靶向livin基因的短发夹状RNA联合顺铂对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,传统的治疗模式给患者带来了很大的痛苦,且宫颈癌对化疗药物存在耐药,其5年生存率仅为30%～50%,因此迫切需要研究出一种抗肿瘤效果好、副反应少的治疗方法.     

苦参碱联合顺铂对子宫颈癌SiHa细胞中TSLC1基因表达的影响

目的探讨苦参碱联合顺铂对人宫颈癌SiHa细胞肺癌肿瘤抑制因子1（TSLC1）基因的表达及SiHa细胞对顺铂敏感性的影响,以期对治疗宫颈癌提供依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）测定不同浓度苦参碱组（50、100、150、200、250μg／ml）、顺铂组（5、10、15、20、25μg／ml）和联合组（15μg／ml顺铂联合5种浓度苦参碱）干预SiHa细胞后的抑制率;采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术检测TSLC1 mRNA表达水平的变化。结果苦参碱及顺铂呈剂量依赖方式抑制SiHa细胞的生长,且随着各组浓度的增高,TSLC1 mRNA表达上调（P〈0．01）。不同浓度联合组对细胞的抑制率分别为39．35％、63．51％、68．74％、72．04％和74．31％,TSIC1 mRNA的表达量分别为8．59±0．01、15．33±0．01、26．38±0．07、61．34±0．01和92．33±0．01,与苦参碱组或顺铂组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱联合顺铂抑制人宫颈癌SiHa细胞生长的机制可能与TSLC1 mRNA的表达上调有关,且苦参碱能够增加SiHa细胞对顺铂的敏感性。     

槲皮素对子宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制

的凋亡.     

米非司酮对子宫颈癌SiHa细胞增殖及其顺铂敏感性的影响

米非司酮为强效孕激素及糖皮质激素拮抗剂,广泛用于终止早中期妊娠、扩张宫颈和紧急避孕等.随着对其深入研究发现,米非司酮在脑脊膜瘤、子宫平滑肌瘤、子宫内膜癌等的治疗中起着积极作用[1].本研究探讨了米非司酮对宫颈癌SiHa细胞增殖及其顺铂敏感性的影响,并探讨其可能机制.     

RNAi抑制宫颈癌HeLa细胞survivin基因及其对顺铂敏感性影响的研究

目的:利用RNA i技术抑制宫颈癌HeLa细胞株Survivin基因,观察HeLa细胞株的细胞凋亡率、survivin蛋白表达及对顺铂(DDP)药物敏感性的变化。方法:以培养的宫颈癌HeLa细胞株为体外研究模型,设脂质体组、对照组、RNA i组进行实验。(1)半定量RT-PCR,W estern blot法检测Survivin mRNA、蛋白在各组细胞中的表达;(2)用流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响;(3)用MTT法分析DDP对各组细胞存活率作用的浓度。结果:(1)RT-PCR检测结果显示,Survivin扩增条带(206bp)的亮度差异显著,RNA i组明显弱于脂质体组及对照组。RNA i组Survivin mRNA相对含量较质脂体组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);W estern blot检测各实验组Survivin蛋白的表达,脂质体组与对照组Survivin蛋白条带明显存在,且基本一致,而RNA i组同样位置的条带基本消失;(2)RNA i组细胞阻滞在G0/G1期,G/M期减少,与脂质体组和对照组分别比较,差异有统计学意义(P<0.01);(3)MTT比色法检测结果显示,不同浓度顺铂处理后脂质体组、对照组、RNA i组的IC50分别为(0.298±0.035)、(0.147±0.031)、(0.012±0.001),RNA i组HeLa细胞对顺铂的药物敏感性增高。两者相比差异有统计学意义(P=0.000)。结论:RNA i明显抑制了Survivin在转录及翻译水平的表达;RNA i抑制Survivin基因表达,能明显提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的药物敏感性。     

氯化镧对子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨氯化镧对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响,为寻找新的有效治疗宫颈癌的药物提供实验依据.方法 宫颈癌细胞株HeLa细胞经培养、传代后分为两组,即实验组(加入5、50、100 μmol/L的氯化镧)和对照组(未加入氯化镧).倒置显微镜下观察两组细胞的生长情况,激光共聚焦显微镜观察两组细胞核的形态变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTF)比色法检测两组细胞的增殖情况,双染色流式细胞仪检测两组细胞的凋亡率,体外迁移实验检测两组细胞迁移能力的变化,逆转录(RT)-PCR技术检测两组细胞中增殖、抗凋亡和迁移相关基因细胞周期蛋白(cyclinD1)、锌指蛋白(A20)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.结果 倒置显微镜下观察:实验组细胞随着氯化镧浓度的升高,细胞密度逐渐降低,细胞质内颗粒逐渐增多,颜色加深,细胞间隙增大,少量细胞变圆漂浮,脱落细胞也逐渐增多;而对照组细胞贴壁生长密集,形态清晰,胞质饱满,相邻细胞生长融合成片.激光共聚焦显微镜观察:实验组细胞核染色质浓聚边集,核体积变小,随着氯化镧浓度的升高,核染色质崩解,核膜破裂、核碎裂,直至细胞核完全碎裂;而对照组细胞核饱满,核膜完整.实验组细胞经不同浓度(5、50、100 μmol/L)的氯化镧作用后,细胞生长抑制率分别为24%、51%、78%,高于对照组(0),差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率分别为(4.91±0.39)%、(7.30±0.71)%、(13.48±0.92)%,高于对照组的(0.89±0.11)%,差异有统计学意义(P<0.01);穿膜细胞数分别为(22.2±4.3)、(12.0±3.2)、(7.8±2.6)个,低于对照组的(41.2±5.4)个,差异有统计学意义(P<0.01).实验组细胞中cyclinD1、A20及MMP-9 mRNA的表达强度随氯化镧浓度(5、50、100 μmol/L)的升高逐渐减弱.结论 氯化镧通过下调宫颈癌细胞中增殖、抗凋亡和迁移相关基因cyclinD1、A20及MMP-9 mRNA的表达,抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移并诱导其凋亡.     

大蒜油单独及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞生长影响的研究

目的 :探讨大蒜油对人宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用 ,以及大蒜油增加Hela细胞对顺铂的敏感性 ,以期对药物治疗宫颈癌以及其他肿瘤寻找更加完善的途径。方法 :体外培养人宫颈癌Hela细胞 ,分别用大蒜油、顺铂、大蒜油加顺铂处理 4 8小时 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测大蒜油和顺铂及两者联合应用对Hela细胞的生长抑制作用。结果 :大蒜油在浓度为 12 5mg/L、2 5mg/L、5 0mg/L、10 0mg/L时对Hela细胞的抑制率分别为 2 3 82 %、37 2 1%、5 2 2 5 %、6 7 6 9% ,与对照组 (加入等量培养液 )比较 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1)。顺铂在浓度为 0 5mg/L、1 0mg/L、2 0mg/L时对Hela细胞的抑制率为 38 13%、4 6 16 %、6 0 38%。两者合用可大大提高对Hela细胞的抑制作用 ,抑制率分别为 4 2 5 0 %、5 5 38%、6 6 98%、78 31% ,与单纯应用大蒜油或顺铂比较差异有非常显著性 (P <0 0 1)。结论 :大蒜油能抑制Hela细胞的生长 ,同时能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性。     

纳秒脉冲消融联合顺铂对人宫颈癌细胞Hela生长的影响及机制

目的:通过研究纳秒脉冲消融与顺铂对人宫颈癌细胞Hela的体外作用,探讨低剂量纳秒脉冲电场联合低浓度顺铂之间的相互作用及机制。方法:采用CCK8法检测纳秒脉冲消融、顺铂对细胞增殖的影响,选取低于半抑制率(IC_(50))的低剂量(6个、12个)脉冲电场和低浓度(1μg/ml、2μg/ml)顺铂,CCK8法检测两者联合后的抑制率,计算联合作用指数(IC值),取IC值最低时的脉冲次数和顺铂浓度,将实验分为对照组、单纯脉冲电场组、单纯顺铂组和脉冲电场联合顺铂组,Annexin V/PI双染细胞后流式细胞仪检测凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达。结果:纳秒脉冲消融与顺铂均抑制细胞生长,低剂量脉冲电场和低浓度顺铂的联合作用指数均0.9,表明两者有协同作用,脉冲电场联合顺铂组的凋亡率最高(P0.05),且该组Bax蛋白表达最高,Bcl-2蛋白表达最低(P0.05)。结论:低剂量脉冲电场联合低浓度顺铂具有协同作用,其中12个脉冲联合2μg/ml顺铂对肿瘤细胞抑制最显著,其机制可能与Bax高表达,促进细胞凋亡有关。     

小剂量顺铂增强放疗诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的 :实验研究小剂量顺铂增强放疗诱导HeLa细胞凋亡的作用。方法 :将细胞分为单纯放疗组、单纯化疗组、放疗加化疗组和空白对照组 4组 ,采用TUNEL法分别检测各组细胞的凋亡率。结果 :单纯放疗、化疗都可诱导HeLa细胞凋亡 ,顺铂 (化疗 )可以明显增强放疗诱导的细胞凋亡。结论 :小剂量顺铂可明显增加放疗诱导的HeLa细胞凋亡 ,为临床应用小剂量顺铂使放疗增效提供了理论依据     

外源性FHIT基因表达对顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因表达与顺铂(cisplatin,DDP)是否可协同促进宫颈癌SiHa细胞的凋亡。方法:重组质粒PRcC-MV-FHIT(A组)及空质粒PRcCMV(B组)分别转染无内源性FHIT蛋白表达的SiHa细胞(未转染SiHa细胞为C组),Western Blot检测外源性FHIT蛋白的表达,使用不同浓度的顺铂分别处理各组细胞,通过AO-EB染色、流式细胞术检测顺铂处理后各组细胞的凋亡。结果:顺铂处理48h后进行流式细胞仪检测,重组质粒+DDP2.0μg/ml、未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组凋亡率分别为51.03%、20.58%、22.07%,重组质粒+DDP组细胞凋亡更明显(重组质粒+DDP2.0μg/ml组与未转染细胞+DDP2.0μg/ml及未用顺铂处理的重组质粒组相比P<0.01),AO-EB染色亦见顺铂处理的重组质粒组凋亡细胞明显增多。结论:外源性FHIT基因表达与顺铂协同促进SiHa细胞凋亡,为基因治疗与化疗联合治疗宫颈癌提供理论基础。     

紫杉醇诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究紫杉醇对人宫颈癌Hela细胞的作用。方法将紫杉醇处理Hela细胞后，用MTT法测定宫颈癌Hela细胞的生长抑制率。光镜下观察细胞凋亡形态的改变。流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率，流式细胞仪检测bcl-2水平，TRAP法测定端粒酶活性的变化。结果0．01—1μmol/L的紫杉醇能引起Hela细胞的凋亡。表现为Cz／M期阻滞，且呈时间依赖性及剂量依赖性。紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调和bcl-2表达水平下降。结论紫杉醇诱导宫颈癌Hela细胞凋亡，并抑制端粒酶活性，bcl-2参与了紫杉醇诱导的宫颈癌细胞凋亡过程中端粒酶活性的调控。这一机制将为临床治疗提供理论依据。     

紫杉醇联合顺铂对局部晚期宫颈癌的疗效研究

目的:研究新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NACT)紫杉醇联合顺铂方案(TP)对局部晚期宫颈癌的近期疗效,分析化疗前后细胞核增殖抗原PCNA及凋亡抑制基因Survivin的变化,探讨其对宫颈癌的治疗意义.方法:手术前行新辅助化疗的宫颈癌患者30例为研究组,直接手术的20例患者为对照组,分析近期疗效.应用免疫组化方法检测宫颈癌组织的PCNA及Sur-vivin表达.分析其改变与化疗的关系和意义.结果:①研究组TP方案的总有效率为70%;②研究组TP方案盆腔淋巴结转移率(3.3%)显著低于对照组(25.0%);③临床有效组的PCNA高表达率及Survivin阳性率在NACT后明显降低(P<0.05),临床无效组则无明显变化(P>0.05).结论:新辅助化疗,TP方案对局部晚期宫颈癌有效,可降低盆腔淋巴转移率,化疗有效者的PCNA及Survivin表达明显降低,可能成为评价TP方案疗效的指标.     

川芎嗪联合顺铂对小细胞肺癌细胞的影响分析

目的：进一步研究顺铂、川穹嗪对于小细胞肺癌细胞的治疗作用以及影响分析。方法：在含小牛血清10％的培养液R．PM11640,进行细胞株NCI—H446的培养。结果：相比于对照组,顺铂纽、川穹嗪组、顺铂川穹嗪组的P16表达水平升高,顺铂川穹嗪组的P16表达水平又高于顺铂组、川穹嗪组。顺铂组、川穹嗪组、顺铂川穹嗪组的CyclinD1表达水平下降。顺铂川穹嗪组的CyclinD1表达水平又高于顺铂组、川穹嗪组。结论：顺铂、川穹嗪都可以对NCL—H446细胞增殖起到抑制作用,两种药物的联合使用效果更加明显。与此同时,还可以降低小细胞肺癌的CyclinD1水平,提高P16表达水平。     

IL-24基因联合顺铂对人宫颈癌Siha细胞淋巴转移抑制作用的研究

目的:研究IL-24基因与顺铂(DDP)联合应用对宫颈癌裸鼠移植瘤淋巴转移的抑制作用。方法:构建宫颈癌Siha细胞裸鼠淋巴转移模型,按治疗方案将动物模型分为5组:PBS组、p DC316空质粒组、p DC316-h IL-24质粒组、顺铂组、联合组(p DC316-h IL-24质粒联合顺铂)。Western blot法检测各组转移淋巴结中小窝蛋白(Caveolin-1)及VEGF-D表达水平,比较各组Caveolin-1 VEGF-D表达水平及淋巴结转移数。结果:重组质粒p DC316-h IL-24成功转染并表达。联合组的淋巴转移总数最低,为1.57±0.79,差异有统计学意义(P0.05);VEGF-D表达下调(0.13±0.01),Caveolin-1表达上调(0.74±0.02)。结论:IL-24基因联合顺铂可通过下调VEGF-D和上调Caveolin-1表达进而抑制Siha肿瘤细胞淋巴转移能力,其抑制淋巴结转移的效果优于单独使用顺铂。     

STAT3抑制剂HO-3867与顺铂单独或联合使用对子宫颈癌HeLa细胞生物学行为影响的研究

目的:确定转录活化因子3(STAT3)抑制剂H0-3867与顺铂单独或联合使用对子宫颈癌He-La细胞生物学行为的影响,并探索其作用机制.方法:培养子宫颈癌HeLa细胞,采用噻唑蓝(MTF)法检测不同浓度的H0-3867(0～10 μmol/L)和顺铂(0～20μg/ml)对HeLa细胞增殖的影响,根据结果确定实验浓度...     

顺铂对小鼠宫颈癌局部CD8~+T细胞的影响及可能机制

目的:探讨顺铂对小鼠宫颈癌局部CD8~+T细胞的影响及可能机制。方法:建立TC-1肿瘤细胞C57BL/6小鼠模型,分为对照组(4只)和顺铂组(4只),对照组给予磷酸盐缓冲溶液(PBS)100μl,顺铂组给予顺铂5 mg/kg,两组均腹腔注射,3天1次,共2次。免疫组化方法检测两组肿瘤组织中CD8阳性T细胞(CD8~+T)、程序性凋亡配体1(PD-L1)的表达,并对小鼠宫颈癌组织中CD8~+T细胞与PD-L1表达的相关性进行分析,同时采用流式细胞仪检测并比较两组脾单核淋巴细胞中CD4~+CD25~+T调节细胞(Treg)数量比例。结果:①顺铂组模型小鼠宫颈癌组织中CD8~+T表达的MOD值为3.24±0.39明显低于对照组4.70±0.28,差异有统计学意义(P0.05);顺铂组PD-L1表达的MOD值为7.65±1.82高于对照组2.89±0.70,差异有统计学意义(P0.05)。②小鼠肿瘤组织中CD8~+T细胞与PD-L1表达呈负相关(r=-0.61,P0.05)。③顺铂组小鼠脾脏内单核淋巴细胞中Treg细胞数量(71.50±4.04)%低于对照组(87.00±6.06)%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:顺铂可增加宫颈癌组织PD-L1表达,减少宫颈癌组织局部CD8~+T细胞数量,抑制机体免疫内环境,并且顺铂对机体免疫的抑制作用可能并不来源于对Treg细胞的影响。应用PD-L1抗体阻断顺铂诱发的PD-L1表达可能可促进顺铂的化疗效果。     

小剂量顺铂化疗联合放射治疗对实验性人子宫颈癌传代细胞增效作用的研究

目的 :研究小剂量顺铂化疗联合放疗对实验性人子宫颈癌传代细胞 (HeLa细胞 )的增效作用。方法 :将裸鼠分为空白对照、单纯放疗组、单纯化疗组和放疗加化疗 4组 ,分别观察各组肿瘤的生长情况 ,并绘制生长曲线。结果 :单纯放、化疗均可使HeLa细胞肿瘤生长受到抑制 ,药物加放疗组与其他两组差异有高度显著性 (P <0 .0 1)。上述三组肿瘤生长抑制率分别为 69.4 8%、77.31%及 90 .2 4 %。结论 :小剂量顺铂可明显增加放疗的敏感性 ,为临床小剂量顺铂化疗联合放疗的增敏提供了依据     

奈达铂或顺铂联合紫杉醇应用于宫颈癌辅助化疗的比较分析

目的:探讨奈达铂在宫颈癌化疗中的临床应用价值。方法:收集2012年1月至2013年12月间在安徽省立医院妇科接受术后辅助化疗的宫颈癌患者资料。选取ⅠB1期~ⅡB期,且术后病理检查提示为宫颈鳞状细胞癌的患者。根据其与紫杉醇联合化疗中选用铂类药物的不同,分为奈达铂组(NDP组)与顺铂组(DDP组)。对两组患者的化疗毒副反应、治疗费用、住院时间进行比较。结果:符合标准的患者共82例,NDP组39例,中位年龄45岁;DDP组43例,中位年龄43岁。NDP组共行化疗156疗程,DDP组共行化疗170疗程。NDP组患者恶心、呕吐的发生率为18.59%,明显低于DDP组(58.82%)(P0.05)。白细胞减少(43.59%vs 32.35%)、血小板减少(26.92%vs8.82%)发生率高于DDP组(P0.05)。NDP组与DDP组患者人均每次化疗住院费用分别为4970.05±405.00元与4242.26±826.00元,两者差异无统计学意义(P0.05)。NDP组与DDP组平均住院天数分别为3.00±0.63天与4.73±0.78天,两者差异有统计学意义(P0.05)。结论:铂类药物联合紫杉醇为宫颈癌患者化疗的一线方案,NDP组较DDP组的胃肠道毒性更低,骨髓抑制虽然增加但可控。采用NDP化疗较DDP缩短了住院时间,且住院费用并无显著升高,更易被患者接受。     

硼替佐米联合顺铂对卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞化疗敏感性的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂--硼替佐米联合顺铂作用于卵巢上皮性癌(卵巢癌)顺铂耐药细胞的效果,并探讨其诱导细胞凋亡的分子学机制.方法 实验分组:硼替佐米(50 nmol/L)+顺铂(40μmol/L)、硼替佐米(50 nmol/L)、顺铂(40 μmol/L)、对照组(未加药物),以未加药物和细胞,仅加培养基为空白对照(空白组).采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定各组卵巢癌顺铂耐药细胞株C13细胞培养不同时间(12、24、36、48、60及72 h)后的增殖活性(以细胞存活率表示),膜联蛋白-碘化丙啶双染色法流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;并采用蛋白印迹法检测各组细胞内凋亡抑制蛋白短亚型(cFLIPs)蛋白的表达水平,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)活性检测试剂盒检测各组细胞内caspase-8的活性.结果 硼替佐米+顺铂组细胞显示较好的抑制效果,作用12、24、36、48、60及72 h时其细胞存活率分别为(56.0±8.4)%、(44.7±7.3)%、(33.7±11.2)%、(27.6±8.0)%、(27.6±7.6)%和(28.1±2.4)%,均明显低于顺铂组各时间点(P<0.05).作用24 h时,顺铂、硼替佐米、硼替佐米+顺铂组细胞凋亡率分别为(16.7±l.7)%、(23.4±2.1)%和(26.9±1.6)%,硼替佐米+顺铂组明显高于顺铂或硼替佐米组(P<0.05).各药物处理组细胞内cFLIPs蛋白表达水平均不同程度下降,以硼替佐米+顺铂组[(43.2±2.3)%]降低最为明显,分别与顺铂、硼替佐米组[分别为(75.7±3.0)%、(67.9±2.1)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05).顺铂、硼替佐米和硼替佐米+顺铂组细胞内caspase-8活性分别为2.3±1.0、4.2±0.9和5.6±1.6,两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 蛋白酶体抑制剂--硼替佐米联合顺铂能增强卵巢癌顺铂耐药细胞的化疗敏感性;由药物作用后cFLIPs表达的降低和caspase-8活性的增强推测,cFLIPs/capsspe-8信号传导通路在硼替佐米联合顺铂诱导细胞凋亡中发挥了重要作用.