PCOS及PCOS伴2型糖尿病大鼠卵巢热休克蛋白70的研究

目的利用量子点(QDs-SA605)荧光及免疫组化法对热休克蛋白(HSP)70进行标记,检测PCOS及PCOS伴2型糖尿病(2-DM)大鼠卵巢中HSP70的表达情况。方法将23日龄雌性SD大鼠分为PCOS组、PCOS伴2-DM组及对照组,PCOS组及PCOS伴2-DM组以硫酸普拉睾酮钠9mg/100g皮下注射20d;PCOS伴2-DM组则在硫酸普拉睾酮钠停药后第2天给予链脲佐菌素(STZ)45mg/kg腹腔注射1次,PCOS组及对照组注射等量柠檬酸盐缓冲液。注射后72h处死大鼠,观察卵巢形态学改变,测定血清性激素、胰岛素及血糖水平,并以QDs-SA605荧光标记和免疫组化染色检测各组大鼠卵巢组织中HSP70的表达。结果血液指标测定结果显示,与对照组相比,PCOS组和PCOS伴2-DM组血清E2、T、血清胰岛素(INS)及空腹血糖(FBG)均明显增高,差异均具有统计学意义(P0.05);PCOS伴2-DM组的血液中INS及FBG浓度均高于PCOS组,差异有统计学意义(P0.05);量子点荧光标记法与免疫组化法结果均显示大鼠卵巢组织中有HSP70的表达,颗粒细胞中表达较多,主要为胞质表达,HSP70的表达趋势为正常组PCOS组PCOS伴2-DM组,HSP70表达量各组间均有统计学差异(P0.05)。结论大鼠卵巢中存在HSP70的表达,且在正常组、PCOS组及PCOS伴2-DM组间存在差异;HSP70在各组间的差异表达可能与PCOS及PCOS伴2-DM的发病机制有关。     

全身振动训练对绝经大鼠骨骼肌的改善及其作用机制研究

目的通过观察全身振动性训练法(WBV)对去卵巢(OVX)大鼠骨骼肌中过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARγ),β-连环蛋白和磷酸化糖原的表达合成酶激酶-3(P-GSK-3β)蛋白质表达的影响,探讨WBV对绝经大鼠骨骼肌的作用机制。方法将雌性大鼠随机分成正常对照组(Sham组,n=10),去卵巢组(OVX组,n=10),17β-雌二醇治疗组(E_2组,n=10)和全身振动性训练组(WBV组,n=10)。测定各组大鼠血清E_2和黄体生成素(LH)水平,以及PPARγ、β-连环蛋白和P-GSK-3β在骨骼肌中的表达。结果 OVX组大鼠血清LH比Sham组和E_2组明显升高(P0.05)。OVX组大鼠血清E_2水平与Sham组、E_2组和WBV组相比明显上升(P0.05)。OVX组骨骼肌PPARγ表达较Sham组显著升高(P0.05),而β-连环蛋白和P-GSK-3β蛋白表达较Sham组均显著降低(P0.05)。在WBV或雌激素替代治疗的干预下,WBV组或E_2组的PPARγ表达均显著低于OVX组(P0.05),β-连环蛋白和P-GSK-3β蛋白表达均显著高于OVX组(P0.05)。结论 WBV能有效预防OVX大鼠的骨质流失,并提高骨质强度,这可能与抑制OVX大鼠骨骼肌中GSK-3β和PPARγ活性来激活β-连环蛋白信号传导通路有关。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响

目的:研究银杏叶提取物(EGB)对2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞雄激素合成的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机均分成3组:正常对照组、2型糖尿病组、EGB治疗组。用光镜和透射电镜观察EGB对2型糖尿病大鼠睾丸的形态学改变;ELISA法检测血清LH、T水平;半定量RT-PCR检测睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a-羟化酶(P450c17)、3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(3β-HSD1)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型(17β-HSD3)的mRNA水平。结果:糖尿病组光镜下睾丸间质细胞较正常对照组缩小;透射电镜下见到间质细胞核固缩,胞质内内质网减少。糖尿病组血清LH及T水平显著低于正常对照组(P<0.05);睾丸组织P450scc的mRNA水平显著低于正常对照组(P<0.01),StAR、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平也明显低于正常对照组(P<0.05),P450c17基因表达呈下降趋势(P>0.05);EGB治疗12周与糖尿病组比较睾丸组织病理改变较轻,血清LH、T含量升高(P<0.05),StAR、P450scc的mRNA水平升高(P<0.05),P450c17、17β-HSD3及3β-HSD1的mRNA水平呈上升趋势(P>0.05)。结论:EGB能减轻糖尿病大鼠睾丸损害并使2型糖尿病大鼠睾丸间质细胞合成和分泌T能力增强。     

颗粒蛋白前体在高脂饮食诱导的肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达

目的研究颗粒蛋白前体(PGRN)在肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达情况,初步探讨PGRN在PCOS发病中的作用。方法选择SPF级23日龄SD雌性大鼠38只,使用随机数字表随机分为3组:正常对照组(n=8)、PCOS组(DHEA组,n=15)及肥胖PCOS组(DHEA+HFD组,n=15)。采用脱氢表雄酮联合高脂饲料(DHEA+HFD)诱导肥胖PCOS大鼠。HE染色光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构改变。酶联免疫吸附法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量等,比较各组间的水平差异。采用免疫组织化学法检测各组卵巢PGRN的表达水平及分布情况。结果造模结束时,DHEA+HFD组体重显著高于对照组(P<0.01)及DHEA组(P<0.05)。DHEA组及DHEA+HFD组的FINS、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著高于对照组(P<0.05)。DHEA组及DHEA+HFD组的睾酮(T)、FSH水平均显著升高(P<0.01)。DHEA组及DHEA+HFD组卵巢组织光镜下均表现出典型的多囊样改变。免疫组化结果显示各组大鼠卵巢中均可见PGRN蛋白表达,主要分布于卵泡的颗粒细胞层及黄体;DHEA组PGRN表达水平显著高于对照组(P<0.01),DHEA+HFD组PGRN表达水平显著高于DHEA组及对照组(P<0.01)。结论 PGRN在卵巢颗粒细胞层有表达。其在PCOS大鼠和肥胖PCOS大鼠卵巢组织中的差异性表达,提示PGRN可能通过作用于局部卵泡微环境,参与PCOS肥胖及慢性代谢性炎症的发生。     

全身振动训练对大鼠骨骼肌的改善及其作用机制研究

目的通过观察全身振动性训练法(WBV)对去卵巢(OVX)大鼠骨骼肌中过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARγ),β-连环蛋白和磷酸化糖原的表达合成酶激酶-3(P-GSK-3β)蛋白质表达的影响,探讨WBV对绝经大鼠骨骼肌的作用机制。方法将雌性大鼠随机分成正常对照组(Sham组,n=10),去卵巢组(OVX组,n=10),17β-雌二醇治疗组(E_2组,n=10)和全身振动性训练组(WBV组,n=10)。测定各组大鼠血清E_2和黄体生成素(LH)水平,以及PPARγ、β-连环蛋白和P-GSK-3β在骨骼肌中的表达。结果 OVX组大鼠血清LH比Sham组和E_2组明显升高(P0.05)。OVX组大鼠血清E_2水平与Sham组、E_2组和WBV组相比明显上升(P0.05)。OVX组骨骼肌PPARγ表达较Sham组显著升高(P0.05),而β-连环蛋白和P-GSK-3β蛋白表达较Sham组均显著降低(P0.05)。在WBV或雌激素替代治疗的干预下,WBV组或E_2组的PPARγ表达均显著低于OVX组(P0.05),β-连环蛋白和P-GSK-3β蛋白表达均显著高于OVX组(P0.05)。结论 WBV能有效预防OVX大鼠的骨质流失,并提高骨质强度,这可能与抑制OVX大鼠骨骼肌中GSK-3β和PPARγ活性来激活β-连环蛋白信号传导通路有关。     

低氘水联合富血小板血浆对糖尿病大鼠胰岛细胞的保护作用及TGF-β_1表达的影响

目的:观察低氘水(Deuterium-depleted water,DDW)联合富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)对糖尿病大鼠胰岛细胞保护作用及TGF-β_1表达的影响,初步探讨其对保护糖尿病大鼠胰岛细胞、促进糖尿病溃疡愈合的可能机制。方法:通过高糖高脂饲料喂养配合腹腔注射链脲菌素(STZ)+背部皮肤全层切除建立糖尿病大鼠溃疡模型。成模后按随机数字法分为糖尿病模型组、低氘水组(DDW)、富血小板血浆组(PRP)和低氘水联合富血小板血浆组(DDW+PRP)。空白对照组采用腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液+背部皮肤全层切除建模。各组大鼠分别于治疗后3d、7d、14d检测随机血糖,创面愈合率。胰腺组织HE染色后观察其病理学改变,酶联免疫吸附法检测创面组织TGF-β_1表达情况。结果:DDW组、DDW+PRP组干预14d后随机血糖较干预前降低,差异具有统计学意义(P0.05)。DDW组、PRP组、DDW+PRP组在干预7d、14d后创面愈合率高于糖尿病模型组,差异具有统计学意义(P0.05);DDW+PRP组在干预14d时创面愈合率高于DDW组、PRP组,差异具有统计学意义(P0.05);且与空白对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。胰岛组织学观察随干预时间延长,DDW组、DDW+PRP组较前相比,胰岛细胞在形态、数量、排列方式、染色颗粒分布情况均有明显改观。DDW+PRP组干预后7d、14d后TGF-β_1含量高于DDW组、PRP组,差异具有统计学意义(P0.05);而DDW组、PRP组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:低氘水联合富血小板血浆对2型糖尿病大鼠溃疡创面的愈合有显著促进作用,且低氘水对2型糖尿病大鼠胰岛细胞具有一定保护和修复作用。促进创面愈合机制可能与降低糖尿病大鼠随机血糖,改善胰岛细胞功能,提高创面组织中TGF-β_1含量有关。     

糖尿病大鼠膀胱中P物质、神经生长因子表达及氧化应激状态的研究

目的 研究糖尿病大鼠膀胱中P物质、神经生长因子(NGF)的表达及氧化应激状态的改变. 方法雄性Wistar大鼠分3组:对照组(n=10),糖尿病组(n=10),治疗组(n=10,糖尿病大鼠胃管注入太得恩(R),100 mg·kg-1·d-1).8周后取出膀胱,RT-PCR法检测膀胱组织中NGF表达,免疫组化方法检测P物质及一氧化氮合酶(iNOS)的表达,采用生化方法检测过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平.结果 糖尿病组膀胱组织中NGF mRNA表达水平中位值(0.35)显著低于对照组(2.77,P＜0.05),P物质表达水平(9.83)显著低于对照组(28.81,P＜0.05),CAT及SOD水平(11.46,7.16 U/mg蛋白)显著低于对照组(16.01,21.436 U/mg蛋白,P＜0.05),iNOS及MDA水平(67.50,15.97 nmol/mg蛋白)显著高于对照组(0,7.95 nmol/mg蛋白,P＜0.05).治疗组膀胱组织中NGF mRNA表达水平中位值(1.84)显著高于糖尿病组(P＜0.05),P物质表达水平(20.75)显著高于糖尿病组(P＜0.01),CAT及SOD水平(14.47,16.641 U/rag蛋白)显著高于糖尿病组(P＜0.05),iNOS及MDA水平(13.20,10.99 nmol/mg蛋白)显著低于糖尿病组(P＜0.05).结论 氧化应激存在于糖尿病大鼠膀胱.NGF、P物质在糖尿病膀胱中低表达.太得恩能增强糖尿病大鼠膀胱中NGF及P物质表达,改善氧化应激状态.     

双膦酸盐联合降糖药对2型糖尿病合并骨质疏松症大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-1的影响

目的观察研究双膦酸盐联合降糖药对2型糖尿病合并骨质疏松症大鼠BMP-2、TGF-β1和IGF-1表达的影响,以探讨其防治DOP的作用机制。方法 60只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、双膦酸盐组、降糖药组、联合组,构建2型糖尿病合并骨质疏松症大鼠动物模型并给予不同药物干预。分别检测糖代谢、骨密度和骨生物力学指标; RT-PCR和免疫组化分别检测骨组织BMP-2、TGF-β1、IGF-1mRNA和蛋白表达。结果双膦酸盐组、降糖药组、联合组血清FPG、2hBPG、Hb Alc较模型组均显著降低(P0.05);双膦酸盐组、降糖药组、联合组血清FINS较模型组显著升高(P0.05)。双膦酸盐组、降糖药组、联合组骨组织BMC和骨生物力学指标较模型组均显著升高(P0.05)。双膦酸盐组、降糖药组、联合组骨组织BMP-2、TGF-β1、IGF-1mRNA和蛋白表达较模型组均显著升高(P0.05)。结论双膦酸盐联合降糖药可能通过调控2型糖尿病合并骨质疏松大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-1表达,以改善糖代谢,增加骨密度和提高骨生物力学性能,发挥防治DOP作用。     

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。     

谷氨酰胺对多囊卵巢综合征大鼠氧化应激相关指标的调节作用

目的谷氨酰胺(Gln)干预多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠,探讨Gln对PCOS大鼠氧化应激状态的调节作用。方法将30只23日龄雌性SD大鼠随机分为PCOS组、PCOS+Gln组和对照组(10只/组),PCOS组和PCOS+Gln组每日颈部皮下注射脱氢表雄酮6mg/100g,连续注射20d,颈部皮下注射等量油剂作为对照组;造模后次日晨8:00,PCOS+Gln组腹腔注射Gln 0.75g/kg,间隔4h后再次注射与首次剂量相等的Gln,PCOS组及对照组腹腔注射等量生理盐水。首次腹腔注射后24h处死各组大鼠,对卵巢组织HE染色进行形态学分析,检测血激素T、LH、INS、FBG以及氧化应激指标MDA、SOD、NO、NOS的表达水平。结果血清激素检测结果显示,与对照组相比,PCOS组和PCOS+Gln组血清T、LH均显著升高(P均0.05);血清氧化应激指标检测结果提示,与对照组相比,PCOS组大鼠血清MDA、NO、NOS浓度均显著升高,SOD浓度显著下降(P均0.05);与PCOS组相比,PCOS+Gln组大鼠血清MDA、NO、NOS浓度均显著下降,SOD浓度显著升高(P均0.05)。结论 PCOS大鼠体内氧化与抗氧化失衡,谷氨酰胺能显著降低PCOS大鼠体内MDA、NO、NOS表达水平、显著升高SOD水平,改善PCOS大鼠氧化应激状态。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾保护机制的研究

目的探讨罗格列酮对糖尿病肾损害的保护作用机制。方法单次腹腔注射50mg/kg链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,糖尿病大鼠随机分成糖尿病组、罗格列酮治疗组(5mg·kg-1·d-1),和正常对照组。用免疫组化、RT-PCR及Western印迹的方法检测8周后过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、TGF-β1表达的改变。结果与正常对照组相比,糖尿病组及治疗组PPARγ及TGF-β1表达增加(P<0.05);而治疗组PPARγ及TGF-β1表达显著低于糖尿病组(P<0.05)。结论罗格列酮可通过活化PPARγ,下调TGF-β1,显著减少糖尿病大鼠尿蛋白,从而延缓肾脏损伤。     

低温微重力培养对大鼠胰岛细胞质量影响的实验

目的:研究低温微重力对大鼠胰岛移植质量的影响，以期减少体外培养对胰岛活性和数量的影响，提高胰岛移植质量。方法:将分离纯化的大鼠胰岛分为3组：大鼠新鲜胰岛移植组（于移植前在普通培养基中培养21 d,对照组）；实验1组（大鼠新鲜胰岛在37 ℃ RCCS中培养21 d）；实验2组（新鲜大鼠胰岛在26 ℃ RCCS中培养14 d后复温至37 ℃继续在37 ℃ RCCS中培养7 d）。　观察各种培养液中的胰岛素含量。并将上述3个实验组不同条件培养的胰岛分别以2000IEQ胰岛移植量植入糖尿病大鼠体内，并观察10周。结果:实验2组的胰岛存活率、胰岛素分泌水平及胰岛素刺激指数均高于对照组和实验1组，差异有统计学意义(P＜0.05)。21 d时实验2组胰岛存活率高达(67.4±4.6)%，而对照组和实验1组胰岛存活率分别降至(28.1±3.3)%和(50.3±3.5)%，3组间差异有统计学意义(P＜0.05)。给糖尿病大鼠移植实验1，2组的胰岛后均能控制血糖至正常水平，但实验2组胰岛移植对糖尿病大鼠7 d内血糖控制优于实验1组；对照组血糖控制差，3组间两两比较均有统计学差异（均P＞0.05）。结论:大鼠胰岛经低温微重力培养后移植，可以明显提高1型糖尿病大鼠的治疗效果。     

糖尿病大鼠阴茎海绵体CBS和CSE表达及其意义

目的:内源性硫化氢(H2S)是新发现的气体信号分子,对于平滑肌细胞的舒张具有重要的调节功能。本文探讨糖尿病(DM)大鼠阴茎海绵体组织H2S信号通路及其与DM勃起功能障碍(ED)的关系。方法:8周龄健康雄性SD大鼠20只,随机分成4组:正常对照4周组(A)、DM 4周组(B)、正常对照6周组(C)、DM 6周组(D)。采用腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)制作DM模型,对照组给予等量生理盐水腹腔注射。测定各组大鼠阴茎海绵体内压/平均颈动脉压(ICPmax/MAP),取阴茎标本测定组织内H2S浓度、免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白含量。结果:电压5V和7 V刺激盆神经节测定ICPmax/MAP比值,B组(0.19±0.03,0.29±0.04)较A组(0.46±0.07,0.68±0.09),D组(0.14±0.04,0.25±0.04)较C组(0.43±0.07,0.65±0.16)均显著降低(P0.05)。各组大鼠血清睾酮水平比较,B组[(359.08±60.06)ng/dl]与A组[(469.19±126.46)ng/dl]比较无显著差异性(P0.05),D组血清睾酮水平[(297.01±96.58)ng/dl]与C组[(470.44±209.28)ng/dl]比较无显著差异性(P0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度,B组较A组、D组较C组均显著降低(P均0.05)。阴茎海绵体组织内CBS和CSE蛋白表达量,B组较A组、D组较C组均显著降低(P0.05),D组较B组亦显著降低(P0.05)。结论:DM大鼠阴茎海绵体内H2S浓度降低、CBS和CSE表达下降,提示H2S信号系统可能与DM的ED病理机制相关。     

实验性多囊卵巢综合征大鼠脂肪组织中抵抗素基因的表达及其意义

目的研究脱氢表雄酮(DHEA)诱导SD幼年雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型的脂肪组织中抵抗素(resistin)mRNA的表达与其性激素变化及胰岛素抵抗(IR)的关系。方法以DHEA皮下注射21d龄SD雌性大鼠,观察卵巢重量及光镜(HE染色)、透视电镜下形态学改变,测定糖耐量、血清胰岛素、雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法检测脂肪组织resistinmRNA的表达。结果实验组卵巢重量显著高于对照组(P<0.05),实验组卵巢呈多囊样改变而黄体形成比例减少;实验组血清T、E2和空腹血糖、胰岛素水平明显高于对照组(分别为P<0.001、<0.05、<0.001、<0.05),空腹血胰岛素与空腹血糖乘积的倒数(1/FINS×FGC)显著高于对照组(P<0.05);PCOS大鼠白色脂肪组织resistinmRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论DHEA诱导的PCOS大鼠动物模型与PCOS患者相似,伴有IR现象;由白色脂肪组织分泌的resistin在PCOS发生机制中起部分调节的作用,并使PCOS的IR进一步加重。     

氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响

目的 利用比较蛋白质组学双向电泳技术研究体系来观察血管紧张素受体拮抗剂(ARB)氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响.方法 8周龄自发性2型糖尿病KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组(饮用水中喂入氯沙坦粉末10 mg+kg-1·d-1)和非治疗组;8周龄C57BL/6小鼠作为正常对照组.饲养12周后,经胸主动脉磁珠灌流分离肾小球,提取肾小球蛋白.DIGE最小荧光标记法标记,行二维荧光差异凝胶电泳.应用Typhoon多功能成像系统扫描凝胶,DeCyder 2D差异分析软件进行图像分析.采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质.结果 KKAy小鼠的体质量、血糖和尿白蛋白排泄率较正常对照C57BL/6小鼠显著升高(均P＜0.05),氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠尿白蛋白肌酐比[(539.71±100.23)mg/g比(728±177.19) mg/g]、肾小球基底膜增厚和系膜基质增生等肾脏病理损害,而对血糖无影响.通过DeCyder 2D差异分析软件,发现KKAy氯沙坦治疗组与KKAy非治疗组肾小球内表达差异大于1.1倍的蛋白质斑点62个.经肽质量指纹图分析,鉴定出41种蛋白质.其中表达上调的蛋白28种,包括甘油激酶、亚硫酸盐氧化酶、甘氨酸脒基转移酶、腺苷高半胱氨酸酶等;表达下调的蛋白质13种,包括3-巯基丙酮酸硫基转移酶、ATP合酶亚单位d、60 000热休克蛋白、线粒体应激蛋白70(又名75 000葡萄糖调节蛋白,GRP75)等.有6种蛋白在20周龄KKAy小鼠和C57BL/6小鼠肾小球内存在差异表达,氯沙坦治疗抑制了其在糖尿病状态下的表达变化,包括丙酮酸脱氢酶复合物的二氢硫辛酰赖氨酸残基乙酰基转移酶组分、琥珀酰辅酶A连接酶[GDP-形成]亚单位β、ATP合酶亚单位d、GRP75、核苷二磷酸盐结合部分X模体19和硒结合蛋白1.结论 氯沙坦可明显减轻KKAy小鼠尿白蛋白排泄率和肾脏病理损害;可抑制糖尿病状态下肾小球ATP合酶亚单位d、GRP75、硒结合蛋白1等蛋白的表达变化;可能通过减少线粒体活性氧簇产生,抑制氧化应激反应发挥其肾脏保护作用.     

胃转流术对2型糖尿病大鼠胰岛细胞胰岛素受体及胰岛素受体底物2表达的影响

目的：探讨胃转流术对2型糖尿病大鼠胰岛细胞中胰岛素受体（IRc）及胰岛素受体底物2（IRS-2）表达的影响。 方法：高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组和胃转流组,另取正常大鼠作为正常对照组,胃转流组大鼠行胃空肠吻合术加空肠侧侧吻合,模型组与正常对照组大鼠均行假手术。检测术前及术后8周大鼠空腹血糖、血清胰岛素,计算胰岛素敏感指数（ISI）,用免疫组化法检测胰腺组织IRc及IRS-2的表达。 结果：与正常对照组比较,模型组与胃转流组术前空腹血糖均明显升高,ISI均明显降低,但术后胃转流组两项指标均较模型组明显改善（均P<0.05）;各组胰岛素水平手术前后均无统计学差异（均P>0.05）。术后8周,胃转流组胰岛细胞IRc和IRS-2表达量均明显高于模型组（均P<0.05）,其中IRc表达量仍低于正常对照组（P<0.05）,但IRS-2表达量与正常对照组接近（P>0.05）。 结论：2型糖尿病大鼠胰岛细胞中IRc及IRS-2表达下调,而胃转流术能够使其表达显著增加,这可能是该手术产生对2型糖尿病产生疗效的机制之一。     

补肾方对自然衰老大鼠睾酮调节作用及机制研究

目的:探讨补肾方对自然衰老大鼠睾酮调节作用及机制,为临床治疗迟发性睾丸功能减退提供理论和实验依据。方法:将32只18月龄老年雄性SD大鼠随机分为4组,自然衰老模型组,补肾方低、中、高剂量组,每组8只;另选4月龄青年雄性SD大鼠8只作为正常对照。正常对照组、自然衰老模型组予生理盐水,补肾方低剂量、中剂量、高剂量组分别按生药量3.25、7.5、15.0 g/kg体重予中药复方连续灌胃,各组给药3周后处死。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠睾丸组织形态,放免法检测大鼠血清睾酮水平,RT-PCR法检测大鼠类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素胆固醇侧链裂解酶(P450 scc)、3β-羟类固醇脱氢酶Ⅰ(3β-HSDⅠ)mRNA的相对表达。结果:睾丸组织病理切片显示补肾方干预后大鼠睾丸间质细胞数目增多,补肾方低、中、高剂量组血清睾酮水平[(6.74±1.56)、(8.50±1.99)、(12.41±2.91)nmol/L]与自然衰老模型组[(3.48±0.75)nmol/L]比较显著提高(P<0.05),睾酮合成相关酶StAR、P450 scc、3β-HSDⅠmRNA相对表达(StAR:0.74±0.29、0.83±0.32、1.35±0.50;P450 scc:0.72±0.36、1.02±0.30、1.41±0.37;3β-HSDⅠ:0.58±0.14、0.72±0.07、0.85±0.18)与自然衰老模型组(StAR:0.44±0.09;P450 scc:0.33±0.05;3β-HSDⅠ:0.34±0.02)比较均提高,其中高剂量组StAR,中、高剂量组P450 scc、3β-HSDⅠ的表达与自然衰老模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:改善睾丸组织衰老的病理状态,提高睾酮合成酶表达可能是补肾方调节自然衰老大鼠睾酮水平的作用机制。     

雄激素缺乏对大鼠阴茎海绵体H2S信号通路的影响

目的:研究H2S信号通路在雄激素缺乏引起勃起功能下降中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成6组:假手术2周组(A组)、假手术4周组(B组)、去势2周组(C组)、去势4周组(D组)、去势后雄激素替代治疗2周组(E组)和去势后雄激素替代治疗4周组(F组)。E、F去势术后给予生理剂量丙酸睾酮3 mg/(kg·d)皮下注射。测定各组大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压(ICP)、平均颈动脉压(MAP),测定血浆和阴茎组织内H2S浓度,免疫组化和Western印迹检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白的表达。结果:血清睾酮水平结果显示C组[(0.63±0.15)nmol/L]较A组[(16.55±4.17)nmol/L]、E组[(18.99±4.62)nmol/L]显著降低(P0.05);D组[(0.70±0.22)nmol/L]较B组[(15.44±5.18)nmol/L]、F组[(20.99±6.41)nmol/L]显著降低(P0.05)。予以5、7 V电刺激盆神经后,ICP/MAP在C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度含量C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内CBS、CSE蛋白表达量,C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。C组较D组CBS、CSE蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论:阴茎海绵体组织CBS、CSE表达下降引起H2S信号通路受抑可能是雄激素缺乏引起大鼠勃起功能下降的机制之一。     

高脂高糖饮食暴露诱导大鼠多囊卵巢综合征研究

目的通过高脂高糖饮食诱导雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS),探讨其生殖和代谢特征。方法将23天断奶雌性大鼠随机分成两组:对照组接受正常饮食(对照组,n=18),实验组接受高脂高糖饮食(HFHS组,n=18),连续喂养14周。观察两组体重、动情周期和卵巢组织学变化,检测两组空腹血糖、空腹胰岛素、计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血脂水平、性激素水平。结果 HFHS组大鼠体重至第3周起显著高于对照组(P0.001),但两组卵巢重量无显著差异[(0.041±0.006)g vs.(0.045±0.005)g,P0.05]。HFHS组动情周期失去规律变化,发情期持续时间占整个发情周期时间的比例显著长大对照组[(0.46±0.06)vs.(0.27±0.03),P0.001]。HFHS组卵巢组织学检查发现多个囊状扩张卵泡、黄体数量下降。HFHS组空腹胰岛素、HOMA-IR、总胆固醇水平显著高于对照组(P0.001);发情间期HFHS组LH和E2水平显著低于对照组(P0.05),睾酮(T)水平显著高于对照组(P0.001);发情前期HFHS组LH和P水平显著低于对照组(P0.05),T和E2水平显著高于对照组(P0.001)。结论高脂高糖饮食诱导雌性大鼠PCOS,并产生代谢紊乱和卵巢改变,与PCOS患者临床观察到的相似。     

雄激素调控ERK1/2通路改善去势大鼠勃起功能的机制研究

目的:研究细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路在雄激素缺乏引起的勃起功能障碍(ED)中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(A组)、去势组(B组)、去势后补充雄激素组(C组)。B组和C组大鼠均手术去势,其中C组大鼠在去势1周后注射十一酸睾酮(TU)100 mg/kg,其余组则注射等量生理盐水。1个月后测各组大鼠血清睾酮浓度、平均颈动脉压(MAP)、阴茎海绵体内压(ICP),通过Western印迹检测大鼠阴茎海绵体ERK1/2、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白表达。结果:B组大鼠血清睾酮[(1.27±0.48)nmol/L]较A组[(17.14±1.07)nmol/L]和C组[(16.24±1.90)nmol/L]明显降低(P0.05),ICP/MAP比值B组较A组和C组明显下降(P0.05);Western印迹结果显示ERK1/2在各组中表达基本一致(P0.05),而磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(P-ERK1/2)在B组中表达高于A组和C组(P0.05),e NOS在B组中表达明显低于A组和C组(P0.05)。结论:雄激素可能通过调控ERK1/2通路改善去势大鼠的勃起功能。