TGF-β1可通过ERK信号通路调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）/丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）通路在调节胃癌细胞MMP-2和MMP-9表达中的作用。方法 以MKN45和BGC823胃癌细胞系为研究对象。明胶酶谱法检测TGF-β1对各细胞MMP-2和MMP-9表达的影响,Western蛋白印迹检测在TGF-β1作用下各细胞中MAPK（P38、JNK、ERK）的活化情况。用相应MAPK通路的特异抑制剂对TGF-β1调节各细胞MMP-2和MMP-9的表达进行阻断研究。结果 TGF-β1可上调MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达;TGF-β1可诱导BGC823细胞P38、MKN45和BGC823细胞ERK及JNK的活化;ERK特异抑制剂PD98059可明显抑制TGF-β1诱导MKN45和BGC823细胞MMP-2和MMP-9的表达,但P38特异抑制剂SB203580和JNK特异抑制剂SP600125对TGF-β1诱导这两种细胞MMP-2和MMP-9的表达无明显影响。结论 TGF-β1可通过活化ERK信号通路上调MKN45和BGC823胃癌细胞 MMP-2和MMP-9的表达。     

阻抑素基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用研究

目的:研究阻抑素(prohibitin,PHB)基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用.方法:使用RNA干扰技术和基因转染技术,分别获得PHB基因低表达和高表达的胃癌BGC823细胞.然后采用MTT法和FCM法分别检测PHB基因低表达和高表达的胃癌细胞的增殖率、细胞周期和凋亡情况,Western印迹法检测Bax、Bcl-2和细胞质内细胞色素c的表达水平,并且检测 caspase-3和caspase-9的激活情况.结果:PHB基因转染胃癌BGC823细胞后,细胞生长速度减缓,G1期细胞所占比例明显下降,G2期细胞比例略有上升,S期细胞比例和细胞凋亡率明显上升,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,细胞质内细胞色素c水平显著上升,caspase-3和caspase-9的激活程度增加.PHB基因特异性RNA干扰胃癌细胞BGC823后,细胞生长加速,G1期和G2期细胞所占比例变化不大,S期细胞比例略有上升,细胞凋亡率小幅下降,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,caspase-3和caspase-9的激活程度减弱.结论:PHB是抑制胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的重要因子之一,推测该作用可能是通过线粒体途径实现的.     

沉默YAP通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌BGC823细胞的凋亡

目的 本研究探讨Yes相关蛋白（YAP）对胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法 BGC823细胞中转染YAP小干扰RNA（YAP siRNA1、YAP siRNA2）,用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞中YAP表达,筛选干扰效果较好的YAP siRNA1做后续实验。MTT测定细胞增殖,平板克隆实验测定克隆形成能力,流式细胞术测定凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9活性,蛋白质印迹法检测β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白水平。用Wnt/β-catenin的激活剂处理下调YAP后的BGC823细胞,按照上述方法测定细胞增殖凋亡和克隆形成能力。结果 YAP siRNA1、YAP siRNA2下调BGC823细胞中YAP的转录和表达,YAP siRNA1对YAP表达的干扰效率较好。敲低YAP后的细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡率由（6.32±0.58）%升高至（32.71±2.64）%,Caspase-3、Caspase-9活性升高,β-catenin、c-myc、cyclinD1蛋白表达减少,与正常培养的BGC823细胞相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Wnt/β-catenin的激活剂处理可以部分逆转敲低YAP对BGC823细胞的凋亡、增殖、克隆形成能力和细胞中Caspase-3、Caspase-9活性的影响。结论 YAP敲低诱导胃癌细胞凋亡,且作用机制与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

蛋白酶体抑制剂DCI对胃癌细胞P38α信号的调节

目的 探讨P38α在蛋白酶体抑制剂3,4-二氯异香豆素(3,4-Dichloroisocoumarin,DCI)诱导人胃癌细胞BGC823凋亡过程中作用.方法 采用MTT,流式细胞术、分析DCI对细胞凋亡的诱导作用,RT-PCR分析DCI作用于胃癌细胞后P38 MAPK在基因表达水平改变的情况.结果 随着DIC浓度的增加和处理时间延长,胃癌细胞增殖明显受到抑制,400 μmol·L-1DCI作用于胃癌细胞24 h后细胞存活率43.6±5.3%,与对照组比较差异显著(P《0.01).流式细胞术显示DCI主要作用于S期细胞,300 μmol·L-1 DCI浓度时,细胞凋亡率23.86%,与对照组比较差异明显(P《0.05).300、150μmol·L-1DCI作用于胃癌细胞后均可以使P38α基因灰度值明显高于对照组,差异有显著性(P《0.01).结论 DCI可抑制人胃癌BGC823细胞增殖并促进其凋亡,在此过程中P38α通路激活发挥重要作用.     

PHGDH对胃癌细胞BGC823增殖和化疗药物敏感性的影响

目的 磷酸甘油酸脱氢酶(phosphoglycerate dehydrogenase,PHGDH)催化糖酵解中间产物3-磷酸甘油酸生成3-磷酸羟基丙酮酸,将糖酵解中间产物引入丝氨酸生物合成途径,它在包括乳腺癌和结肠癌等多种肿瘤中表达升高.本研究旨在探讨PHGDH的表达对胃癌细胞(BGC823)增殖以及对化疗药物顺铂敏感性的影响.方法 免疫组织化学染色检测PHGDH蛋白在75例配对的胃癌和癌旁正常组织中的表达情况;siRNA转染胃癌细胞BGC823干扰PHGDH表达,蛋白质印迹法验证siRNA对PHGDH蛋白表达的干扰效率;CCK-8法和平板克隆实验检测PHGDH基因沉默对胃癌细胞BGC823增殖和克隆形成能力的影响;流式细胞术检测PHGDH基因沉默对BGC823细胞周期的影响;流式细胞术检测凋亡评估PHGDH基因沉默对胃癌细胞BGC823对化疗药物顺铂反应性的影响.结果 PHGDH在胃癌组织中的阳性表达率为72.0%(54/75),显著高于癌旁正常组织的41.3%(31/75),差异有统计学意义,χ2=14.36,P<0.01;在转染siRNA后,实验组BGC823-siPHGDH细胞中的PHGDH/β-actin蛋白表达相对灰度比值为0.09±0.02,显著低于阴性对照组的0.70±0.05和空白对照组的0.74±0.06,差异有统计学意义,F=62.35,P<0.01;CCK-8实验结果显示,细胞铺板后5 d,BGC823-Mock、BGC823-siNC和BGC823-siPHGDH细胞各组在第5天时BGC823细胞增长倍数分别为11.13±0.35、11.30±0.72和5.58±0.66,差异有统计学意义,F=48.61,P<0.01;平板克隆形成实验结果显示,细胞培养14 d后,BGC823-Mock、BGC823-siNC和BGC823-siPHGDH细胞形成的克隆数分别为182.67±11.85、173.33±7.26和28.33±10.93,差异有统计学意义,F=71.85,P<0.01;细胞周期检测结果显示,阴性对照组BGC823-siNC的G0/G1期细胞百分比为(70.3±2.4)%,实验组BGC823-siPHGDH的G0/G1期细胞百分比为(87.5±1.3)%,说明实验组BGC823-siPHGDH的G0/G1期细胞增多,PHGDH基因沉默引起胃癌细胞发生G0/G1细胞周期阻滞;细胞凋亡检测结果显示,经1 μg/mL的顺铂处理BGC823-siNC和BGC823-siPHGDH细胞24 h后,BGC823-siNC凋亡率为(28.8±2.5)%,BGC823-siPHGDH组为(45.0±5.1)%,提示PHGDH基因沉默能够增加胃癌细胞BGC823对顺铂的敏感性.结论 PHGDH基因沉默抑制胃癌细胞BGC823的增殖,引起细胞周期阻滞,增加对化疗药物顺铂的敏感性,这不仅为胃癌临床治疗提供一个新的靶点,而且为肿瘤代谢在肿瘤发生和发展中的作用提供了新的实验证据.     

β-榄香烯对胃癌细胞Akt通路活化和凋亡相关蛋白表达的影响

目的：旨在探讨β-榄香烯对人胃癌BGC823细胞Akt通路的活化和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PARP表达的影响。方法：实验分为对照组和β-榄香烯处理组,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）试验法检测β-榄香烯对人胃癌BGC823细胞的药物敏感性,采用Western blot检测蛋白表达,应用SPSS（13.0软件包）进行统计学分析。结果：β-榄香烯处理胃癌BGC823细胞24h的IC50为46.56μg/ml,选用50μg/ml和200μg/ml的β-榄香烯处理24h,BGC823细胞凋亡率分别为12.33%和42.59%,与对照组相比有统计学差异（P〈0.05）。与对照组相比,β-榄香烯处理组Bcl-2与Bax的比值显著下调、伴有PARP裂解。进一步检测发现β-榄香烯处理组明显下调了Akt的磷酸化水平,从而有效抑制Akt信号转导通路。结论：β-榄香烯可以通过抑制Akt信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值和诱导PARP裂解,进而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

脂质体介导FLICE抑制蛋白反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡

背景与目的:FLICE抑制蛋白基因在凋亡信号传递中发挥重要作用,研究靶向cFLIP的反义基因治疗药物可能为临床治疗胃癌提供新的方法和思路.本研究拟探讨cFLIP反义寡核苷酸对人胃癌细胞株BGC823凋亡的影响.方法:以脂质体Lipofectame2000为载体,介导cFLIP反义寡核苷酸片段导入胃癌细胞株BGC823.RT-PCR和Western blot方法检测cFLIPL/s mRNA和蛋白在HeLa、BGC823细胞中的表达;以cFLIP基因翻译起始区为靶点,人工合成20个碱基全硫代修饰的反义寡核苷酸,脂质体介导转染BGC823细胞后,MTT法检测细胞抑制率;原位末端标记、流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测蛋白表达变化.结果:cFLIP mRNA的2种拼接体和表达蛋白在HeLa、BGC823细胞中呈阳性表达.MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖,其抑制作用随浓度增加而增强;TUNEL检测可见阳性染色;流式细胞仪分析发现在G1峰前出现凋亡峰;Western blot检测可见cFLIPL和cFLIPs蛋白表达显著下降.结论:cFLIPL/s mRNA和蛋白在HeLa、BGC823细胞中表达.脂质体介导反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制cFLIPL/s蛋白表达,促进凋亡.     

胃癌组织Tau蛋白表达与紫杉醇敏感性关系的研究

目的:研究Tau蛋白在胃癌组织中的表达情况及其与应用紫杉醇敏感性的关系.方法:免疫组化方法检测47例胃癌组织中Tau蛋白的表达水平,分析Tau蛋白的表达丰度;蛋白质印迹法检测胃癌细胞株中Tau蛋白表达水平;MTT法分析紫杉醇对胃癌细胞珠的生长抑制作用;流式细胞术检测紫杉醇对胃癌细胞珠的诱导凋亡作用.结果:免疫组化方法检测47例胃癌组织Tau蛋白(3+)表达率为12.77％(6/47),(2+)表达率51.06％(24/47),Tau蛋白高表达率为63.83％.蛋白质印迹法检测结果显示,Tau蛋白在胃癌MKN45细胞株中相对高表达,在BGC823细胞珠中相对低表达,P=0.014 7.MTT法分析发现,不同剂量紫杉醇对细胞珠MKN45和BGC823均有细胞抑制作用,但对Tau蛋白表达低的BGC823细胞株抑制作用更为明显,紫杉醇浓度6、8、10、30、50、70和90 μg/mL,其P值分别为0.051 91、0.000 50、0.021 89、0.002 28、0.002 45、0.549 39和0.022 72.流式细胞术检测结果显示,紫杉醇对两细胞珠均有诱导凋亡作用,且Tau蛋白低表达的BGC823细胞珠凋亡率更明显.结论:Tau蛋白在胃癌细胞中有较高表达,紫杉醇对Tau蛋白表达低的胃癌细胞具有更强的抑制作用,其敏感性更高.     

靶向抑制COX-2基因对胃癌细胞BGC823凋亡及药物敏感性的影响

目的:研究siRNA靶向抑制环氧合酶-2(COX-2)基因后对胃癌细胞BGC823增殖、凋亡及药物敏感性的影响.方法:将COX-2 siRNA(siRNA-COX-2组)及negative control siRNA(siRNA-control组)序列转入细胞BGC823中,检测细胞增殖能力,观察多西紫杉醇(docetaxel艾素)、奥沙利铂(L-OHP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的药物敏感性变化,及转染前后BGC823细胞COX-2、β-catenin、Bcl-2 mRNA基因和蛋白的表达.结果:siRNA-COX-2组细胞在转染后第四天开始增殖能力下降,与siRNA-control组差异存在明显统计学意义(P＜0.05),而siRNA-control组细胞于BGC823组增殖能力差异无明显统计学意义(P＞0.05).MTT法检测转染后胃癌细胞对艾素、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶的IC50较转染前药物敏感性明显增加.流式细胞术检测转染前后胃癌细胞凋亡率为(3.08％±0.27％vs 16.14％ ±1.89％,P＜0.05),转染后凋亡明显增加(P＜0.05).qRT-PCR法检测发现转染后COX-2、β-catenin、Bcl-2 mRNA基因的表达明显下降,Westernblot检测发现,转染后48小时COX-2蛋白表达达到最低,转染后48小时β-catenin、Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:通过下调COX-2基因的表达,可有效抑制WNT信号通路的激活,同时有效降低Bcl-2基因的表达.抑制COX-2基因后可有效降低胃癌细胞BGC823的细胞增殖能力,可有效提高对艾素、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶的药物敏感性,有效促进细胞凋亡.     

棱术合剂诱导人胃癌细胞凋亡实验研究

目的:研究棱术合剂对胃癌细胞凋亡的诱导作用,进一步阐明棱术合剂治疗胃癌的作用机理。方法:选用棱术合剂,顺铂与人胃癌细胞系BGC823 共同孵育48 小时后,应用光镜、电镜进行形态学观察,提取细胞总DNA 经琼脂糖凝胶电泳,分析电泳条带。细胞DNA 经碘化丙啶染色后,用流式细胞仪分析细胞周期变化,测定凋亡指数,增殖指数。结果:细胞经棱术合剂、顺铂处理后,染色质浓缩,致密,深染,沿核膜下凝聚,可见凋亡小体形成,细胞DNA 电泳呈现梯度状条带,细胞周期分析G1 峰前二者均出现明显的细胞凋亡峰,凋亡指数分别为43 % 、45 % ;增殖指数分别为33 % 、32 % 经统计学处理,二者无显著性差异。结论:棱术合剂可诱导人胃癌细胞系BGC823 发生细胞凋亡     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC823细胞凋亡

[目的]观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的生物学效应及分子机制。[方法]通过MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;用形态学观察、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳研究EGCG诱导BGC823细胞凋亡。West-ern blot法检测EGCG处理后BGC823细胞NF-κB（p65）、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。[结果]EGCG显著性抑制BGC823细胞的生长,呈浓度依赖性。EGCG处理后,光镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变;流式细胞术分析表明不同浓度EGCG处理48h后,亚G1期细胞逐渐增加;EGCG（80μg/ml）作用48、72h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带;Western blot表明EGCG处理48h后,NF-κB（p65）和Bcl-2蛋白表达下调,Bax和Caspase-3蛋白表达升高。[结论]EGCG具有诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制NF-κB活化,导致Bax/Bcl-2比值上调,促进Caspase-3活化有关。     

Livin的siRNA对胃癌细胞BGC823生长与功能影响的初步研究

目的:观察livin基因的siRNA对人胃癌细胞株BGC823生长与功能的影响.方法:构建针对livin基因siR-NA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-livin,通过脂质体介导转染至BGC823细胞,半定量RT-PCR、蛋白质印迹法分别检测livin基因mRNA和蛋白表达,激酶活性检测试剂盒检测胱冬肽酶-3(Caspase-3)的活性,MTT法分别检测PBMC和BGC823细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测混合细胞培养上清中TNF-α分泌量的变化.结果:转染48 h实验组细胞livin mRNA和蛋白表达水平明显受到抑制,表达抑制率分别为64.63%和62.80%,P<0.05;Caspase-3活性增强,细胞凋亡率为22.4%,P<0.05;PBMC和BGC823细胞增殖减慢;细胞培养上清中TNF-α分泌量明显降低,P<0.05.结论:通过抑制BGC823细胞中livin的表达,Caspase-3的活性增加,从而诱导细胞凋亡率上升;livin基因表达沉默可以抑制PBMC细胞增殖,TNF-α分泌减少,提示了livin基因可能是在细胞发生癌变初期过度表达的一个凋亡抑制基因.     

microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响

目的：研究人微小RNA-10a（microRNA-10a,miR-10a）对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法：利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a（25、50、100、150nmol/L）转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a（100nmol/L）的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为（88.34&#177;0.61）%和（56.02&#177;3.13）%。结论：转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。     

香菇多糖联合多西他赛对胃癌BGC823细胞增殖的影响

目的：观察香菇多糖单药及联合多西他赛抑制胃癌细胞BGC823增殖的作用.方法：分别用不同浓度的香菇多糖、多西他赛和香菇多糖联合多西他赛处理胃癌细胞BGC823.香菇多糖终浓度分别为1.560μg/ml,3.125 μg/ml,6.250 μg/ml,12.500μg/ml.多西他赛终浓度分别为0.625 μg/ml,1.250μg/ml,2.500μg/nl,5.000 μg/ml.MTT法检测各组细胞增殖情况;同时用Annexin Ⅴ/PI法检测各组细胞的凋亡.结果：单药香菇多糖能抑制BCG823细胞的增殖,不同浓度（由高到低）对BGC823细胞的增殖抑制率分别为67.7％,56.0％、42.1％和23.2％,与阴性对照组比较有统计学意义（P＜0.05）.不同浓度香菇多糖联合多西他赛能增强多西他赛对BGC823细胞增殖的抑制作用.单药香菇多糖能增加BGC823细胞的细胞凋亡率,与多西他赛联用使细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）.结论：香菇多糖能抑制胃癌BGC823细胞的增殖,并能显著增强多西他赛抑制胃癌细胞BGC823的增殖作用.     

microRNA 10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响

摘　要　目的:研究人微小RNA10a（microRNA10a，miR10a）对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法：利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选，获得高侵袭能力的BGC823P3亚系；通过miRNA芯片差异分析发现miR10a在高侵袭能力BGC823P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR10a，以脂质体包裹合成的miR10a（25、50、100、150 nmol/L）转染BGC823细胞，并设空白转染、无关序列转染对照组; Realtime PCR分别检测以上各组细胞miR10a的表达。采用细胞计数试剂盒8（Cell Counting Kit8，CCK8）检测miR10a对细胞增殖的影响，流式分析检测miR10a对细胞凋亡的影响，Transwell小室检测miR10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：化学合成的成熟型miR－10a转染后，BGC823细胞miR10a表达的提高以100 nmol/L miR10a转染组最佳，较无关序列转染组提高了2.06倍。 miR10a（１００ nmol/L）的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响，但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用，促进率分别为（88.34± 0.61）% 和（56.02±3.13）%。结论：转染成熟型人miR－10a能使胃癌细胞系BGC823中miR10a的表达提高，并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。     

沉默 ATM基因对人胃癌细胞 BGC823放射敏感性的影响

目的：探讨毛细血管扩张突变基因（ATM）对人胃癌细胞放射敏感性的影响。方法：将 ATM基因敲减后获取得到的稳定转染克隆细胞和空载细胞同时通过不同剂量的照射后,观察敲减 ATM基因前后 BGC823细胞平板克隆形成率,并使用流式细胞术,观察 ATM被敲减后对细胞周期和凋亡的影响。结果：BGC823细胞中的 ATM被敲减后,经不同剂量的照射（2、4、6和8Gy）克隆形成率分别为（15．4±0．9）％、（9．2±0．3）％、（2．2±0．1）％和（1．0±0．1）％,远低于空载细胞的克隆形成率分别为（28．1±0．6）％、（15．6±0．8）％、（5．3±0．1）％和（1．8±0．1）％,P 均小于0．05,有显著性差异。采用相同剂量（4Gy）照射后,流式细胞术检测发现,BGC823细胞中的 ATM被敲减后,细胞周期被阻滞,细胞停止生长,并在12h 后出现凋亡的现象。结论：ATM基因的表达可影响胃癌细胞的放射敏感性,ATM的表达被敲减后对 BGC823细胞的放射起到增敏作用。ATM基因在胃癌放射敏感性方面可能有非常重要的作用。     

熊果酸诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其作用机制初探

背景与目的：熊果酸（ursolic acid,UA）广泛存在于夏枯草、白花蛇舌草等清热解毒药中,可抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,具有广泛生物学活性。本研究将UA作用于人胃癌BGC823细胞,观察其对细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测UA对BGC823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化;Realtime-PCR检测细胞bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果：UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,分别作用24、48、72h后半数抑制浓度依次为36.88、34.72、32.18μmol/L;UA能诱导BGC823细胞凋亡,并阻滞细胞于G2/M期;此外,其还可上调BGC823细胞bax及下调bc1-2mRNA表达,且作用随剂量的增加而加强。结论：UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞于G2/M期;其凋亡机制可能与上调bax及下调bcl-2基因的表达有关。     

菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的:观察不同浓度菝葜皂苷元对体外培养胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡的影响.方法:BGC-823细胞经不同浓度菝葜皂苷元处理后,采用MTT法检测细胞的生长活性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:随菝葜皂苷元浓度的增加,胃癌BGC-823细胞增殖抑制率、凋亡率亦升高.结论:菝葜皂苷元对胃癌BGC-823细胞的增殖有抑制作用,并可诱导细胞凋亡.     

MTT法检测C-FLIP反义寡核苷酸对BGC823细胞的抑制效果

目的探讨脂质体Lipofectamine2000介导下c-FLIP反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823生长的抑制作用.方法 RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL/S的mRNA和蛋白的表达变化;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞抑制率.结果 Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降;反义寡核苷酸作用细胞36 h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖.结论 c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.     

PKM2对人胃癌细胞HMGB1释放的影响

目的:探讨M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)对胃癌细胞高迁移率族蛋白B-1(high mobility group box 1,HMGB1)释放的作用。方法:通过siRNA干扰抑制人胃癌BGC823细胞PKM2的表达,Western blot检测各组细胞PKM2蛋白的表达,以评价PKM2 siRNA的转染效率;CCK-8法检测各组细胞活力,分析干扰PKM2的表达对胃癌BGC823细胞增殖的影响;Western blot检测各组细胞HMGB1的表达以及ELISA检测各组细胞培养液HMGB1的水平,分析PKM2对胃癌BGC823细胞HMGB1的作用。结果:与空载体pU6组相比,PKM2 siRNA 组PKM2的表达显著降低(P＜0.01),表明siRNA有效地抑制胃癌BGC823细胞PKM2的表达;CCK-8结果显示,PKM2 siRNA 组细胞活力明显低于空载体pU6组(P＜0.001),表明干扰PKM2抑制胃癌BGC823细胞增殖;此外,PKM2 siRNA 组HMGB1的表达以及细胞外HMGB1的水平显著降低(P＜0.01),表明干扰PKM2抑制人胃癌BGC823细胞HMGB1的释放。结论:PKM2促进人胃癌BGC823细胞HMGB1的释放。