三苯氧胺可延迟人黑色素瘤和卵巢癌细胞系对顺铂抗药性的发生

无论体外还是体内顺铂都能迅速发生抗药性,这是影响疗效的主要障碍。已证明三苯氧胺与顺铂联用对三种有代表性的人癌细胞系(黑色素瘤、卵巢癌和小细胞肺癌)具有高度协同效应。现报告三苯氧胺的一种新药效动力学作用,即延迟顺铂抗药性发生的能力。 试验选用T-289黑色素瘤细胞和2008卵巢癌细胞。单以顺铂或顺铂加三苯氧胺培养这两种细胞系。于不同时间从培养中取出这些细胞,定量检测顺铂的抗药性。结果发现T-289黑色素瘤细胞培养200天时抗药性的差异有统计学意义。单用顺铂(2.2μmol/L)治疗的细胞IC_(50)(抑制50％细胞生长的药浓度)为20.6μmol/L,而顺铂(2.0μmol/L)     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的 通过乳腺癌细胞系及其干细胞的培养,化疗药干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。方法 通过细胞培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,观察生长曲线,比较化疗药物干预下生长情况;利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例;无血清悬浮培养,化疗药(多西紫杉醇、表阿霉素)干预这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。结果 (1)MDA-MB-231细胞系倍增时间短,生长速率高于MCF-7细胞系;(2)MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,其对化疗抵制,能自我更新;(3)化疗敏感性用两独立样本t检验,MCF-7细胞,差异没有统计学意义;MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗较敏感;(4)无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞系未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约6天出现细胞球。加入化疗药筛选后两种细胞,见大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;(5)流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要是CD44⁺CD24⁺亚群和CD44^-CD24⁺亚群,CD44⁺CD24^-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论 (1)MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,其对TA联合化疗药物较敏感;MCF-7细胞系中可能存在少量肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新;(2)无血清培养液培养MCF-7细胞系能形成悬浮细胞球;流式细胞仪检测两种细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例小;(3)CD44⁺CD24^-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志。     

人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系的建立及其特性

背景与目的:临床前和临床研究显示吉西他滨对实体瘤有较好的疗效,尽管已有卵巢癌和红白血病吉西他滨耐药细胞系的报道,但肺癌吉西他滨耐药细胞系尚未见报道。我们建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系,并对其细胞生物学特性进行研究。方法:逐步增加培养基中吉西他滨的浓度,建立了对吉西他滨耐药的人肺腺癌细胞系A549-Gem。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,计算出A549和A549-Gem的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI)。比较A549和A549-Gem的生长曲线,并计算出两细胞系的倍增时间。采用MTT法检测A549-Gem对几种常用抗肿瘤药物的交叉耐药谱。结果:吉西他滨对A549和A549-Gem的IC50分别为(6.56±1.19)μmol/L和(921.09±225.27)μmol/L,RI为140.52(P=0.0195)。集落形成实验的RI为132.95。根据生长曲线计算出A549和A549-Gem的倍增时间为29.7h和36.4h。交叉耐药实验表明,A549-Gem对长春新碱(VCR)和足叶乙甙(VP-16)的RI分别为54.38和6.18(P<0.01),对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、阿糖胞苷(Ara-C)和紫杉醇(Taxol)无交叉耐药。结论:成功建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系A549-Gem,耐药性能明显、稳定,非常适合用于肺癌中吉西他滨耐药的研究。A549-Gem对VCR、VP-16产生交叉耐药,对ADM、DDP、Ara-C和Taxol无交叉耐药     

人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系的建立及耐药特性的检测

目的为揭示吉西他滨在胰腺癌中引起耐药的机制,建立了人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系并对其细胞生物学特性进行了研究。方法逐步增加培养基中吉西他滨的浓度,在人胰腺癌细胞系SW1990中建立了对吉西他滨耐药的细胞系SW1990-GEM。采用四氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,计算SW1990和SW1990-GEM的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI)。比较SW1990和SW1990-GEM的生长曲线并计算出两细胞系的倍增时间。采用MTT法检测SW1990-GEM对几种常用抗肿瘤药物的交叉耐药谱。结果SW1990和SW1990-GEM的IC50分别为(0.428±0.069)μmol/L和(230.53±13.12)μmol/L,RI为537.45(P<0.001)。根据生长曲线计算出SW1990和SW1990-GEM的倍增时间为22.8小时和35.8小时。交叉耐药实验表明,SW1990-GEM对5-FU、表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇、泰素帝、长春新碱和依托泊苷产生交叉耐药,对顺铂、阿糖胞苷无交叉耐药。结论成功建立了人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系SW1990-GEM,耐药性能明显、稳定。SW1990-GEM对5-FU、表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、紫杉醇、泰素帝、长春新碱和依托泊苷产生交叉耐药,对顺铂、阿糖胞苷无交叉耐药。     

体细脑杂交的诞生:Boris Ephrussi和染色体移植(续)

巴黎Gustave Roussy研究所的Georges Barski,Serge Sorieul和FrancineCornefert的新发现促进了这项工作,Barski小组研究由某个小鼠成纤维细胞而来的小鼠癌细胞系,2个细胞系在组织培养中表现出不同的表型,即染色体构型,及肿瘤形成的能力:“高癌”系(NI)容易产生肿瘤,而“低癌”系(N2)则相当弱。Barski,Sorieul和Cornefert为了能在2个细胞系发现象肺炎双球菌那样的转化,他们于1959年12月9日开始了一系列实验,将2种细胞类型(N1和N2)混合培养。经过3个月的培养,他们发现了1种出乎意料的新的细胞类型,截然与2个亲本不同,在混合培养中长得很好。看来新细胞是N1和N2细胞融合形成1个在核中有2种细胞染色体的杂种细胞。其染色体数大致是N1和N2的总和,每一系染     

人多发性骨髓瘤耐药细胞系MOL P22/ R 的 建立及其耐药机制

 目的　建立耐马法兰的人多发性骨髓瘤细胞系MOL P22/ R , 并对其生物学特性及耐药机制进 行初步探讨。方法　采用马法兰浓度梯度递增法,建立耐马法兰多发性骨髓瘤细胞系。检测两种细胞 的形态差异、生长曲线及倍增时间; 用药物敏感试验检测两种细胞对马法兰及多种化疗药物的半数抑 制浓度( IC50 ) 和耐药指数( R I) ;使用Western blot 比较两种细胞P2gp 、MRP 和FANCD2 的表达差异来 探讨可能的耐药机制。结果　成功建立了耐药指数为6. 03的MOL P22/ R 耐药细胞系,与MOL P22 细胞 相比,MOL P22/ R 耐药细胞异形明显; 耐药细胞倍增时间显著延长( P < 0. 05 ) ; MOL P22/ R 且对 ADM、CTX、DDP、VP216 有交叉耐药; MOL P22/ R 中FANCD2 的单泛素化表达较MOL P22 明显增加, 而P2gp 、MRP 在耐药细胞系中表达无升高。结论　MOL P22/ R 具有典型多药耐药特性,为进一步研究 耐药逆转途径提供了实验基础。FANCD2 蛋白单泛素化表达增强可能是MOL P22/ R 细胞产生获得性 耐药的主要机制之一。     

人结肠癌细胞系肿瘤干细胞特性的初步研究

目的:本研究对8种人结肠癌细胞系的干细胞特性进行初步检测,以寻找适合分选结肠癌干细胞的细胞系.方法:利用流式细胞术,RT-PCR检测8种结肠癌细胞中CD133的表达情况;利用条件培养观察8种细胞系的肿瘤细胞在无血清培养基中的生物学特性;利用裸鼠成瘤模型检测成瘤能力和转移能力.结果:CD133在8种细胞系中的表达有显著差异,最高的HCT116细胞系中CD133+细胞含量为(91.4±5.0)%;各种细胞系细胞均能在无血清培养基中增殖,但只有HCT116细胞能形成典型的"神经球样结构"且具有较高的成瘤能力和转移能力.同等细胞浓度下移植瘤体积HCT116(1.06±0.13) cm3, LOVO(0.22±0.09) cm3, P=0.01, 差异具有统计学意义.结论:相对于其他7种细胞系,HCT116细胞具有多种肿瘤干细胞的生物学特性,更适合于结肠癌干细胞的研究.     

小鼠多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性观察

目的：建立小鼠多药耐药白血病细胞系P388/VCR并研究其生物学特性。方法：小鼠淋巴细胞白血病细胞系P388,通过长期、单一、逐步提高浓度的方法建立多药耐药的白血病细胞系P388/VCR。采用悬浮细胞培养和半固体培养观察该细胞系的生长规律：流式细胞术分析细胞周期分布及柔红霉素在细胞内的积聚量;RT-PCR方法检测mdrLa基因表达;四氮甲基唑蓝(MTT)法研究P388/VCR细胞系的耐药谱。结果：经过6个月单一、小剂量及间歇给药的方法诱导P388细胞成为多药耐药细胞系P388/VCR。与亲本细胞系P388比较,细胞生长曲线及倍增时间无明显差异,软琼脂培养集落形成率及大集落形成率差异不显著。细胞周期分析P388/VCR细胞S期比例降低。P388／VCR细胞除对原诱导药物具有耐药性外,对其他多种抗肿瘤药物如柔红霉素、高三尖杉酯碱、米托蒽醌、足叶乙苷等也具有交叉耐药性。流式细胞仪检测细胞内柔红霉素含量P388/VCR细胞平均荧光值为3．72,明显低于P388细胞的17．31。RT-PCR检测mdrla基因的表达结果为：P388细胞阴性,P388/VCR细胞阳性。结论：多药耐药细胞系P388／VCR具有mdrla基因表达阳性及对多种抗肿瘤药物耐药的特征。     

人多发性骨髓瘤耐药细胞系MOLP-2/R的建立及其耐药机制

目的 建立耐马法兰的人多发性骨髓瘤细胞系MOLP-2/R,并对其生物学特性及耐药机制进行初步探讨.方法 采用马法兰浓度梯度递增法,建立耐马法兰多发性骨髓瘤细胞系.检测两种细胞的形态差异、生长曲线及倍增时间;用药物敏感试验检测两种细胞对马法兰及多种化疗药物的半数抑制浓度(JC50)和耐药指数(RJ);使用Western blot比较两种细胞P_gP、MRP和FANCD2的表达差异来探讨可能的耐药机制.结果 成功建立了耐药指数为6.03的M()Lp2/R耐药细胞系,与MOLP-2细胞相比,MOLP-2/R耐药细胞异形明显;耐药细胞倍增时间显著延长(P<0.05);MOLP_2/R且对ADM、CTX、DDP、VP-16有交叉耐药;MOLp-2/R中FANC132的单泛素化表达较MOLP-2明显增加,而P-gp、MRP在耐药细胞系中表达无升高.结论 MOLP-2/R具有典型多药耐药特性,为进一步研究耐药逆转途径提供了实验基础.FANCD2蛋白单泛素化表达增强可能是MOLp-2/R细胞产生获得性耐药的主要机制之一.     

恶性肿瘤细胞系自发性老化的研究

目的:探讨恶性肿瘤细胞系是否普遍存在自发性老化.方法:应用老化相关半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-Gal)染色法检测10种恶性肿瘤细胞系中SA-β-Gal的表达情况,以及血清饥饿后该酶的表达变化.结果:在无诱导处理且处于对数生长期的10种恶性肿瘤细胞系中,均发现有SA-β-Gal表达阳性的细胞,但不同细胞系中该酶表达阳性的老化细胞所占比率明显不同,最低的是宫颈癌HeLa细胞系(0.65 %),最高的是肝癌HepG2细胞系(3.69 %) (F=13.006,P=0.000);SA-β-Gal阳性表达的老化细胞不都是多倍体细胞;给予无血清培养液饥饿24 h后,老化细胞数目明显增加(P=0.001).结论:恶性肿瘤细胞系会发生自发性老化,其程度与细胞系种类有关.短期饥饿培养会明显增加老化细胞所占的比率,提示饥饿诱发细胞老化可能是抗肿瘤治疗的又一快速、简单且有效的途径.     

细胞培养技术在胸苷磷酸化酶研究中的应用

体外细胞培养是指将活体细胞从体内取出,放在类似于体内环境的体外环境中,让其生长繁殖的方法。从1907年实验胚胎学家R Harrison较完善地建立了体外活体组织的培养体系开始到现在细胞培养已有了长足的进步,而且包括我国在内的许多国家已建立“培养物银行”。从各类细胞系、培养     

甲基硝基亚硝基胍(MNNG)转化的金仓鼠乳鼠肺细胞系(BHLB_4)的细胞周期与同步化研究

金仓鼠细胞培养系统已证明是研究癌变原理的良好实验模型。我们曾报导用MNNG转化金仓鼠乳鼠肺细胞,获得了一个恶性转化的细胞系(BHLB_4),并进行了一系列生物学特性研究和染色体核型分析。最近,我们建立了金仓鼠高分辨G方带染色     

“彗星” 法分析人肿瘤细胞DNA放射损伤和修复

探讨“彗星”分析法 (CA)在检测体外培养人肿瘤细胞DNA放射损伤与修复和放射敏感性的关系。方法　采用碱性CA检测鼻咽高分化鳞癌上皮细胞系 (CNE 1)、食管鳞癌上皮细胞系 (Ec 10 9)、肺腺癌细胞系 (GLC)和胃低分化腺癌细胞系 (BGC 82 3)经 6MVX射线照射后单细胞内DNA单链断裂 (SSB)程度及其与放射剂量的关系 ,以及CNE 1和GLC细胞系在分别接受了 16GyX射线照射后的自身修复情况 ,同时与相应的细胞存活曲线比较。结果　碱性CA可以检测出 4个细胞系DNA的SSB ,并与放射剂量呈良好的线性关系。 16Gy剂量下各细胞系的SSB程度依次为CNE 1>Ec 10 9>GLC >BGC 82 3。CNE 1,Ec 10 9,GLC和BGC 82 3细胞系的Do值分别为 1.2 5 ,1.2 7,1.88和 1.5 6。 16Gy诱导CNE 1和GLC细胞系的DNA损伤后 ,其半修复时间分别为 7.4,17.8min。结论　采用碱性CA能确切反映 4种人肿瘤细胞系DNA的定量损伤程度及其与放射剂量的关系 ,并能确切反映辐射损伤后自身修复能力 (CNE 1和GLC)在受测时间中的定量变化情况。自身修复能力的大小在鳞癌和腺癌细胞系间与放射敏感性的大小 (Do值 )有较好的对应关系。     

基因功能研究中线粒体定位方法的比较

目的：比较和选择最佳细胞线粒体定位方法及其适用范围。方法：采用免疫细胞化学，免疫组织化学，荧光免疫细胞和化学和活细胞培养法对不同细胞系和癌细胞的线粒体定位方法进行比较。结果：几种线粒体定位方法各有其特征和适用范围，但均具很高的特异性。结论：免疫组化法可用于组织中（即体内）细胞线粒体的显示；免疫细胞化学，荧光免疫细胞化学和活细胞培养法可用于体外基因功能研究中培养细胞的线粒体定位。     

人舌癌细胞耐药系Tca8113/BLM的建立及其耐药机理的分析

目的 :建立舌癌平阳霉素 (BleomycinA5Hydrochloride ,BLM)耐药细胞系Tca8113/BLM ;研究Tca8113/BLM细胞P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)表达变化与其耐药的相关性。方法 :采用大剂量BLM(30 μg/ml)反复间歇 2 4小时暴露法处理舌癌细胞系Tca8113细胞 ;用MTT法检测该耐药细胞模型的多药耐药性 ;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测P gp、MRP ;并用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,细胞内阿霉素 (ADM)蓄积 ,以及经典钙离子生物泵阻断剂逆转剂黄体酮 (Progesterone,Prog)对ADM蓄积的影响。结果 :①Tca8113/BLM耐药性稳定 ,耐药指数为 12 ,且对其它化疗药物产生交叉耐药性 ;②Tca8113/BLM的倍增时间延长 ,G1期细胞减少 ,G2和S期细胞增多 ;③P gp和MRP在Tca8113/BLM细胞中强阳性表达 ,在Tca8113细胞中弱阳性表达 ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ;④ADM在Tca8113/BLM细胞内蓄积明显低于Tca8113细胞 (P <0 .0 5 ) ;⑤Prog能显著提高Tca8113/BLM细胞内ADM蓄积 ,而对Tca8113细胞内ADM蓄积无明显作用。结论 :建立了舌癌BLM耐药细胞系Tca8113/BLM ,发现Tca8113/BLM的耐药性与P gp和MRP过表达有密切关系     

胸腺因子对T淋巴细胞前体的作用(文摘)

一种胸腺体液因子(TF)其特性为一分子量12,600的蛋白质(Goldstein et al.,1972)。Bach等叙述了在体外试验中能转化小鼠的T细胞前体为成熟的淋巴细胞。用TF短时间处理后,去除胸腺的小鼠获得与正常小鼠一样地具有表面标记的,在各种细胞参与的免疫反应中成为有活性功能的T细胞。(Lonai et al.,1973,Scheid et al.,1973)     

瞬时受体电位阳离子通道蛋白在膀胱癌细胞系中的差异表达及其意义

目的:研究瞬时受体电位阳离子通道蛋白(TRPV1)在三种膀胱癌细胞系(RT4、5637和T24)中的差异表达情况,并探讨其意义.方法:Real-time PCR和Western blot 实验分别检测TRPV1 mRNA和蛋白在三种膀胱癌细胞系中的表达情况;MTT 细胞增殖实验检测TRPV1特异性激动剂-辣椒素对三种肿瘤细胞增殖能力的影响,并计算其半数抑制浓度(IC50).结果:Real-time PCR 实验显示TRPV1 mRNA 在膀胱癌细胞系中差异性表达.RT4细胞相对表达量最高,为41.56±4.64;5637表达量次之,为8.81±0.62;T24细胞最少,为1.00±0.063,统计学分析表明三种细胞系表达TRPV1 mRNA具有统计学差异(P<0.01).TRPV1蛋白在膀胱癌细胞系中的表达与mRNA一致.MTT实验表明辣椒素能抑制TRPV1阳性肿瘤细胞的增殖,膀胱癌细胞系对辣椒素作用的敏感性依赖于TRPV1的表达程度.结论:TRPV1在膀胱癌细胞系中存在表达,膀胱癌细胞系对辣椒素的敏感性依赖于TRPV1的表达程度,TRPV1可能是膀胱癌潜在的治疗靶点.     

鸡新城疫病毒诱导口腔鳞癌细胞凋亡的实验研究

目的检测鸡新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)对人口腔鳞癌细胞诱导凋亡作用。方法采用MTT染色法和流式细胞仪分析法检测NDV对人口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)颈淋巴结转移癌细胞系(GNM)及人舌鳞癌细胞系(TSCCa)体外细胞培养株诱导凋亡的作用。结果NDV作用后的GNM、TSCCa均出现明显的细胞凋亡特征,与对照组差异有统计学意义。结论NDV能够诱导OSCC凋亡。     

六磷酸肌醇对人肝癌7402细胞凋亡的诱导

六磷酸肌醇 (IP6 )是高纤维食物的有效成分。流行病学调查表明 ,富含 IP6 的谷、豆类饮食与结肠癌、乳腺癌的发生呈负相关 :研究还发现 ,IP6 能抑制肝、肺、前列腺和其它脏器肿瘤的发生、发展和转移 [1 ] 。IP6 的抗癌作用已在体内外实验中得到证实 [2～ 4]。作者新近研究发现 ,体外 IP6 亦能诱导人肝癌 740 2细胞凋亡。材料与方法一、细胞系及细胞培养　肝癌细胞系 740 2由我所冻存。培养基为 RPMI- 16 40 ,含浓度为 10 %小牛血清 (CS杭州四季青 )、青链霉素终浓度各 10 0 U/ m l,置于 37℃、5 % CO2 培养箱中单层贴壁生长。二、细…     

肝癌细胞中Connexin32蛋白可调控表达亚克隆的建立

目的:利用Tet-off基因表达体系建立人间隙连接蛋白Connexin32基因可调控表达的肝癌细胞系,为探讨Connexin32蛋白表达与肝癌细胞的增殖、运动和侵袭能力的相关性奠定基础.方法:利用基因重组方法建立人Connexin32 cDNA的逆病毒表达载体pRevTRE-Cx32;利用逆病毒感染法将Connexin32表达载体和调控质粒pRevTet-off转入人肝癌细胞系HuH7中,筛选出稳定整合了两种载体的细胞克隆;western-blot法检测Connexin32蛋白表达的诱导率.结果:建立了可以通过向细胞培养液中添加或去除Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7亚克隆,western-blot结果显示当从细胞培养液中去除Doxycycline后,Connexin32表达明显升高,呈现4倍左右的诱导率.结论:成功建立了Connexin32蛋白可诱导表达的肝癌细胞HuH7 Tet-off Cx32亚克隆.