产多杀菌素刺糖多孢菌的诱变选育

目的 采用甲基磺酸乙酯(EMS)、核糖体工程育种和常压室温等离子体(ARTP)方法处理产多杀菌素刺糖多孢菌 (Saccharopolyspora spinosa) SIIA-1802,采用含蛋氨酸培养基筛选得到高产菌株。方法 首轮采用EMS诱变;第二轮采用链霉 素抗性育种;第三轮采用ARTP诱变育种进一步巩固育种成效;采用对照和添加蛋氨酸的发酵培养基考察突变菌株的发酵水 平。结果 出发株刺糖多孢菌SIIA-1802经过EMS诱变、链霉素抗性筛选和ARTP诱变得到的突变株ESA-611,发酵水平提高了 671.8%,采用含有蛋氨酸的发酵培养基进行筛选,发酵水平进一步提高了57.6%。在ARTP诱变过程中,筛选到一株多杀菌素A 显著下降,但产生较高水平多杀菌素J的菌株ESA-598。结论 本方法简单经济,突变效率高,能够快速获得传代稳定的多杀菌 素高产突变株。另外,通过诱变拓宽了代谢产物谱,得到了具有更高潜在价值的组分。     

纳他霉素产生菌基因组重排育种

Streptomyces gilvosporeus SG-1原生质体经紫外线诱变并筛选链霉素抗性菌株，获得纳他霉素高产菌株。在上述高产突变株中选择4株作为亲本进行基因组重排育种，筛选得到了高产重排菌株，其中一株重排菌株S．gilvosporeus GS-74的纳他霉素产量为3574mg／L。为产量最高的亲本菌株的153％，比原始出发菌株SG-1提高1.17倍。     

低氮源消耗和高产雷帕霉素菌株的选育

目的 采用亚硝基胍(NTG)、常压室温等离子体(ARTP)、核糖体工程育种方法处理产雷帕霉素游动放线菌SIIA-1602，结合OSMAC策略以期筛选得到发酵水平有较大提高，氮源利用更加高效的新菌株。方法 首轮采用NTG诱变筛选；第二轮采用链霉素抗性育种，第三轮采用ARTP诱变育种；采用3种不同的发酵培养基考察突变菌株的发酵水平。结果 出发株游动放线菌SIIA-1602经过NTG诱变、链霉素抗性和ARTP诱变筛选得到的突变株ASN-256，其发酵水平提高了55.7%，通过发酵培养基删减有机复合氮源并且添加了赖氨酸和哌可酸后，发酵水平提高分别107.6%和148.9%。在10t发酵罐通过流加 ，使菌种ASN-256发酵单位进一步提高到1250mg/L，是出发菌株SIIA-1602发酵水平的2.85倍。菌种ASN-256发酵过程中总氮源使用量减少50%，放罐时氨基氮排放仅为菌株SIIA-1602的一半，菌渣量也显著降低。结论 本方法简单经济，突变效率高，能够快速获得传代稳定，氮源利用更加高效的雷帕霉素高产突变株。另外，该菌通过发酵培养基的调整实现了氨基氮排放和菌渣量的大幅降低，在环保方面取得了显著的效益。     

螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌遗传育种

本文是利用抗生素抗性与产量之间的相关性来进行螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌的遗传育种,旨在获得高效价菌株,从而提高螺旋霉素的生产水平。首先用正交试验法确定出发菌株最佳发酵培养基,并在此基础上通过紫外线诱变,和在螺旋霉素浓度梯度平板上筛选螺旋霉素抗性菌株。按上述方法理性化筛选得到的菌株多为正突变株。从本实验得到一株螺旋霉素抗性菌株SPM~r-248,其抗性较出发菌株提高300％,生产能力较出发菌株提高81.3％。菌株SPM~r-248的高效价生产性能遗传特性稳定。在7m~3罐做发酵放大,与出发菌株相比,发酵效价提高31.4％,发酵指数提高18.8％,具有一定的学术意义和经济价值。     

通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选梅岭霉素高产菌株

本文通过链霉素对梅岭霉素（meilingmycin）产生菌南昌链霉菌NS－41－80菌株孢子致死浓度的测定，采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理，诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上，获得了大量的链霉素抗性基因（str）突变株。然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选到梅岭霉素高产菌株80－5．11－221，在摇瓶条件下，只产梅岭霉素不产南昌霉素，梅岭霉素活性效价达1500μg/ml，比出发菌株NS－41－80的摇瓶发酵效价855μg/ml提高了77．9％，该菌株连续传代六代进行摇瓶发酵，其F2代和F3代梅岭霉素发酵效价稳定，F4代至F6代随着传代数增加，其梅岭霉素发酵效价急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和链霉素抗性基因突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明，菌株抗药性突变与产抗生素突变密切相关，产抗生素突变的EMS诱变剂量高于链霉素抗性基因突变诱变剂量。在0．03mol/L的EMS剂量作用下，菌株致死率为99．43％，而抗药性突变率为0．0440％，建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法，为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试，并有助于其它链霉菌属的抗生素产生菌育种研究。     

纳他霉素高产菌株的链霉素抗性选育及其发酵工艺的优化

用紫外线对纳他霉素(Natamycin)产生菌褐黄孢链霉菌(Streptomyces gilvosporeus)ATCC13326菌株孢子进行诱变处理后，利用链霉素抗性突变选育得122株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有13株。突变株SG-56的生产能力达到出发菌株的146％，研究了其发酵性能，优化了培养基组成和发酵工艺条件，纳他霉素产量为2．81g／L，较出发菌株产量提高了170％。     

链霉素抗性突变理性筛选avermectin高产菌株

为提高菌株avermectin的产量，本文以链霉素抗性为选择压力，对除虫链霉菌Streptomyces avermi-tilis进行紫外诱变（253.7nm,30w，照射时间45s)，得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高25%以上的4株突变株，其中2株提高水平达30%以上，实验表明了链霉素抗性突变与产抗生素突变之间的密切联系。同时，对其机理和意义作了一些探讨。     

放线菌野生株代谢功能的核糖体工程改造与新产抗肿瘤活性产物研究

目的利用核糖体工程技术,改造放线菌次级代谢功能,筛选获得抗肿瘤活性突变株,并对突变株新产活性产物进行研究。方法以海洋来源无活性放线菌野生株HLF-9和HLF-43为出发菌,通过单菌落挑选与平板划线培养,分离纯化链霉素抗性突变株,通过摇床液态发酵和发酵提取物乙酸乙酯萃取样品的抗肿瘤活性筛选,获得抗肿瘤活性突变株;采用活性跟踪与微量预试先导．放大实验制备组合的实验模式,与原始菌样品对照比较,在快速确定差异活性斑点基础上,组合各种色谱技术,分离纯化突变株新产抗肿瘤活性产物;根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构;采用MTF法测评抗肿瘤活性。结果链霉素对HLF-9和HLF-43的最低抑菌浓度分别为3和10mg·L^-1。经抗性筛选,得到对链霉素产生抗性的HLF-39突变株28株、HLF-43突变株204株。在所得突变株中,3株HLF．39突变株和14株HLF-43突变株有抗肿瘤活性,100mg·L^-1样品对K562细胞的抑制率大于20％;其中,4株分别对11、100、200和300mg·L^-1链霉素产生抗性的HLF43突变株CHS-21101、CHS-210010、CHS-220002和CHS-230001活性显著,100mg·L^-1样品对K562细胞的抑制率分别达59．5％、50．0％、44．1％和59．6％。从CHS-21101发酵物中分离得到2个该突变株新产抗肿瘤活性产物,并分别鉴定为环（4-羟脯-亮）二肽（1）和phencomycin（2）。化合物1和2对K562细胞呈抑制活性,100mg·L-1抑制率分别为33．9％和21．4％。结论利用核糖体工程抗性筛选技术,从2株无活性放线菌野生菌株成功筛选得到17株具有抗肿瘤活性的链霉素抗性突变株,从其中1株发酵物中分离鉴定了2个该突变株新产抗肿瘤活性产物。用核糖体工程技术改造无活性放线菌野生株的次级代谢功能,可筛选获得活性突变株并提供深入研究新产活性产物,从中筛选新药及其先导结构,从?     

链霉素抗性筛选法在柔红霉素产生菌S.coeruleorubidus var.zhengding SIPI 1482菌种选育中的应用

采用链霉素抗性筛选法,用含链霉素的高氏一号合成培养基筛天蓝淡红链霉菌ＳＩＰＩ１４８２菌株对链霉素的抗性自发突变株,检测突变株产抗生素水平。实验结果发现,在ＳＩＰＩ１４８２菌株的莲霉素抗性自发突变株中,正向突变的频率比较高（３４％）,同时获得了产抗生素能力是原菌株的１．５倍左右的突变株。     

万古霉素产生菌的选育

以东方拟无枝酸菌（Amycolatopsisoriental）05—12为出发菌株,经紫外线（15W。253．7nm,距离18cm,照射5m）诱变处理,在含庆大霉素1000μg·mL^-1的浓度梯度平板上筛选庆大霉素抗性变株,得到一株万古霉素高产交株（Amyeolatopsisoriental）06-4。其摇瓶效价较出发菌株提高23％．对万古霉素的抗性提高200％。传代试验表明该变株的高产性能遗传特性较稳定。用正交试验法对万古霉素发酵培养基进行了优化,与原发酵培养基相比,万古霉素的摇瓶发酵效价提高了13．4%。     

利福霉素B产生菌─—地中海诺卡氏菌的推理选育

利福霉素Ｂ的生物合成受芳香族氨基酸（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）的反馈抑制。用紫外线处理Ｎ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉＸＣ－１０２菌丝悬浮液后，并在含０．１％芳香族氨基酸的琼脂平板上分离芳香族氨基酸抗性变种。结果表明，芳香族氨基酸抗性变种的发酵效价高于自然分离株和紫外线诱变株；色氨酸抗性变种（Ｔｒｐｒ）的发酵效价又高于酪氨酸抗性变种（Ｔｙｒｒ）和苯丙氨酸抗性变种（Ｐｈｅｒ）；０．５％Ｔｒｐｒ变种比０．１％Ｔｒｐｒ变种更高产。其中０．５％Ｔｒｐｒ变种ＸＣ－５４０的生产能力较出发菌株ＸＣ－１０２增加４２．１６％。传代试验表明ＸＣ－５４０的遗传特性稳定，在７ｍ３罐做发酵放大，与出发菌株相比，发酵效价和发酵指数分别提高５１．１１％和５１．０２％。     

Avermectin产生菌异亮氨酸诱导变种的选育

用紫外线处理ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ（ＡＶＭ）产生菌ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓＸＣ１－２５，并在含有Ｌ－异亮氨酸（Ｌ－Ｉｌｅ）的平板培养基上筛选Ｌ－Ｉｌｅ诱导变种。结果表明：Ｉｌｅｉ变株发酵产生的ＡＶＭＢ１ａ效价高于自然分离株与紫外线诱变株，其中Ｉｌｅｉ变株ＸＣ２－２６的ＡＶＭＢ１ａ效价较亲株提高２２％。该变株经自然分离获得菌株ＸＣ３－８，其ＡＶＭＢ１ａ效价比出发菌株提高５０％以上，传代试验表明菌株ＸＣ３－８的形态和高产性能稳定，它在７ｍ３发酵罐生产试验，产生ＡＶＭＢ１ａ效价与发酵指数均比出发菌株提高５６％。     

麦迪霉素产生菌880103#菌株的选育

麦迪霉素产生菌生米加链霉菌A03菌株经过多次诱变筛选及抗自身代谢物突变,得到了产量正变株;通过推理筛选的方法,应用初级代谢产物生物合成途径的调节突变株,分离得到了一主要组分麦迪霉素A_1高于对照菌株的优良菌株880103。并通过加入前体的方法,使其麦迪霉素A_1组分进一步提高。在试产中,该菌株与对照菌株相比,发酵单位相对提高16％,麦迪霉素 A_1组分相对提高 28％,成品效价相对提高4.7％;且发酵周期短、温度适中、遗传性能稳定、适应性强,是一株优于对照菌株的优质高产菌株。     

青霉素生产菌原生质体诱变选育

以青霉素生产菌丝状产黄青霉ＪＳ９４－１８为出发菌株制备菌丝原生质体·并对原生质体进行了紫外诱变，筛选到变异株ＪＳ９４－１８－５８，该菌株摇瓶发酵效价比生产菌株提高８．６３％，５０吨发酵罐试生产平均发酵效价比生产菌株提高１０．４０％。     

红霉素链霉菌1—25菌株的特性研究

红霉素链霉菌14-74经一系列诱变筛选得到1-25菌株。本文报道1-25菌株培养特性,在摇瓶及生产罐中1-25菌株的生产能力比对照14-74菌株提高7％以上。发酵液中红霉素C的含量等于或小于对照菌株。高产的遗传性能稳定,对红霉素及丙醇的耐受力明显高于亲株,是一株优于14-74菌株的高产优质的抗反馈及抗阻遏的突变菌株。     

Effect of methionine on cephalosporin C and penicillin N production by a mutant of Cephalosporium acremonium.

A mutant with enhanced potential to utilize sulfate for cephalosporin C production was isolated from a strain of Cephalosporium acremonium. The mutant displayed potency levels more than twofold that of the parent in the presence of sulfate but its productivity was severely inhibited by more than 0.5% of methionine which gave high cephalosporin C production with the parent. In a complex medium norleucine stimulated cephalosporin C production by the mutant in the presence of sulfate, whereas it showed no effect on the parent. In an incubation system with sulfur-starved cells of the mutant, L-methionine, but not the D-isomer, gave lower cephalosporin C production and a delayed production of penicillin N. However, it exhibited a stimulatory effect in the presence of valine or alpha-aminoadipic acid, the constituent amino acids of the antibiotic. Norleucine showed a similar effect to that of L-methionine in the presence of sulfate. On the basis of these results, characteristics of the mutant are discussed in connection with the effect of methionine.     

Whole spectrum analysis of ligand efficacy at constitutively active human wild-type and S267K 5-HT6 receptors in HEK-293F cells

INTRODUCTION: Modulation of constitutive activity by the recombinant wild-type human 5-HT6 receptor was investigated with a series of 5-HT6 receptor ligands by monitoring the cAMP signalling pathway. The impact of the mutation S267K near the B(261)BXXB(265) CIII-loop motif was analyzed on the magnitude of constitutive receptor activity as previously conflicting results have been reported. METHODS: The wild-type 5-HT6 receptor plasmid was obtained by PCR and the mutant S267K5-HT6 receptor was constructed by site-directed mutagenesis and stably transfected in HEK-293F cells by electroporation. The cAMP signalling pathway was monitored as a functional read-out to investigate ligands' responses using homogeneous time resolved fluorescence. RESULTS: Constitutive activity was present both at wild-type and mutant S267K 5-HT6 receptors. Negative efficacy (E(max), % versus basal) as observed at nanomolar concentrations with SB-271046 was larger for mutant (-92+/-1%) than wild-type 5-HT6 receptor (-45+/-1%). Ro 04-6790 also demonstrated negative efficacy at the wild-type 5-HT6 receptor with a magnitude similar to SB-271046 but with a 36-fold lower potency. MS-245 demonstrated at nanomolar concentrations intermediate negative efficacy; -48+/-3% and -16+/-2% at mutant and wild-type 5-HT6 receptor, respectively. The 5-HT-mediated cAMP response was blocked by SB-271046, MS-245 and Ro 04-6790 to their respective level of negative efficacy with pKB values fitting with their binding pK(i) values. E-6801 was a highly potent (pEC50: 10.17 to 10.19) and efficacious agonist (+98 to +102% versus 5-HT) at both wild-type and mutant 5-HT6 receptors. DISCUSSION: The recombinant wild-type human 5-HT6 receptor is constitutively active in HEK-293F cells and displays a high resolution to monitor efficacy properties of 5-HT6 receptor ligands. The resolution capacity to differentiate between efficacy properties of 5-HT6 receptor ligands, in particular for negative efficacy, can be further enhanced by monitoring the mutant S267K 5-HT6 receptor.     

金霉素链霉菌2-106菌株的选育及发酵特性研究

微生物诱变育种的主要目的是获得高产菌株,通过诱发突变.使产量性状向着高产方向发展,从而提高抗生素工业生产的产量.金霉素链霉菌生产菌株Streptomyces aureofaciens S_2经过紫外线、甲基磺酸乙酯及秋水仙碱的诱变作用,得到了83-2-106新菌株.新菌株与亲株在形态上有明显的差异.通过研究发现:新菌株在摇瓶中的生产能力比亲株稳定提高10%;对无机磷及空气的需要与亲株明显不同;通过传代试验证明,其生产性能稳定.     

西罗莫司产生菌Streptomyces hygroscopicus WY—93的诱变育种与代谢研究

研究了不同诱变方法对西罗莫司产生菌正变率的影响,发现紫外线单一因子处理、光复活较为有效;用这一条件处理得到--正变株UV-8-61,其效价比出发菌株Z27高2～3倍,产生抗生素水平经连续传代证明非常稳定。本文还研究了菌落形态与发酵效价以及诱变后正变率与死亡率的关系,表明孢子丰富的梅花型或面包型菌株发酵效价较高。以紫外线单一因子、光复活处理死亡率在99.90%～99.95%时正变率较高。另外,从代谢角度对高产株与原株对碳、氮源的利用及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性进行了深入研究,发现两者在生长速度,碳、氮源的利用方面存在显著差别,尤其是高产株葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性进行了深入研究,发现两者在生长速度,碳、氮源的利用方面存在显著差别,尤其是高产株葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性明显高于原株。由此推断,高产株UV-8-61西罗莫司产量的提高有可能是由于菌体生理代谢旺盛,参与戊糖一级代谢的G-6-P脱氢酶活性提高,由此增加了作为西罗莫司生物合成环已烷前体的莽草酸的供给。