蕲蛇酶(凝血酶样酶)溶液及注射液的稳定性研究

+本文报道温度及pH对蕲蛇酶(凝血酶样酶)溶液及注射液活性的影响。经50,60,80,100±0.5℃恒温水浴中温孵1h后测定凝血酶活力及pH的变化,以判定蕲蛇酶的稳定性。结果50℃热处理酶活力未变,60℃以上酶活力逐渐降低,80,100℃酶活力减少50％～78％。热处理后对pH影响不大。以1:nol/L HCl或Dnol/L NaOH调整蕲蛇注射液的pH至1～12,分别测定凝血酶活力,共最适pH为6,pH在5～8范围内酶活力较稳定,在此范围以外酶活力均受影响同。当调回到pH6时,除ph1,12外,仍表现出很强的酶活力。     

多聚乙二醇化蒜酶的特性研究

采用酶活性测定及双扩散法研究了蒜酶及修饰度为53％的多聚乙二醇（PEG）化蒜酶的某些理化性质、抗原性和免疫原性及体外和小鼠体内的活性半衰期。结果显示：在75％的乙醇中，蒜酶完全失活，而PEG化蒜酶仍保持了50％的活性。蒜酶和PEG化蒜酶最适温度均为40℃，与蒜酶相比，PEG化蒜酶在更宽的pH范围内具有催化活性，蒜酶的最适pH为7，而PEG化蒜酶在pH为6－7范围内均具有最强的催化活性。蒜酶与其抗血清形成明显沉淀线，而PEG化蒜酶既不与蒜酶的抗血清也不与自身的抗血清形成沉淀。在血清中PEG化蒜酶的半衰期为90h，是蒜酶的45倍。PEG化蒜酶的小鼠体内半衰期达2．58d，而蒜酶在小鼠体内30min后，已测不出催化活性。多次应用PEG化蒜酶的小鼠体内，相邻两次应用的PEG化蒜酶半衰期无显著性差异。     

耐热脂肪酶产生菌的筛选及其产酶条件和酶学特性的研究

从福州温泉等地取样品若干，筛选耐热脂肪酶产生菌，最终获得一株脂肪酶产生菌wi-2，初步鉴定为细菌。经发酵产酶条件优化得到：Wi-2最佳产酶条件为：发酵周期35h，培养温度37℃（2，培养起始pH6．5，摇瓶装量25ml／250ml，接种量7％。用硫酸铵提取wi-2发酵液中脂肪酶，进行酶学特性的初步研究，结果：最适反应pH为8．2，最适反应温度为45℃（2。酶的热稳定性：在40℃下处理100min，酶活基本不损失，在60℃下处理100min，酶残余酶活为40％以上。     

胰酶水解干酪素的动力学行为

研究了胰酶水解干酪素制备蛋白胨过程中胰酶在不同温度下的失活行为,以及底物浓度对反应速率和平衡的影响,ｐＨ对反应浓度和平衡的影响。胰酶在４０℃下４ｈ基本不丧失水解大分子的活力;在５０℃,ｍｉｎ、５５℃,１００ｍｉｎ、６０℃,９０ｍｉｎ完全丧失对大分子的水解活性。胰酶短时间在高温下丧失的活性,当其返回到４０℃时可部分恢复。底物和产物对反应有抑制作用。底物初始浓度高,最终平衡转化率低。当ｐＨ８时的反应速     

α-晶体蛋白对抗氧化酶失活的保护

目的 研究α－晶体蛋白的分子伴侣特性。方法 采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００ＨＲ凝胶性分离纯化牛α－晶体蛋白。应用分光光度计检测超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活性,以酶失活后保留的酶活性占其对照组活性的百分比表示α－晶体蛋白的伴侣作用。结果 糖与酶的孵育导致时间依赖性的ＳＯＤ和ＣＡＴ失活。果糠和核糖比６－磷酸葡萄糖和葡萄糖具有糖基化诱导ＳＯＤ和ＣＡＴ的快速失活效应。α－晶体蛋白与     

源于纤维单胞菌的聚阿拉伯糖内切酶性质的研究

目的确定源于纤维单胞菌（Cellulomonose sp．）的聚阿拉伯糖内切酶的性质。方法SDS—PAGE和凝胶层析测定相对分子质量,离子交换层析估计等电点,TLC法测定酶活力,Lineweare—Burk双倒数做图法测定酶促反应动力学特性。结果相对分子质量为45kD,等电点约为6．0,酶促反应动力学符合Michaelis—Menten动力学规律,在37℃反应条件下,米氏常数Km为2．5mg／ml,最大反应速率Vmax为0．083μmol／L·min,最适pH为8．0,pH6．0～9．0时较稳定。最适温度为40℃,在40℃以下较稳定,超过50℃时酶活力开始下降。结论确定了一种聚阿拉伯糖内切酶的性质。     

释炎达肠溶片中锯齿酶活力测定的方法学研究

本文建立了释炎达肠溶片中锯齿酶活力测定方法。最适反应条件：１６．０μｇ／ｍｌ Ｌ－酷氨酸溶液为标准对照；０．６％酪蛋白溶液为底物；１．８％三氯醋酸溶液为沉淀剂；反应时间为２０分钟；反应温度为（３７±０．５）℃。结果准确，ＲＳＤ〈３．０％。本法操作简便、快速，适用于释炎达片的质量控制。     

多聚乙二醇化f蒜酶的特性研究

采用酶活性测定及双扩散法研究了蒜酶及修饰度为53%的多聚乙二醇(PEG)化蒜酶的某些理化性质、抗原性和免疫原性及在体外和小鼠体内的活性半衰期.结果显示在75%的乙醇中,蒜酶完全失活,而PEG化蒜酶仍保持了50%的活性.蒜酶和PEG化蒜酶最适温度均为40C.与蒜酶相比,PEG化蒜酶在更宽的pH范围内具有催化活性,蒜酶的最适pH为7,而PEG化蒜酶在pH为6～7范围内均具有最强的催化活性.蒜酶与其抗血清形成明显沉淀线,而PEG化蒜酶既不与蒜酶的抗血清也不与自身的抗血清形成沉淀.在血清中PEG化蒜酶的半衰期为90 h,是蒜酶的45倍.PEG化蒜酶的小鼠体内半衰期达2.58 d,而蒜酶在小鼠体内30 min后,已测不出催化活性.多次应用PEG化蒜酶的小鼠体内,相邻两次应用的PEG化蒜酶半衰期无显著性差异.     

血管紧张素转换酶研究概况

血管紧张素转换酶（angiote。inconvertingenzpoe,ACt）是肾索一血管紧张素系统（RAS）的关键酶,是含锌二按基肽酶（DCPI）,其主要功能是将血管紧张素1（Angl）转化为血管紧张素11（Angll）,并使援激肽失活［门而导致局部血管收缩并增加血管对收缩物质的反应,因而在心血管、肾病等的发病机理中起重要作用。90年代初,Vrata等成功地克隆了ACE基因,并对其结构进行了分析。人类ACE基因定位于问号染色体长青（17衣3）,全长21kb,含26个外显子和万个内含子,是单拷贝基因。近几年发现ACE基因存在多态性,令人感兴趣又具有重要生…     

壳聚糖凝胶的温敏性及其药物缓释性能研究

目的研究壳聚糖／甘油磷酸钠（CS／GPS）水凝胶的温敏性及载药凝胶缓释性能。方法试管倒置法研究不同配比、不同pH对CS／GPS体系凝胶化性能的影响;红外光谱表征CS／GPS复合物;紫外分光光度法考察温敏凝胶相变动力学曲线,并测定载药凝胶的累积释放度。结果56％GPS与2％CS体积配比从0．2增到0．8（混合液pH6．5）,在37℃下凝胶化时间（GT）从10min缩短到1．5min;56％GPS／2％CS体积比为0．4的混合液,pH6．5升至7．0,37℃下GT从120S减少到90S;56％GPS与2％CS以体积配比为0．2时（混合液pH6．9）,在25℃时维持液相,温度从30℃升至45℃,GT从9min降至1min,在37℃时,可快速凝胶化（GT为130s）。依诺沙星为模型药物,载药凝胶12h累积释放度为62％,依诺沙星原药3h累积释放度达到97％。结论一定配比CS／GPs体系在37℃具有快速凝胶化特性,温敏性载药凝胶对药物具有缓释作用。     

原发性高血压患者G蛋白β3亚单位基因C825T多态性的研究

目的：研究中国大陆高血压人群中G蛋白β，亚单位(GNB3)基因(C825T多态性的分布及与血浆肾素-血管紧张素系统(RAS)活性的关系。方法：确诊原发性高血压的患者408例作为试验组，140例健康成年人作为正常对照组，61例有高血压家族史的健康成年人作为高血压家族史阳性正常对照组。C／T多态性测定采用PCR—RFLP方法。结果：各组GNB3 825T等位基因频率为45．6%～56．4％，各基因型在原发性高血压患者与正常人间分布差异无显著性。TT型高血压患者有较高的醛固酮水平和较低的血浆血管紧张素转换酶活性。结论：G蛋白β，亚单位825TT基因型的中国大陆人群原发性高血压患者有较高的醛固酮水平和较低的血浆血管紧张素转换酶活性。     

在可回用两水相体系中进行青霉素酰化酶的相转移催化裂解青霉素G为6-APA

在光敏感可回用高聚物PNBC与pH敏感型可回用高聚物PADB形成的两水相体系中进行同定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应.在这个两水相体系中,通过优化,在1%NaCl存在下,6-APA的分配系数可达5.78.催化动力学显示,达平衡的时间近7 h,反应最高得率约85.3%(pH 7.8,20℃).较相近条件下的单水相反应得率提高近20%.在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸义转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果.此外,采用周定化酶较固定化细胞效率高,占用下相体积小,较游离酶稳定性高,且完全单侧分配在下相.因此,在两水相中进行固定化酶的催化反应具有明显的优越性.形成两水相的高聚物PNBC通过488 nm的激光照射或经滤光的450nm光源照射,pH敏感型成相聚合物PADB可实现循环利用,高聚物的回收率在95%～98%之间.     

固定化甲烷氧化菌Z201催化丙烯合成环氧丙烷

找到了合适的包埋材料卡拉胶；探索了固定化操作的工艺条件；研究了ｐＨ、温度、激活剂浓度和磷酸盐缓冲液离子强度对丙烯反应的影响，得出了固定化细胞单加氧酶的动力学常数及酶活力变化曲线。包埋后的细胞酶活力达游离细胞的９４．９％，其半衰期为１．５ｄ。固定化细胞的酶活力在１０ｄ后仍占游离细胞的１０％。     

Preparation of seeding type immobilized microorganisms and their degradation characteristics on Di-n-butyl phthalate

Objective To study the preparation of seeding type immobilized microorganisms and their degradation characteristics on di-n-butyl phthalate （DBP）. Methods Diatomite, clinoptilolite, silk zeolite, and coal fly ash were chosen as reserved materials and modified. Their adsorption capacity and intensity in the bacteria were determined and the best carrier was picked out. The seeding type immobilized microorganisms were prepared by the best carrier and then it degraded DBP under different primary concentration, vibration rate, pH, temperature in the presence of metal compounds. Results The adsorption capacity of the modified coal fly ash, silk zeolite, clinoptilolite and zeolite was 44.2%, 71.6%, 84.0%, and 94.4%, respectively, which was 1.66, 1.49, 1.37, and 1.16 times as high as that of their natural state. Their adsorption intensity was 72.1%, 90.5%, 90.1%, and 91.1% in turn. The modified diatomite was selected to prepare the seeding type immobilized microorganisms. When the primary DBP concentration was 100 to 500 mg/L, the DBP-degraded rate of the immobilized microorganisms could be above 80%. The degradation activity of both the dissociative and immobilized microorganisms was higher in vibration than in stillness. When pH was 6.0 to 9.0, the DBP-degraded rate of the immobilized microorganisms was above 82%, which was higher than the dissociative microorganisms. When the temperature was between 20~C and 40~C, the DBP-degraded rate could reach 84.5% in 24 h. The metal compounds could inhibit the degradation activity of both the dissociative and immobilized microorganisms. The degradation process of the immobilized microorganisms could be described by the first-order model. Conclusion The adsorption capacity of the diatomite, clinoptilolite, silk zeolite and coal fly ash on DBP-degrading bacteria can be improved obviously after they are modified. The modified diatomite is best in terms of its adsorption capacity and intensity. Its seeding type immobilized microorganisms could degrade DBP effectively and is more adaptable to DBP load, temperature, pH than the dissociative microorganisms. The metal compounds could inhibit the activity of both the immobilized and dissociative microorganisms. The degradation reaction of the immobilized microorganisms on DBP is consistent with the gust-order model.     

Detection of mucopolysaccharidosis type I heterozygotes based on the biochemical characteristics of leukocyte alpha-L-iduronidase

BACKGROUND: In the present study, we biochemically characterized the enzyme alpha-L-iduronidase (IDUA) of leukocytes from normal individuals and from mucopolysaccharidosis I (MPS I) heterozygotes, and compared these characteristics to discriminate for inclusion into two different groups. METHODS: We fluorimetrically measured IDUA activity in leukocytes using 4-methylumbelliferyl-alpha-L-iduronide as an artificial substrate. Optimum pH, Km, Vmax, and thermostability of the enzyme at 50 degrees C were determined. RESULTS: Based on leukocyte IDUA activity, we divided the heterozygotes into two groups, one (group 1) with activity below that detected in controls, and the other with activity similar to that of normal individuals (group 2). The optimum pH for IDUA was 2.7 for normal individuals and 2.6-2.8 for heterozygotes. With respect to Km, there was a difference only between the value for normal IDUA (0.60 mM) and the value for group 2 (0.38 mM), while group 1 showed a statistically similar value (0.49 mM). The Vmax of the reaction was discriminated in the three groups in a highly effective manner. The IDUA of normal individuals had a higher Vmax (60.98 nmoL/h x mg protein) than the enzyme of group 1 heterozygotes (28.66 nmoL/h x mg protein) and the enzyme of group 2 (31.78 nmoL/h x mg protein). When the IDUA from the three groups was pre-incubated at 50 degrees C, we observed that the IDUA of both group 1 and group 2 was significantly more thermostable than the IDUA of normal individuals. CONCLUSIONS: Determination of IDUA activity alone is not sufficient to discriminate between MPS I heterozygotes and normal individuals because a considerable overlap occurs between them. Our study showed that leukocyte IDUA from MPS I heterozygotes differed from the normal enzyme in terms of optimum pH, Km, and Vmax of the reaction and thermostability at 50 degrees C. These parameters provide a simple and reliable tool for the detection of carriers for MPS I.     

糖尿病视网膜病变与血管紧张素转换酶基因多态性的关系

为探讨血管紧张素Ⅰ转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）及其视网膜病变的关系，以ＡＣＥ基因第１６内含子１个２８７ｂｐＡｌｕ顺序Ｉ／Ｄ型为多态性标志，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增基因片段，１％琼脂糖凝胶电泳ＰＣＲ产物。结果８７例ＮＩＤＤＭ与５０例正常人之间基因频率无显著差异；ＮＩＤＤＭ合并视网膜病变与未合并视网膜病变２组间基因型频率和等位基因频率无显著差异。提示糖尿病视网膜病变与ＡＣＥ基因多态性无关。     

小鼠ACE2基因的克隆和体外表达以及序列分析与组织分布

目的:深入研究血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)在心血管疾病发病机理中的作用及在高血压基因治疗中的应用,克隆和体外表达小鼠ACE2基因,并进行核苷酸和氨基酸序列分析和组织分布特征研究.方法:采用RT-PCR方法,从小鼠肾组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,TA克隆到pGEM-T easy载体,亚克隆到pcDNA3.1 载体,构建重组真核表达质粒pmACE2,测序鉴定.采用脂质体法将pmACE2转染Cos7细胞,分别用RT-PCR和SDS-PAGE检测ACE2的转录和表达.CLUSTALX 1.8生物软件分析小鼠和大鼠及人ACE2蛋白的多序列比较.采用RT-PCR技术研究小鼠ACE2组织分布的特异性.结果:①RT-PCR扩增片段约2.6 kb,重组真核表达质粒pmACE2测序结果表明,克隆片段存在A701G、T1102C和T1330C 3处变异,其序列与以往报道不一致,cDNA全长为2 397 bp,而与NCBI Refseq数据库(XM-136130)中cDNA全长1 902 bp不符;②SDS-PAGE显示pmACE2表达产物的相对分子量约80 kD;③氨基酸序列分析表明,小鼠ACE2主要由N末端的信号肽序列(第1-18位残氨)、含有锌结合位点保守序列HHEMGHIQ(第373-380位残氨)的催化结构域和跨膜结构域(第738-765位残氨)组成;④小鼠ACE2与人有84%的相似性,与大鼠有90%的相似性,三者同源;⑤ACE2在肺、心和肾组织中大量表达,在睾丸和肝组织中也有表达.结论:成功克隆并体外表达了小鼠ACE2基因,不同物种ACE2组织分布的特异性不尽相同.     

有机氯化物的固定化酶处理技术研究

研究了Ｆｅ３Ｏ４固定辣根过氧化物酶的吸附特性、贮存稳定性,考察了固定化酶浓度、ｐＨ值、Ｈ２Ｏ２浓度对催化氧化反应的影响。对均相与非均相酶处理氯酚的效果进行比较,显示固定化酶处理有机氯化物具有很大的优越性。     

异硫氰酸酯法固定化醇脱氢酶乳酸脱氢酶和辅酶Ⅰ

本文探索了一条较为简便、实用的制备异硫氰酸酯活性载体的新方法,研究了用异硫氰酸酯共价法固定化醇脱氨酶、乳酸脱氢酶和辅酶Ⅰ的条件,并对三者进行了共固定化。按本实验方法得到的固定化醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的活力回收可达8.9%和11.9%,得到的固定化三元全酶系统的辅酶再生能力为相应游离酶系统的4倍。     

异丙酚预处理对脂多糖（LPS）诱导的人肺微血管内皮细胞（HPMVCs）血管紧张素转化酶（ACE）的表达与活性的影响

 目的 在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVCs)损伤模型中,观察异丙酚预处理对血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)的影响,探讨异丙酚肺保护作用的可能机制。方法 以体外培养的HPMVCs 3~5代作为实验对象,将细胞随机分为4组(n=8)：对照组(C组)、异丙酚组(P组)、LPS组(L组)和异丙酚预处理组(P+L组)。药物终浓度：LPS 5 μg/mL,异丙酚50 μmol/L。按上述分组,加入LPS前1 h加入异丙酚。于37℃、5％CO₂培养箱中进行培养。分别培养12、24、48、72 h后采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法测细胞活力。细胞孵育12 h后,采用改良分光光度法检测各组培养液和细胞中的ACE活性,real-time PCR检测ACE、TNF-α、IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平,同时ELISA测定细胞培养液中TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量。结果 (1)各组细胞在72 h内的细胞活力无显著差异(P>0.05);(2)与C组相比,P组各检测指标均无显著差异(P>0.05);(3)与C组相比,L组TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量及其基因表达水平均显著升高,分泌型ACE活性增加,细胞ACE活性降低,ACE mRNA表达下调(P<0.05);(4)与L组相比,P+L组分泌的TNF-α、IL-1β和MCP-1及其mRNA表达显著降低,细胞ACE活性增加,ACE mRNA表达上调(P<0.05),分泌型ACE活性不变(P>0.05)。结论 异丙酚在转录水平调节HPMVCs中ACE的表达,可能是异丙酚保护HPMVCs的作用机制之一。