体外纯化乳鼠许旺细胞的4种方法比较(英文)

背景:许旺细胞是外周神经系统中修复神经损伤及神经疾病的主要种子细胞之一.但是,许旺细胞的来源有限,且由于成纤维细胞的污染,使许旺细胞的纯度受到影响.有学者提出了其他的纯化方法,但每种方法都存在其不足之处而不能很好的满足临床应用的需要.目的:比较差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法4种体外纯化乳鼠许旺细胞方法的差异.方法:取SD大鼠坐骨神经得到所需神经组织.分别用差速贴壁消化法、冷喷注法、磁珠分选法和G418筛选法纯化许旺细胞.比较4种方法获得细胞的活力,免疫组织化学法鉴定许旺细胞并计算纯度.结果与结论:差速贴壁消化法所得到的细胞纯度稍低,活力尚可;冷喷注法获得的细胞纯度和活力均较高;磁珠分选法获得的细胞纯度和冷喷注法相当,但是活力稍差:G418筛选法活力差,纯度高.     

双重消减纯化体外培养许旺细胞

背景: 许旺细胞培养技术和纯化方法虽不断改良, 得到的培养物纯度仍然有限, 双重消减法是否可以培养高纯度许旺细胞。目的: 采用双重消减法对许旺细胞进行培养, 观察其生长情况并测定培养纯度。设计:对照动物实验。单位:首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科,北京市耳鼻咽喉科研究所。材料:实验于2006-03/07在北京市耳鼻咽喉科研究所免疫室和病理室完成。选用20只3天龄Wistar大鼠,雌雄不限,由中国医学科学院实验动物中心提供。方法:分离大鼠坐骨神经,以0.2%胶原酶消化后培养。①分组干预:细胞分为实验组及对照1,2,3组,每组5只。实验组应用双30min差速贴壁法和Ara-c纯化,对照组1,2分别用双30min差速贴壁法和Ara-c纯化处理,对照组3不进行纯化。②实验评估:倒置显微镜下观察许旺细胞生长情况;采用MTT法测量实验组和对照组3生长曲线,观察细胞增殖能力;采用免疫细胞化学染色对许旺细胞进行鉴定;计算许旺细胞培养纯度(每个视野S100阳性细胞占所有细胞的比例)。主要观察指标:①各组许旺细胞生长情况。②免疫细胞化学染色结果。③细胞生长曲线。④许旺细胞培养纯度。结果:①许旺细胞生长情况:培养5d时实验组许旺细胞形态及增殖能力良好,偶见成纤维细胞。对照组1、2在培养第5天时可见较多成纤维细胞,许旺细胞形态好,但较少呈漩涡状排列的生长区域。对照组3从培养第2天开始成纤维细胞迅速增殖,所占比例逐渐增大,许旺细胞生长受到影响,突起较短,少见漩涡状生长区域。②许旺细胞生长曲线:实验组许旺细胞于第3天进入对数增殖期,至第6天达平台期。对照组3较实验组提前1d进入对数增殖期。③免疫细胞化学鉴定结果:实验组经抗S100抗体染色,阳性的许旺细胞胞体及突起呈棕褐色,梭形或三角形,双极突起,漩涡状排列。成纤维细胞形态不规则,胞浆宽大,着蓝色。④许旺细胞计数:实验组S100阳性细胞所占比例高于对照组3(P<0.01)。结论:利用双重消减法得到较高纯度的许旺细胞培养物。     

三种纯化方法体外培养人胚嗅球嗅鞘细胞的比较

目的:嗅鞘细胞纯化培养方法有免疫亲和吸附法、免疫磁珠法、化学药物法、差速贴壁法、无血清饥饿法等,但均存在缺陷.比较3种纯化方法原代培养人胚嗅球嗅鞘细胞的纯度,寻求简单实用的高纯度人胚嗅球嗅鞘细胞的体外培养方法.方法:实验于2007-08/12在西安交通大学口腔医院医学实验中心进行.选用流产胚胎标本24份,胎龄4～6月,由西安交通大学第二医院和陕西省妇幼保健院产科提供.实验经产妇及家属同意,并经医院伦理委员会的批准.实验方法:取胚胎嗅球分离培养嗅鞘细胞,制成单细胞悬液.将单细胞悬液加入未包被的培养瓶中培养,然后再次将细胞悬液加入未包被的培养瓶中,具体差速时间根据观察决定.最后将差速贴壁后含未贴壁细胞的细胞悬液加入多聚赖氨酸包被的培养瓶或培养板中,用3种方法纯化培养:阿糖胞苷法、无血清饥饿法和间断神经营养因子3法纯化培养人胚嗅球嗅鞘细胞.比较3种纯化方法下嗅鞘细胞生长变化及纯度.结果:①培养早期嗅鞘细胞呈圆形, 随着培养过程进行细胞逐渐伸出细长突起呈双极、三极和多极细胞,胞核位于细胞中央. 成熟的嗅鞘细胞大多呈双极、三极细胞与许旺细胞相似,细胞折光性好,胞核呈圆形位于细胞中央,"煎蛋样" 细胞少见.②差速贴壁法培养3～6 d时纯度为88%,以后成纤维细胞增殖嗅鞘细胞纯度迅速下降.阿糖胞苷法阿糖胞苷作用后细胞大量死亡,免疫染色几乎未见阳性反应细胞存在.无血清饥饿法培养3～6 d时嗅鞘细胞纯度为90%,但细胞状态差.间断神经营养因子3法培养3～9 d时嗅鞘细胞纯度为95%,且细胞状态良好.结论:差速贴壁结合间断间断神经营养因子3法比结合阿糖胞苷法、无血清饥饿法获得的嗅鞘细胞纯度高,且细胞状态良好.     

许旺细胞体外培养纯化的观察

目的：许旺细胞能分泌生长因子，在周围神经再生中起重要作用，获得高纯度许旺细胞是对其研究的重要前提，为此探讨获得高纯度的SD乳鼠的许旺细胞的有效方法。方法：组织块反复种植纯化法、低含量胰酶快速消化和差速贴壁法。结果：经组织块反复种植纯化法、低含量胰酶快速消化和差速贴壁法综合运用，所得许旺细胞的纯度很高，可达98％以上，而且细胞所受到的外界因素影响也较少。结论：通过体外培养方法得到高纯度且受到的外界因素影响小的许旺细胞，可采用组织块反复种植纯化法、低含量胰酶快速消化和差速贴壁法综合运用的方法。     

许旺细胞体外培养纯化的观察

目的:许旺细胞能分泌生长因子,在周围神经再生中起重要作用,获得高纯度许旺细胞是对其研究的重要前提,为此探讨获得高纯度的SD乳鼠的许旺细胞的有效方法。方法:组织块反复种植纯化法、低含量胰酶快速消化和差速贴壁法。结果:经组织块反复种植纯化法、低含量胰酶快速消化和差速贴壁法综合运用,所得许旺细胞的纯度很高,可达98%以上,而且细胞所受到的外界因素影响也较少。结论:通过体外培养方法得到高纯度且受到的外界因素影响小的许旺细胞,可采用组织块反复种植纯化法、低含量胰酶快速消化和差速贴壁法综合运用的方法。     

SD大鼠许旺细胞提取及纯化:乳鼠和成年鼠的对照(英文)

背景:许旺细胞是神经创伤修复的种子细胞,获取大量高纯度、高活性许旺细胞是研究的关键.目的:比较乳鼠和成年鼠许旺细胞的体外培养、纯化和形态学的差别,探讨简单可行的、可以获得高纯度许旺细胞的培养方法.方法:出生1～3 d SD大鼠20只和成年大鼠10只(体质量150～200 g),实验按细胞的来源分为新生组和成年组.双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞;倒置显微镜观察细胞形态、贴壁速度;细胞计数,纯度计算;MTT法检测细胞增殖能力,绘制两组许旺细胞的增殖曲线,判定增殖速度;S-100免疫化学法鉴定细胞.结果与结论:乳鼠的许旺细胞贴壁速度快于成纤维细胞,成鼠的许旺细胞贴壁速度慢于成纤维细胞,两组许旺细胞纯度均达96%以上;MTT法检测两组许旺细胞增殖均活跃,由增殖曲线显示乳鼠许旺细胞增殖更快(P < 0.05);S-100免疫化学反应均呈阳性.提示双酶分步消化,二次接种差速分离纯化细胞,可以获取纯度高、活性良好的许旺细胞;乳鼠许旺细胞的增殖、贴壁能力更强.     

三种大鼠胰岛分离纯化方法的比较

目的寻找一种高效、经济、便捷的胰岛纯化方法。方法选取50只Wistar大鼠,随机分成3组,v型胶原酶经胆总管逆行灌注消化,三组分别用Ficoll、淋巴细胞分离液、及碘克沙醇进行胰岛纯化,并对纯化后胰岛的产量、纯度、活性、形态以及体外功能进行评估。结果三种纯化方法均可得到较多的胰岛细胞,与Ficoll组相比,经淋巴细胞分离液及碘克沙醇纯化的胰岛细胞纯度和存活率均显著增加;淋巴细胞分离液组与碘克沙醇组胰岛细胞纯度和存活率无显著差异。结论三种纯化方法在胰岛产量和胰岛分泌功能方面无显著差异,使用淋巴细胞分离液和碘克沙醇组可以获得更好的胰岛纯度和存活率,且这两种试剂的成本均较低廉。淋巴细胞分离液还具有对实验条件要求不高,操作简便的优点。     

三种人胚胎许旺细胞培养方法的比较

目的比较三种不同培养方法对许旺细胞纯度影响。方法应用三种不同的培养方法对10份人胚胎样本的坐骨神经分别采用植块培养法、差速贴壁法、分次消化法进行培养观察。并采用S100免疫荧光化学方法鉴定许旺细胞,Hoechst染色标记细胞核,统计许旺细胞纯度。结果三种培养方法其获得的细胞纯度分别为:分次消化培养法为90%,差速贴壁法为75%,植块培养法为67%,分次消化培养法获得的细胞纯度明显高于其他两组(P<0.05)。结论分次消化培养法较差速贴壁法、植块培养法更易获得高纯度许旺细胞。     

新生兔雪旺细胞体外培养及纯化的实验研究

目的 优化雪旺细胞（SCs)的体外培养条件，在去除成纤维细胞（FCs)沾染后，应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)促进SCs的增殖以获取大量、纯净SCs应用于神经组织工程。方法 采用高浓度胶原酶分次消化分离SCs，使用阿糖胞苷、Geneticin去除FCs，待基本为纯净的SCs后，再用bFGF促进其分裂增殖。结果 经S－100染色鉴定，SCs纯度可达到98％以上。结论 章所用的方法是培养和促进SCs增殖较为理想的方法。     

新生大鼠许旺细胞体外培养纯化的最佳培养条件

背景:许旺细胞对促进外周神经的生长,发育和修复有重要作用,目前对于许旺细胞体外培养方法的优劣情况报道不一.目的:筛选许旺细胞最佳体外培养条件.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/10在武汉大学人民医院中心实验室完成.材料:三四天龄SD大鼠24只,由武汉大学医学部实验动物中心提供.方法:无菌剥离大鼠双侧坐骨神经,应用低浓度酶快速消化法、差速贴壁法分离培养纯化许旺细胞.取处于指数生长期的细胞,调整密度为1×107 L-1接种到6孔培养板,然后分组实验.设定4个条件:培养基pH(6.8～8.8)、胎牛血清体积分数(2%～20%)、培养箱温度(34～39℃)、培养箱CO2浓度(3%～8%).首先固定胎牛血清体积分数、培养箱温度和培养箱CO2浓度,改变培养基pH对细胞进行培养,从而确定最适培养基pH.然后依次改变胎牛血清体积分数、培养箱温度以及培养箱CO2浓度,进而得到其他3个指标的最佳值.镜下观察见明显克隆形成时终止培养,以含5个以上细胞的细胞团作为1个克隆,在倒置显微镜下进行克隆计数.主要观察指标:通过许旺细胞长势及克隆形成情况,筛选许旺细胞体外培养扩增的最适pH、胎牛血清体积分数、培养温度和培养箱CO2浓度.结果:在以DMEM/F12(1:1)为基础培养基的情况下,培养基pH为7.0～7.2时克隆形成最多,＜7.0或＞7.2时克隆形成明显下降:胎牛血清体积分数为10%许旺细胞长势较好且克隆数明显增加,当血清浓度过高或过低时克隆形成相对较差;34～36℃细胞生长受到明显抑制,克隆形成较少,37℃时克隆形成最多,＞37℃细胞长势开始变差,克隆形成下降,至39℃时细胞已无法贴壁民;培养箱CO2浓度为3%～8%时许旺细胞克隆形成无明显变化.结论:许旺细胞体外培养的最佳条件为pH7.2的DMEM/F12(1:1)细胞培养基、胎牛血清体积分数10%、培养箱温度37℃、培养箱CO2浓度5%.     

成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞生长和增殖的影响

目的：观察成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞增殖分化的影响，探讨两者之间的协同作用，为组织工程化神经桥接体的构建奠定实践基础。方法：取20只出生四五天的SD乳鼠的臂丛和坐骨神经，运用双酶结合单酶消化法培养雪旺细胞和成纤维细胞，纯化和培养雪旺细胞并制备两种条件培养基：A组：成纤维细胞 DMEM／F12;组：成纤维细胞 雪旺细胞 DMEM／F12；c组：DMEM／F12(对照组)。将A，B，C3组分别加入种植有纯化雪旺细胞的96孔板中，MTT检测雪旺细胞增殖情况，S-100蛋白免疫组化染色鉴定雪旺细胞。结果：B组对雪旺细胞的增殖和分化有明显的促进作用；A组次之：C组最差(P＜O．001)。结论：成纤维细胞条件培养基可促进雪旺细胞的增殖和分化。     

检测淋球菌三种方法的阳性率比较

目前检查淋球菌的方法很多,我们选择常用的直接涂片法、淋球菌培养分离法和淋球菌试纸条法三种方法对门诊和妇科门诊的100例可疑淋病患者进行检查,比较其在临床诊断中价值,其实验结果报告如下。     

三种不同方法分离脐血造血细胞的比较

脐血作为一种造血干细胞来源可替代骨髓进行造血干细胞移植,脐血移植在治疗儿童遗传性疾病和血液病方面取得了巨大的成效。为进一步推广脐血移植,必须相应地建立起完备的脐血库。脐血库不同于骨髓库,它必须冻存实物。为减少冻存体积,降低成本,需要采取有效的方法分离...     

成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞生长和增殖的影响

目的:观察成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞增殖分化的影响,探讨两者之间的协同作用,为组织工程化神经桥接体的构建奠定实践基础。方法:取20只出生四五天的SD乳鼠的臂丛和坐骨神经,运用双酶结合单酶消化法培养雪旺细胞和成纤维细胞,纯化和培养雪旺细胞并制备两种条件培养基:A组:成纤维细胞+DMEM/F12;B组:成纤维细胞+雪旺细胞+DMEM/F12;C组:DMEM/F12(对照组)。将A,B,C3组分别加入种植有纯化雪旺细胞的96孔板中,MTT检测雪旺细胞增殖情况,S-100蛋白免疫组化染色鉴定雪旺细胞。结果:B组对雪旺细胞的增殖和分化有明显的促进作用;A组次之;C组最差(P<0.001)。结论:成纤维细胞条件培养基可促进雪旺细胞的增殖和分化。     

不同消化酶对体外培养的原代乳鼠雪旺细胞的影响

目的　比较不同消化酶对体外培养的原代乳鼠雪旺细胞的影响。方法　取1周龄SD乳鼠坐骨神经,分别用胰蛋白酶、胶原酶Ⅱ型、混合酶消化,相同方法及实验条件下进行雪旺细胞培养,观察细胞形态、计算2 4h贴壁活细胞百分比及MTT微量比色法比较细胞的生长增殖状况。结果　胰蛋白酶消化组细胞收获量相对最小,细胞损伤程度较大;胶原酶组细胞有一定程度损伤;混合酶组细胞收获量最大,细胞生长状态较好。结论　单纯使用胰蛋白酶或胶原酶消化对原代雪旺细胞的活性及增殖有一定影响,采用胰蛋白酶与胶原酶联合消化效果较好。     

三种麻醉方法用于下肢手术的比较

下肢手术目前主要采用脊麻、硬膜外麻醉和脊硬联合麻醉三经硬膜外导管注入１%利多卡因及０．３７５%布比卡因混合液。所有长而加长 ,如时间较长的手术无法达到要求。使用短效药如利多卡因虽能减少尿潴留 ,但作用时间仅１．５小时左右 ,长效药如布比卡少了止血带引起的疼痛、血压增高等一系列反应三种麻醉方法用于下肢手术的比较@阮立云!316000$浙江省舟山市骨伤医院麻醉科 @李清平!316000$浙江省舟山市骨伤医院麻醉科 @朱海伦!316000$浙江省舟山市骨伤医院麻醉科~~     

正负向磁性细胞分选技术纯化血小板方法的比较

目的获得纯化的血小板,为血小板免疫功能的研究提供实验基础。方法应用磁性细胞分选技术纯化血小板;流式法评价纯化后血小板活化率;白细胞绝对计数法评价有核细胞清除率。结果分选前血小板基础活化率为(2.39±1.10)%,负向分选后为(2.56±1.08)%,正向分选后为(16.76±4.04)%;正、负向分选的有核细胞清除率分别为(98.44±0.24)%及(98.47±0.18)%。正负向分选后血小板回收率分别为(76.5±1.49)%及(79.2±2.61%)。结论磁性细胞负向分选技术适合进行血小板纯化。     

两种肠管脱落细胞收集方法的比较

脱落细胞学检查对于某些恶性肿瘤的诊断有一定的实用价值。其优点是方法简便，患者痛苦小，可用于防癌普查。发现早期癌达到早期诊断，早期治疗的目的。然而，采集脱落细胞的方法是细胞学检查的先决条件，也是提高阳性诊断率的关键。我们从1995年开始采用两种方法收集肠管脱落细胞，一是收集口服清肠液后排泄物中的肠管脱落细胞，共     

无血清法从成年兔坐骨神经分离培养激活态雪旺细胞的实验研究

目的：探索用“M”无血清培养液培养成年兔激活态雪旺细胞的可行性。方法：取成年兔新鲜和预变性坐骨神经，酶消化法获取激活态和正常雪旺细胞。“M”无血清培养液体外培养，每天观察细胞形态及生长状况，培养第3、5、7、9、11和13天分别计数雪旺细胞．绘制生长曲线；作Lowry蛋白测定，H^3-胸腺嘧啶核甙测定，了解雪旺细胞生长情况。结果：细胞在“M”无血清培养液中生活良好，每个时间段检测激活态雪旺细胞的生长繁殖能力、Lowry蛋白含量、H^3-胸腺嘧啶核甙的含量．均数倍高于正常态的雪旺细胞，两者差异有非常显著性（P〈0．01）。结论：激活态雪旺细胞在“M”无血清培养液培养下仍具有旺盛的生长繁殖能力。     

乳鼠预损伤周围神经雪旺细胞的培养及增殖能力研究

目的:从乳鼠预损伤的坐骨神经中分离培养雪旺细胞。方法:预损伤SD乳鼠坐骨神经,3d后取损伤的坐骨神经,手术显微镜下分离神经外膜,用胰酶、胶原酶消化,差速贴壁除去成纤维细胞,接种培养后对细胞进行计数、MTT活性检测,并用S-100蛋白标记观察。结果:该方法所培养的雪旺细胞形态正常,数量及纯度高,增殖旺盛。结论:此实验为神经组织工程研究中雪旺细胞的来源提供了一个有效的方法。