国产与进口荧光定量PCR试剂检测HBV DNA的结果比较

目的:评价国产和进口HBV DNA定量检测试剂盒的性能和应用。方法:同时用国产和进口HBVDNA定量检测试剂盒对200例临床血清样本进行检测,比较试剂的特异性、灵敏度和符合率,分析检测结果。结果:国产科华试剂的特异性为100%,而灵敏度(68.1%)和符合率(74.5%)均低于CAP/CTM系统;CAP/CTM系统与科华试剂相比,对相同标本检出的HBV DNA水平数值更高。结论:结合临床诊治和检测的效率、以及患者费用等各方面因素,可选择适当的检测试剂。     

HBV-M与定量PCR法检测HBV-DNA相关性探析

目的：探讨乙肝病毒DNA（HBV-DNA）与其血清学标志物HBV-M之间的相关性。方法：选取本院收治的乙肝患者183例作为研究对象,采集并分离患者的血清标本,分别采用荧光定量PCR法和酶联免疫吸附法对患者的HBV-DNA、HBV-M进行检测,在不同的HBV-M模式下分析其与HBV-DNA间的关系。结果：在HBsAg（＋）＋HBeAg（＋）＋HBcAb（＋）的模式下,HBV-DNA的检测阳性率为97.9%;HBsAg（＋）＋HBeAg（＋）模式下,HBV-DNA的检测阳性率是100%;两者比较差异无统计学意义,但这两种模式下的检测阳性率都显著高于其他模式（P〈0.05）。结论：乙肝病毒的血清学标志物的模式不同,HBV-DNA的检测阳性率不同,乙肝患者机体内的病毒含量也有差异,HBV-M和HBV-DNA的检测分别是乙肝感染的间接证据和直接证据,同时对患者进行这两项指标的检测对于乙肝的临床诊断、病情判定、传染性的评估具有重要的意义。     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA结果比较

乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种严重影响我国人民健康的传染病,检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是反映HBV复制的程度,考核抗病毒药物治疗效果的重要依据。用PCR检测HBV-DNA是最常用的检测方法,由于该法受一系列的技术以及人为因素影响,易使检测结果产生误差,甚至造成假阴性的结果。为此,我们对48份HBV-DNA检测阴性标本,用多种不同厂家生产的PCR试剂进行同步复核,探讨其假阴性结果的真实性,现报道如下。材料与方法1标本来源宁波市传染病院2005~2005年住院和门诊乙肝患者2333份血清标本,均未经抗病毒药物治疗,其血清病毒学标志检…     

2种荧光定量PCR扩增仪检测结果的比较

目的:观察2种荧光定量PCR扩增仪测定乙肝病毒定量(HBV DNA)的结果是否一致。方法:用2台PCR扩增仪同时对20份标本进行检测,观察2台荧光定量PCR定量扩增仪对HBV DNA测定结果的差异。结果:对20份标本HBV DNA含量的对数值进行相关性分析,二者相关性良好(r=0.96)。结论:通过2种荧光定量PCR扩增仪对20份随机样本的检测结果比较,2种仪器检测结果具有较好的一致性,可用于同时检测HBV DNA。     

实时荧光定量PCR法与常规PCR法检测沙门菌的比较

目的:比较实时荧光定量PCR法、常规PCR法检测沙门菌的灵敏度与特异性。方法:采用建立的实时荧光定量PCR、常规PCR方法,同时对沙门菌等细菌进行检测。结果:实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达33 cfu/m l,且有很高的特异性,对金黄色葡萄球菌等10种相关细菌均无交叉反应,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论:实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是2种方法中最为快速敏感的方法,适用于临床实验室的快速诊断。     

两种方法制备标准品的荧光定量PCR法检测细菌结果分析

目的 目前细菌定量检测提取细菌基因组多采用裂解法,此方法在提取基因组过程中部分基因组丢失。荧光定量PCR定量检测细菌常采用纯化的PCR产物制备标准品,但用这种标准品制备标准曲线没有考虑基因组提取过程中基因组丢失问题,检测结果偏低。本研究使用细菌直接计数法制备标准品,力争减少提取基因组过程中部分基因组丢失造成的误差。方法脆弱类杆菌作为试验菌株,用细菌直接计数法和纯化PCR产物制备标准品,检测用细菌计数法获得的细菌基因组,用统计学软件分析两种方法得到的检测结果。结果用两种不同的标准品作荧光定量PCR检测1000个细菌基因组μL-1的标本,细菌计数法制作标准品测得的结果是763.8个细菌基因组μL-1,普通PCR产物制作标准品测得的结果是112.9个细菌基因组μL-1,统计软件SPSS10.0分析结果表明,使用两种不同的标准品,荧光定量PCR检测结果差别显著(p<0.05)。结论使用细菌直接计数法制备标准品比用PCR产物制备标准品作荧光定量PCR检测细菌标本的结果更接近实际结果。     

荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

目的:探讨分析应用荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的结果。方法:选取2018年8月~2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者,按数字法随机分两组,各15例,对照组仪器采用RLC480仪检测,观察组仪器采用荧光定量PCR仪检测,通过对患者HBV DNA水平的测定,对比分析不同仪器检测的结果。结果:RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果未出现离群值;两台仪器的检测HBV DNA结果的相关性良好(r>0.975);两台PCR检测仪器检测结果的偏倚度百分比为3.18%(<7.51%),一致性良好,且系统误差在可接受的范围内。结论:ABI7500型荧光定量PCR仪器和RLC480型荧光定量PCR仪器检测HBA DNA的一致性极高,误差小,测算乙型肝炎DNA结果偏倚度在可控范围内,两种仪器运用于乙型肝炎的测量结果可用于以后的临床检测中。     

荧光定量PCR检测HBV DNA

目的：探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBV M)表现模式的关系。方法：对1207例慢性乙型肝炎患者进行血清HBV DNA荧光定量PCR分析，HBV M检测采用ELISA法。结果：血清HBV DNA水平与HBV M表现模式有关，HBsAg与HBeAg的存在影响HBV DNA水平变化。结论：HBbAg和HBV DNA有明显的相关，抗—HBe、抗HBc阳性者病毒末完全停止复制，只是复制水平降低。     

ELISA法检测乙肝两对半与荧光定量PCR检测HBV-DNA的比较

乙型肝炎病毒是当今流行最广泛,危害最严重的病毒性肝炎之一,相当一部分乙肝携带者可以发展成慢性肝炎,需要接受病毒治疗.目前多以其血清感染标志物乙肝两对半及HBV-DNA定量,作为临床分析和判断乙肝患者病情、疗效及预后的主要依据,但由于两对半的组合模式复杂多样,导致部分患者的HBV感染复制状况难以判断,而HBV-DNA是乙肝病毒感染和复制的特异性指标,是表明其具有传染性的最有力的证据.但是受到实验室要求较高的严格限制,尚无法普及检测,为了进一步探讨乙肝两对半与HBV-DNA定量结果之间的关系.本文对ELISA法检测乙肝两对半与荧光定量PCR检测HBV-DNA的比较进行分析比较.     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA阴性结果的比较

目的：为了解实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）不同试剂间的假阴性差异,分析其原因,寻找消除办法。方法：用深圳匹基基因诊断技术有限公司的FQ-PCR试剂（A方法）检测2 333份血清病毒学标志为HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc阳性病人血清中的HBV-DNA,对HBV-DNA阴性标本,用2种试剂盒进行复核。结果：2 333份HBeAg阳性标本A方法检出48份HBV-DNA阴性标本,阴性率为2.06%,经广州中山大学达安基因股份有限公司试剂（B方法）复核,有28份转为HBV-DNA阳性;上海申友基因技术诊断公司试剂（C方法）复核,有31份转为HBV-DNA阳性。结论：FQ-PCR不同试剂检测HBV-DNA存在假阴性,且假阴性率较高,其原因可能与试剂引物设计保守序列与HBV某些变异造成不相匹配有关,可以采用多种试剂进行复核的方法弥补。当FQ-PCR检测HBV-DNA低于检测值时,应用其他试剂进行复核,以减少假阴性错误的发生,为临床诊断提供可靠的依据。     

荧光PCR检测乙型肝炎病毒cccDNA方法的建立

目的:建立特异、灵敏的荧光PCR检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法.方法:首先用煮沸法提取血清中的HBVDNA,然后用绿豆核酸酶(Mung Bean Nuclease)消化松弛环状HBV DNA(rcDNA),保留共价闭合环状DNA(cccDNA).设计一条嵌合引物,该引物分为两部分序列,近5'部分为人为设定的序列,近3'部分是与正链缺口下游互补序列.先用该嵌合引物以正链为模板,自HBV cccDNA1590nt开始向上游延伸,然后以嵌合引物中人为设定的序列为下游引物、与负链互补的上游引物以及一条在两引物之间与正链互补的Taqman探针,扩增检测嵌合引物延伸的产物.由于带有缺口的HBV rcDNA无法被嵌合引物延伸,因此最终只能扩增检测到cccDNA.结果:用含有相应HBV DNA片端的PUC19质粒模拟HBV cccDNA,该检测方法的检测灵敏度为1×103拷贝/ml;以模拟松弛环状DNA(rcDNA)与模拟HBV cccDNA按不同比例混合,在rcDNA与cccDNA的比为1×109拷贝/ml:1×103拷贝/ml时,该方法仍可检测到模拟cccDNA;单独检测模拟rcDNA浓度为1 × 109拷贝/ml时,该方法检测未出现假阳性.结论:该检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法操作简单、灵敏、特异.适用于检测血清中HBV cccDNA.     

病毒基因型对联合抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者的HBV DNA、HBeAg变化的影响

目的:分析慢性乙型肝炎患者在拉米夫定和阿德福韦酯联合治疗过程中不同基因型对HBV DNA、HBeAg及ALT变化的影响。方法:对2009年9月-2011年3月在我院就诊的51例服用拉米夫定和阿德福韦酯慢性乙型肝炎患者进行基因分型、HBV DNA及肝功能指标的测定。结果:51例患者的HBV病毒基因型主要为B和C型,C型32例,占62.7%,B型19例,为37.3%,以C型基因型为主;B、C不同基因型组在治疗48周后,除12周时的HBV DNA、HBeAg有统计学意义,其余均无显著性差异。结论:拉米夫定和阿德福韦酯联合治疗的慢性乙型肝炎患者在治疗12周时,B和C基因型对患者的HBV DNA、HBeAg的变化有影响;但随着治疗时间的延长,基因型对HBV DNA、HBeAg及ALT的变化均无显著影响。     

乙型肝炎病毒DNA定量试剂检测样本的结果评定与分析

目的对国产乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量试剂最低检测限样本进行结果评定与分析,评估国产定量试剂的临床应用性能。方法 2011年6月-2012年6月应用国产HBV-DNA检测试剂检测2 061份临床样本、12份灵敏度试验稀释血清、10份卫生部临床检验中心标准品中HBV-DNA含量,结合实时荧光定量曲线和DNA凝胶电泳对小于最低检测限样本进行结果评定,分别采用化学发光法和全自动生化分析仪检测低病毒载量患者血清学指标和肝功能生化指标,对FX试剂定量结果进行相关性统计分析。结果 2 061份样本中小于最低检测限的样本1 233份占59.9%,其中<1 000IU/ml的低载量阳性样本393份占19.1%;393份低病毒载量样本中有193份样本检出有至少1项肝功能生化指标异常,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc 3项阳性的有332份占84.48%,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性26份占6.62%;10份标准品经检测均能正确检出,其实测值和理论靶值相关性比较差异有统计学意义(R=0.9942,P<0.01);国产试剂检测灵敏度试验稀释血清,检出稀释度样本最低浓度为57.8IU/ml。结论国产HBV-DNA定量试剂结果为小于最低检测限的样本中存在一定比例低病毒载量HBV感染者,建议对小于最低检测限样本采用进口试剂检测确认以避免漏检。     

乙型肝炎病毒DNA和血清学标志物的相关分析

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清标志物之间的关系。方法应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和荧光定量PCR分别检测468例乙型肝炎患者血清标志物和HBV-DNA含量。结果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc抗体和Pre-S1Ag阳性患者组的HBV-DNA阳性率(50.6%,χ2=56.28,P<0.001;97.7%,χ2=122.65,P<0.001;46.8%,χ2=8.46,P<0.01;62.4%,χ2=39.93,P<0.001)均显著高于相应的阴性患者组;抗-HBs抗体和抗-HBe抗体阳性患者组的HBV-DNA阳性率(2.1%,χ2=35.61,P<0.001;38.0%,χ2=6.34,P<0.05)均显著低于相应的阴性患者组。血清HBsAg含量和HBV-DNA拷贝数之间存在相关性(r2=0.028,P=0.016)。结论乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量与HBV血清学标志物测定结果之间存在关联。     

HBV-DNA与乙型肝炎病毒宫内感染之间的关系

目的 探讨HBV-DNA在乙型肝炎病毒(HBV)垂直传播中的作用.方法 选择2009年1月-2010年1月在我院正规产检的HBsAg阳性孕妇,定量检测其血清HBV-DNA和新生儿脐带血HBV-DNA含量.结果 HBsAg阳性孕妇外周血和新生儿脐带血HBV-DNA含量具有相关性(r=0.401,P<0.001),HBeAg阳性孕妇其新生儿宫内感染率较HBeAg阴性孕妇的新生儿宫内感染率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);脐带血HBV-DNA阳性孕妇中,剖宫产组与阴道分娩组HBV-DNA滴度对数之间差异无统计学意义(t=0.466,P=0.642).结论 母体血清HBV-DNA高滴度和HBeAg阳性是导致宫内感染的高危因素,而且HBV垂直传播与分娩方式无关.     

慢性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒S基因变异分析

目的探讨湖州地区慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者乙型肝炎病毒S基因序列变异状况,了解该地区乙型肝炎病毒S基因的病毒学特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增湖州地区40例HBV-DNA阳性的慢性乙型肝炎病毒感染者S基因,并对扩增产物进行测序,将测序结果与GenBank中的标准序列进行比对分析。结果 40例HBV感染者中B基因型26例,C基因型14例,血清学分型adw型25例,adr型13例,ayw和ayr各有1例;随无症状携带者、慢性肝炎、肝硬化、肝癌疾病的进展,氨基酸变异有逐渐增加的趋势,肝硬化、肝癌患者与携带者、慢性肝炎患者比较,S基因变异率在主要亲水区(MHR)、a决定簇以及第一茎环区差异均有统计学意义(P<0.05);126位点氨基酸变异在较为严重的肝脏疾病中发生率较高(P<0.05)。结论湖州地区乙型肝炎病毒血清型以adw型和adr型为主,S基因变异可能与肝病严重程度相关,特别126位点变异可能与较为严重肝病有一定相关性。     

乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量与HBV血清学标志关系

[目的 ]　探讨乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量与HBV血清学标志的关系。 [方法 ]　测定不同乙肝血清学标志模式和 2 47份标志物全阴性的临床肝炎病人血清以半套式PCR荧光定量检测系统检测HBVDNA含量。 [结果 ]　在HBsAg、HBeAg阳性的血清中HBVDNA含量最高 ,血清HBeAg和HBVDNA含量密切相关。但在很少数HBeAg阳性血清中未能检出HBVDNA。在另外的乙肝血清标志物模式中 ,包括全阴性和抗HBs阳性 ,也有少数血清标本能检出HBVDNA ,其浓度分布的范围很广。 [结论 ]　少数血清HBsAg、HBeAg阳性的病人并不处于HBV活跃复制的状态。PCR定量检测HBVDNA含量更有助于乙肝的预后和抗病毒疗效的监测。     

慢性乙型肝炎病毒感染者前C区变异及HBV DNA载量的临床意义

目的探讨慢性HBV感染者前C区A1896变异及HBVDNA载量与肝炎病情进展的关系。方法检测116例慢性HBV感染者前C区A1896变异,比较不同临床类型前C区A1896变异阳性率,再根据前C区变异不同,比较不同临床类型HBVDNA含量的差异。结果不同临床类型前C区变异株检出率差异无统计学意义(χ2=2.863,P=0.581)。在慢性HBV携带者中,变异阳性率同时伴有较高水平的HBVDNA量(P=0.003),其余各临床类型均未见明显差异;但变异情况相同的条件下,HBVDNA载量似随着病情的加重呈降低趋势。结论影响肝炎病情进展的因素错综复杂,前C区A1896变异可能不起作用,但前C区A1896变异可能是影响HBVDNA复制的一个因素。     

YMDD变异后HBeAg阴性患者的临床研究

目的研究经拉米夫定(LAM)治疗后出现YMDD变异且HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者病情的进展及预后;观察阿德福韦酯(ADV)的临床疗效。方法将90例患者随机分为3组:A组继续LAM并加强护肝治疗48周,B组采用ADV治疗48周,C组采用ADV与LAM联合治疗12周后再单用ADV治疗36周。结果YMDD变异后大部分患者HBV DNA的反弹和/或ALT的升高程度低于治疗前水平,少数出现轻度黄疸;3组治疗48周后ALT水平下降均显著,B组和C组ALT水平、ALT复常率、HBV DNA转阴率与A组对比差异显著(P≤0.001),B组与C组之间无统计学意义。结论YMDD变异后患者临床表现轻微;ADV单药或与LAM联合12周后单用ADV治疗YMDD变异且HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者,均可得到较好临床疗效,对临床稳定的患者可以使用ADV单药治疗。     

50例HBV基因分型及P区耐药突变分析

目的:调查温州乙型肝炎患者血清HBV基因分型和P区基因逆转录酶区(RT区)序列的突变情况。方法:选取50例接受核苷类似物治疗后的乙型肝炎患者作为研究对象,采用PCR产物直接测序法,并对扩增产物进行测序,将测序结果与GenBank中的标准序列进行比对分析,同时确定基因型。结果:在50例中C型44例,占88%,B型6例,占12%。存在位点突变者25例(50%)。其中检出以单位点rtM204I/V/S突变为主,9例,占36%,rtA181V/T突变4例,占16%,rtM204I/V/S+rtL180M突变5例,占20%,rtV214A,rtA181V/T+rtV173L,rtM204I/V/S+rtQ215H,rtM204I/V/S+rtL180M+rtV173L,rtM204I/V/S+rtL180M+rtV207I,rtM204I/V/S+rtL180M+rtT184A/G/I/S,rtM204I/V/S+rtL180M+rtT184A/G/I/S+rtA181V/T突变各占1例,占4%。结论:多数乙型肝炎患者在HBV P区可检出突变,突变形式多样,其中以rtM204I/V/S突变为主,应用DNA序列测定法分析HBV P区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。