耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌表型检测及其耐药性研究

目的了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)感染状况及其产酶类型。方法采用最低抑菌浓度(MIC)法分析肠杆菌科细菌的耐药情况。采用厄他培南纸片扩散法初筛产碳青霉烯酶菌株,对初筛阳性菌株分别采用改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验、EDTA亚胺培南复合纸片法进行表型确证。结果肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为2.7%、2.3%。厄他培南纸片扩散法初筛阳性菌株11株,其中改良Hodge确证试验阳性(或弱阳性)菌株3株,包括产金属酶菌株1株,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)或AmpC酶菌株2株。2株改良Hodge确证试验弱阳性菌中未检出碳青霉烯酶基因,但检出AmpC、TEM、CTX-M基因,改良Hodge试验阳性菌中检出blaIMP基因。结论改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林改良Hodge试验及EDTA亚胺培南复合纸片法相结合进行碳青霉烯酶检测,在暂无条件开展基因分型的医院具有很好的应用前景。     

用改良Hodge试验筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌

目的 筛查临床分离的对碳青霉烯类表型敏感但携带碳青霉烯酶耐药基因的肠杆菌科细菌,分析改良Hodge试验(MHT)的筛查效果。 方法 用MHT筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌;M-H琼脂稀释法和纸片扩散法（K-B）检测对第三代头孢菌素和碳青霉烯类药物的敏感度;EDTA 双纸片协同试验检测金属碳青霉烯酶;PCR检测细菌相关耐药基因。 结果 203株表型第三代头孢菌素耐药的碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌中,24株MHT阳性,EDTA双纸片协同试验均阴性;M-H琼脂稀释法结果对头孢他啶（CAZ）2株敏感,2株中介,其余均耐药;对厄他培南（ETP）、亚胺培南（IPM）和美洛培南（MEM）均敏感;碳青霉烯酶、β内酰胺酶基因特异性PCR扩增,4株扩增出KPC基因,2株扩增出CTX-M基因,13株扩增出TEM基因。 结论 经MHT筛检出临床分离株中存在潜在的产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌。阳性结果需用基因检测的方法进一步确认。     

耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌耐药基因分析

目的探讨耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌相关耐药基因分布情况。方法收集2015年1月至2017年12月佛山市第一人民医院分离的16株阴沟肠杆菌为研究对象,利用VITEK2-Compact全自动微生物分析系统进行细菌鉴定及药敏试验。采用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验进行耐药表型筛选。采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(bla IMP、bla KPC、bla NDM、bla VIM、bla OXA-48)、ISCR1、Ⅰ类整合酶、Ⅰ类整合子基因盒基因。结果16株阴沟肠杆菌对亚胺培南、美罗培南均耐药。16株细菌改良Hodge试验和EDTA协同试验均阳性。16株均携带有碳青霉烯酶基因,其中14株携带bla NDM-1,2株携带bla IMP-4。16株ISCR1、Ⅰ类整合酶和Ⅰ类整合子基因盒均阳性,携带的基因盒主要由dfrA17-aadA5或dfrA15-aadA2组成。结论该院耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌携带的碳青霉烯酶基因以bla NDM-1为主。     

低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的筛选及耐药基因检测

目的:了解临床分离碳青霉烯类表型敏感的肠杆菌科细菌碳青霉烯酶耐药基因携带情况。方法:VITEK-2系统进行药物的最低抑菌浓度(MIC)检测;改良Hodge试验(MHT)筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌;EDTA双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶(MBL);PCR法检测相关耐药基因。结果:115株实验菌有12株MHT阳性;12株阳性菌中,3株EDTA双纸片增效试验阴性,9株阳性,这9株菌除阿米卡星、多粘菌素B敏感外,其他抗菌药物均呈耐药,含I类整合子,且检出IMP-4(blaIMP-4)和IMP-1(blaIMP-1)型的MBL基因,未检出KPC型碳青霉烯酶基因及其他MBL基因。结论:厄他培南对肠杆科细菌产碳青霉烯酶的筛选比亚胺培南、美洛培南敏感;经MHT筛选阳性的,潜在产碳青霉烯酶的肠杆科细菌,应进一步用基因检测法确认。     

耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌的KPC-2酶检测与分析

目的 了解分离自临床标本的耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌的耐药机制.方法 对临床分离到非重复的16株厄他培南耐药,及亚胺培南耐药或敏感性减低的产气肠杆菌采用改良Hodge试验和聚合酶链反应(PCR)检测KPC酶及其KPC酶基因,并采用转移接合试验对KPC酶基因阳性的菌株进行转移接合.结果 对16株产气肠杆菌的改良Hodg...     

产KPC酶肺炎克雷伯菌检测及耐药性研究

目的探讨我院产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药率升高的原因。方法对2009—2011年我院各类临床标本中分离的肺炎克雷伯菌进行统计及药敏结果分析。对2010年1月—2011年12月间分离的耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌做改良Hodge试验和金属β-内酰胺酶检测,阳性菌株筛查KPC酶及耐药细菌（NDM-1）基因。结果 2009、2010年肺炎克雷伯菌对亚胺培南仍保持高敏感性,对2010年分离的8株耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌做改良Hodge试验均为阴性（2009年菌株未保留）。2011年肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的耐药性显著升高,47株耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性,KPC酶阳性;2株耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌金属β-内酰胺酶阳性;所有菌株NDM-1基因检测均为阴性。结论由KPC酶介导的耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌在临床分离菌株中显著增加。KPC酶基因的出现是碳青霉烯类抗菌药物广泛应用引起的耐药基因突变,携带KPC酶的质粒存在不同种属细菌间进行转移的可能性,临床应加强监控,防止产碳青霉烯酶菌株在医院环境中暴发和流行。     

VITEK 2 Compact专家系统对肠杆菌科碳青霉烯酶耐药表型分析的问题探讨

目的评估Vitek 2 compact专家系统(AES)对肠杆菌科细菌破青霉烯酶耐药表型的提示和分析的准确性,探讨弥补其不足的检测方法。方法收集用Vitek 2 compact检测亚胺培南非耐药,而专家系统提示其产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌28株。纸片扩散法检测亚胺培南药物的敏感度;改良Hodge试验(MHT)筛查产碳青霉烯酶菌株;EDTA双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶;PCR检测细菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和碳青霉烯酶相关耐药基因。结果 28株菌中,均扩增出ESBLs相关耐药基因,其中16株扩增出KPC基因。金属酶表型皆为阴性。以碳青霉烯酶基因检测为金标准,AES的符合率为57.12%;纸片扩散法检测亚胺培南的符合率为100%;MHT的符合率为100%。PCR与纸片扩散法及MHT对碳青霉烯酶检测的结果一致,与AES有差异(X~2=10.08,P0.05)。结论 AES对肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶提示不一定全部准确,存在一定的假阳性,可以采用其他方法,如简便易行的纸片扩散法或改良Hodge试验予以复检,以提高药敏结果的可靠性。     

肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株筛选试验方法的研究

目的 评价肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株纸片扩散初筛试验与改良Hodge试验的符合性,为基层实验室常规开展产碳青霉烯酶菌株检验提供依据.方法 收集临床分离的34株对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分离株,采用纸片扩散法检测其对厄他培南、亚胺培南、美罗培南的耐药性;通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶.结果 34株临床分离株经纸片扩散法检测对厄他培南为全部耐药;对美罗培南29株耐药,5株敏感;对亚胺培南25株耐药,1株中介,8株敏感.通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶34株菌中有21株阳性;厄他培南、美罗培南、亚胺培南耐药株与Hodge试验阳性株的符合率分别为61.8%、72.4%、80.8%.结论 以亚胺培南作为初筛底物对筛选产碳青霉烯酶菌株的特异度更高,亚胺培南耐药菌株应高度怀疑是产碳青霉烯酶株.     

临床分离16株耐碳青酶烯类肠杆菌科细菌耐药机制初步研究

目的了解佛山市第一人民医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药情况和耐药机制。方法 2013年1月至2015年12月收集16株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌4株,产酸克雷伯菌1株。利用VITEK2-compact微生物分析系统进行细菌鉴定及药敏试验。采用改良Hodges和MEM(美罗培南)-EDTA(乙二胺四乙酸)-Na2双纸片协同试验进行耐药表型筛选。采用PCR法检测耐药基因blaIMP、blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaOXA-48。结果 16株细菌对亚胺培南、美罗培南均耐药。16株细菌Hodges均阳性,15株双纸片协同试验阳性。在11株大肠埃希菌,9株携带blaNDM-5,2株携带blaNDM-1。4株肺炎克雷伯菌携带blaNDM-5,1株产酸克雷伯菌携带blaKPC-2。结论我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制以产blaNDM-5碳青霉烯酶为主。     

改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的性能评估

目的 评估改良Hodge试验在碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌中检测碳青霉烯酶的效能.方法 收集2004-2008年我国16家教学医院的49株碳青霉烯类药物敏感性降低(亚胺培南、美罗培由或厄他培南的MIC≥2μg/ml)的肠杆菌科细菌;采用对倍琼脂稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;利用加苯硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验区分碳青霉烯酶或AmpCs/ESBLs导致的阳性结果 ;采用PCR检测包括NDM-1型碳青霉烯酶基因在内的多种β内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 49株菌中,36株菌对亚胺培南不敏感(MIC>4μg/ml),31株菌对美罗培由不敏感(MIC>4μg/ml),47株菌对厄他培南不敏感(MIC>2μg/ml).49株临床分离菌中23株菌改良Hodge试验刚性,包括9株弱阳性和14株强阳性.经过对菌株进行β内酰胺酶基因PCR和测序,发现9株Hodge弱阳性菌株中2株携带blaKPC-2,7株不携带碳青霉烯酶基因,但携带blaampC/blaESBL;14株强阳性菌株中4株携带blaKPC-2,8株携带blaIMP-4,2株携带blaIMP-8;26株改良Hodge试验阴性菌株均未携带碳青霉烯酶基因.所有49株菌均未检测到blaNDM-1.以碳青霉烯酶基因检测为标准,则改良Hodge试验对检测碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌中碳青霉烯酶的敏感度为100%,特异度为79%,阳性预测值为70%,阴性预测值为100%,准确性为86%.结论 改良Hodge试验具有很好的敏感性,但存在一些假阳性结果 .利用苯硼酸和苯唑西林可有效区分改良Hodge试验的假阳性和真阳性.     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的表型和基因型分析

目的研究本院碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌的表型和基因型。方法用纸片扩散法进行药物敏感试验,改良Hodge试验和EDTA协同试验检测耐药表型,设计通用引物行PCR检测KPC、IMP、VIM、NDM-1和OXA-23耐药基因,并测序分析。结果 14株肺炎克雷伯菌呈现高度耐药性,有13株携带KPC-2基因,1株携带IMP-4基因,未检测出VIM、NDM-1和OXA-23基因。结论本院产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌主要为KPC-2和IMP-4基因型。     

Three months survey of multidrug-resistant Enterobacteriaceae in Japan

In 2010, a three months survey of multidrug-resistant Enterobacteriaceae was conducted by Ministry of Health, Labour and Welfare of Japan. A total of 153 isolates were obtained through this survey and we performed PCR using the NDM-1 type, KPC type, IMP-1 type, IMP-2 type and VIM-2 type carbapenemase genes specific primers. Of 153 analyzed isolates, 72 (47.1%) were positive for IMP-1 type bla(IMP), and two isolates from two patients were positive for bla(NDM-1). None of those patients had traveled abroad. Two isolates from a single patient who had traveled and hospitalized in abroad were positive for bla(KPC). 77 (50.3%) isolates were all negative for those five carbapenemase genes. It was shown that IMP-1 type is the most predominant carbapenemase gene among Enterobacteriaceae in Japan.     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌的耐药机制和同源性研究

目的研究肺炎克雷伯菌对耐碳青霉烯类抗生素的耐药机制和同源性。方法对卫生部中日友好医院从2006年1月至2011年2月临床标本中分离的肺炎克雷伯菌,用V1TEK-Ⅱ全自动微生物分析仪和常规方法进行菌种鉴定和药敏试验,筛选对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌;用三维试验和改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;用PCR扩增碳青霉烯酶基因,并对扩增产物测序,确定其基因型;接合试验研究其传播机制;通过基因外重复回文(REP)-PCR分析其同源性。结果共检测得4株耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌,其中2株菌对所测试的所有抗菌药物均耐药。1株菌产IMP-4型金属酶;未检测出其他碳青霉烯酶基因。转移接合试验呈阴性;REP-PCR显示4株菌属于3个不同的克隆型。结论该院出现碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌,属于不同克隆型,耐药机制复杂,产IMP-4型金属酶是其对碳青霉烯类抗生素耐药的原因之一。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶检测和基因分型

摘要：目的：探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶情况和β-内酰胺酶基因分型研究。 方法：用Vitek-Ⅱ全自动微生物分析仪对本院临床标本中分离的对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌进行菌种鉴定和药物敏感试验;用冻融法提取β-内酰胺酶,三维试验检测β-内酰胺酶［AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、金属酶;改良Hodge试验检测KPC酶;用PCR扩增TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、DHA、MIR/ACT、KPC、IMP、VIM、SPM、GIM和NDM-1基因,并对阳性基因进行测序分析确定其基因型;REP-PCR检测分析其同源性。 结果: 4株对碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌均表现为多重耐药,其中2株菌对所有测试的抗菌药物均耐药;1株菌产金属酶,由IMP-4型金属酶基因编码;4株菌均产生DHA型AmpC酶,2株菌产CTX-M-14型ESBLs;1株菌产TEM-71型ESBLs,均经测序证实;未检测出SHV、PER、VEB、MIR/ACT、KPC、VIM、SPM、GIM和NDM-1基因型。REP-PCR显示4株菌属于3个不同的克隆型。 结论：本院出现碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌,属于不同克隆型,产多种β-内酰胺酶（AmpC酶、ESBLs、金属酶）,基因型为DHA、IMP-4、CTX-M-14、TEM-71。     

三种AmpC酶表型检测方法比较

目的对革兰阴性菌产AmpC酶的检测方法进行评价,并寻找一种适合临床常规应用的AmpC酶检测方法。方法对39株耐头孢西丁的革兰阴性菌同时进行改良Hodge试验、三维试验、氯唑西林（CLO）双纸片协同试验和ampC基因聚合酶链反应（PCR）检测,比较4种方法的结果。结果39株革兰阴性杆菌中,改良Hodge试验、三维试验和CLO双纸片协同试验检出产AmpC酶的阳性率分别为38．5％、43．6％和28．2％,3种方法AmpC酶检出率的差异无统计学意义（P〉0．05）。与PCR结果比较,改良Hodge试验特异性为87％,敏感性为75％;三维试验的特异性为78％,敏感性为75％;CLO双纸片协同试验特异性为87％,敏感性为50％。PCR显示ampC基因阳性率为41％（16／39）,对16株阳性菌进行ampC基因测序,测序结果与基因数据库内相应的ampC核酸序列比对发现,同源性均在98％～100％之间。结论改良Hodge试验可作为一种操作快速、简便的筛选试验检测革兰阴性菌产AmpC酶的情况,而CLO双纸片协同试验可作为一种操作简便的排除产AmpC酶试验应用于实验室,但在准确性上低于改良Hodge试验。     

Multiplex PCR for rapid detection of genes encoding class a carbapenemases

In recent years, there have been increasing reports of KPC-producing Klebsiella pneumoniae in Korea. The modified Hodge test can be used as a phenotypic screening test for class A carbapenamase (CAC)-producing clinical isolates; however, it does not distinguish between carbapenemase types. The confirmation of type of CAC is important to ensure optimal therapy and to prevent transmission. This study applied a novel multiplex PCR assay to detect and differentiate CAC genes in a single reaction. Four primer pairs were designed to amplify fragments encoding 4 CAC families (SME, IMI/NMC-A, KPC, and GES). The multiplex PCR detected all genes tested for 4 CAC families that could be differentiated by fragment size according to gene type. This multiplex PCR offers a simple and useful approach for detecting and distinguishing CAC genes in carbapenem-resistant strains that are metallo-β-lactamase nonproducers.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布

目的 了解耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布情况.方法 收集天津医科大学总医院2008年1月至2010年3月期间,103株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌临床标本.用Vitek-2系统鉴定细菌,并进行药敏试验,通过改良Hodge试验、改良三维试验和2-巯基丙酸协同试验初筛碳青霉烯酶,多重PCR同时检测4种OXA型碳青霉烯酶基因、2种金属酶基因及整合酶基因,对整合子可变区进行PCR检测及序列分析.结果 103株鲍曼不动杆菌中,改良Hodge试验检出碳青霉烯酶阳性75株(72.8%),改良三维试验检出产碳青霉烯酶菌株80株(77.7%),未检出产金属酶菌株.PCR检出blaOXA-51-like+bsaOXA-23-like+int11基因84株,blaOxA-51-like+blaOXA-23-like阳性5株,blaOXA-51-like+intll阳性8株,blaOXA-51-like+blaOXA-24-like阳性2株,仅blaOXA-51-like阳性4株,blaOXA-58-like、金属酶基因(IMP-1、VIM-2)及Ⅱ类整合酶基因(intI2)均阴性.89株(96.7%)Ⅰ类整合酶阳性株均扩增出可变区,检出2种耐药基因盒组合形式:aacA4-catB8-aadAl(2 300 bp)81株,aacCl-orfX-orfX-orfX'-aadAla(3 000 bp)8株.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药及多重耐药主要与其携带的OXA-23型碳青霉烯酶和Ⅰ类整合子有关.

Abstract：

Objective To investigate the carbapenemases and integrons in imipenem-resistant Acinetobacter baumannii. Methods One hundred and three Acinetobacter baumannii were collected from Janurary 2008 to March 2010 in Tianjin Medical University General Hospital. The identification of strains and antimicrobial susceptibility test were performed by using Vitek-2 compact automatic system. Isolates of imipenem-resistant A. baumannii were screened for carbapenemases by modified Hodge test, improved threedimensional test and 2-mercaptopropionic acid synergy test. Isolates were then subjected to the multiplex PCR targeting genes encoding for OXA type carbapenemases, metallo-β-lactamases (MBLs) and integrases. The variable regions of integrons were amplificated and sequenced. Results Among the 103 isolates, 75 (72. 8% ) demonstrated positive in the modified Hodge test, 80 (77.7%)were positive in the improved three-dimensional test. No MBLs was found in the 2-mercaptopropionic acid synergy test. Eightyfour isolates were positive for blaOXA-51-like, blaOXA-23-like, and intI1; five were positive for blaOXA-51-like and blaOXA-23-like ;eight were positive for blaOXA-51-like and int11 ;two were positive for blaOXA-51-like and blaOXA-24-like ;four were only found positive for blaOXA-51-like. The blaOXA-58-like, IMP-1, VIM-2 and intI2 genes were all negative. Eighty-nine(96. 7% )of the intI1 positive strains owned the variable region. Two different cassettes arrangements were identified within class 1 integrons:81 isolates harbored aacA4-catB8-aadAI (2 300 bp) and 8 harbored aacCl-orX-orfX-orX'-aadAla (3 000 bp ) . Conclusion The presence of OXA-23 carbapenermase and class Ⅰ integrons are correlated with Acinetobacter baumannii resistant to carbapenems and multi-drug resistance.