9例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者的基因诊断与表型分析

目的探讨9例遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症患者的基因突变类型与临床特征。方法采用一期法检测患者的FⅦ活性(FⅦ:C),用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其FⅦ抗原(FⅦ:Ag)水平,并抽提患者的外周血基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增FⅦ基因所有外显子及其侧翼序列,采用DNA直接测序进行基因分析。结果在9例遗传性FⅦ缺陷症患者中发现10种基因突变,包括3种剪切位点突变和7种错义突变。1例患者为p.Tyr128(68)Cys纯合突变,其FⅦ:C为0.8%,FⅦ:Ag为2.5%,临床表型为反复重度出血;5例患者携带FⅦ基因双杂合突变,分别为p.Thr241(181)Asn和p.Gly406(346)Asn、IVS1a+5GA和p.His408(348)Gln、IVS5-1GA和p.His408(348)Gln、c.*64GA合并p.Ile213(153)Asn、p.Cys389(329)Gly和p.His408(348)Gln的双杂合突变,其相应的FⅦ:C分别为1.2%、4.4%、1.0%、0.5%和1.2%,患者临床出血症状轻重不一;3例患者携带杂合突变,分别为p.Cys389(329)Gly、p.His408(348)Gln和p.Thr419(359)Met,其FⅦ:C分别为0.5%、8.3%和9.4%,第1位有出血史,后2位无明显出血。结论在9例遗传性FⅦ缺陷症患者中发现了10种基因突变,其中p.Gly406(346)Asn、c.*64GA、p.Ile213(153)Asn为新发现突变。p.His408(348)Gln突变较常见,而FⅦ:C与患者的临床表型间无相关性。     

10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症分子发病机制与临床特性分析

目的探讨10例遗传性凝血因子Ⅶ(coagulation factor Ⅶ，FⅦ)缺陷症基因突变类型与临床特性。方法 检测凝血指标以明确诊断；用DNA直接测序法对先证者及其家庭成员FⅦ基因的全部外显子及其侧翼、5’和3’非翻译区进行分析，寻找基因突变；将含插入或缺失突变序列克隆人pMD18-T TA克隆载体中，对所得两条染色体相应序列分别测序，以确定突变在染色体上的分布。应用限制性内切酶对先证者及家系成员相应基因片段进行酶切分析，无酶切位点改变的基因片段用等位基因特异的PER(ASPCR)方法，证实测序所发现的突变。结果 在10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者中发现8种类型的基因突变，其中6390T→C(Phe40Cys)，9482G→T(Argl52Leu)，和11487．9delC3种突变为国际首次报道；6种突变发生在催化区；除一种缺失突变外，其余均为点突变；所有的基因突变都来自先证者的父亲和(或)母亲。Thr359Met和Arg304Trp突变分别在4个及2个无亲缘关系的家系中重复出现。2例Thr359Met纯合突变(FⅦ：C分别为2％和3％)及1例Argl52Leu、11487-9delC及Arg304Trp复合杂合突变(FⅦ：C为1％)临床表型为重型；2例双重杂合突变(His348Gln和Thr359Met，Agr304Trp和Arg304Gln)临床表型分别为中型和无症状(FⅦ：C分别为3．4％和10％)。4例杂合突变(Phe40Cys伴有Arg353Gln杂合多态性、Thr359Met、Arg152Gln、-55C→T)FⅦ：C分别为1％、3．0％、1％、5．5％，临床表型为中型或轻型；1例-323P0／P10、73G→A及Arg353Gln复合杂合多态性(FⅦ：C为1％)的临床表型为轻型。结论 在10例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者中发现了8种类型的FⅦ基因突变，其中3种为新突变。中国汉族人中存在导致FⅦ基因缺陷的突变热点。纯合及双杂合FⅦ基因突变FⅦ：C较低，临床出血常较重；特定的杂合突变可有临床出血倾向，FⅦ基因突变与FⅦ：C及临床表型无明显的相关性。     

遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者的基因诊断与表型分析

目的:探讨3例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症患者的基因突变类型及其临床特征。方法:检测先证者及其家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、FⅦ活性(FⅦ:C)及FⅦ抗原(FⅦ:Ag)等进行表型诊断;用DNA直接测序法分析先证者F7基因的全部外显子、侧翼、5'和3'非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,用反向测序证实所发生的突变。结果:在3例患者及其家系成员中发现5种基因突变,包括4种错义突变和1种剪切位点突变。在3例遗传性FⅦ缺陷症患者中有2例为双杂合突变、1例为纯合突变。患者1为p.His408Gln和p.Arg413Gln双杂合突变,其家系成员中有一位为p.His408Gln和p.Arg413Gln双杂合突变,1例为His408Gln突变的杂合子,其相应FⅦ:C分别为5.0%、3.0%和75.0%。;患者2为p.Arg364Gln和p.His408Gln双杂合突变,其家系成员为p.Arg364Gln和IVS6-1G A双杂合突变,其相应FⅦ:C分别为2.0%、2.0%;患者3为p.Arg337Cys纯合突变, FⅦ:C为3%。结论:在3例遗传性FⅦ缺陷症患者及其家系成员中发现5种基因突变,其中p.His408Gln突变较为常见,而临床表现及出血程度与FⅦ:C及FⅦ:Ag无相关性。     

29例汉族马凡综合征患者的FBN1基因突变分析

目的对29例汉族马凡综合征（Marfan syndrome,MFS）患者的原纤蛋白-1（fibrillin-1,FBNI）基因进行突变筛查,探讨MFS与FBN1基因突变的关系。方法提取29例患者外周血全基因组DNA,应用PCR技术对FBN1的65个外显子进行扩增,应用变性高效液相色谱（denaturing high perfommce liquid chromatography,DHPLC）对患者FBNI的65个外显子进行突变筛查,对DHPLC检测出图形异常的PCR扩增片段用DNA测序鉴定突变位点和类型。结果在12例MFS患者中发现12种FBN1突变。其中有8种为新的突变,分别为2359A〉T（S787C）、3380G〉T（G1127V）、4151T〉C（M1384T）、4244G〉A（C1415Y）、6071G〉T（C2024F）、IVS2＋1G〉T、IVS37＋5G〉A和7970C〉G＋7971delC。另外4种为已报道突变,包括3037G〉A（G1013R）、6049T〉C（C2017R）、4429G〉T（E1477X）和4930C〉T（R1644X）。结论FBN1基因突变可能是12例MFS患者的致病因素。     

海南地区非综合征遗传性耳聋四个常见基因突变的分析

目的：了解海南地区非综合征遗传性耳聋的四个常见基因突变情况。方法采用晶芯九项遗传性耳聋基因芯片检测试剂盒、微阵列芯片扫描仪及相应的遗传性耳聋基因芯片判别系统进行检测分析。结果429例临床标本中,共检出55例携带致聋突变,阳性率为12.82％。其中,5例（1.17％）线粒体DNA 12S rRNA突变,包括1555 A＞G均质突变4例,1494 C＞T均质突变1例;GJB2基因突变25例（5.83％）,其中包括235 del C纯合突变9例,235 del C/GJB2299 del AT复合杂合突变2例,235 del C单杂合突变10例,176 del 16单杂合突变4例;22例（5.13％）SLC26A4基因突变,包括IVS7-2A＞G纯合突变4例,2168 A＞G纯合突变1例,IVS7-2A＞G单杂合突变12例,2168 A＞G单杂合突变5例;3例（0.70％）GJB3基因突变,均为538 C＞T单杂合突变。在SLC26A4基因突变阳性的22例中,有4例临床诊断为双侧大前庭水管综合征,其基因突变型分别为3例 SLC26 A4基因 IVS7-2 A＞G纯合突变,1例 SLC26 A4基因2168 A＞G纯合突变。结论海南地区非综合征遗传性耳聋以 GJB2基因突变和 SLC26A4基因突变为主要耳聋突变基因。     

两个遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症家系分子缺陷的初步探讨

目的：探讨两个遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺乏症家系的基因突变类型。方法：用DNA直接测序法对2例患者及其家庭成员FⅦ基因进行分析；应用等位基因特异PCR（ASPCR）以及PCR辅助酶切反应鉴定是否有基因改变。结果：家系A中先证者有两种基因突变：6390位T→G导致Trp40Cys,11496位G→A导致Arg353Gln，这两个突变均为杂合子；PCR辅助MspⅠ酶切证实其母亲也是杂合子Arg353Gln。家系B的先证者有11482T→G，导致His348Gln,PCR辅助NspⅠ酶切证实称证者及其女含有同样的杂保子基因突变，不安现有11514位C→T导致Thr359Met,ASPCR证实先证者及其子携带同样的杂合子突变基因。结论：在两个遗传性FⅦ缺乏症家系中找到3种FⅦ基因的错义突变，其中Trp40Cys为首次报道。     

同源型凝血活酶试剂检测重组人野生型和突变型凝血因子Ⅶ

遗传性凝血因子Ⅶ（FVⅦ）缺乏症患者血浆中FⅦ凝血活性降低，出现不同程度的出血倾向。早先我们报道了遗传性FⅦ缺乏症2个家系患者的FⅦ基因存在Cys329Gly错义突变。为了研究该突变对FⅦ的功能影响，我们将野生型FⅦ和Cys329Gly突变型真核表达载体转染BHK-21细胞进行体外表达，并用自制同源型凝血酶原试剂[0]对表达产物进行凝血活性的检测。     

冠心病患者血浆凝血因子Ⅶ水平及其基因多态性研究

目的：研究冠心病（CHD）患者血浆凝血因子Ⅶ（FⅦ）水平及其基因多态性。方法：对60例CHD患者[其中急性心肌梗死（AMI）33例]及正常对照者149名的血浆活化因子Ⅶ（FⅦa)、FⅦ活性（FⅦc）与FⅦ抗原（FⅦ：Ag)进行测定。应用PCR、限制性片段长度多态性分析及琼脂糖凝胶电泳的方法鉴定Ⅶ基因中的5个可能与血栓有关的多态性位点：－401G/T、－402G／A、5′F7 A1/A2、IVS7 H5/H6/H7/H8和R335Q M1／M2。结果：与正常对照组相比，CHD组的FⅦa、FⅦc与FⅦAg平均值均有升高，但仅AMI组FⅦa与FⅦc的增高有统计学意义（P＜0．05）；AMI组IVS7基因型频率与正常对照组比较差异有显著性（P＜0．05），其余各组间各基因型频率与等位基因频率差异均无显著性；－402A纯合子与－402G纯合子相比，血浆FⅦ：Ag水平显著升高（P＜0．05）。结论：血浆FⅦa与FⅦc增高，可能对AMI时冠状动脉血栓形成有促进作用；AMI组IVS7基因型频率与正常对照组比较差异有显著性；而且－402A纯合子血浆FⅦ：Ag水平显著高于－402G纯合子，故－402G／A多态性可能主要是影响血浆FⅦ：Ag水平，进而影响血栓形成。     

6个遗传性凝血因子Ⅹ缺陷症家系的表型与基因型诊断

目的:探讨6个遗传性凝血因子Ⅹ(factor X, FⅩ)缺陷症家系的分子发病机制,并采用凝血酶生成试验(thrombin generation test, TGT)评估FⅩ缺陷症患者的出血风险。方法:收集6例先证者及相关家系成员的临床资料,凝固法检测内源性、外源性以及共同途径激活的FⅩ活性(FⅩ∶C),酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测FⅩ抗原(FⅩ∶Ag),采用蛋白印迹法检测血浆中的FⅩ相对分子质量及含量,直接测序法检测FⅩ基因(F10)突变,采用TGT检测6例先证者及部分家系成员血浆中的凝血酶生成。结果:在6例先证者中共发现了10种F10突变,其中5种(p.Cys246Ser, p.Tyr319Cys, p.Leu252Phe, p.Arg313Gln以及IVS5-2AG)为新突变,其余5种(p.Phe71Ser, p.Val338Met, p.Gly406Ser, p.Gly365Ser, p.Cys151Arg)为已报道突变。TGT显示凝血酶生成潜力(endogenous thrombin potential, ETP)及峰值这2个参数与FⅩ缺陷症患者临床出血表现的严重程度具有一定关联。结论 :共发现5种F10基因新突变;5例遗传性FⅩ缺陷症患者由F10双杂合突变所致,1例由F10单杂合突变所致;在浓度为1 pM(1 pmol/L)组织因子(tissue factor,TF)激活下的TGT中,测得的ETP及峰值这2个参数可用于评估FⅩ缺陷症患者的出血倾向,对于了解该病患者的临床出血风险有一定的参考价值。     

四个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的基因与表型分析

目的 研究4个遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症家系的临床表型及基因突变.方法 用一期法测定先证者及其家系成员的凝血酶原时间(PT)及FⅦ活性(FⅦ:C),用双抗夹心ELISA测定血浆中FⅦ抗原(FⅦ:Ag),用PCR结合测序分析各家系成员的基因突变情况.结果 各家系先证者PT明显延长,FⅦ:C与FⅦ:Ag明显降低.家系1先证者FⅦ基因为18041T→G纯合性突变,使未成熟FⅦ(ProFⅦ)的408位组氨酸(His)变为谷氨酸(Gln)(成熟蛋白的His348Gln);家系2先证者FⅦ基因测序发现5078-5079 CT双碱基的纯合性缺失,致使阅读框改变,在ProFⅦ的N端25位提前终止;家系3先证者FⅦ基因分析发现15975G→A与18093C→T双重杂合突变,前者为内含子6的3'端剪接位点突变(IVS6-1G→A),后者为无义突变,致使ProFⅦ蛋白的426位提前终止;家系4先证者FⅦ基因测序发现15975G→A与17908G→A双重杂合突变,后者使ProFⅦ364位Arg→Gln.结论 在4个遗传性FⅦ缺陷症家系中发现His408Gln与5078-5079 del CT两个纯合突变及IVS6-1G→A、Gln426stop与IVS6-1G→A、Arg364Gln两个双重杂合突变.其中His408Gln与5078-5079 del CT为国内首次报道的纯合突变,IVS6-1G→A、Gln426stop为国际首次报道的突变.

Abstract：

Objective To investigate the clinical manifestation and gene mutation in four Chinese pedigrees with the congenital coagulation factor Ⅶ deficiency. Methods Prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time, thrombin time and plasma fibrinogen were measured using STAGO STA-R automatic coagulation analyzer, and the coagulation activity of factor Ⅶ (FⅦ: C) was determined by a PT-based one stage method, and factor Ⅶ antigen (FⅦ: Ag) level by a sandwich enzyme-linked immunoabsorbsent assay. All exons, exon-intron boundaries and 3', 5'untranslated regions of the FⅦ gene from the genomic DNA of the probands and their families were amplified by PCR, and then sequenced. Results PT was significantly prolonged, and FⅦ: C and FⅦ: Ag were decreased and the following mutations were identified in the four probands: a homozygous transversion of 18041 T→G resulting in His408→Gln substitution in exon 8 in proband 1, a homozygous double nucleotide deletion, del CT (5078-5079) in exon 1 in proband 2, a double heterozygous of IVS6-1G→A and Gln426→stop in proband 3, and a double heterozygous of IVS6-1G→A and Arg364Gln in prohand 4. Conclusion Two missense mutations, His408Gln, Arg364Gln and one nonsense,Gln426stop in the catalytic domain of FⅦ and one double nucleotide deletion, del CT(5078-5079) in exon 1 and one splicesome mutation, IVS6-1G→A in intron 6 were separately identified in four Chinese pedigrees with inherited coagulation factor Ⅶ deficiency. The Gln426stop and IVS6-1G→A were first identified in the world and the homozygous del CT(5078-5079) and His408Gln were first found in China.     

遗传性耳聋基因芯片检测的临床应用研究

目的应用遗传性耳聋基因芯片对散发性耳聋患者进行耳聋基因筛查,评价其在临床上快速检测常见遗传性耳聋基因的可行性。方法研究对象为76例耳聋患儿,取外周血5mL,分离提取全血淋巴细胞基因组DNA,用遗传性耳聋基因芯片检测中国人中常见的4个耳聋相关基因上的9个热点突变,包括GJB2（35delG、176del16、235delC及299delAT）、GJB3（C538T）、SLC26A4（IVS7-2A〉G、A2168G）以及线粒体12S rRNA（A1555G、C1494T）。结果在76例样本中,共检出9例突变,其中5例为SLC26A4IVS7-2A〉G杂合突变型;1例线粒体12S rRNA1555A〉G均质突变型;1例GJB2235delC/GJB2299delAT复合杂合突变型;1例GJB2235delC纯合突变型;1例SLC26A4IVS7-2A〉G纯合突变型。结论遗传性耳聋基因芯片对中国人中常见耳聋相关基因突变位点检出率高,可满足临床耳聋基因检测的要求,具有广阔的临床应用前景。     

深圳地区乳腺癌患者BRCA1基因突变分析

目的研究BRCA1基因在乳腺癌中的突变情况,探讨BRCA1基因突变与乳腺癌的关系。方法应用PCR—SSCP分析和DNA直接测序法,检测57例乳腺癌BRCA1第2,5,11,18,20和21外显子基因突变情况。结果57例中共检测出7例突变,其中4例为11外显子的错义突变（3232A〉G）,3例为20外显子的拼接点突变（IVS20—68insA〉A）。乳腺癌BRCA1的基因突变率为12．2％（7／57）。结论BRCA1基因突变与乳腺癌有密切关系。     

沧州市非综合征性耳聋患者常见耳聋基因突变的分析

目的：筛查沧州市非综合征青少年耳聋患者常见耳聋基因热点突变,初步了解该地区耳聋基因热点发生频率和突变谱系。方法对沧州市特殊教育学校的30例非综合征感觉神经性耳聋患者采集外周血5 mL,通过基因芯片检测技术对GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA基因20个位点进行测序。结果30例患者中共检出耳聋基因热点突变阳性者6例,阳性率为20%。其中GJB2基因突变235delC纯合突变2例,235delC杂合突变1例,299-300delAT 杂合突变1例, SLC26A4 IVS7-2A〉G 纯合突变1例,SLC26A4IVS7-2A〉G 合并 IVS7-2A〉G 杂合突变1例。结论 GJB2基因突变是引起非综合征性耳聋的主要致病基因,SLC26A4为最常见的耳聋突变基因。未检测到线粒体12SrRNA基因突变。     

海南省71例黎、汉族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者的基因突变型分析

目的分析海南省29例汉族和42例黎族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者的G6PD基因突变类型。方法采用突变特异性扩增系统法筛查海南省人群中G6PD缺乏症的G1376T、G1388A和A95G三种常见突变位点；运用DNA测序技术鉴定未知突变标本G6PD基因外显子2至外显子13的基因突变类型。结果在29例汉族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 11例（37．9％）、G1388A 2例（6．9％）、G1376T复合G1388A突变1例（3．4％）和G1376T复合A95G突变1例（3．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占汉族G6PD缺乏症患者的51．7％；在42例黎族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 25例（59．5％）、G1388A 6例（14．3％）、A95G 2例（4．8％）、G1376T复合G1388A突变4例（9．5％）和G1376T复合A95G突变1例（2．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占黎族G6PD缺乏症患者的90．5％；18例（汉族14例，黎族4例）未发现G1376T、G1388A、A95G。对这18例标本的测序发现：1例G6PD内含子5第636或637位核苷酸T缺失（IVS-5 636或637 T del）突变；2例C1311T复合IVS-11 T93C突变，其余标本未发现突变。结论G1376T和G1388A是海南省人群中最常见的基因突变型；在我国人群中存在IVS-5636或637 T del突变型；在海南省黎族人群中首次报道G1376T／A95G复合突变型。     

四个遗传性凝血因子V缺陷症家系临床表型和基因型变化的研究

目的 研究4个遗传性凝血因子V(FV)缺陷症家系的临床表型和基因突变.方法 测定家系成员活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及FV促凝活性(FV:C)和FV抗原(FV:Ag)含量进行表型诊断;用PCR法扩增先证者F5基因的25个外显子及其侧翼序列,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变.结果 4例先证者APTT、PT明显延长,血浆FV:C和FV:Ag含量均显著降低.基因分析发现,先证者1的F5基因存在G16088C(Asp68His)杂合错义突变及4种位于同一条染色体上的杂合多态性T35788C(Met385Thr)、A47295G(Hisl299Arg)、A58668G(Metl736Val)和A74083G(Asp2194Gly);先证者2的F5基因存在CA6253T(Arg952Cys)和CA6724T (Glnl 109stop)两种纯合突变;先证者3的F5基因存在C67793G(Pr02006Ala)纯合错义突变;先证者4的F5基因存在C74022T(Arg2174Cys)纯合错义突变.结论 Asp68His、Arg952Cys、Glnl109stop、Pro2006Ala和Arg2174Cys这5种突变,及Met385Thr、Hisl299Arg、Metl736Val和Asp2194Gly这4种多态性是导致相应先证者I型遗传性FV缺陷症的原因.其中,Glnl109stop、Pro2006Ala和Arg2174Cys是国际七首次报道的新突变.     

东莞地区469例 G6PD 缺乏症基因突变类型分析

目的：了解东莞地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的基因突变类型,为 G6PD 缺乏症的临床诊断及预防提供依据。方法收集进行 G6PD 酶活性筛查的患者资料,记录其 G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）比值结果,随机抽取469例表型阳性样本,通过反向斑点杂交（RDB）技术检测其基因突变类型。结果采用 G6PD/6PGD 比值法共检测16464例标本,检出阳性标本672例（G6PD/6PGD＜1．0）,检出率为4．08％。随机抽取样本中,检出基因突变460例,检出率为98．1％,其中G1376T 突变173例、G1388A 突变141例、A95G 突变82例、G871A 突变60例、G392T 突变23例、C1024T 突变14例;还检出中国地区 G6PD 少见突变基因型 C1004T 突变6例、T517C 突变2例、C1360T 突变1例;同时检出 C1311T 多态性65例和双重杂合突变96例。结论东莞地区 G6PD 缺乏症发生率较高,G6PD 基因突变类型具有中国人群普遍代表性,又有该地区的异质性。     

一个遗传性凝血因子Ⅶ与X联合缺陷症家系的基因分析

目的 对1例遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)与因子X(FX)联合缺陷患者进行基因分析和家系调查,鉴定导致FⅦ与FX联合缺陷症的基因突变.方法 检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原、FⅦ促凝活性(FⅦ:C)、FX:C及FⅦ抗原(FⅦ:Ag)、FX:Ag等进行表型诊断;用DNA直接测序法分析先证者FⅦ、FX基因的全部外显子、侧翼、5’和3’非翻译区及家系成员相应的突变位点区域;选择106名健康体检者作对照.结果 先证者PT、APTT延长,分别为84.5 s和63.4 s,FⅦ:C、FⅦ:Ag和FX:C、FX:Ag分别为6％、7％和4％、30％;先证者父亲、母亲、姐姐的PT稍延长,FⅦ:C分别为72％、47％、42％,FX:C分别为76％、54％、47％,FX:Ag分别为100％、69％、58％,其APTT、FⅦ:Ag均无明显异常.先证者FⅦ基因外显子8的g.11267C→T纯合突变导致Arg277Cys,FX基因外显子8的g.28139G→T纯合突变导致Val384Phe;其父亲、母亲、姐姐均存在FⅦ基因g.11267C→T和FX基因g.28139G→T杂合子.结论 FⅦ和FX基因分别存在的Arg277Cys、VM384Phe纯合突变是导致先证者FⅦ与FX联合缺陷的分子机制;Val384Phe突变为国际首次报道,推测可能影响FX蛋白合成或分泌功能.     

云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究

目的：调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率．分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征，探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法：NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人，NBT定量酶活性，PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变，作PCR-SSCP分析，最后用DNA测序分析和证实。结果：（1）450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例（男31例，女17例）。（2）PCR-ARMS发现G1388A 21例（43．75％）、G1376T4例（8．33％），未见A93G。（3）PCR-SSCP发现27例异常，PCR—DNA测序结果与PCR—ARMS结果吻合。2份未知突变样本测序分析证实为C1311T。（4）测序发现复合型突变：1例G1376T／IVS-11T93C，1例G1376T／C1311T和1例G1388A／IVS-11＇I＇93C。结论：（1）云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10．67％，男性13．78％．女性7．56％；男、女性别比例1．82。（2）云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以G1388A突变最常见，其次是G1376T突变，两种突变共占52．08％，未发现A95G突变。（3）研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育，预防该病的遗传传播．提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义。对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义     

遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症的分子发病机制研究

目的 对一个遗传性FⅦ缺乏症家系进行F7基因突变检测,探讨其分子发病机制.方法 采用ELISA法检测先证者及家系成员FⅦ∶Ag,采用一期凝固法检测先证者及家系成员PT、FⅦ∶C等凝血指标进行实验表型诊断.基因检测采用DNA直接测序法分析先证者及家系成员F7基因的全部外显子及侧翼、5'和3'非翻译区,发现突变位点用反向测序加以证实;用CLC Protein Workbench软件分析基因突变位点的物种保守性和蛋白质二级结构改变.选择100名健康对照者以排除基因多态性.结果 先证者及其妹妹的PT、FⅦ∶C、FⅦ∶Ag明显异常,分别为36.3 s、5.0%、40.7%和33.4 s、5.0%、37.4%;先证者的父亲、母亲、女儿、外甥女的PT稍延长,分别为14.9 s、14.6 s、15.5 s、14.6 s;其FⅦ:C稍减低,分别为70%、85%、59%、79%.先证者F7基因8号外显子c.784T＞C杂合突变导致Ser269Pro,8号外显子c.964T＞G杂合突变导致Cys329Gly;先证者妹妹为c.784T＞C和c.964T＞G双重杂合突变,母亲为c.784T＞C杂合子,父亲、女儿、外甥女均为c.964T＞G杂合子.蛋白质生物学特性分析发现,Cys329Gly导致蛋白质空间构型发生改变,Ser269Pro导致氨基酸极性及疏水性发生改变.结论 F7基因Ser269Pro和Cys329Gly双重杂合突变是导致该例遗传性FⅦ缺乏症的分子发病机制.

Abstract：

Objective To identify gene mutations and explore the molecular mechanism of a pedigree with inherited coagulation F Ⅶ deficiency. Methods The levels of F Ⅶ: Ag in the proband and other family members were measured by ELISA assay. The values of PT, F Ⅶ: C and other coagulant parameters were determined by one-stage clotting for laboratory phenotype diagnosis. All the exons,exon-intron boundaries and 5',3' untranslated sequences of F7 gene were amplified by direct sequencing. The detected mutations were further confirmed by sequencing the other stand. The CLC Protein Workbench software was used to analyze the species conservation of the mutated site and the protein secondary structure. 100 healthy individuals were selected to exclude gene polymorphism. Results PT, FⅦ∶C and FⅦ: Ag in the proband and his sister were abnormal, which were 36. 3 s, 5.0%, 40. 7% and 33.4 s,5. 0%, 37.4%, respectively. Both PT and FⅦ∶C in the proband's father, mother, daughter and niece were slightly abnormal, which were 14.9 s, 14. 6 s, 15.5 s, 14. 6 s and 70%, 85%, 59%, 79%, respectively.The heterozygous mutations c. 784T ＞ C and c. 964T ＞ G in exon 8 of F7 gene were found in the proband,resulting in the substitutions of Ser269Pro and Cys329Gly respectively. Compound heterozygous mutations c. 784T ＞ C and c. 964T ＞ G were found in the proband's sister. The proband's mother was heterozygous for c. 784T ＞ C. His father, daughter and niece were heterozygous for c. 964T ＞ G. The protein biological characteristics analysis revealed that the Cys329Gly caused the change of spatial configuration, and Ser269Pro led to the change of amino acid polarity and hydrophobicity. Conclusion Compound heterozygous mutations of Cys329Gly and Ser269 Pro in F7 gene may be the underlying molecule mechanism of FⅦ deficiency in this pedigree.     

遗传性痉挛性截瘫伴胼胝体发育不良maspardin基因突变分析

[目的]探讨遗传性痉挛性截瘫伴胼胝体发育不良(HSP—TCC)患者的临床特征并检测是否存在maspardin基因突变。[方法]对5个HSP-TCC家系患者的临床资料进行回顾性分析,采用DNA序列分析方法,对这5个家系先证者的maspardin基因编码区进行突变分析。[结果]5个HSP—TCC家系的患者表现为10～20岁发病．痉挛性截瘫伴痴呆．头颅MRI示胼胝体发育不良,maspardin基因突变分析未发现致病突变,发现3个多态(IVS1—linsC．IVS2 35A→G,IVS3 84G→C)。[结论]HSP—TCC家系的临床特征与Mast综合征的临床特征极其相似,本组HSP-TCC患者不是maspardin基因突变所致。