术前血液稀释法自体输血的临床应用

目的 探讨血液稀释自体输血的方法及在成人外科手术中的应用价值。方法 64例患者采用了血液稀释自体输血,另外43例作为对照。比较了二组患者所需的同种异体输血量,术后不同时间H_6、HCT、Pit的恢复情况,以及抗生素与应用时间与用量。结果 血液稀释自体输血组在全麻诱导下,采用血液稀释,贮存自体血量平均为627ml,同种异体输血量明显少于对照组。同时,Pit恢复速度快,抗生素应用时间及量明显少于同种异体输血组。结论 血液稀释自体输血是一种十分安全有效的输血方式,可以明显减少同种异体血的输入及其并发症的发生。     

一种稀释法制备脂质体的方法考察

介绍了一种简单的直接稀释制备脂质体的方法,并考察了工艺因素对空白脂质体平均粒径的影响.结果表明,磷脂在乙醇及水化介质中的浓度越低,得到的脂质体粒径越小;水化介质的离子强度越大,得到的脂质体粒径越大.采用本法以多西他赛为模型药物试制得到的脂质体平均粒径为(110±10)nm,包封率为(99.2±1.4)%.     

试管稀释法筛选抑制β-内酰胺酶的中草药的研究

本实验根据文献记录，选出8种具有抑菌作用的中草药。联合使用中草药，采用试管稀释法测定青霉素对耐青霉素大肠杆菌的药物敏感性，结果表明有5种中草药对耐青霉素大肠杆菌、β-内酰胺酶有不同程度的抑制作用。     

血液稀释法自身输血的采血方法和护理探讨

目的探讨颅内肿瘤择期手术患者采取血液稀释法自身输血的采血方法和护理体会。方法选取我市第一人民医院2013年~2014年收治的46例颅内肿瘤择期手术患者作为本次研究对象,由于医院条件限制,血液稀释法自身输血的采血于本血站进行,机采自体血,血站室内常规温度环境下储存,待术毕后予以患者回输。结果本组46例患者每例患者的采血量为(445±45)mL;患者围术期未见有败血症发生;MAP、HR、SpO_2各项指标均无显著变化。结论采取血液稀释法自身输血可实现减少使用异体血液,充分利用自身血液既安全可靠又经济有效,是解决血液资源紧缺问题的有效途径。     

4种抗菌药物梯度试条法与琼脂稀释法测定MIC的比较

本文报告一种简便、实用的ＭＩＣ测定方法，即抗生素敏感试验梯度试条法，并将该法与经典的琼脂稀释法所得结果进行了比较。结果表明：４种药物两法之间的符合率为６９．５７～７６．０９％，平均７３．８％；相关系数均＞０．９０。该法操作简便，抑菌域清晰，有尖锐的终点，读数直观，结果准确，重现性较好。     

Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗免疫原性及对造血系统的影响

目的:研究Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗对SD大鼠的免疫原性及对造血系统的长期毒性。方法:疫苗组大鼠(n=30)免疫3次,每次每只动物2 mL ig,第1次免疫后3周、第3次免疫后1和4周各处死大鼠10只,检测血清特异性抗体,血液学和骨髓。结果:在各时间点疫苗组血清抗体滴度均明显高于对照组。第1次免疫后3周时可测出针对G1,G2,G3,G4和G10型抗原的抗体,逐渐升高。针对G2,G3和G4型的抗体滴度明显高于G1和G10型(P<0.01或<0.05)。疫苗组大鼠LY计数和MCH出现了可逆性变化(P<0.05),但无明显毒性,大鼠骨髓象无明显改变。结论:Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗对大鼠有明显免疫原性,对造血系统无明显毒性。     

稳定表达抗HER2单克隆抗体的FUT8基因敲除细胞株的建立

本研究在实验室前期构建的敲除α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株(FUT8-/--CHO-S)基础上,建立了稳定表达IgG1型抗HER2单克隆抗体的稳转细胞株。以曲妥珠单抗为模式蛋白,构建了带有嘌呤霉素抗性基因的表达载体pIRES-HC和pIRES-LC,并用电穿孔法共转染入FUT8-/--CHO-S细胞,通过嘌呤霉素加压培养、Dot Blot和WesternBlot等检测方法,经过两轮有限稀释筛选出了高表达的稳转细胞株Tru-FUT8-/--CHO-S。该细胞株在批次培养(Batch)中最高生长密度达每毫升6.05×106个,抗体产量为168 mg/L。在补料培养(Fed-Batch)中,通过补料CHO Feed4的添加,最高生长密度提高到每毫升17.1×106个,抗体产量达到437 mg/L,试验结果表明改造的FUT8-/--CHO-S细胞株具有开发成工业细胞株的潜力。     

血涂片法血小板计数方法学的建立及临床应用研究

目的通过多种方法计数血小板(PLT)结果比较研究,以探讨血涂片染色直接镜检法 (简称直接涂片法)和米勒氏窥盘法(简称米氏法)(合称血涂片法)PLT计数结果的可靠性。方法在检查并确定直接涂片法和米勒氏法计数PLT精密度后,分别采用血细胞分析仪、手工稀释法、直接涂片法、朱氏法同时计数60份血样PLT。结果直接涂片法和米氏法重复检测同一涂片PLT的CV值分别为2．13％和1．21％;检测同一血样20张涂片PLT的CV值分别为4．24％和2．35％。4种方法计数PLT结果接近(P>0．05)。结论严格控制操作条件下,血涂片法镜下PLT计数结果可用于临床诊断疾病。     

高通量筛选JAK-STAT6信号传导通路抑制剂方法的初步建立

目的构建可用于高通量筛选JAK/STAT6信号传导通路抑制剂的工程细胞株,建立稳定可靠的筛选方法。方法利用基因重组和转染技术,将STAT6特异性识别启动子IgE基因序列和虫荧光素酶报告基因联合插入pCMV质粒,脂质体法转染至HeLa细胞,经潮红霉素B抗性筛选及报告基因检测,得到稳定表达虫荧光素酶的工程细胞株。通过优化溶剂DMSO浓度,IL4作用浓度及孵育时间等筛选条件,建立了可靠的筛选方法,并在此基础上对1600种化合物进行了筛选。结果建立的筛选方法稳定可靠,系统Z′因子达到0.64。通过对1600种化合物的筛选,得到3个抑制效果较理想的化合物并测得其IC50值。结论所建立的高通量筛选方法可用于JAK/STAT6信号传导通路抑制剂的筛选。     

Neo-Sensitab纸片扩散法与NCCL SM27-A微量稀释法测定97株酵母对抗真菌药物敏感性的比较

目的比较Neo-Sensitab纸片扩散法和NCCLS微量稀释法的一致性,评价该商品化方案的稳定性。方法同时采用NCCLSM27-A微量稀释法和Neo-Sensitab纸片扩散法测定临床分离的97株酵母对两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCZ)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)和伊曲康唑(ITC)等五种常用抗真菌药物的敏感性。结果两种方法的药敏结果一致率分别为AMB100%,FCZ94.8%,5-FC93.8%,KCZ75.3%和ITC84.5%。结论纸片扩散法和微量稀释法药敏测试结果一致率较高,以FCZ、AMB和5-FC最佳,该方法检测敏感株的准确率较高,而在区分耐药株和中介株方面有所不足。     

荧光灶试验和TCID50-ELISA方法在Ⅲ价轮状病毒重配疫苗感染滴度测定中的对比研究

目的:对比荧光灶试验和TCID50-ELISA方法测定III价轮状病毒基因重配疫苗感染滴度的精确性,重复性和可行性。方法:同时采用TCID50-ELISA方法和荧光灶试验方法测定Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度,对测定结果进行比较分析。结果与结论:在Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度测定中,荧光灶试验方法和TCID50-ELISA方法各有其特点,荧光灶试验方法更加精确和快速,相对于TCID50-ELISA方法,具有更低的变异性,即其重复性较高;而TCID50-ELISA方法受主观因素的影响较低。     

96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法药敏试验结果的对比

目的 为了验证96点阵琼脂稀释法进行药敏试验的可靠性和有效性,与国际通用的微量肉汤稀释法进行对比。方法 用微量肉汤稀释法和96点阵琼脂稀释法分别对质控菌株E. coli ATCC25922、临床分离E. coli进行4种不同药物(头孢噻呋、庆大霉素、氟苯尼考和多西环素)的药敏试验,并经过多次重复和对比。结果 这两种检测方法所测定的菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)完全相同者占30%~50%,相差1个梯度占80%,3个梯度以内的吻合率高达96%以上,96点阵琼脂稀释法具有很好的重复性和稳定性。结论 96点阵琼脂稀释法与微量肉汤稀释法两种方法测定的MIC没有显著差异,可共用一个质控标准。96点阵琼脂稀释法的标准化和规范化,有利于高通量药敏检测的进行,推动建立完善的抗药性监测技术体系。     

改良ELISA一步法检测小儿粪便轮状病毒

目的 探讨改良ELISA一步法检测小儿腹泻粪便的轮状病毒,为临床提供可靠的诊断依据。方法 应用快速轮状病毒抗原酶标诊断试剂盒(RotaFast)进行改良的ELISA一步法检测小儿腹泻粪便轮状病毒抗原695例。结果 经检测小儿腹泻粪便695例,阳性率达75．97％(528/695)。结论 改良ELISA一步法检测小儿粪便轮状病毒,具有快速、敏感,方法简单,结果准确等优点。     

重组人白细胞介素-15包涵体离子交换柱复性与稀释复性的比较

目的比较重组人白细胞介素-15 (rhIL-15 )包涵体蛋白稀释复性法与离子交换柱复性法的效果。方法采用离子交换柱吸附变性包涵体蛋白,用含有复性剂的洗脱液洗脱复性,所得蛋白质比活和稀释复性法所得比活比较。结果两种方法所得目的蛋白质比活相近,但离子交换柱复性法目的蛋白质回收率高,试剂消耗少。结论对于rhIL-15包涵体,离子交换柱复性法用于生产,可大幅降低生产成本     

微量平板稀释法测定血清杀菌活性的方法学研究

目的:采用微量平板稀释法测定血清杀菌活性(SBA)。方法:选择Mueller Hinton肉汤(MHB)为稀释剂、控制隔夜培养的菌悬液光度在108～109cfu/mL,以微量平板稀释法和琼脂平板计数法分别测定头孢哌酮钠对金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠埃希氏菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853三种标准质控菌的血清杀菌活性,并测定头孢哌酮钠对三种标准质控菌的SBA的天间和天内重现性。结果:微量平板稀释法与琼脂平板稀释法测定的结果相似,SBA中位数经秩和检验差异无统计学意义(P>0.05)。微量平板稀释法测定的结果天内、天间差异均无统计学意义。结论:微量平板稀释法测定SBA方法简便、易行,实验结果稳定、可靠,具有可行性。     

3种中成药微生物限度检查的方法验证

目的建立合适的微生物限度检查方法,对银黄颗粒、清喉利咽颗粒、柴黄颗粒3种中成药的微生物限度检查方法进行验证。方法采用中国药典2005年版一部规定的常规法、培养基稀释法进行菌回收率比较试验。结果3种药品在常规法检测金黄色葡萄球菌回收率均低于70%。采用培养基稀释法,金黄色葡萄球菌回收率均>70%。符合验证要求。结论3种中成药在常规法检测时均有一定的抑菌作用。3种中成药的微生物限度检查应采用培养基稀释法检测才得到满意的结果。     

Kinetics of hepatic transport of 4-methylumbelliferone in rats. Analysis by multiple indicator dilution method

Hepatic elimination of 4-methylumbelliferone (4MU), which has been used as a model compound for conjugative metabolism, was studied by means of a multiple indicator dilution (MID) method in the isolated perfused rat liver. Using this method, three intrinsic hepatic clearances, CL _int,inf , CL _{int,eff, and} CL _{int,seq, which represent the influx, efflux, and sequestration processes, respectively, were obtained. When the dose was increased from a low dose (50 g/rat liver) to a high dose (3000 g/rat liver), the hepatic availability of 4MU increased from 0.11 to 0.73. With increasing dose, the} CL _{int,eff value increased approximately two times, while the} CL _{int,seq value decreased to approximately one-third. The remarkable dose dependence of hepatic availability was due to nonlinearity in both} CL _{int,eff and} CL _{int,seq values. However, the} CL_int,inf value was almost independent of dose. The dose-dependent change in CL_int,seq might be explained by the saturation of conjugative metabolism of 4-MU, while the increase in the CL _{int,eff value with increasing dose might be partly explained by the nonlinear tissue binding of 4-MU, since the tissue unbound fraction determined by an ultrafiltration method using liver homogenate increased approximately 1.5 times at higher concentration of 4-MU compared to that at lower concentrations. In addition, based on a comparison of the individual intrinsic clearances, i.e.}, CL _int,inf , CL _{int,eff, and} CL _{int,seq, the major determining process of the apparent hepatic intrinsic clearance of 4MU is thought to be the sequestration process at the high dose. However, at the low dose, the membrane transport process (influx and efflux processes) as well as the sequestration process also determine the apparent hepatic intrinsic clearance}.     

Effect of albumin on hepatic uptake of warfarin in normal and analbuminemic mutant rats: Analysis by multiple indicator dilution method

Multiple indicator dilution studies of warfarin uptake were carried out on isolated perfused rat livers in the presence and absence of bovine serum albumin (BSA) in the perfusate using normal rats and Nagase analbuminemic rats (NAR). A distributed model was fitted to the dilution data and estimates of influx, efflux, and sequestration rate constants were obtained. In both groups of rats, the intrinsic clearance for unidirectional hepatic uptake (CL_inl,influx) of warfarin in the presence of 1.6g/dl BSA was approximately 37–45% of that in the absence of BSA, while the unbound fraction of warfarin with 1.6 g/dl BSA in the perfusate was only 4.2% of that in the absence of BSA. Thus the degree of BSA-induced reduction of the value of CL_inl,influx and that of the unbound fraction are different. From these observations, it was found that the hepatic uptake of warfarin is not driven solely by the unbound concentration of warfarin, supporting the recent concepts of albumin-mediated transport for tightly albumin bound ligands as reported by Ockner et al. In addition, the fact that the same hepatic uptake mechanism of warfarin was also observed in NAR suggested that the hepatic uptake of warfarin may not necessarily require a special albumin receptor on the hepatocyte surface.     

内科老年患者营养风险筛查及营养支持使用情况分析

目的调查我院内科住院患者应用营养风险筛查2002(NRS2002)方法的适用率、营养风险发生率以及营养支持使用情况,为营养支持在内科老年住院患者中的合理应用提供参考依据。方法选择新入长宁区中心医院内科的老年患者共500例,应用NRS 2002方法进行营养风险筛查,并调查营养支持的使用情况。结果患者的营养筛查适用率为95.20%,营养不足和营养风险发生率分别为18.8%和31.09%。有营养风险者115例接受营养支持(77.70%),无营养风险者38例接受营养支持(11.59%)。结论 NRS2002方法对内科老年住院患者营养风险筛查有较高的适用率。内科老年住院患者存在一定的营养风险或营养不足,目前临床可能存在营养支持的某些不合理性。