siRNA沉默APE1／Ref-1基因增强人胰腺癌细胞株对吉西他滨的敏感性

背景：人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶／氧化还原因子-1（APE1／Ref-1）基因与肿瘤的化放疗抵抗和预后密切相关．是肿瘤基因治疗的理想靶点。目的：以RNA干扰技术靶向沉默人胰腺癌细胞株APE1／Ref-1基因,观察该方法对细胞增殖和凋亡的影响及其能否增强胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。方法：将靶向APE1／Ref-1基因的小干扰RNA（siRNA）转染人胰腺癌细胞株SW1990,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测APEl／Ref-1基因和蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况。结果：转染APE1siRNA后．SW1990细胞APE1／Ref-1mRNA和蛋白表达显著减低,蛋白表达抑制率为55．4％±3．6％;24h、48h和72h时细胞增殖抑制率分别为41．7％±2．8％、24．8％±3．7％和21．3％±9．8％：吉西他滨组、si-APE1组和联合组均可见明显细胞凋亡．联合组早期凋亡率显著高于两者单用和空白对照组（19．8％±3．5％对7．7％±1．1％、8．4％±1．0％和2．7％±1．4％．P〈0．05）,凋亡核形态学变化最为明显。结论：沉默APE1／ReG1基因能抑制SW1990细胞增殖,促进细胞凋亡,显著提高细胞对吉西他滨的敏感性。RNAi沉默APE1／Ref-1基因联合吉西他滨化疗可能成为胰腺癌治疗的新的选择。     

浅蓝菌素联合吉西他滨对人胰腺癌细胞BxPC3增殖与凋亡的影响

目的 观察浅蓝菌素联合吉西他滨对胰腺癌细胞BxPC3生长抑制的协同作用,探讨其机制.方法 以10μg/ml浅蓝菌素、20μmol/L吉西他滨、10 μg/ml浅蓝菌素+20μg/L吉西他滨分别处理对数生长期的人胰腺癌BxPC3细胞48 h,以不经药物处理的细胞作为对照.应用CCK-8法检测各组细胞增殖,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 对照组、浅蓝菌素组、吉西他滨组、联合处理组48 h的生长抑制率分别为0、(51.28±1.84)％、(53.59±1.62)％、(84.57 ±1.01)％;细胞早期凋亡率为(0.83±0.31)％、(31.37±1.04)％、(38.33±0.75)％、(69.43±0.83)％;BxPC3细胞Bcl-2 mRNA表达量分别为0.67±0.01、0.44±0.01、0.36±0.08、0.27 ±0.07;Bax mRNA表达量为0.14±0.01、0.31±0.02、0.32±0.03、0.91±0.06;Bcl-2 mRNA/Bax mRNA比值为4.78±0.13、1.39±0.04、1.15±0.02、0.30±0.02;Bcl-2蛋白表达量分别为1.24±0.04、0.51±0.02、0.42±0.02、0.13±0.01;Bax蛋白表达量为0.20±0.05、0.47±0.01、0.54±0.01、1.21±0.03;Bcl-2/Bax比值为6.00±0.11、1.11±0.01、0.77±0.03、0.10±0.06.各处理组与对照组,联合处理组与单药处理组的差异均有统计学意义(P值均＜0.01).结论 浅蓝菌素与吉西他滨对人胰腺癌BxPC3细胞的生长抑制具有协同作用,其机制可能通过上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达,降低Bcl-2/Bax比值而促进细胞凋亡所致.     

白藜芦醇和吉西他滨联合用药对人胰腺癌细胞作用的研究

背景：吉西他滨是治疗进展期胰腺癌的一线化疗药物,单独用药临床效果欠佳。白藜芦醇为脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1／氧化还原因子－1（APEl／Ref-1）的氧化还原功能抑制剂,具有抑制恶性肿瘤生长的特性．可能在胰腺癌的预防和治疗中发挥重要作用。目的：检测白藜芦醇和吉西他滨联合用药对人胰腺癌细胞株生长和凋亡的影响．并进一步探讨发挥该作用的分子机制。方法：将胰腺癌细胞株SWl990和BxPc-3分为4组：溶剂对照组、吉西他滨组、白藜芦醇组和联合用药组。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡．以蛋白质印迹法检测APE1／Ref-1蛋白的表达。结果：作用于SWl990和BxPc-3细胞24h、48h和72h后．与溶剂对照组相比,三组用药组的细胞存活率均明显降低;作用于SWl990和BxPc-3细胞48h后,与溶剂对照组相比,三组用药组的细胞凋亡率均明显增加：联合用药组对细胞增殖和凋亡的影响均强于两组单独用药组。与空白对照组相比．吉西他滨组SWl990和BxPc－3细胞APEl／Ref-1蛋白表达均明显增加。结论：白藜芦醇和吉西他滨联合用药可明显加强对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响．白藜芦醇可能通1寸抑制APEl,Ref-1蛋白的氧化还原功能而增加胰腺痛细胞对吉西他滨的敏感十牛．     

PUMA在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用

目的 研究吉西他滨体外对人胰腺癌AsPC-1细胞生长的作用机制.方法 用脂质体转染法将p53正向凋亡调控因子(PUMA)反义核酸(反义PUMA cNA)的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1-导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度1、5、10和15 μmol/ml的吉西他滨中作用72 h.RT-PCR和Western blotting检测不同组细胞经吉西他滨作用72 h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)、Hoechst 33258荧光染色法和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞出现PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖.结论 吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关.     

RNA干扰抑制FAK基因表达对人胰腺癌细胞凋亡及吉西他滨敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制黏着斑激酶（FAK）基因表达增强人胰腺癌PANC-1细胞对化疗药物敏感性及凋亡能力的研究.方法 针对FAK mRNA序列设计合成短发夹状干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pRNAT-FAK重组表达载体,转染人胰腺癌PANC-1细胞;通过RT-PCR分析其对PANC-1细胞内源性FAK表达的影响;激光共聚焦显微镜检测PANC-1细胞凋亡的形态学改变;用四甲基偶氮唑蓝法观察PANC-1细胞对化疗药物吉西他滨敏感性的改变;采用分光光度计检测 Caspase 活性.结果 成功构建 pRNAT-FAK重组质粒,并成功转染PANC-1细胞;RT-PCR证实重组质粒在mRNA显著抑制FAK基因表达（P＜0.01）;吉西他滨组及吉西他滨加pRNAT-FAK组细胞则检测出明显的细胞凋亡;四甲基偶氮唑蓝结果证明在和吉西他滨联合作用下,pRNAT-FAK组PANC-1细胞的生长抑制率明显增高（P＜0.01）;Caspase 3活性明显高于空白对照绀和阴性对照组.结论 pRNAT-FAK可抑制FAK在人胰腺癌PANC-1细胞中的表达,并增强PANC-1细胞对吉西他滨敏感性.     

Beclinl基因沉默对胰腺癌MiaPaCa-2细胞生长的影响

Beclin1基因与酵母自噬基因Atg 6同源,是参与哺乳动物自噬体形成,调控细胞自噬过程的重要基因.Beclin1自噬基因的缺陷可能导致肿瘤细胞逃避自噬性死亡[1],而稳定转染Beclin1后可促进细胞的自噬活性,并降低了其成瘤能力[2].本研究观察沉默胰腺癌MiaPaCa-2细胞的Beclin1基因表达后对其增殖、凋亡及细胞周期分布的影响,为胰腺癌的基因治疗提供新的思路. 一、材料与方法 1.靶向Beclin1的siRNA表达载体构建：根据siRNA设计原理,由上海吉玛制药技术有限公司构建3个插入靶向Beclin1基因的siRNA（Beclin1-siRNA）质粒以及阴性对照siRNA（NC-siRNA）质粒和荧光标记的siRNA（FAM-siRNA）质粒.经筛选后选择沉默效果最好的Beclin1-siRNA序列插入表达载体U6/Neo,构建表达载体U6/Neo-shBeclin1,同时构建阴性对照载体pGPU6/Neo-shNC及荧光对照载体pGPU6/GFP/Neo-shNC.     

吉西他滨对人肝癌细胞凋亡和分化的影响

目的 研究吉西他滨(Gemcitabine)对人肝癌SMMC7721细胞系凋亡和分化的影响.方法 培养人肝癌SM MC7721细胞,应用流式细胞术测定吉西他滨对肝癌细胞的凋亡率.同时以酶促反应试剂盒检测细胞质中碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性,用考马斯亮蓝法测定蛋白相对含量.放免法检测细胞甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)分泌量.结果 吉西他滨能明显抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡.吉西他滨作用后细胞分泌γ-GT 、ALP及AFP合成和分泌量显著降低,ALB分泌显著升高,提示肝癌细胞趋于分化.结论 吉西他滨能抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,诱导肝癌细胞分化.     

吉西他滨联合卡培他滨与吉西他滨单药治疗晚期胰腺癌的疗效

近年来,吉西他滨(gemcitabine,GEM)已成为晚期胰腺癌的标准治疗方案,但结果仍不尽如人意.因此,寻找新的治疗方案成为研究热点.2006年7月至2009年7月,我科将收治的48例晚期胰腺癌患者分别采用吉西他滨加卡培他滨(CAP)(GEMCAP方案)和吉西他滨单药治疗(GEM方案),观察其临床疗效.     

重组TRAIL蛋白对胰腺癌细胞SW1990增殖、凋亡的影响及吉西他滨的干预作用

目的 探讨重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的抗胰腺癌作用及吉西他滨的干预作用.方法 分别采用不同浓度TRAIL 和(或)吉西他滨处理人胰腺癌细胞株SW1990并分为TRAIL组、吉西他们滨组、联合组.采用MTT法检测各组生长抑制率(IR),流式细胞仪检测细胞凋亡率,Heochst 33342染色法检测凋亡细胞形态,Western blot检测凋亡相关蛋白Smac/DIABLO、Caspase-3表达.结果 TRAIL组、吉西他滨组及联合组均出现细胞增殖抑制和凋亡;联合组IR、凋亡率及凋亡相关蛋白表达均显著高于其他两组(P＜0.05).结论 TRAIL可通过调节细胞凋亡相关蛋白表达抑制SW1990细胞增殖及诱导凋亡;其与吉西他滨联用可为胰腺癌的靶向治疗提供新思路.     

吉西他滨联合希罗达治疗胰腺癌临床观察

采用吉西他滨(GEM)联合希罗达治疗晚期胰腺癌患者30例,希罗达1 250 mg/m2口服,第1～14天,休息7 d后重复治疗;GEM 1 000 mg/m2静滴, 第1、8天;至少接受2个周期化疗后进行临床评价.结果近期客观有效率26.67% ,疼痛缓解率、生活状态改善率均为53.33% ,体质量改善率40.00%.主要不良反应为骨髓抑制、外周神经毒性及胃肠道反应.认为GEM联合希罗达治疗晚期胰腺癌近期疗效较高,毒性较低,能显著提高患者的生存质量.     

HDAC1基因沉默对人胰腺癌细胞PaTu8988细胞周期的影响

目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶1( HDAC1)基因沉默对人胰腺癌PaTu8988细胞周期影响及可能机制.方法 常规培养胰腺癌PaTu8988细胞,分为对照组、阴性siRNA转染(c-siRNA)组及15、30 nmol/L HDAC1 siRNA转染组.采用脂质体2000转染细胞48 h后,应用蛋白质印迹法检测细胞HDAC1基因沉默效率及p21基因表达;流式细胞法检测细胞周期的变化.结果 与对照组比较,30 nmol/L HDAC1 siRNA组PaTu8988细胞的HDAC1蛋白表达明显下降,P21蛋白表达明显增加;G2/M 期细胞比例显著减少[(21.48±3.67)％比(28.28±2.94)％,P＜0.05],S期细胞比例显著增加[(50.20±6.85)％比(32.49±2.78)％,P＜0.05].结论 HDACl siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达,引起细胞S期阻滞,其机制可能与上调p21蛋白表达有关.     

沉默SIRT1基因表达对胰腺癌细胞PANC1增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默胰腺癌PANC1细胞的SIRT1基因表达,观察其对细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建靶向SIRT1基因表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒pGC-shRNA,转染胰腺癌细胞PANC1.设对照shRNA(shRNA-C)转染组和未转染对照组.实时定量PCR和免疫细胞化学法检测转染后细胞SIRT1 mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞的增殖率;ELASA法检测细胞caspase-3和caspase-9活性;Western bloting检测细胞Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与未转染组相比,shRNA组转染后48 h,PANC1细胞SIRT1 mRNA及蛋白表达的抑制率分别为(76.2%±10.4)%和(80.1±11.6)%;细胞增殖抑制率为(45.1±6.5)%;caspase-3和caspase-9酶活性显著增高;Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论 应用RNA干扰技术能有效沉默PANC1细胞SIRT1基因的表达,其机制可能与caspasa酶活性升高及Bax表达上调、Bcl-2表达下调有关.     

胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA体外转染树突细胞的方法探讨

目的 探讨将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA转染树突细胞(DCs)最优化的方法.方法 以rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合诱导外周血单核细胞以获得DCs,观察DCs的形态变化,流式细胞术检测DCs表面标志CD40、HLA-DR、CD83和CD86表达,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DCs刺激异体T细胞增殖的能力.采用脂质体转染、电穿孔及被动转染三种方法将MiaPaCa-2总RNA转染DCs,应用实时定量PCR法检测MUC1 mRNA表达,MTT法测定DCs存活率.结果 所获细胞具有典型的成熟DCs形态特征,CD40、HLA-DR、CD83和CD86阳性表达率分别为34.3%、50.2%、89.2%和73.6%,对同种异体T淋巴细胞具有极强的刺激增殖作用.电穿孔法DCs转染48 h后,DCs的MUC1 mRNA表达量为45.39±9.33,明显高于脂质体法的31.68±7.25和被动转染法的18.53±3.26;DCs存活率为(80.36±2.43)%,较被动转染法的(91.48±5.42)%略低,但高于脂质体法的(67.44±2.51)%,且基本稳定在80%左右.结论 采用电穿孔法将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA体外转染DCs的效率较高,且较安全.     

沉默ABCC4基因表达对人胰腺癌PANC1、BxPC-3细胞增殖的影响

目的 检测ABCC4基因沉默后对人胰腺癌PANC1、BxPC-3细胞增殖及细胞周期的影响.方法 构建插入靶向ABCC4的shRNA片段的重组慢病毒载体,感染人胰腺癌细胞株PANC1和BxPC-3.采用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测感染细胞的ABCC4 mRNA及蛋白表达,克隆形成实验测定感染细胞形成的克隆数,流式细胞仪检测感染细胞的细胞周期.结果 成功构建了插入靶向ABCC4的shRNA片段的重组慢病毒载体.重组慢病毒感染PANC1及BxPC-3细胞后,细胞ABCC4 mRNA表达被抑制(0.28 0.01比1.00±0.03,0.22 ±0.02比1.00 ±0.03,P值均＜0.05);ABCC4蛋白表达亦显著下调;感染的PANC1细胞克隆形成数量显著减少(4比65,P＜0.05);细胞周期阻滞在G1期[(54.98±1.78)％比(42.93±0.88)％,(68.55±0.75)％比(54.76 ±0.29)％].结论 沉默人胰腺癌PANC1和BxPC-3细胞的ABCC4基因表达可显著抑制癌细胞的增殖,使细胞阻滞于G1期.     

抑制5-脂氧合酶表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术阻断5-脂氧合酶(5-LOX)的表达,观察其对人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡的作用.方法 构建4个靶向5-LOX的小干扰RNA(small interference,siRNA)和1个阴性对照siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine TM2000法转染SWl990细胞,RT-PCR和Western blot检测RNAi后SWl990细胞的5-LOX mRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 阴性对照和4个序列特异性的siRNA对SWl990细胞5-LOXmRNA表达的抑制率分别为(3.0±1.4)%、(18.8±1.5)%、(53.5±2.3)%、(56.1±2.0)%、(52.4±2.5)%;5-LOX蛋白表达抑制率分别为(4.5±2.0)%、(18.1±2.5)%、(50.4±4.3)%、(48.9±4.4)%、(45.9±4.0)%.转染24 h后癌细胞增殖抑制率分别为(2.1±1.0)%、(5.5±1.3)%、(11.9±1.2)%、(13.4±1.1)%、(13.8±1.3)%.;48 h的增殖抑制率分别为(3.0±1.3)%、(16.0±2.2)%、(25.7±2.5)%、(25.3±3.1)%、(27.2±3.2)%.转染24 h细胞凋亡率分别为(2.0±0.8)%、(5.3±1.0)%、(10.6±1.2)%、(12.4±1.0)%、(10.6±0.9)%;转染48 h的凋亡率分别为(3.0±1.0)%、(7.1±1.1)%、(17.5±0.9)%、(21.5±1.1)%、(15.7±1.0)%.结论 通过RNAi可以有效、特异地阻断SWl990细胞5-LOX的表达,并可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

沉默小鼠成纤维细胞活化蛋白表达对原代胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默小鼠胰腺癌相关成纤维细胞的成纤维活化蛋白(FAP)表达,观察其对小鼠原代胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建靶向小鼠FAP基因的重组表达质粒siFAP及对照质粒siMOCK,分别转染小鼠原代胰腺癌相关成纤维细胞mPCa-FCs-1212,采用定量RT-PCR法及蛋白质印迹法检测转染细胞的FAP mRNA及蛋白表达.将该细胞与小鼠原代胰腺癌细胞mPCa-1212按1∶1的比例共培养,应用MTT比色法检测mPCa-1212细胞的增殖抑制率,应用Annexin V-FTTC/PI染色及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 转染重组质粒siFAP的mPCa-FCs-1212细胞的FAP mRNA及蛋白表达较转染对照质粒siMOCK的细胞的表达明显下调[0.584±0.029比1.052±0.281,P=0.0213;(27.18±3.23)％比(61.58±4.72)％,P=0.0317].转染siFAP和转染siMOCK的mPCa-FCs-1212分别与mPCa-1212细胞共培养3d后,mPCa-1212的增殖抑制率分别为(23.02±3.32)％和(1.11±0.23)％;细胞凋亡率分别为(42.31±5.34)％和(7.38±2.09)％,两组细胞的差异具有统计学意义(P=0.000).结论 沉默FAP基因的mPCa-FCs-1212在体外可有效抑制mPCa-1212细胞的增殖,诱导细胞凋亡,可能是一种潜在的基因治疗新方法.     

MicroRNA-200b在吉西他滨诱导的胰腺癌细胞株MiaPaCa-2上皮间质转化中的作用

目的 探讨MicroRNA-200b (miR-200b)在吉西他滨诱导的胰腺癌MiaPaCa-2细胞上皮间质转化(EMT)过程中的作用.方法 应用不同浓度的吉西他滨诱导MiaPaCa-2细胞,选择50％细胞生长抑制时的药物浓度(IC50),获取耐药MiaPaCa-2细胞.采用脂质体法将miR-200b和无意义小分子片段(阴性对照)分别转染MiaPaCa-2细胞,再用IC50的吉西他滨诱导细胞,获取转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞及阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化;Transwell小室测定细胞侵袭能力;实时定量PCR检测细胞miR-200b表达;蛋白质印迹法检测细胞E-cadherin、Vimentin、Zeb1、Zeb2蛋白表达.结果 吉西他滨处理后细胞体积逐渐缩小,呈纺锤样,细胞间连接减少,伪足增多,呈现间质细胞特征.耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数从亲本细胞的(26±3)个上升至(85±6)个,Vimentin、Zeb1、Zeb2表达分别上升至亲本细胞的(1.87±0.17)、(2.57±0.21)、(5.24±0.83)倍,miR-200b表达下降至亲本细胞的(0.36±0.01)倍,E-cadherin表达下降至亲本细胞的(0.47±0.05)倍.而转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数下降至(42±4)个,Zeb1、Zeb2表达下降至阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞的(0.36±0.07)、(0.08±0.01)倍.结论 吉西他滨诱导胰腺癌MiaPaCa-2细胞过程中细胞出现EMT,其机制可能与miR-200b表达下调有关.     

组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的 观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响.方法 培养胰腺癌PaTu8988细胞株,设空白对照组(未予任何处理)、阴性对照组[予30 nmol/L阴性小干扰RNA(siRNA)]、HDACI低剂量组(予15 nmol/L HDAC1 siRNA)和HDAC1高剂量组(予30 nmol/L HDAC1 siRNA),siRNA转染48 h后,分别采用相对实时定量PCR法和Western印迹法检测HDAC1基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率,细胞计数试剂盒法检测siRNA干扰前、后细胞增殖变化,流式细胞技术检测干扰前、后细胞凋亡变化.结果 转染HDAC1siRNA 48 h后,低剂量组和高剂量组人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1 mRNA表达率分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照组(87.4%±28.3%),差异有统计学意义(P值均<0.05).空白对照组和阴性对照组HDAC1蛋白表达水平高于其余两组.空白对照组、阴性对照组、HDAC1低剂量组和HDAC1高低剂量组的细胞存活率分别为100.0%±17.1%、87.1%±5.0%、68.7%±4.7%和61.6%±2.0%,细胞凋亡率分别为4.20%±0.95%、4.59%±1.26%、10.09%±1.36%和11.19%±6.07%,空白对照组和阴性对照组与其余两组比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 HDAC1 siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDAC1表达,抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

人类真核翻译延长因子1A2在胰腺癌中抑制凋亡致癌机制研究

目的探讨人类真核翻译延长因子1A2（Homo sapiens eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2，EEFlA2）可能的致癌机制。方法培养人胰腺导管细胞腺癌细胞株BxPC-3；采用EEFlA2 siRNA干扰EEFlA2高表达的胰腺癌细胞株BxPC-3，另设空白对照组和阴性对照组。采用Western印迹检测各组EEFlA2蛋白水平变化；四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率；分别应用流式细胞仪、透射电镜以及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果靶向EEFlA2的序列特异性的siRNA可以高效地抑制BxPC-3细胞EEFlA2基因表达。EEFlA2 siRNA干扰细胞24、48h后，与阴性对照组相比，实验组细胞的细胞增殖被显著抑制（23．51％比37．67％和11．53％比48．89％，P〈0．05），凋亡明显增加[（2．820±0．240）％比（8．505±2．454）％和（2．850±1．117）％比（4．075±1．068）％，P〈0．05]，TUNEL标记分析和透射电镜均发现典型凋亡特征。结论EEFlA2可能是胰腺癌的一个癌基因。EEFlA2可能通过抑制细胞凋亡途径促进胰腺癌细胞生长。