脑缺血再灌注大鼠神经细胞DNA损伤与凋亡的时空关系分析

目的　探讨局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞DNA损伤与凋亡的时空分布演变过程及两者间的联系。方法　共选取 72只成年Wistar大鼠 ,将其随机分为正常组、假手术组、缺血 3 0min组及缺血 2h组 ;后 2组大鼠又根据再灌注时间 (再灌注 1,6,12 ,2 4及 48h)不同 ,各细分为 5个亚组。制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型 (MCAO R) ,应用免疫组化法观察脑缺血组织在不同缺血再灌注时间下 ,其P5 3表达在空间及程度上的改变 ,并结合TUNEL技术观察P5 3表达与细胞凋亡的时空关系。结果　脑缺血再灌注可诱导细胞凋亡及P5 3蛋白表达增强 ,并随着缺血或再灌注时间的延长 ,凋亡细胞数量与P5 3表达均逐渐增加 ,但P5 3蛋白的表达始终早于凋亡细胞的出现 ,且P5 3阳性细胞数量始终多于凋亡细胞数量 (P <0 .0 5 ) ,其分布范围也较凋亡细胞更广。结论　神经细胞缺血可引起DNA损伤 ,DNA损伤后可诱导DNA修复 ,如修复失败则启动细胞凋亡程序。     

H2O2对PC12细胞par-4和caspase-3基因表达的影响

目的：探讨H2O2对PC12细胞par-4和caspase-3基因表达的影响，为阿尔茨海默病神经元凋亡发生的机制提供实验依据。方法：用不同剂量H2O2(O-400nmaol／L)处理PC12细胞8h，或终浓度200nmol／L H2O2处理PC12细胞不同时间(0～8h)，采用RT-PCR检测par-4，caspase-3 mRNA表达变化，Western blot检测Par-4蛋白表达和Caspase-3P20活性片段的变化，用比色法检测Caspase-3相对活性。结果：随H2O2浓度从100～400nmol／L增加，par-4,caspase-3 mRNA表达和Par-4蛋白表达水平及Caspase-3 P20活性片段逐渐增加；200nmol／LH2O2作用PC12细胞0～8h，par-4 mRNA表达和Par-4蛋白表达，在2～8h随时间延长表达增加；caspase-3 mRNA表达和Caspase-3 P20活性片段，在4～8h随时间延长而增加；随H2O2浓度从50—400nmol／L增加，Caspase-3相对活性增加(r=4．8，P&;lt;0．05)，在400nmol／LH2O2时Caspase-3相对活性达最大值。结论：随着H2O2剂量依赖性的增加和同一剂量下H2O2处理PC12细胞时间增加par-4，cctspase-3基因mRNA的表达，Par-4蛋白的表达，Gaspase-3 P20活性片段，Caspase-3活性均有所增加。     

DNA损伤修复相关因子在宫颈癌组织中的表达研究

目的探究DNA损伤修复相关因子[毛细血管扩张性共济失调突变因子(pATM)、磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)]在宫颈癌组织中的表达及其诊断意义。方法选取2018年2月至2019年8月于我院就诊的50例宫颈癌患者设置为试验组,另选择同期我院体检健康者50例作为对照组。两组研究对象均进行免疫组化染色,检验pATM、γH2AX的表达情况;通过磷酸化抗体检测手段检测两组研究对象的pATM、γH2AX水平。结果试验组的pATM、γH2AX mRNA的相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。试验组pATM、γH2AX的阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。pATM、γH2AX高表达与宫颈癌的临床分期相关(P<0.05),与年龄、病理分化程度、化疗周期无关(P>0.05)。结论DNA损伤修复相关因子pATM、γH2AX在宫颈癌中高表达有利于疾病的的早期诊断和临床分期诊断,具有一定的临床价值。     

Targeting the microRNA-regulating DNA damage/repair pathways in cancer

Introduction: Maintenance of genome stability requires the integrity of the DNA repair machinery. DNA damage response (DDR) determines cell fate and regulates the expression of microRNAs (miRNAs), which in turn may also regulate important components of the DNA repair machinery.

Areas covered: In this review, we describe the bidirectional connection between miRNAs and DDR and their link with important biological functions such as, DNA repair, cell cycle and apoptosis in cancer. Furthermore, we highlight the potential implications of recent findings on miRNA/DDR in determining chemotherapy response in cancer patients, and the use of these biomarkers for novel potential therapeutic approaches.

Expert opinion: Defects in the DDR and deregulation of miRNAs are important hallmarks of human cancer. A full understanding of the mechanisms underlying the connection between miRNAs and DDR/DNA repair pathways will positively impact our knowledge on human tumor biology and on different responses to distinct drugs. Specific miRNAs interact with distinct DDR components and are promising targets for enhancing the effects of, and/or to overcome the resistance to, conventional chemotherapeutic agents. Finally, the development of innovative tools to deliver miRNA-targeting oligonucleotides may represents novel types of cancer interventions in clinic.     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内游离钙的浓度(犤Ca2+犦i)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白激酶II(Ca2+/CaM-PKII)的变化。方法采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性、细胞内犤Ca2+犦i变化,cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII的变化。结果缺氧组PC12细胞cAMP、CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组;Ca2+/CaM-PKII活性明显低于正常对照组。结论犤Ca2+犦i、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

合成致死作用中DNA损伤修复机制的研究

合成致死（Synthetic lethality）作用即生物体内多个基因共突变时,会造成无法被机体本身调控机制修复的DNA损伤,引发细胞凋亡。以DNA损伤反应与修复网络为背景,通过细胞信号通路中关键位点基因的共突变,来解决肿瘤细胞治疗过程中的凋亡逃避,为特定基因遗传背景的肿瘤治疗提供了特异性、个体化的治疗方案。三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）通常伴有brca基因缺陷,对其合成致死作用的发现和深入研究也为恶性肿瘤治疗提供了新的方向。本文针对目前研究较为透彻的合成致死基因位点的作用原理及意义进行概述,包括brca、p53、atm／atr等。同时讨论了合成致死作用在自杀基因系统和药物化疗两种恶性肿瘤治疗方案中可能存在的积极作用。     

NRF2/ABCB1-mediated efflux and PARP1-mediated dampening of DNA damage contribute to doxorubicin resistance in chronic hypoxic HepG2 cells

Transarterial chemoembolization (TACE)-induced hypoxia can trigger residual liver cancer cells to present a more aggressive phenotype associated with chemoresistance, but the underlying mechanisms are still unknown. In this study, the human liver cancer cell line HepG2 was pre-cultured in different oxygen environments to examine the possible mechanisms of hypoxia-induced doxorubicin resistance. Our study showed that HepG2 cells pre-cultured in a chronic intermittent hypoxic environment exhibited significant resistance to doxorubicin, evidenced by increased intracellular doxorubicin efflux, relatively higher cell proliferation, lower apoptosis, and decreased DNA damage. These changes were accompanied by high levels of NRF2 and ABCB1 under conditions of both chronic and acute hypoxia and PARP1 gene expression only under conditions of chronic hypoxia. SiRNA-mediated silencing of NRF2 gene expression downregulated the expression of ABCB1 and increased the intracellular doxorubicin accumulation and cell apoptosis both in acute and chronic hypoxic HepG2 cells. Moreover, silencing of PARP1 gene expression increased the doxorubicin-induced DNA damage and cell apoptosis in chronic hypoxic cells. On the basis of these findings, we concluded that NRF2/ABCB1-mediated efflux and PARP1-mediated DNA repair contribute to doxorubicin resistance in chronic hypoxic HepG2 cells.     

奥沙利铂对结肠癌细胞DNA损伤修复类抗药基因表达的影响

目的观察奥利沙铂对结肠癌细胞DNA损伤修复类基因表达的影响。方法采用奥利沙铂处理结肠癌细胞株HCT116 48 h。以Western blot免疫印迹法检测奥利沙铂诱导的DNA损伤。采用CCK-8方法探讨奥利沙铂对HCT116细胞生长的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测奥利沙铂处理后相关DNA损伤修复基因的表达。结果奥利沙铂处理后,HCT116细胞中DNA损伤标志基因γ-H2AX表达明显上升。DNA损伤切除修复相关基因XPC表达在奥利沙铂处理后出现显著上升,其他DNA损伤修复基因mRNA表达无明显上调。结论 XPC基因可能在临床应用奥沙利铂治疗结肠癌时肿瘤细胞产生抗药性的过程中起到了关键作用。     

吡哆胺修复糖基化终产物诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的实验研究

目的　观察吡哆胺 (PM)对糖基化终产物 (AGEs)诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的修复情况。方法　采用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术 ,根据AGEs BSA浓度的不同所致离体小鼠脾淋巴细胞的DNA损伤进行研究 ,并对PM修复AGEs BSA诱导的DNA损伤不同时点的修复能力作了分析。结果　① 5 0、10 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率与阴性对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。 2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率明显高于阴性对照组 (P <0 0 1) ,且两者呈正相关 (r=0 95 6 3)。②以能引起明显DNA断裂剂量 (2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mL)的AGEs BSA作用小鼠脾淋巴细胞 ,PM最佳修复时点为 2h。结论　AGEs可引起离体脾淋巴细胞DNA链损伤 ,并存在一定的剂量 反应关系 ;PM对此有修复作用     

DNA氧化损伤及其修复酶与肿瘤关系的研究进展

DNA氧化损伤可引起机体功能的改变及疾病的发生.机体可通过多种途径修复DNA氧化损伤,而碱基切除修复(BER)方式是DNA氧化损伤修复最为重要的途径.参与DNA氧化损伤修复的代表酶为8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶,即MutT同源酶(MTH)1和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG)1.DNA氧化损伤及其修复酶与肿瘤的发生、肿瘤细胞的生长关系密切.笔者拟就DNA氧化损伤及其修复酶与肿瘤的发生、肿瘤细胞的生长及治疗研究进行综述如下.     

DNA损伤时钠氢交换蛋白1在K562和HL-60细胞中的表达和对细胞凋亡的影响

本研究主要探讨在依托泊苷引起的DNA损伤下,BCR-ABL阳性细胞系K562中钠氢交换蛋白-1(NHE1)的表达变化情况,并初步探讨其在何种水平被调控。采用实时定量PCR技术检测NHE1在mRNA水平的表达;Western blot检测依托泊苷对细胞NHE1在蛋白水平的影响;流式细胞术测定细胞凋亡情况;构建NHE1启动子区荧光素酶报告载体,并测定不同依托泊苷浓度作用下的荧光素酶活性。结果表明:DNA损伤引起HL-60细胞NHE1在mRNA和蛋白水平升高(p<0.05),在K562细胞中未发现明显变化(p>0.05);依托泊苷对HL-60细胞有明显的促凋亡作用,阻止细胞内pH值的升高可以降低依托泊苷的促凋亡作用,依托泊苷对K562细胞凋亡率无明显影响;K562细胞在DNA损伤时,NHE1启动子区构建的荧光素酶表达载体活性升高。结论:依托泊苷造成的DNA损伤,促进HL-60细胞凋亡,并且依赖pHi的改变;在K562细胞中NHE1表达没有改变,但其转录活性升高。