910细胞分别用TGFβ1(0.01～10ng/ml)和Dex(100nmol/L)单独或联合处理不同时间后,用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测PAI-1mRNA和蛋白表达的变化;用放线菌素D阻断新的mRNA合成,检测PAI-1mRNA的稳定性。结果HO-8910细胞中,TGFβ1能以时间和浓度依赖性的方式上调PAI-1mRNA的表达,最高可上调3.75倍(P<0.01);Dex也能上调PAI-1mRNA的表达,最高为1.65倍(P<0.01);Dex和TGFβ1两者联合作用4h,可上调PAI-1mRNA12.7倍(P<0.01),远大于两者单独作用之和,两者联合处理对PAI-1蛋白的上调作用也大于两者单独作用;Dex和TGFβ1单独及联合作用均不影响PAI-1mRNA的稳定性。结论Dex和TGFβ1单独均能上调HO-8910细胞中PAI-1的表达,联用对PAI-1上调有协同作用,该协同作用不是通过增强PAI-1mRN...