大鼠心脏缺氧缺血再灌注损伤与果糖二磷酸镁的保护途径

目的：观察具有改善心脏能量代谢作用的果糖二磷酸镁对实验性大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护性途径。方法：实验于2005-03在锦州医学院药理学实验室完成。24只SD大鼠随机分为3组：对照组、缺血再灌注组和果糖二磷酸镁组，每组8只。3组大鼠均实施主动脉递引灌流，采用Langendorff方法用KH缓冲液[(NaCI 118．5，NaCO325．0，KH2PO4 1．2，KCI 4．8，MgSO4 1．2，CaCl2 2．0，葡萄糖1．0)mmol／L]制备离体大鼠心脏缺血再灌注模型，将果糖二磷酸镁(2.4mmol／L)加入灌流液内，停灌时间30min，再灌注时间1h。分别在心脏灌流稳定20min，再灌注60min记录左室收缩压、左室压力变化速率，并收集1min冠状动脉血流量。取左心室标本测总超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法，测组织丙二醛含量用硫代巴比妥酸法。结果：24只SD大鼠均进入结果分析。①再灌注后左室收缩压比较：果糖磷酸镁组明显低于缺血再灌注组[(73．0&;#177;6．8，109．0&;#177;9．2)mmHg，τ=10．789，P&;lt;0．05)]。②再灌注后左室压力变化速率比较：缺血再灌注组明显低于对照组[(913&;#177;233，1889&;#177;304)mmHg／s，τ=6．756，P&;lt;0．01)]。③再灌注后心脏冠状动脉血流量比较：果糖磷酸镁组明显高于缺血再灌注组[(4．6&;#177;0.4，3．5&;#177;0．5)mL／min,τ=2．693，P&;lt;0．05)]。④再灌注后左心室肌组织总超氧化物歧化酶活性比较：果糖磷酸镁组明显高于缺血再灌注组[(33．06&;#177;3．03，22．18&;#177;4．79)NU／mg，(τ=8．123，P&;lt;0．01)]。⑤再灌注后左心室肌组织丙二醛含量比较：缺血再灌注组组明显高于对照组[(10.00&;#177;1．13，2．56&;#177;0．63)nmol／mg，(τ=18．76，P&;lt;0．01)]。结论：果糖二磷酸镁对再灌注损伤心肌可改善其收缩功能，并降低心肌组织中的丙二醛含量，从而减少氧自由基的产生，起到抗脂质过氧化而保护心肌的作用。     

大鼠心脏缺血再灌损伤与葡萄糖酸镁的保护作用

目的观察具有改善心肌收缩作用的葡萄糖酸镁对实验性大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用. 方法实验于2005-02在锦州医学院药理教研室完成.24只SD大鼠随机分为3组,对照组、缺血再灌注组和葡萄糖酸镁组,每组8只.3组大鼠均实施主动脉递引灌流,采用Langendorff方法用KH缓冲液[(NaCl 118.5,NaCO3 25.0,KH2PO41.2,KCl 4.8,MgSO4 1.2,CaCl 22.0,葡萄糖1.0)mmol/L]制备离体大鼠心脏缺血再灌注模型,将葡萄糖酸镁(2.4 mmol/L)加入灌流液内,停灌时间30 min,再灌注时间1 h.分别在心脏灌流稳定20 min,再灌注60 min记录左室收缩压、左室压力变化速率,并收集1 min冠状动脉血流量.取左心室标本测总超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法,测组织丙二醛含量用硫代巴比妥酸法. 结果SD大鼠共24只均进入结果分析.①再灌注后左室收缩压葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组[(65.6±3.8,56.1±8.7)mm Hg,(t=2.287,P＜0.05)].②再灌注后左室压力变化速率葡萄糖酸镁组明显低于对照组[(1241±202,1889±304)mm Hg/s,(t=-3.980,P＜0.01)].③再灌注后冠状动脉血流量葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组[(4.5±0.3,3.5±0.5)mL/min,t=5.895,P＜0.01].④再灌注后左室心肌组织内总超氧化物歧化酶活性葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组[(37.17±3.42,22.18±4.79)kNU/g,t=4.874,P＜0.01].⑤再灌注后丙二醛的含量葡萄糖酸镁组明显低于缺血再灌注组[(5.25±1.01,10.00±1.13)μmol/g,t=-5.827,P＜0.01]. 结论葡萄糖酸镁对再灌注损伤心肌可改善其收缩功能,并降低心肌组织中的丙二醛含量,从而减少氧自由基的产生,起到抗脂质过氧化而保护心肌的作用.     

大鼠心脏缺血再灌损伤与葡萄糖酸镁的保护作用

目的:观察具有改善心肌收缩作用的葡萄糖酸镁对实验性大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:实验于2005-02在锦州医学院药理教研室完成。24只SD大鼠随机分为3组,对照组、缺血再灌注组和葡萄糖酸镁组,每组8只。3组大鼠均实施主动脉递引灌流,采用Langendorff方法用KH缓冲液犤(NaCl118.5,NaCO325.0,KH2PO41.2,KCl4.8,MgSO41.2,CaCl22.0,葡萄糖:1.0)mmol/L犦制备离体大鼠心脏缺血再灌注模型,将葡萄糖酸镁(2.4mmol/L)加入灌流液内,停灌时间30min,再灌注时间1h。分别在心脏灌流稳定20min,再灌注60min记录左室收缩压、左室压力变化速率,并收集1min冠状动脉血流量。取左心室标本测总超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法,测组织丙二醛含量用硫代巴比妥酸法。结果:SD大鼠共24只均进入结果分析。①再灌注后左室收缩压:葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组犤(65.6±3.8,56.1±8.7)mmHg,(t=2.287,P<0.05)犦。②再灌注后左室压力变化速率:葡萄糖酸镁组明显低于对照组犤(1241±202,1889±304)mmHg/s,(t=-3.980,P<0.01)犦。③再灌注后冠状动脉血流量:葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组犤(4.5±0.3,3.5±0.5)mL/min,t=5.895,P<0.01犦。④再灌注后左室心肌组织内总超氧化物歧化酶活性:葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组犤(37.17±3.42,22.18±4.79)kNU/g,t=4.874,P<0.01犦。⑤再灌注后丙二醛的含量:葡萄糖酸镁组明显低于缺血再灌注组犤(5.25±1.01,10.00±1.13)μmol/g,t=-5.827,P<0.01犦。结论:葡萄糖酸镁对再灌注损伤心肌可改善其收缩功能,并降低心肌组织中的丙二醛含量,从而减少氧自由基的产生,起到抗脂质过氧化而保护心肌的作用。     

大鼠胰腺缺血再灌注损伤微循环改变的实验

目的:探讨胰腺缺血再灌注后微循环的改变与胰腺损伤的关系。方法:实验于2002-12/2004-01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室、解放军第九十七医院实验科、徐州市心血管研究所实验室完成。24只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注1h组,缺血再灌注6h组,每组8只。测定血淀粉酶,脂肪酶了解胰腺外分泌功能;光镜、电镜观察胰腺组织结构改变;微循环显微镜检测胰腺微循环的血管直径、血流速度、血流状态;测定胰腺组织干/湿比,了解组织含水量的变化。结果:24只大鼠全部进入结果分析。①胰腺缺血再灌注后血清淀粉酶、脂肪酶含量:缺血再灌注1h组淀粉酶和脂肪酶含量高于假手术组[(26.67±9.99)μkat/L,(5.24±1.82)μkat/L,(14.53±3.98)μkat/L,(2.83±1.64)μkat/L,(t=2.60,3.49,P<0.05)],缺血再灌注6h时明显高于假手术组[(41.59±10.95)μkat/L,(10.66±2.61)μkat/L,(t=7.35,7.54,P<0.01)]。淀粉酶、脂肪酶随着再灌注时间延长而增加。②胰腺缺血再灌注后形态学改变:缺血再灌注1h组光镜下呈现急性水肿性胰腺炎表现,缺血再灌注6h组损伤加重,出现出血、坏死。③胰腺缺血再灌注后微循环的改变:缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微动脉口径小于假手术组[(18±6)μm,(20±9)μm,(22±8)μm,(t=2.42～3.85,P<0.05)]。缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微静脉口径均较假手术组扩张[(30±8)μm,(35±15)μm,(25±10)μm,(t=2.42～3.85,P<0.05)],缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组微静脉口径明显扩张(t=3.69,P<0.05)。缺血再灌注1h组与缺血再灌注6h组的血流速度均较假手术组减缓[(0.44±0.12)mm/s,(0.21±0.04)mm/s,(0.56±0.03)mm/s,(t=2.42～4.19,P<0.05～0.01)],并且缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组血流速度显著减缓(t=5.19,P<0.01)。④胰腺再灌注后胰腺组织干湿比的改变:缺血再灌注1h组胰腺干湿比明显少于假手术组[(26.5±2.3)%,(30.1±2.1)%,(t=3.23,P<0.05)],缺血再灌注6h组胰腺干湿显著减少[(20.4±2.2)%,(t=8.23,P<0.01)]。结论:胰腺缺血再灌注1h时即发生微循环障碍及组织损伤,再灌注6h微循环障碍进一步恶化,胰腺缺血再灌注后,胰腺组织损伤与微循环紊乱的发展呈现一致性。     

大鼠心脏缺血再灌损伤与葡萄糖酸镁的保护作用

目的：观察具有改善心肌收缩作用的葡萄糖酸镁对实验性大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法：实验于2005-02在锦州医学院药理教研室完成。24只SD大鼠随机分为3组，对照组、缺血再灌注组和葡萄糖酸镁组，每组8只。3组大鼠均实施主动脉递引灌流，采用Langendorff方法用KH缓冲液[（NaCl 118．5，NaCO3 25.0，KH2PO4 1．2，KCl 4．8，MgSO4 1．2，CaCl 22.0，葡萄糖：1．0）mmol／L]制备离体大鼠心脏缺血再灌注模型，将葡萄糖酸镁（2．4mmol／L）加入灌流液内，停灌时间30min，再灌注时间1h。分别在心脏灌流稳定20min，再灌注60min记录左室收缩压、左室压力变化速率，并收集1min冠状动脉血流量。取左心室标本测总超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法，测组织丙二醛含量用硫代巴比妥酸法。结果：SD大鼠共24只均进入结果分析。①再灌注后左室收缩压：葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组[（65．6&;#177;3．8，56．1&;#177;8．7）mmHg，（t=2．287，P〈0．05）]。②再灌注后左室压力变化速率：葡萄糖酸镁组明显低于对照组[（1241&;#177;202，1889&;#177;304）mmHg／s，（t=-3．980，P〈0．01）]。（勤再灌注后冠状动脉血流量：葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组[（4．5&;#177;0．3，3．5&;#177;0．5）mL/min，t=5．895，P〈0．01]。④再灌注后左室心肌组织内总超氧化物歧化酶活性：葡萄糖酸镁组明显高于缺血再灌注组[（37．17&;#177;3．42，22．18&;#177;4．79）kNU／g，t=4．874，P〈0．01]。⑤再灌注后丙二醛的含量：葡萄糖酸镁组明显低于缺血再灌注组[（5．25&;#177;1．01，10．00&;#177;1．13）μmol／g，t=-5．827，P〈0．01]。结论：葡萄糖酸镁对再灌注损伤心肌可改善其收缩功能，并降低心肌组织中的丙二醛含量，从而减少氧自由基的产生，起到抗脂质过氧化而保护心肌的作用。     

1,6-二磷酸果糖对大鼠心肌再灌注损伤的干预效应

目的:探讨1,6-二磷酸果糖(fructose1,6-diphosthate,FDP)的抗再灌注心肌损伤作用与脂质过氧化的关系。方法:实验于2003-06/07在大连医科大学中心实验室完成,选取健康SD大鼠60只,随机分成对照组、心肌缺血组、缺血再灌注组、缺血再灌注+FDP组和缺血再灌注+超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)组。采用硫代巴比妥酸法和肌酸固定法,分别测定丙二醛及血清肌酸激酶(creatinekinase,CK)在大鼠心肌缺血和再灌注条件下的含量变化。结果:心肌缺血组SD大鼠CK含量明显升高,(4684.27±533.44)nkat/L;缺血组再灌注血清丙二醛和CK含量急剧上升,分别为(3.90±0.73)μmol/g,(5784.49±883.51)nkat/L;缺血再灌注+FDP组和缺血再灌注+SOD组丙二醛和CK含量均显著降低,分别为(2.82±0.46)μmol/g,(3767.42±833.50)nkat/L;(3.22±0.72)μmol/g,(4234.18±766.82)nkat/L(P<0.01)。结论:再灌注心肌损伤加重;FDP对再灌注心肌损伤有明显的保护作用。     

果糖二磷酸镁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察1,6二磷酸果糖和镁离子的合成药果糖二磷酸镁对心肌缺血再灌注损伤过程中血清中肌酸激酶,乳酸脱氢酶,Mg2 浓度,心肌组织内超氧化物歧化酶,丙二醛浓度的影响,并与单用1,6二磷酸果糖或硫酸镁相比较。方法:实验于2004-10/2005-05在锦州医学院药理学实验室进行,取50只雄性SD大鼠随机分为5组,每组10只:①模型组:采用左冠状动脉下穿线,拉紧丝线引起心肌缺血,放松丝线给予再灌注的方法建立心肌缺血再灌注损伤动物模型,结扎冠脉左室前降支30min时经大鼠尾静脉注入生理盐水1mL,10min给药完毕,再灌注40min。②果糖二磷酸镁组:造模及给药时间和方法同模型组,注入药物为1mL果糖二磷酸镁(100mg/kg)。③1,6二磷酸果糖组:同前造模给药,药物为1mL1,6二磷酸果糖(106mg/kg)。④硫酸镁组:同前造模给药,药物为硫酸镁(30mg/kg)。⑤假手术组:完成模型全部操作,只穿线不结扎。各组大鼠在再灌注40min后,均经颈动脉取血采用比色法测定肌酸激酶,乳酸脱氢酶活力及Mg2 浓度;于实验结束后立即取左室游离心肌组织0.5g,采用羟胺法测定超氧化物歧化酶活力,采用硫代巴比妥钠比色法测定丙二醛含量。结果:50只大鼠进入结果分析。①血清中肌酸激酶活力:果糖二磷酸镁组、1,6二磷酸果糖组和硫酸镁组均低于模型组[(84.40±19.15),(86.90±5.68),(90.86±9.13),(105.43±3.95)μkat/L,P<0.05]。②血清乳酸脱氢酶活力:果糖二磷酸镁组、1,6二磷酸果糖组和硫酸镁组均低于模型组[(47.57±19.58),(50.94±3.86),(50.45±5.37),(68.59±11.74)μkat/L,P<0.01]。③血清中Mg2 浓度:果糖二磷酸镁组和硫酸镁组均高于模型组[(0.92±0.06),(0.91±0.04),(0.75±0.03)mmol/L,P<0.01]。④心肌组织超氧化物歧化酶活力:果糖二磷酸镁组和1,6二磷酸果糖组均高于模型组[(1.52±0.41),(1.44±0.39),(1.15±0.28)μkat/g,P<0.05]。⑤心肌组织内丙二醛含量:果糖二磷酸镁组和1,6二磷酸果糖组显著低于模型组[(17.08±23.12),(21.60±5.58),(50.13±18.21)nmol/g,P<0.01]。结论:果糖二磷酸镁对缺血再灌注心肌损伤具有保护作用,很可能是通过1,6二磷酸果糖和硫酸镁协同作用而产生,其效果优于单用1,6二磷酸果糖或硫酸镁。其保护作用机制与增加血清中Mg2 浓度和组织内超氧化物歧化酶含量,减少血清中肌酸激酶,乳酸脱氢酶活力和组织内丙二醛含量及抗脂质过氧化有关。     

拳参正丁醇提取物保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的剂量依赖性效应

目的:观察具有清热、镇惊、理湿、消肿、镇痛等功效的中药拳参正丁醇提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:实验于2004-09/2005-12在赣南医学院科研中心实验室完成。①取32只雄性Wistar大鼠,随机分为4组,每组8只,分别为假手术组、缺血再灌注组、拳参正丁醇提取物实验样品由沈阳药科大学植化教研室邱峰博士提供.高剂量组(120mg/kg)、拳参正丁醇提取物低剂量组(60mg/kg)。结扎冠状动脉左前降支使心肌缺血,40min后恢复血流并持续120min,复制缺血再灌注损伤模型。治疗组于结扎冠状动脉左前降支前20min经十二指肠注入拳参正丁醇提取物。缺血再灌注组及假手术组经十二指肠注入等体积生理盐水。按南京建成生物工程研究所提供试剂盒说明测定血清乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶值。测定心肌组织丙二醛和超氧化物歧化酶值。用硫代巴比妥法测定丙二醛含量,用羟胺法测定超氧化物歧化酶值。②另取24只Wistar大鼠,分别为缺血再灌注组、拳参正丁醇提取物高剂量组(120mg/kg)、拳参正丁醇提取物低剂量组(60mg/kg)。同上述动物模型制作方法进行实验。以梗死区心肌湿质量占全心肌湿质量的百分比表示心肌梗死的范围。③用t检验进行组间计量资料差异比较。结果:大鼠56只均进入结果分析。①心肌组织超氧化物歧化酶含量:缺血再灌注组和拳参正丁醇提取物高低剂量组均明显低于假手术组(t=5.27～12.15,P<0.01);拳参正丁醇提取物高剂量组明显高于缺血再灌注组(t=2.30,P<0.05)。②心肌组织丙二醛含量:缺血再灌注组和拳参正丁醇提取物高低剂量组均明显高于假手术组(t=9.00～10.25,P<0.01);拳参正丁醇提取物高剂量组明显低于缺血再灌注组(t=1.97,P<0.05)。③血清乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶活性:缺血再灌注组和拳参正丁醇提取物高低剂量组均明显高于假手术组(t=2.93～18.36,P<0.01),拳参正丁醇提取物高低剂量组明显低于缺血再灌注组(t=1.99～6.99,P<0.05～0.01)。④心肌梗死范围:拳参正丁醇提取物高、低剂量组大鼠均明显小于缺血再灌注组[(34.24±1.51)%,(34.93±1.88)%,(38.66±3.89)%,t=2.99,2.43,P<0.01,0.05],尤以高剂量组明显。结论:拳参正丁醇提取物通过提高心肌组织的超氧化物歧化酶和降低丙二醛,降低血清乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶,清除自由基,防止脂质过氧化而产生保护心肌的作用,该作用随着拳参正丁醇提取物剂量增大而增强。     

缺血再灌注对大鼠心室肌细胞钠离子电流的影响

目的探讨大鼠心室肌细胞的分离方法以及缺血再灌注后钠通道电流的异常变化。方法实验于2003-08/2004-06在白求恩国际和平医院心内科中心实验室完成。选择健康成年一级W istar大鼠30只,随机分为3组,即正常对照组、缺血10m in再灌组和缺血30m in再灌组,每组10只。采用Langendorff灌流装置,经主动脉根部逆行灌流K-H液使离体大鼠心脏复跳,继以4℃St.Thomas液于主动脉根部逆行灌注,使心脏分别停跳10m in,30m in,再以K-H液复灌使心脏复跳稳定,建立模拟心脏外科体外循环缺血再灌注动物模型。采用酶解技术分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录方法,观察记录心室肌细胞钠通道电流的变化。结果纳入30只大鼠,各组以获得离子电流的实际细胞数作为统计学样本量[正常对照组(n=12),缺血10m in再灌组(n=10),缺血30m in再灌组(n=10)]。①心肌细胞存活率及形态存活率约70%～80%。细胞形态呈长杆状、横纹清晰、膜良好。②缺血再灌注后心室肌细胞钠通道电流密度变化缺血10m in再灌组的钠通道电流密度峰值(-20m V)显著低于正常对照组[(6.51±1.06),(13.55±2.33)pA/pF(t=3.126,P<0.01)];缺血30m in再灌组的钠通道电流密度峰值显著高于对照组[(41.27±4.43)pA/pF(t=5.437,P<0.01)]。结论在模拟心脏外科体外循环缺血再灌注环境下可分离出高存活率的心室肌细胞,具有很好的电生理活性。钠通道电流于缺血/再灌注不同时间的异常变化,可导致钙超载,产生再灌注损伤。     

老年大鼠血脂、载脂蛋白-胆固醇、过氧化脂质含量及单胺氧化酶活性与还少丹的干预作用

目的:探讨由何首乌、熟地、肉苁蓉等中药组成的还少丹对大鼠血脂、载脂蛋白-胆固醇、过氧化脂质含量和单胺氧化酶活性的影响。方法:实验于2005-04在湖南中医学院分子生物学实验室完成。24只健康SD老年大鼠,随机分为对照组和药物组,每组12只。药物组用还少丹水煎液(由何首乌、熟地、肉苁蓉等中药组成)灌胃2mL(含生药7g)/(kg.d),对照组用等量生理盐水灌胃,5d/周,另2d自由饮水,给药80d。大鼠禁食12h后取血,检测血脂和载脂蛋白-胆固醇的含量,测定血清谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量,并取脑组织测定单胺氧化酶活性。结果:21只老年大鼠进入结果分析。①三酰甘油含量:药物组明显低于对照组[(0.97±0.11,1.50±0.93)mmol/L,(t=11.98,P<0.01)]。②低密度脂蛋白-胆固醇:药物组明显低于对照组[(1.99±0.11,2.94±0.12)mmol/L,(t=18.68,P<0.01)]。③谷胱甘肽过氧化物酶活性:药物组明显高于对照组[(37.34±2.00,31.51±2.33)nkat/L,(t=6.25,P<0.01)]。④丙二醛含量:药物组明显低于对照组[(13.79±1.01,17.70±1.41)nmol/mL,(t=5.12,P<0.01)]。⑤单胺氧化酶活性:药物组明显低于对照组[(0.07±0.01,0.24±0.02)nkat/g,(t=13.27,P<0.01)]。结论:①还少丹能降低大鼠血清中三酰甘油、总胆固醇的含量,提高高密度脂蛋白胆固醇/低密度脂蛋白胆固醇的比值,起到抗动脉粥样硬化的效应。②有效地提高大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶活性,抑制大鼠脑内的单胺过氧化物酶活性,产生抗衰老的作用。