迎接高通量测序技术诊断儿童遗传性疾病的新时代

<正>周文浩教授非常荣幸能邀请到美国贝勒医学院夏凡教授来复旦大学附属儿科医院讲学,并就分子遗传诊断中心的工作给予非常具体的指导。复旦大学附属儿科医院分子诊断实验室已经开展100余项基因检测项目,应用Sanger测序、a CGH和MLPA等技术,建立了常见单基因遗传病的筛查和诊断平台,二代测序检测项目也初步展开。全外显子组测序(WES)技术,为寻找疾病的致病基因、易     

磁共振波谱分析在儿童脑遗传性疾病中的应用

儿童时期一些常见的遗传性疾病其脑部改变缺乏特异性,诊断缺少良好的手段,磁共振波谱分析作为目前唯一的无创性定量分析人体器官组织代谢生化的诊断技术,在协助这些疾病的诊断及早期发现病变等方面起到辅助诊断的作用。尤其是海绵样脑白质营养不良,其病变部位的N-乙酰天门冬氨酸水平增高,线粒体脑病颅内出现异常增高乳酸峰对于疾病的诊断具有较为显著的意义,而其他脑白质营养不良的表现则无特异性。     

儿科医师在遗传性肾脏疾病诊断中的作用

遗传性肾脏疾病治疗最关键为早期确诊,对有更多机会遇到遗传性肾脏疾病患儿的儿科医师,需要有诊断遗传性肾脏疾病的意识,以抓住早期诊断时机,尽可能将确诊的患儿转移到成人科,及早、及时采取相关干预措施,控制或减缓疾病进展,同时为患儿家长再生育提供有价值的信息。为此儿科医师需掌握医学遗传学基本的概念和规则,利用多种形式不断学习,了解、理解有关进展,多学科、多中心配合促进遗传性肾脏疾病的诊断工作。     

遗传性血小板功能障碍的诊断和治疗现状

遗传性血小板功能障碍(IPFD)是一种罕见的遗传性疾病,临床上以不同程度的出血倾向伴或不伴血小板减少为主要表现。以往由于实验室缺乏标准化评估体系,IPFD的诊断及分类困难,导致该类疾病的发病率可能被低估。目前,结合临床表现和实验室检测及二代测序技术,有助于及时、准确地诊断这类复杂的出血性疾病,并给予及时的病情评估及治疗...     

二代测序技术在儿童下呼吸道感染病原检测中的应用

二代测序(NGS)技术又称为高通量测序技术,与已经成为临床DNA测序标准方法的桑格测序相比,NGS技术更高效,可在较短的时间内以较低的成本获得大量信息。NGS技术在诊断及提高儿童下呼吸道感染病原检测、鉴别院内交叉感染病原、药物耐药性研究及疫苗开发等方面具有广阔的前景。在如何提高NGS技术诊断的特异性与敏感性,如何进一步...     

核医学在儿童泌尿系统疾病诊断中的应用（讲座）

随着核医学的发展,儿童作核医学检查逐渐增多。泌尿系统核医学检查仅需静脉注射药物和适当补液,可在门诊进行。放射性药物用量极微,无不良反应,全身辐射剂量一般小于美国FDA规定的5mGy(0.5rad)。许多学者认为,核医学是诊断儿科泌尿系统疾病的有效检查方法。     

宏基因组二代测序在儿童重症感染中的应用价值

目的 分析宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)在儿童重症感染性疾病中的应用价值.方法 对2018年6月至2020年12月温州医科大学附属第二医院收治的29例重症感染患儿的临床资料及实验室检查结果进行分析.29例患儿的29份标本(外周血标本27份,胸水...     

微小残留病变检测在儿童急性白血病中的应用

近年来,儿童急性白血病（AL）治疗效果随化疗方案的改进和危险分层治疗的引入取得很大进展。但微小残留病变（MRD）仍然是影响AL预后的一大难题。MRD水平影响化疗方案的选择、复发风险的分级,同时还可用于判断预后。目前检测MRD的方法主要有流式细胞术（FCM）和PCR。随着二代测序技术（NGS）的不断成熟与发展,其在MRD检测尤其在干细胞移植（SCT）后MRD检测方面扮演着重要角色。本文对微小残留病变检测在儿童急性白血病中的应用进行综述。     

高分辨率CT在儿童间质性肺疾病诊断中的应用

儿童间质性肺疾病与成人有不同的特点,正确诊断需要依靠临床、放射和病理相结合,其中高分辨CT(high-resolution CT,HRCT)在诊断中发挥了重要的作用.文章就HRCT在儿童间质性肺疾病临床诊断中的应用作一概述.     

病原体宏基因组二代测序在儿童粒细胞缺乏伴发热中的应用价值北大核心CSCD

目的探讨病原体宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)在儿童粒细胞缺乏伴发热中的应用价值,以期为儿童粒细胞缺乏伴发热的诊疗提供新的方法和策略。方法回顾性收集2020年1月至2021年12月粒细胞缺乏伴发热116例患儿的病原体mNGS结果。mNGS结果阴性患儿为阴性组(n=38),78例阳性患儿根据主要病原体分为细菌组(n=22)、真菌组(n=23)及病毒组(n=31)。比较各组临床资料的差异。结果116例粒细胞缺乏伴发热患儿中位诊断年龄8岁,中位mNGS结果回报时间为2 d,mNGS检测阳性率为67.2%(78/116)。细菌组患儿降钙素原水平高于阴性组(P<0.05),真菌组患儿C-反应蛋白水平、(1,3)-β-D葡聚糖/半乳甘露聚糖试验阳性率高于阴性组(P<0.05),真菌组患儿热程长于阴性组(P<0.05)。培养阳性病例中mNGS结果符合率为41%(9/22),其中血培养阳性病例中mNGS结果符合率为47%(8/17)。28例(36%)患儿根据mNGS阳性结果调整用药,其中26例治愈好转出院。结论病原体mNGS技术具有很好的时效性和阳性率,能为粒细胞缺乏伴发热患儿病原学诊断提供有力证据。     

住院儿童遗传性疾病6451例分析

目的了解１５年来住院儿童遗传病概况。方法对１９８３～１９９７年１２７７５７例住院病例进行了回顾性分析。结果遗传病６４５１例,占住院病例的５０５％,男女之比为１１２∶１。其中染色体病１００例（００８％）,单基因病２０４６例（１６０％）,多基因病（遗传度≥７０％）４３０５例（３３７％）。住院儿童遗传性疾病检出率９０年代较８０年代显著增加（Ｐ＜００１）。小儿遗传病可见于任何年龄组,但某些病种有其相对集中的发病年龄,死亡年龄高峰在新生儿期,某些疾病病死率高达３０％以上。结论目前优生工作的重点仍应放在预防劣生上,有必要强调儿科医师研究临床遗传学的重要性     

儿童肾脏疾病与基因检测的研究进展

随着基因检测手段的发展和进步,肾脏疾病的基因检测已成为肾脏疾病诊断及预后评估的一种重要手段.儿童肾脏疾病的发病与特定基因的异常有着密切联系.全面认识这些基因,为基因诊断、遗传咨询、产前诊断、疾病预后评估以及指导临床治疗奠定了基础.该文对近年来研究的一些热点基因与肾脏的关系以及这些基因突变导致肾脏疾病的有关研究进行综述.     

儿童Alport综合征COL4A5基因4种新突变分析

目的 分析4例儿童Alport综合征的基因型和临床表型特点。方法 总结4例患儿的临床特点,采用外显子捕获-第二代测序技术对4例诊断为Alport综合征患儿的COL4A5、COL4A4和COL4A3基因进行突变检测。结果 4例均为男性,年龄6～8岁,首发症状均为血尿,均伴有不同程度的蛋白尿。1例表现为高频听力区受损,1例右侧视网膜脱色素改变。4例肾功能均正常。肾穿刺活检电镜检查均显示典型Alport综合征基底膜病变。在4个家系中发现4种COL4A5基因突变,分别为Gly132Glu、Gly1238Arg、Gly267Arg和Gly1033Ser, 均为未报道的新突变。经家系验证Gly132Glu和Gly1033Ser为新生突变。用 SIFT 和PolyPhen 软件进行蛋白功能预测均显示4种突变为有害突变。结论 本研究采用外显子捕获-第二代测序技术共检测到4种COL4A5基因新突变,其中2种为新生突变。为人类Alport综合征基因突变数据库增添了4个新成员,对进一步研究中国人群Alport综合征的发病机制以及遗传咨询和产前诊断有重大意义。     

Current and future diagnosis of cystic fibrosis: Performance and limitations

Cystic fibrosis (CF) is the most frequent genetic disorder in the Caucasian population benefiting from systematic newborn screening tests. It is also the most frequent indication of prenatal and preimplantation genetic diagnosis for a single gene disorder. During the past thirty years, thanks in part to the evolution of diagnostic techniques, our knowledge on CFTR genetics and pathophysiological mechanisms involved in CF have significantly improved. With the implementation of newborn screening in France and in several countries, the diagnosis now often occurs in clinically asymptomatic infants and this has modified the criteria for CF diagnosis. Recently, guidelines for CF diagnosis have been reformulated in Europe and the US, in regard to sweat chloride usual values and disease terminology. This review describes the methods and molecular approaches that are used in routine practice or are being developed to detect CFTR protein dysfunction and to identify disease-causing CFTR variants. Ultimately, an optimal use of all these functional and genetic resources may improve patient care and therapeutic decision-making.© 2020 French Society of Pediatrics. Published by Elsevier Masson SAS. All rights reserved.     

Alagille综合征患儿1例临床和遗传学分析:一个包含JAG1基因的染色体新中间缺失的识别

Alagille综合征(ALGS)是一种常染色体显性遗传病,可累及肝脏、心脏、骨骼、眼睛、肾脏、颜面等多个系统。本文报道1例ALGS患儿的临床和遗传学特征。患儿为3个月10d男婴,因发现皮肤、巩膜黄染3个月就诊。体格检查示:宽额头,小下颌;胸骨左缘第2、3肋间可闻及3~4/6级收缩期杂音;腹部膨隆,肝右肋下3cm可触及,质地中等。生化结果示肝功能明显异常,胆红素升高,且以结合胆红素升高为主,伴总胆汁酸和γ-谷氨酰转肽酶显著升高。心脏彩超示房间隔缺损、肺动脉狭窄。二代测序发现该患儿JAG1基因整体杂合缺失,而染色体微阵列分析在患儿20号染色体p12.3p12.2处检出约3.0Mb缺失,该范围包含ALGS致病基因JAG1。该患儿具备特殊面容、心脏畸形和胆汁淤积等临床表现,结合遗传学分析结果,诊断ALGS明确。确诊后给予对症支持治疗,现已随访至生后11个月,胆红素较治疗前明显下降,但总胆汁酸和γ-谷氨酰转肽酶等指标仍明显升高,其远期预后仍有待随访观察。本研究扩展了JAG1基因突变谱,同时为患儿诊断、治疗及家系遗传咨询和产前诊断提供了实验室依据。     

基于目的基因捕获的二代测序技术对质谱检测阳性患儿的分子诊断

目的运用基于目的基因捕获的二代测序技术,对质谱检测阳性的遗传代谢病疑似患儿进行基因检测,探讨二代测序技术在遗传代谢性疾病诊断的应用价值。方法回顾性收集复旦大学附属儿科医院遗传代谢专科门诊收治的、质谱检测阳性遗传代谢病疑似患儿的剩余干血滴滤纸片,行目的基因捕获的二代测序,行Sanger进行验证。结果 2013年6月至2014年5月共有48例质谱检测阳性的遗传代谢病疑似患儿纳入本文分析,40例完成二代测序,男性22例。40例测序标本中,29例(72.5%)检测到与临床症状相符的基因变异,包括甲基丙二酸血症6例,citrin缺陷病6例,高苯丙氨酸血症5例,戊二酸血症3例,其他遗传代谢病9例。2例疑似citrin缺陷病的标本在SLC25A13基因上仅检测到单个致病性突变,进一步行长片段PCR,检测到2例标本均存在3 kb的杂合插入突变。结论基于目的基因捕获的二代测序技术在对临床疑似遗传代谢病的检测中,有着较高的阳性诊断率,不仅能为临床医生提供可靠的分子诊断依据,而且可以根据致病基因对疾病分型,有效地为后续的临床治疗和遗传咨询提供依据。     

血浆置换治疗儿童危重自身免疫性疾病临床分析

目的 观察血浆置换(plasma exchange,PE)技术对儿童危重自身免疫性疾病的疗效并探讨其机制.方法 用PE治疗3例系统性红斑狼疮,3例血栓性血小板减少性紫癜,5例吉兰-巴雷综合征,1例溶血尿毒综合征患儿.12例危重自身免疫性疾病患儿体重10～35 kg,平均(26.25±6.85) kg,每次置换量50～70 ml/kg,每日或隔日1次,共置换3～5次.检测PE治疗前后血生化、自身抗体及临床症状、体征等变化.结果 2例系统性红斑狼疮患儿在第1次PE治疗后神经系统症状明显减轻,血清补体升高,ANA和抗ds-DNA抗体滴度下降;3例血栓性血小板减少性紫癜患儿神志改善,于PE治疗后第5天血小板恢复正常;4例吉兰-巴雷综合征患儿均未发生呼吸衰竭,于PE疗程结束后双下肢肌力逐渐恢复.PE治疗前后血电解质和CO2CP保持稳定.1例溶血尿毒综合征和1例系统性红斑狼疮患儿死于肺出血,余10例好转出院,有效率83%.结论 PE联合其他综合治疗可明显提高危重自身免疫性疾病患儿的生存率,值得进一步研究和应用.     

儿科介入呼吸病学的历史 现状及展望

国内儿科呼吸内镜的开展要比成人晚10余年。1985年,我国儿科医院开始使用纤维支气管镜。20世纪90年代,首都医科大学附属北京儿童医院创建了国内首个儿科支气管镜室,国内开始建立对呼吸专业有重大意义的儿科气管镜方法。发展至今,支气管镜术在很多医院都成为了方法过关、安全可靠的有效诊疗手段,对支气管镜术在诊断中的需求性甚至和CT一样普及,特别是对呼吸系统重症和疑难病的诊断与治疗起到了巨大作用。未来,要将儿童介入呼吸病学发展为综合多学科的临床应用。     

高容量血液滤过在儿科的应用进展

高容量血液滤过(high volume hemofiltration,HVHF)是血液净化领域的一项重要发展,具有稳定血流动力学、清除炎症因子和体内代谢毒素等作用,同时HVHF在治疗中也存在一些弊端.目前HVHF在全身性炎症反应综合征、儿童脓毒症、脓毒性休克、多器官功能障碍、急性肾损伤、急性中毒等儿科危重疾病中的应用逐渐增多,已经成为儿科急救医学领域一项重要的救治技术.