超声微泡造影剂介导脑源性神经营养因子联合转染视网膜和视皮质对视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用

　　目的　观察超声微泡造影剂介导脑源性神经营养因子（BDNF）联合转染大鼠视网膜和视皮质区细胞对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。方法　雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠88只随机分为正常组（A组）、假手术组（B组）、空白对照组（C组）、单纯眼转染组（D组）、单纯脑转染组（E组）、联合转染组（F组）;A组8只大鼠,B～F组每组16只大鼠。建立钳夹视神经损伤模型,将B～F组大鼠随机分为视神经损伤1、2周亚组,各亚组8只大鼠。B、C组玻璃体腔和视皮质区分别注射磷酸盐缓冲液（PBS）,D、E组玻璃体腔和视皮质区分别注射BDNF质粒（pBDNF）微泡造影剂悬液,F组玻璃体腔和视皮质区同时注射pBDNF微泡造影剂悬液。D～F组注射pBDNF微泡微泡造影剂悬液后,立即用超声辐照相应转染部位。视神经损伤后1、2周,各组行逆行荧光金标记RGC计数;半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3）蛋白免疫组织化学染色,观察其阳性表达情况;图形视网膜电流图（PERG）检测,记录N95振幅。结果　荧光金标记RGC结果显示,各组均可见金黄色荧光散布于视网膜定向铺片上。A~F组间RGC计数差异有统计学意义（F=256.30,P＜0.01）;B~F组视神经损伤1、2周亚组间RGC计数差异也有统计学意义（F=6518,P＜0.01）。光学显微镜观察发现,A、B组大鼠视网膜均未见caspase-3蛋白阳性表达;C~F组均可见主要位于神经节细胞层的caspase-3蛋白阳性表达。PERG检测发现,A~F组间N₉₅振幅差异有统计学意义（F=121.56,P＜0.01）;B~F组视神经损伤1、2周亚组间N95振幅差异也有统计学意义（F=8238,P＜0.01）。结论　超声微泡造影剂介导BDNF联合转染视网膜和视皮质区细胞能抑制视神经损伤后RGC凋亡,提高RGC存活数,保护其视功能。      

活化的巨噬细胞在外伤性视神经损伤修复中的作用

　　目的　探讨活化的巨噬细胞在视神经损伤修复中的作用。方法　选取112只健康新西兰大耳白兔作为实验动物,按随机数字表法随机分为实验组和对照组,每组各56只,按照不同观察时间点（1、4、7、10、14、21、28 d）每组分为7个亚组,每亚组8只。用液压冲击颅脑损伤仪（FPI）建立外伤性视神经不完全损伤联合晶体损伤模型作为实验组,外伤性视神经不完全损伤模型作为对照组。应用闪光视觉诱发电位（FVEP）分析并比较实验组、对照组建模前及建模后不同时间点视神经功能变化情况,组织病理学方法观察并比较实验组、对照组建模后视网膜组织中巨噬细胞及神经节细胞变化情况。结果　建模前,实验组FVEP P₁₀₀波潜伏时为（42.74±5.83） ms,振幅为（7.98±2.15）μV。建模后1 d,实验组FVEP P₁₀₀波潜伏时为（103.91±10.89） ms,较建模前延长,差异有统计学意义（t=-8.464,P=0.000）;振幅（6.39±2.19） μV,较建模前降低,差异有统计学意义（t=-2.094,P=0.000）。建模后10 d,实验组P₁₀₀波潜伏时最长,之后逐渐恢复（F=35.894,P=0.000）。建模后7 d,实验组P₁₀₀波振幅最低,之后逐渐回升(F=6.594,P=0.000）。组织病理学检查显示,建模后1 d,实验组视网膜、视神经未见活化的巨噬细胞,之后逐渐增多,10 d时到达高峰（91.25±6.91）,之后又逐渐减少,差异有统计学意义（F=21.277,P=0.000）;建模后1 d,实验组视膜未出现神经节细胞轴突再生,7 d时出现,平均值为6.38±1.85,之后逐渐增多,28 d时到达高峰,平均值为49.63±2.50,差异有统计学意义（F=7.711,P=0.000）。结论　视神经不完全损伤联合晶状体损伤后,视神经可逐渐修复,活化的巨噬细胞在视神经不完全损伤修复中起着重要的作用。      

不同眼组织病理侵犯对单眼视网膜母细胞瘤生存预后的影响

　　目的　观察单眼视网膜母细胞瘤（RB）患者患眼肿瘤组织不同眼组织病理侵犯对生存率及预后的影响。方法　分析77例单眼RB行I期眼球摘除手术的患者随访观察资料。所有患者治疗后随访1周~89个月,平均随访时间49个月。采用复诊、电话问询及信访方式,随访了解患者的生存情况。应用Kaplan-Meier方法,分析视神经侵犯、脉络膜侵犯、脉络膜侵犯有无合并视神经侵犯以及眼前节受侵犯等眼肿瘤组织不同眼组织病理侵犯与患者生存率的相互关系。结果　2年后生存率保持在88.31％。视神经切面断端侵犯组生存率为16.67％,与其他不同程度视神经侵犯组生存率比较,差异有统计学意义（χ²=19.51,18.42,18.42,14.39;P值均=0.000 0）;大部分脉络膜侵犯合并巩膜内、外侵犯组生存率为60.00％,与无脉络膜侵犯组生存率比较,差异有统计学意义（χ2=7.69,P=0.005 5）;大部分脉络膜侵犯合并不同程度视神经侵犯组生存率为75.00％,与无脉络膜侵犯的视神经侵犯组生存率比较,差异有统计学意义（χ²=4.25,P=0.039 3）;巩膜及巩膜外侵犯合并视神经侵犯组生存率为60.00%,与无脉络膜侵犯的视神经侵犯组生存率比较,差异有统计学意义（χ²=7.59,P=0.005 9）;眼前节受侵犯组与眼前节未受侵犯组生存率比较,差异无统计学意义（χ²=0.05,P=0.823 5）。结论 视神经切面断端侵犯是预后最差的病理因素,死亡风险最大;大部分脉络膜侵犯合并不同程度视神经侵犯者和巩膜侵犯者的预后相对较差;眼前节侵犯对预后无明显影响。      

大鼠opticin表达基因小发夹RNA真核表达质粒的构建及鉴定

　　目的　构建针对大鼠opticin表达基因(OPTC)的特异性小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒。方法　用DNA重组技术将针对大鼠OPTC基因不同位点所设计的4个shRNA序列克隆到真核表达质粒中。根据构建的4对质粒设置shRNA-1组、shRNA-2组、shRNA-3组、shRNA-4组,同时只加转染试剂不加质粒的细胞设为正常对照组,转染阴性质粒的细胞为阴性对照组。用脂质体lipofectimine 2000将4个shRNA质粒分别转染至体外培养的原代大鼠睫状体非色素上皮(NPE)细胞,转染后采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测OPTC基因的mRNA及opticin蛋白的相对表达量和抑制率。结果　各组质粒转染大鼠NPE细胞后,shRNA-1、shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4组细胞OPTC mRNA相对表达较正常对照组均明显下调(F=10.239,P＝0.000),各组OPTC mRNA抑制率为85.7%、62.87%、54.87%、48.77%。各质粒干扰组细胞opticin蛋白表达较正常组均有不同程度下降(F=17.870,P=0.000),各组opticin蛋白抑制率为78.7%、34.6%、31.1%、16.8%。结论　OPTC基因干扰质粒shRNA-1可以有效抑制大鼠睫状体NPE细胞opticin的表达。      

敷贴放射联合经瞳孔温热疗法治疗脉络膜黑色素瘤的初步观察

　　目的　观察巩膜表面敷贴放射（PRT）联合经瞳孔温热疗法（TTT）治疗脉络膜黑色素瘤（CM）的治疗效果。方法　采用国产巩膜敷贴器联合TTT对30例CM患者的30只眼进行治疗。其中,男性15例,女性15例;均为单眼。视力0.1～0.8,平均视力0.3±0.2。肿瘤最大基底径6.80～17.90 mm,平均最大基底径（11.30±2.80） mm;高度3.90～10.60 mm,平均高度（7.20±2.40）mm。肿瘤局部控制标准：对比B型超声测量下的肿瘤大小,若肿瘤高度增加2.00 mm或肿瘤任意一边界扩展0.25 mm视为肿瘤生长。治疗后随访15～57个月,平均随访时间（33.01±9.81）个月,观察肿瘤局部控制率、眼球保存率、治疗后视力以及治疗后并发症的发生情况。结果　治疗后肿瘤最大基底径4.60～17.00 mm,平均最大基底径为（9.79±3.35）mm。与治疗前肿瘤平均最基底径比较,差异有统计学意义（t=2.195,F=0.49;P=0.032）;肿瘤高度为2.70～11.90 mm,平均高度（5.19±2.57） mm。与治疗前肿瘤平均高度比较,差异有统计学意义（t=2.069,F=0.018;P=0.043）。末次随访时,肿瘤最大基底径较治疗前最大基底径增加2只眼;肿瘤高度较治疗前肿瘤高度增加2只眼。肿瘤局部控制率为86.7%。治疗后眼球摘除3只眼,眼球保存率为90.0%。视力保持稳定12只眼,占40.0%;视力提高1只眼,占3.3%;视力下降17只眼,占56.7%。出现放射性视网膜病变12只眼,占40.0%;继发性视网膜脱离3只眼,占10.0%,其中伴有继发性青光眼1只眼;白内障4只眼,占13.3%;干眼症症状5只眼,占16.7%。结论　PRT联合TTT能有效控制肿瘤生长,并发症发生率低。      

基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤中的表达

　　目的　观察基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达及其与RB分化程度和视神经浸润的关系。方法　经病理检查确诊的40例RB眼球石蜡标本纳入研究。按照RB细胞中有无菊形团排列以及RB肿瘤细胞是否浸润视神经分为分化型、未分化型以及视神经浸润、视神经无浸润组。其中,分化型15例,未分化型25例;视神经浸润13例,视神经无浸润27例。采用免疫组织化学方法检测其MMP-2、MMP-9和VEGF的表达,对比分析MMP-2、MMP-9和VEGF表达与肿瘤病理组织分型和视神经是否侵润之间的关系。结果　40例RB中,MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达率分别为52.5%、57.5% 和72.5% 。未分化型RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达均高于分化型RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达,差异有统计学意义(χ²=9.037,9.253,8.095;P＜0.05);有视神经浸润的RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性水平均高于无视神经浸润RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性水平,差异有统计学意义(χ²=11.045,10.243,8.956;P＜0.05)。RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的表达呈正相关关系(r=0.126,0.314;P＜0.05)。结论　RB细胞内有MMP-2、MMP-9和VEGF的表达。MMP-2、MMP-9表达与VEGF表达存在相关性。MMP-2、MMP-9和VEGF的表达水平与视神经浸润存在密切的关系。       

蛋白酶体抑制剂对糖尿病大鼠视网膜病变激活核转录因子-κB信号通路及视网膜神经节细胞凋亡的作用

目的　观察泛素蛋白酶体抑制剂对早期糖尿病性视网膜病变(DR)中激活核转录因子（NF-κB）和其抑制性信号蛋白IκB激酶的降解调控作用,及其对视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响。方法　健康成年雄性Wistar大鼠40只,用数字随机法随机分为正常对照组（A组）、DR安慰剂组（B组）、DR+蛋白酶体抑制剂（MG132）低浓度干预组（C组）,DR+MG132高浓度干预组（D组）,每组10只大鼠。给药后6、8周,检测每组大鼠体重、血糖,并制备视网膜石蜡切片,采用免疫组织化学法分析NF-κB及其抑制性信号蛋白IκB在大鼠视网膜中的表达。采用原位凋亡检测（TUNEL）法分析RGC的凋亡情况。结果　NF-κB在B组表达较A组明显增强,D组表达强度较B组减弱;IκB在B组表达较A组明显减少,D组表达强度较B组增强;RGC凋亡在B组的表达较A组明显增多,D组表达强度较B组减少;差异均有统计学意义(P＜0.01)。C组NF-κB和IκB的表达强度及RGC凋亡与B组相比,差异均无统计学意义(P＜0.05)。结论　泛素蛋白酶体抑制剂MG132通过抑制 IκB泛素化降解,阻断NF-κB激活,抑制RGC的凋亡。      

糖尿病大鼠早期视网膜小胶质细胞活化与神经节细胞损害的关系

目的　观察糖尿病早期视网膜小胶质细胞的活化特征与视网膜神经节细胞（RGC）损害的关系。方法　20只成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,采用链脲佐菌霉素腹腔注射方法制作糖尿病动物模型,分为糖尿病1、3个月组及相应正常对照组,每组5只大鼠。对所有大鼠行上丘定位注射逆行标记RGC,分别用免疫组织化学法标记视网膜铺片、冰冻切片小胶质细胞和RGC,共聚焦显微镜下观察小胶质细胞细胞形态及分布特征。结果　糖尿病组视网膜铺片小胶质细胞胞体增粗,形态不规则。与对照组相比,糖尿病3个月组RGC层发生吞噬的小胶质细胞密度显著增加（t=3.83,P＜0.01）。与对照组相比,糖尿病大鼠1、3月个组RGC层小胶质细胞平均密度均显著增加（t=2.71,4.22;P＜0.05）;糖尿病大鼠3个月组RGC层小胶质细胞平均密度较糖尿病1个月组显著增加（t=7.45,P＜0.0001）。糖尿病早期小胶质细胞与RGC数量之间存在相关关系（r=0.9,P＜0.05）。结论　糖尿病早期小胶质细胞活化与RGC损伤关系密切。     

视网膜母细胞瘤的超声诊断分析

　　目的　分析视网膜母细胞瘤（RB）的超声诊断价值。方法　162例经手术及病理检查证实为RB患者的210只眼纳入研究。对其超声检查、计算机断层扫描(CT)检查、临床和病理学检查资料进行回顾性分析,分相RB的超声特征以及与病理诊断的符合率。结果　RB的超声表现均以眼球后段实质性肿块为特征,呈球形、半球形及不规则形,甚至充满整个眼球。149例197只眼肿块内有钙化,占病例数的92.0%;13例13只眼肿块中无钙化,但超声高度怀疑为RB,占病例数的8.0%。超声诊断与病理诊断符合率为92.0%。所有患眼肿块内均见与视网膜中央血管相延伸的彩色血流信号。CT检查发现145例167只眼肿块内有斑片状、块状钙化。CT诊断与病理诊断符合率为89.5%。结论　超声检查可以显示肿瘤的形状、大小、内部特征及眼眶内累及范围,在RB诊断中有重要应用价值。      

病理性近视患者黄斑功能的微视野检查

　　目的　观察病理性近视患者黄斑功能的微视野检查表现。方法　回顾分析90例病理性近视患者142只眼的临床资料。所有患者均详细询问病史,并行最佳矫正视力（BCVA）、屈光度、眼轴、荧光素眼底血管造影（FFA）、间接检眼镜和黄斑部光相干断层扫描（OCT）检查。根据检查结果将患者分为无黄斑病理改变和黄斑病理改变组,分别为20例24只眼、70例118只眼。采用MP-1微视野计对两组患者行眼底成像和黄斑部微视野检查,记录受检眼黄斑10°范围内视网膜平均光敏感度（MS）、固视稳定性、2°和4°固视率及固视点位置。结果　无黄斑病理改变组和黄斑病理改变组MS值分别为（16.39±2.12）、（10.80±4.53） dB,二者比较,差异有统计学意义（F=15.044,t=-9.314;P=0.000）。无黄斑病理改变组24只眼中,固视稳定19只眼,占79.2%;相对不稳定5只眼,占20.8%。黄斑病理改变组118只眼中,固视稳定45只眼,占38.1%;相对不稳定52只眼,占44.1%;不稳定21只眼,占17.8%。两组固视稳定率比较,差异有统计学意义（χ²=13.56,P=0.000）。两组2°和4°固视率比较,差异均有统计学意义(F=5.773,13.230;t=-4.110,-5.465;P值均=0.000)。无黄斑病理改变组24只眼中,中心固视23只眼,占95.8%;弱中心固视1只眼,占4.2%。黄斑病理改变组118只眼中,中心固视81只眼,占68.6%;弱中心固视16只眼,占13.6%;旁中心固视21只眼,占17.8%。两组中心固视率比较,差异有统计学意义(F=9.618,t=-5.773;P=0.000)。结论　病理性近视有黄斑病理改变者较无黄斑病理改变者MS、固视稳定性下降,并有旁中心固视点形成。      

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠视神经钳夹伤后胶质纤维酸性蛋白表达的影响

背景先前的研究已证实,绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）能提高大鼠视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞（RGCs）的生存率。星形胶质细胞（AS）在神经系统损伤中对神经元的修复起重要作用,而EGCG对视神经钳夹伤后AS反应活性的影响尚有待证实。胶质纤维酸性蛋白（GFAP）是AS的特异性标记物。目的观察EGCG对大鼠视神经钳夹伤后视神经GFAP表达的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术＋EGCG组、视神经钳夹伤＋生理盐水组、视神经钳夹伤＋EGCG组,每组18只。于大鼠球后2mm处用夹持力dOg的微型视神经夹垂直视神经钳夹60s建立视神经钳夹伤模型,似手术大鼠仅切开眼外软组织,不损伤视神经。假手术＋EGCG组和视神经钳夹伤＋EGCG组大鼠术前2d起每日给予25mg／kgEGCG腹腔注射至术后2d,随后改为每日2mg／kg口服。采用免疫组织化学染色及Westernblot法检测并比较各组大鼠造模后7、1d、28d视神经组织中GFAP的表达。结果免疫组织化学染色显示,正常对照组和假手术＋EGCG组视神经组织中GFAP呈弱表达;造模后7、14、28d,视神经钳夹伤＋生理盐水组GFAP表达明显增强,视神经钳夹伤＋EGCG组GFAP的表达强于正常对照组,弱于视神经钳夹伤＋生理盐水组。Westernblot检测表明,造模后视神经组织GFAP的表达量较正常对照组明显增高,差异有统计学意义（P〈0．01）;造模后7d、14d,视神经钳夹伤＋EGCG组GFAP的表达量明显低于视神经钳夹伤＋生理盐水组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论全身应用EGCG可以下调大鼠视神经钳夹伤后视神经组织中GFAP的表达,降低AS的增生活性,提示EGCG可以抑制视神经创伤修复过程中的瘢痕形成。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体神经元保护作用的研究

背景研究证实绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）全身应用可到达视神经及视网膜组织,对视网膜缺血一再灌注和视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞（RGCs）具有保护作用,但EGCG对视神经损伤后RGCs上位神经元的影响目前尚未见报道。目的探讨EGCG对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体（LGN）神经元的保护作用。方法48只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术＋EGCG组、视神经钳夹＋生理盐水组、视神经钳夹＋EGCG组,每组12只。用40g微型视神经夹于大鼠右眼球后约2mm处夹持视神经60S建立视神经钳夹伤模型,假手术＋EGCG组、视神经钳夹＋EGCG组大鼠于造模前2d始每日腹腔内注射EGCG（25mg／kg）共5d,后改为口服（2mg／kg）,视神经钳夹＋生理盐水组大鼠以同样的方法注射生理盐水。于造模4周后处死大鼠并取脑组织,用Nissl染色法计数外侧膝状体背侧核（dLGN）神经元数目,用免疫组织化学染色法和Westernblot法观察神经丝蛋白（NF-L）在LGN的表达,比较各组大鼠dLGN中神经型一氧化氮合酶（nNOS）免疫组织化学染色阳性细胞数量。结果视神经钳夹伤后4周,假手术＋EGCG组左侧、右侧dLGN神经元数量与正常对照组相比差异无统计学意义（P=0．906、P=0．561）;视神经钳夹＋生理盐水组、视神经钳夹＋EGCG组钳夹同侧dLGN神经元数量与正常对照组相比,差异无统计学意义（P=0．794、P=0．646）,对侧dLGN神经元数量均低于正常对照组（P=0．000、P=0．015）,而视神经钳夹＋EGCG组钳夹对侧dLGN神经元数量高于视神经钳夹＋生理盐水组（P=0．007）;NF－L检测可见视神经钳夹＋EGCG组钳夹对侧LGN的NF－L表达量高于视神经钳夹＋生理盐水组（P=0．002）;dLGN的nNOS阳性细胞计数在正常对照组、假手术＋EGCG组、视神经钳夹＋EGCG组之间差异无统计学意义（P〉0．05）,而视神经钳夹＋生理盐水组钳夹对侧dLGN的nNOS阳性细胞高于视神经钳夹＋EGCG组（P=0．000）。结论EGCG对大鼠视神经钳夹伤后LGN的神经元可能具有一定的保护作用,这种保护作用可能与EGCG抑制了nNOS的表达有关。     

两种常用大鼠视神经钳夹伤模型造模效果的比较

背景 视神经钳夹伤(ONC)动物模型是外伤性视神经损伤致病机制及治疗方法相关基础研究的主要工具,目前常用的造模方法有经眼眶上缘开神经鞘膜视神经钳夹法和经球结膜外眦部夹伤视神经法,但关于2种模型优劣评价的研究很少. 目的 比较2种常用大鼠ONC模型的造模效果,为相关的实验研究中造模方法的选择提供依据.方法 采用随机分配方法将8～10周龄健康成年雄性SD大鼠24只分为经眶上缘开神经鞘膜ONC组和经眶上缘开神经鞘膜ONC 20 s、40 s、60 s组,分别采用经眶上缘开神经鞘膜视神经夹伤法(20 s)及经球结膜外眦部夹伤视神经法在大鼠的一侧眼建立ONC动物模型,各组大鼠的正常对侧眼作为对照.于造模后14 d记录各组大鼠闪光视觉诱发电位(F-VEP)P1波;制备大鼠视神经组织切片,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠视神经的组织病理学改变;采用免疫荧光法观察并计数大鼠视网膜组织中Brn-3α阳性视网膜神经节细胞(RGCs).对2种造模方法的造模过程和检测结果进行比较.结果 造模后14d,经眶上缘开神经鞘ONC组和经球结膜ONC 20 s组、40 s组、60 s组大鼠的F-VEP P1波潜伏期较各自的正常对侧眼均明显延长,差异均有统计学意义(t=-11.64、-8.04、-6.50、-10.84,均P＜0.01);经眶上缘开神经鞘ONC组大鼠P1波潜伏期与经球结膜ONC 20 s、40 s、60 s组大鼠比较均明显延长,差异均有统计学意义(P=0.01、0.02、0.05);各组大鼠术眼P1波振幅与其正常对侧眼比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).造模后14 d,免疫荧光检测显示各组大鼠模型眼视网膜上Brn-3α表达阳性RGCs数均较正常对侧眼明显减少,经眶上缘开神经鞘ONC组大鼠视网膜上Brn-3α表达阳性RGCs数为(13.60±2.14)个/视野,为其正常对侧眼的47.49％,经球结膜ONC 20 s、40 s和60 s组中Brn-3α阳性RGCs数分别为(18.74±3.61)、(15.84±2.31)和(14.58±3.23)个/视野,分别为其正常对侧眼的67.70％、56.69％和50.17％,经眶上缘开神经鞘ONC组大鼠视网膜中Brn-3α阳性RGCs数与经球结膜ONC 40 s和60 s组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).组织病理学检查显示,各组大鼠造模眼神经胶质细胞核排列紊乱,细胞基质空泡化,可见大量炎性细胞浸润,以眶上缘开神经鞘ONC组更为严重.结论 与经球结膜ONC模型鼠比较,经眶上缘开视神经鞘ONC模型大鼠视神经形态结构损害更为严重,视神经的传导功能更为迟缓,RGCs的存活率更低.     

脑源性神经营养因子对大鼠视网膜节细胞损伤的保护作用

目的：观察脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对Sprague-Dawly(SD)大鼠视神经损伤后视网膜节细胞（retinal ganglin cells,RGC)存活的作用。方法：将SD大鼠分为正常对照组,夹伤对照组,溶剂对照组,BDNF治疗组4组,每组20只眼。荧光金逆行标记RGC后7天,除正常组外行球后视神经夹伤,将100ng BDNF注入BDNF治疗组大鼠玻璃体腔内,分别于5,7,14,21,28天行RGC计数。结果：视神经夹伤后第7天RGC开始减少,14天时降至正常对照的70．2％,28天时降至40．5％。与正常组相比BDNF治疗组14天时RGC数开始减少,但7、14、21、28天RGC数均明显多于夹伤组（P＜0．01）。结论：在视神经夹伤后眼内注射BDNF能减少RGC的死亡,对RGC损伤有保护作用。     

小鼠视神经损伤后视神经小胶质细胞数目和形态变化

目的：研究小鼠视神经损伤后不同时间点视神经小胶质细胞的数目与形态变化。方法：实验研究。选取32只成年雄性健康CX3CR1—/GFP转基因杂交小鼠,按照随机数字表法将小鼠随机分为正常对照组、视神经损伤1、7、14 d组,每组8只。视神经损伤组均在左眼建立视神经夹伤模型,右眼不处理,正常对照组不做任何处理。分别于上述时间点制备小鼠视神经冰冻切片,每根视神经取3张切片（30 μm）,采用共聚焦显微镜在距离眼球端500 μm处拍摄图像,比较小胶质细胞的数量和形态变化。4组小胶质细胞数目比较采用单因素方差分析。结果：正常对照组、视神经损伤1、7和14 d组的视神经小胶质细胞数目分别为（438±16）个/mm2、（323±15）个/mm2、（1 252±107）个/mm2、（1 474±113）个/mm2。视神经损伤7、14 d组小胶质细胞数量明显多于正常对照组和视神经损伤1 d组,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。正常对照组的视神经小胶质细胞均匀分布,细胞核较小,分枝细长并向四周伸展。视神经损伤1 d组,小胶质细胞分枝数量减少,细胞核形态变化不明显。损伤7 d组的视神经小胶质细胞大量激活,排列较紊乱,存在少量细胞聚集现象,分枝短而粗,且越靠近细胞核分枝越粗,细胞核体积明显增大。视神经损伤14 d组,视神经小胶质细胞形态与损伤7 d组类似。结论：小鼠视神经夹持损伤后,视神经小胶质细胞初期数目减少,随着损伤时间延长,小胶质细胞数目大量增加,且形 态由分枝状变为阿米巴样。     

雪旺细胞源营养神经活性物质对大鼠视网膜节细胞损伤的作用

目的 观察雪旺细胞(Schwann cells,SC)源营养神经活性物质 (SC derived neurotrophic activity,SCNA)对Sprague-Dawly(SD)大鼠视神经损伤后视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGC)存活的影响。 方法 体外培养日龄3～5 d SD乳鼠SC,收集无血清条件培养液,经超滤浓缩后制成冻干粉。SD大鼠分为正常对照组,视神经夹伤对照组,视神经夹伤溶剂对照组,视神经夹伤SCNA 治疗组,每组20只眼。荧光金逆行标记RGC后7 d,除正常对照组外均行球后视神经夹伤,SCNA治疗组将100 ng SCNA注入大鼠玻璃体腔内。分别于视神经夹伤后第5、7、14、21、28 d 将动物灌注固定,做全视网膜铺片,行RGC计数。 结果 视神经夹伤后第7 d RGC开始减少,14 d时降至正常对照的70.2%,28 d时降至40.5%。SCNA治疗组7 d时RGC数开始减少,但14、21、28 d RGC数均明显多于视神经夹伤对照组及视神经夹伤溶剂对照组(P＜0.01)。 结论 在视神经夹伤后眼内注射SCNA能减少RGC的死亡对RGC损伤有保护作用。（中华眼底病杂志,2000,16：1-70）     

Neuroprotective effect of sulfhydryl reduction in a rat optic nerve crush model

PURPOSE: The signaling of retinal ganglion cell (RGC) death after axotomy is partly dependent on the generation of reactive oxygen species. Shifting the RGC redox state toward reduction is protective in a dissociated mixed retinal culture model of axotomy. The hypothesis for the current study was that tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP), a sulfhydryl reductant, would protect RGCs in a rat optic nerve crush model of axotomy. METHODS: RGCs of postnatal day 4 to 5 Long-Evans rats were retrogradely labeled with the fluorescent tracer DiI. At approximately 8 weeks of age, the left optic nerve of each rat was crushed with forceps and, immediately after, 4 muL of TCEP (or vehicle alone) was injected into the vitreous at the pars plana to a final concentration of 6 or 60 microM. The right eye served as the control. Eight or 14 days after the crush, the animals were killed, retinal wholemounts prepared, and DiI-labeled RGCs counted. Bandeiraea simplicifolia lectin (BSL-1) was used to identify microglia. RESULTS: The mean number of surviving RGCs at 8 days in eyes treated with 60 microM TCEP was significantly greater than in the vehicle group (1250 +/- 156 vs. 669 +/- 109 cells/mm(2); P = 0.0082). Similar results were recorded at 14 days. Labeling was not a result of microglia phagocytosing dying RGCs. No toxic effect on RGC survival was observed with TCEP injection alone. CONCLUSIONS: The sulfhydryl-reducing agent TCEP is neuroprotective of RGCs in an optic nerve crush model. Sulfhydryl oxidative modification may be a final common pathway for the signaling of RGC death by reactive oxygen species after axotomy.     

灯盏细辛对大鼠视神经压榨伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的　探讨中草药灯盏细辛对大鼠标定性视神经压榨伤所致的视网膜神经节细胞(RGC)损伤的防护和修复作用。方法　 4 2只健康SD大鼠随机均分为A组和B组。两组均用特制微型视神经夹直接夹持视神经 ,制作成单眼视神经部分压榨伤模型后 ,A组不予任何治疗 ,B组予以灯盏细辛治疗 ,直至处死动物。以上两组按致伤日至处死日动物的存活时间又分为 :A1组和B1组 (损伤后 4d) ,A2 组和B2 组 (损伤后 14d) ,A3 组和B3 组 (损伤后 2 1d) ,每组各 7只大鼠。于处死前 3d双上丘直接注射 3%快蓝标记双眼RGC。处死日行眼球摘除术后 ,将双眼全视网膜组织铺片置于荧光显微镜下 ,在距视乳头 1mm处的颞上、颞下、鼻下及鼻上 4处作荧光摄影 ,并输入计算机经图像分析仪计数RGC。计算RGC标识率 ,即 (损伤眼RGC数 /未损伤眼RGC数 )× 10 0 % ,并进行统计学分析。结果　A组大鼠中 ,A1、A2 及A3 组的RGC标识率分别为 (77 79± 7 11) %、(6 3 76± 3 79) %、(5 4 6 6±4 75 ) % ;B组大鼠中 ,B1、B2 及B3 组的RGC标识率分别为 (80 13± 12 0 3) %、(78 17± 9 19) %及(83 5 9± 12 6 1) %。A2 和A3 组分别与B2 和B3 组比较 ,差异均有非常显著意义 (t=14 10 8,36 2 0 3;P<0 0 1)。结论　大鼠标定性视神经压榨伤后用灯盏细辛治疗 ,     

饱和氢气水对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞保护作用的实验研究

 目的 探索饱和氢气水对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。设计 实验研究。研究对象 SPF级SD大鼠18只。方法 对18只大鼠采用随机数表法随机分为3组,每组6只。均选取右眼为实验眼,左眼为正常对照眼。使用40 g微型视神经夹在大鼠视神经球后2 mm处夹持60 s建立视神经夹伤模型。A组给予饱和氢气水腹腔注射,5 ml/kg,每日1次;B组和C组分别给予饱和氢气水和生理盐水滴眼,每次1滴,每日3次。用药第9天,麻醉下采用3%荧光金双上丘两点注射法逆行标记大鼠RGC,第14天深麻醉下取眼球并处死动物,行视网膜定向铺片,距离视乳头中心上下左右各2 mm 拍摄照片,盲法计数RGC。主要指标 RGC存活率。结果 A组、B组和C组RGC存活率分别为40.35%±13.04%、58.34%±14.00%和43.07%±7.80%（F=3.965, P=0.041）。其中B组与A组和C组之间均有显著性差异（P=0.020;P=0.042）;A组和C组之间无显著性差异（P=0.698）。结论 饱和氢气水滴眼2周对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞可能具有一定的保护作用。（眼科,2014, 23： 107-110）     

经瞳孔温热疗法对大鼠视神经钳夹视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）阈下反应对BN大鼠视神经钳夹后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法采用阈下TTT对BN大鼠视网膜进行照射后3d,通过逆行标记RGCs的方法,对TTT＋视神经钳夹组（A组）、TTT＋假手术组（B组）、单纯视神经钳夹组（C组）和空白对照组（D组）在视神经钳夹后1、2、4周进行RGCs计数并比较;检测视网膜TTT阈下反应的热休克蛋白70（HSP70）表达;观察TTT阈下反应对视网膜的影响。结果视神经钳夹后4周,A组RGCs数显著高于C组（P=0.006）,而1周和2周时2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;各时间点B组和D组的RGCs数差异无统计学意义（P〉0.05）。视网膜经阈下TTT干预后,HSP70表达高于对照眼。阈下TTT照射能引起视网膜组织形态上的改变。结论阈下TTT可显著提高视神经钳夹4周后RGCs的存活数量;其保护机制可能与诱导视网膜内源性HSP70表达、启动内源性保护机制有关。