过表达Cdh1蛋白对高糖诱导的视网膜Müller细胞株GFAP表达的影响

目的 探讨过表达Cdh1蛋白对高糖诱导的视网膜Müller细胞株GFAP表达的影响.方法 培养的Müller细胞分为4组:对照组(Control)、高糖组(HG group,30 mmol/L葡萄糖)、Cdh1过表达组(Cdh1,30 mmol/L葡萄糖+过表达Cdh1蛋白的慢病毒载体)、病毒阴性对照组(NC-Cdh1,30 mmol/L葡萄糖+慢病毒载体稀释液),显微镜下观察Müller细胞一般生长状况,免疫荧光检测GFAP在Müller细胞的表达情况,Western blot检测Müller细胞GFAP及Cdh1蛋白的相对表达.结果 HG组和NC-Cdh1组GFAP表达水平明显高于Control组,Cdh1明显低于Control组(P＜0.05);Cdh1组GFAP表达水平明显低于HG组,Cdh1高于HG组(P＜0.05),而HG组和NC-Cdh1组之间无统计学意义(P＞0.05).结论 过表达Cdh1蛋白下调高糖诱导的视网膜Müller细胞GFAP表达,对高糖诱导的Müller细胞损伤起到保护作用.     

脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的：检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预急性高眼压后大鼠视网膜 Müller 细胞谷氨酰胺合成酶(GS) 和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达的变化,探讨 BDNF 保护节细胞(RGCs)的可能机制。方法：成年大鼠分为3个 BDNF 干预组和3个溶媒对照组并进行玻璃体内注射。2 d 后将预处理动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图 b 波消失的临界眼压且维持缺血60 min。实验动物分别存活1、3或7 d 后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜 GS 和 GLAST 的表达变化。结果：与正常对照组比较,溶媒对照组 GS 和 GLAST 在存活1 d 和3 d 时表达上调,7d 时下降;BDNF 干预组未出现表达明显变化。结论：BDNF 可能不是通过 Müller 细胞上调 GS 和 GLAST,降低胞外 Glu 来保护 RGCs。     

GMFB在高糖处理的Müller细胞中的表达及其对Müller细胞的影响

目的:利用高糖处理Müller细胞,研究高糖条件下胶质细胞成熟因子B(glia maturation factor-β,GMFB)的表达情况和GMFB对Müller细胞的影响,揭示GMFB细胞在糖尿病视网膜病变中可能的作用机制,为糖尿病视网膜病变的治疗提供新的策略。方法:(1)用25mmol/L葡萄糖处理Müller细胞0,1,2,4和6 h,采用Western Blot检测GMFB的表达;(2)用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染Müller细胞后,1μg/ml重组蛋白GMFB处理Müller细胞0,2,4,8,12 h,采用Western Blot和免疫荧光检测自噬情况;(3)1μg/ml GMFB处理Müller细胞24 h为实验组,以未处理组作为对照组,进行RNAseq,检测其基因差异表达谱,选取其中表达差异大于1.5倍且P0.05的基因作为差异表达的基因,对其进行基因本体论(gene ontology,GO)分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果:(1)经高糖处理的Müller细胞早期出现GMFB表达上调,以2 h处理组的GMFB上调最为显著,提示高糖刺激早期能引起Müller细胞的GMFB表达升高;(2)重组蛋白GMFB处理Müller细胞后,Western Blot在第4 h检测到自噬被诱导,但很短暂。我们在24 h用免疫荧光检测,没有发现红绿荧光强度变化,提示双标自噬系统检测未检测到自噬发生,可能与不同检测方法的敏感性不同有关。(3)对GMFB处理24 h的Müller细胞抽提总RNA,进行RNAseq检测,显示在被检测的14411个基因中,实验组和正常组间有显著差异表达的基因有152个。与对照组相比,实验组基因表达显著上调的有103个,下调的有44个。通过GO分析表明,GMFB与细胞代谢、细胞催化等生物过程相关。KEGG分析进一步发现GMFB与细胞黏附分子、轴突导向和胞质DNA感受通路等多条信号通路密切相关。同时,炎症基因IL-33表达降低,提示GMFB有神经保护的作用。结论:GMFB在高糖诱导的Müller细胞中表达明显上调,说明GMFB可能影响细胞间连接,参与炎症反应信号通路等。该工作为理解GMFB在糖尿病视网膜病变中的作用机制提供了有益的线索。GMFB在糖尿病视网膜病变的作用机制需要进一步验证。     

N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化

目的:建立N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N nitrosourea,MNU)损伤视网膜的模型,研究视网膜神经元凋亡对Müller细胞生物学特性的影响及神经营养因子的表达变化。方法:腹腔注射MNU建立视网膜损伤模型,免疫荧光染色方法研究感光细胞缺失对Müller细胞的生物学特性的影响,并检测主要神经营养因子表达的变化。结果:TUNEL法显示,腹腔注射MNU后2 d,视网膜外核层细胞凋亡现象明显。核增殖抗原(PCNA)及细胞周期素CyclinD_1的表达明显增高。与此同时,Müller细胞也开始表达神经干细胞抗原巢蛋白(nestin);RT-PCR显示胰岛素样生长因子(IGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达均升高。结论:在视网膜受到损伤时,Müller细胞增殖、去分化呈现出干细胞的特性。而视网膜中IGF、bFGF和HGF等细胞因子的表达明显增高,提示视网膜损伤后可能通过大量分泌细胞生长因子,促进Müller细胞的增殖。     

胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞VEGF变化影响的研究

目的:观察在不同浓度胰岛素条件下,体外培养的兔视网膜Müller细胞的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的变化.方法: 采用免疫细胞化学法和ELISA方法,定性定量测定不同浓度胰岛素条件下体外培养的兔视网膜Müller细胞VEGF的表达. 结果:胰岛素能明显增强VEGF的表达. 结论: 高浓度胰岛素可增强Müller细胞VEGF的表达,这种VEGF表达水平的升高可能是胰岛素促进糖尿病视网膜病变的因素之一.     

勿动蛋白受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的探讨勿动蛋白受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)SD大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及可能机制。方法链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组:对照组,DM组,siNgR组(玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列),siRNA空白组(玻璃体内给予阴性核苷酸序列)。1个月后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.69±0.51、7.18±0.87、6.52±1.27及3.08±0.48 nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(p0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(p0.05)。结论 NgR过表达是糖尿病视网膜RGC凋亡的原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达相关。     

Nestin 和GFAP在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达及高氧治疗的作用

目的： 探讨巢蛋白（nestin）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及高氧治疗对其表达的影响。方法: 制作大鼠缺氧模型及缺氧后高氧治疗模型,行眼球矢状位切片及视网膜铺片,行GS/nestin、GS/GFAP、GFAP/nestin免疫荧光双标染色。结果: 正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色,GFAP阳性染色仅位于星形胶质细胞上。缺氧后,在Müller细胞和星形胶质细胞上出现了nestin的表达,GFAP的表达没有明显变化。高氧治疗后,nestin在Müller细胞上的表达明显减弱,但在星形胶质细胞上仍有较强的表达。GFAP仍然只在星形胶质细胞上表达。结论: Müller细胞和星形胶质细胞针对缺氧损伤和高氧处理发生不同的细胞骨架蛋白重塑,这与它们和视网膜神经节细胞以及视网膜血管在解剖和功能关系上的差异有关。     

糖基化终末产物对培养的兔视网膜Müller细胞bFGF表达的影响

目的:观察在不同剂量糖基化终产物(AGEs)条件下,对体外培养的视网膜Müller细胞碱性成纤维生长因子(b FGF)表达的影响及其机制。方法:采用免疫细胞化学及透射电镜方法鉴定体外培养的兔视网膜Müller细胞;应用免疫细胞化学方法半定量观察640μl/2 000μl AGEs条件下视网膜Müller细胞b FGF表达的变化;利用RT-PCR技术观察AGEs、PKC抑制剂Calphostin C对视网膜Müller细胞b FGF mRNA表达的影响。结果:640μl/2 000μl AGEs可刺激视网膜Müller细胞表达b FGF,Calphostin C可明显抑制AGEs引起的b FGF mRNA表达的增加,在浓度为50 nmol/L时其抑制作用最强。结论:AGEs刺激Müller细胞b FGF的表达,发挥促血管生成的作用,b FGF mRNA的表达可能是通过激活PKC途径实现的。     

Müller细胞在增殖性糖尿病视网膜病变中的最新研究进展

Müller细胞是脊椎动物视网膜中的主要胶质细胞, 其纵向跨越整个视网膜, 几乎与视网膜中的每一种细胞类型都有接触。因其独特的定位, 可以参与维持视网膜内稳态所需的各种功能。增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy, PDR)是糖尿病的眼部并发症, 在炎症的作用下内皮细胞、神经元和神经胶质细胞之间相互作用造成眼底微血管病变。在PDR中, Müller细胞经历反应性胶质增生, 一方面起到保护视网膜的作用, 另一方面, 由于炎性细胞因子/趋化因子的水平升高, 可导致瘢痕和视网膜新生血管形成, 损害玻璃体。由此可见, Müller细胞胶质化对于视网膜有着双重作用。另外, Müller细胞表达低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(low density lipoprotein receptor associated protein 1, LRP1), LRP1对新生血管和炎症有着密切联系。对Müller细胞、PDR玻璃体和LRP1展开研究可能为"趋利避害"提供新思路。     

生后小鼠不同年龄阶段视网膜片层化及胶质细胞发育特点

目的:观察小鼠视网膜片层化过程中胶质细胞增殖及与双极细胞分化的关系。方法:各个年龄小鼠共计123只。应用免疫荧光和HE染色法对各个年龄的小鼠视网膜形态结构及胶质细胞的增殖、分化进行观察。结果:星形胶质细胞按照离心型的模式发育,P0时仅在视乳头和邻近周围区域出现幼稚的星形胶质细胞,尔后细胞突起相互缠绕形成的网状联系中出现中空"管样"结构,细胞形态呈现典型的星状外形,类似血管网的脉络。P6时小鼠视网膜Müller细胞零星的表达GS,双极细胞也开始表达少量的PKC-α,尔后Müller细胞GS阳性表达逐渐增加,而PKC-α阳性细胞伸向节细胞层的轴突更加密集,树突和胞体的数量也增多,P14时双极细胞的发育过程基本完成。同时,小鼠视网膜GS和PKC-α双标记,发现Müller细胞内、外突上发出许多细小的侧突与双极细胞的胞体相接触,提示Müller细胞在双极细胞的分化、迁移过程中伴着很重要的角色。结论:在小鼠视网膜片层化过程中,胶质细胞起着关键性作用,Müller细胞在双极细胞的分化、迁移过程中起重要作用。     

Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压致大鼠视网膜损伤中作用

 目的 观察Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压(AOH)大鼠视网膜中变化及其抑制对视网膜损伤的影响。方法 建立大鼠AOH青光眼模型,分为正常对照(Ctrl)、AOH和AOH+玻璃体内注射胶质毒素α-氨基己二酸(AAA)后再灌注1、3和5d组,以及单纯AAA和AOH+PBS对照组。TUNEL染色检测细胞凋亡,GFAP免疫荧光染色反应Müller细胞反应性胶质化程度,Thy-1染色标记视网膜神经节细胞(RGCs)。结果 AOH可致大鼠视网膜内丛状层和内核层明显变薄、神经节细胞层内细胞排列紊乱和数量减少,并诱发Müller细胞反应性胶质化(GFAP表达增加)。同时,AAA抑制Müller细胞反应性胶质化可明显缓解AOH所致RGCs丢失和凋亡发生。结论 Müller细胞反应性胶质化参与AOH所致视网膜损伤,抑制其反应性胶质化可能是改善高眼压性青光眼视网膜病变的一种有效治疗方法。     

葛花总黄酮通过调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨葛花总黄酮(total flavonoids of Pueraria lobate,TFF)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响及机制.方法 雄性SD大鼠60只,利用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型.糖尿病大鼠随机分成三组:糖尿病组(DM)、TFF组(200 mg/kg)及二甲双胍组(Met,75 mg/kg,阳性对照)灌胃治疗,另取15只正常大鼠作为对照组(CON).12周后,检测各组大鼠血糖、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;HE染色检测大鼠RGC数量,免疫组织化学染色及Western blot检测大鼠视网膜ECH相关蛋白1(ECH-associated protein 1,Keap1)、核因子NF-E2相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor-2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达.结果 与CON组相比,DM组血糖、MDA含量、Keap1及Nrf2表达明显增加,SOD活性及HO-1表达明显下降.而经过12周治疗后上述表现均有明显改善.结论 TFF通过降低血糖,增强大鼠视网膜的抗氧化能力,保护糖尿病状态下的RGC损伤,与调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路有关.     

星形胶质细胞在糖皮质激素诱发糖尿病神经病理性痛中的作用

目的探讨星形胶质细胞在糖皮质激素诱发糖尿病神经病理性痛中的作用及可能的机制。方法利用链脲佐菌素诱导SD大鼠糖尿病模型,鞘内置管。实验分3组,对照组,糖尿病组(不给予RU486,糖皮质激素受体阻断剂),RU486组(糖尿病大鼠鞘内注射RU486)。4周后检测大鼠血糖及痛阈变化,免疫组化检测脊髓背角星形胶质细胞形态学变化,Western blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP,星形胶质细胞活性标志物)及磷酸化Jun氨基末端激酶(p-JNK)表达变化。结果与对照组相比,糖尿病组及RU486组大鼠血糖显著升高(0.01)P,糖尿病组脊髓背角星形胶质细胞胞体增大、突起延长,明显活化,而RU486组变化不明显。与对照组相比,糖尿病组痛阈降低,GFAP及p-JNK在脊髓表达减少(均0.01),RU48P6组接近对照组(P0.05)。结论 P糖皮质激素通过血糖非依赖机制活化星形胶质细胞,激活JNK信号通路参与DNP的发生。     

基质金属蛋白酶抑制剂-1减轻糖尿病小鼠视网膜损伤

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)对糖尿病小鼠视网膜的保护作用及机制。方法将96只6~8周龄C57bl小鼠随机分为对照组、糖尿病组和TIMP-1干预组[糖尿病造模后第1和2个月玻璃体腔注射5μL TIMP-1(1 mg/L)各1次]。5个月后进行视网膜灌注铺片检测渗漏,Western blot和RT-q PCR分别检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和环氧合酶-2(COX-2)mRNA及蛋白表达,用生化法检测视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。结果对照组视网膜无渗漏,糖尿病组视网膜渗漏明显高于TIMP-1干预组(P0.01)。糖尿病组视网膜MMP-9、VEGF、TNF-α、COX-2 mRNA与蛋白表达水平以及MDA含量均明显高于对照组(P0.01),TIMP-1干预组则显著回降(P0.01),但仍高于对照组(P0.01);糖尿病组视网膜SOD、GSH-Px活性明显低于对照组(P0.01),TIMP-1干预组则显著回升(P0.01),但仍低于对照组(P0.01)。结论 TIMP-1能够通过减少氧化应激与VEGF表达对糖尿病小鼠视网膜起保护作用。     

斯钙素2在糖尿病视网膜病变中的表达和意义

目的:研究斯钙素2(STC2)在糖尿病视网膜病变(DR)大鼠玻璃体组织中的表达水平,并探究其与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照(control)组和DR组,DR模型通过注射链脲佐菌素构建而成。RT-qPCR、Western blot和ELISA检测大鼠玻璃体中STC2和VEGF的表达水平;用VEGFA处理大鼠视网膜神经节细胞,RT-qPCR、Western blot和ELISA检测STC2的表达水平;用STC2蛋白处理大鼠视网膜神经节细胞,RT-qPCR、Western blot和ELISA检测VEGF的表达水平,免疫共沉淀检测VEGF与STC2的相互作用。结果:相对于control组,DR模型大鼠玻璃体中STC2的mRNA和蛋白水平显著升高,VEGF的表达水平也显著升高(P0.01),两者呈正相关;VEGFA可以诱导大鼠视网膜神经节细胞中STC2的表达,并促进其分泌;STC2蛋白可以诱导大鼠视网膜神经节细胞中VEGF的表达和分泌,并且VEGF与STC2存在蛋白相互作用。结论:STC2在DR大鼠玻璃体中表达显著升高,并且其表达与VEGF紧密相关。     

袖状胃减容术对2型糖尿病大鼠肝脏Nrf2介导的氧化应激反应的影响

目的观察袖状胃减容术对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用,初步探讨其作用机制。方法 SPF级SD大鼠45只,采用腹腔注射STZ法诱导2型糖尿病大鼠模型,模型成功后随机分为2型糖尿病大鼠模型组(DM组)、袖状胃减容术干预组(SG组),假手术组(Sham组),术后连续观察8周,ELISA法检测各组大鼠肝损伤标志物ALT、AST及氧化应激细胞因子MDA、SOD、GSH表达水平,HE染色观察病理学变化,Western blot及qPCR法检测Nrf2、HO-1表达水平。结果 STZ诱导后的糖尿病大鼠,于8w后出现明显的肝功能损伤及氧化应激反应,血清ALT、AST、MDA含量明显升高,SOD、GSH含量明显降低,病理学可见肝脏组织结构模糊,肝小叶内出现局灶性坏死,部分肝细胞颗粒样变性。袖状胃减容术术后8w,SG组大鼠肝功能明显得到改善,血清ALT、AST、MDA含量明显降低,SOD、GSHSD明显升高,同时上调Nrf2、HO-1的表达水平。结论袖状胃减容术改善糖尿病大鼠机体内高糖环境下肝功能损伤,与其上调Nrf2、HO-1的表达,抑制肝脏氧化应激反应相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对2型糖尿病大鼠GLUT2/G6PD/GS表达和血糖调节的研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否通过葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)-葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)-糖原合酶(GS)途径改善2型糖尿病大鼠血糖。方法:采用高脂饲养+小剂量链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病SD大鼠模型,成模后采用数字随机法分为糖尿病模型(M)组、二甲双胍(Met)组、EGCG低剂量(EL)组和EGCG高剂量(EH)组,另设正常对照(Con)组,每组10只,治疗组给予相应药物干预8周,其余2组均灌服生理盐水(0.1 mL/kg),8周后处死大鼠,收集血液和肝脏组织。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)和糖化血红蛋白;采用PAS染色检查肝糖原含量;real-time PCR检测G6PD mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测GS和GLUT2蛋白水平。结果:成功建立2型糖尿病大鼠模型。与Con组比较,M组大鼠FBG、FINS和糖化血红蛋白明显升高(P0.05),胰岛素敏感指数(ISI)、肝糖原含量、G6PD mRNA表达水平、GS蛋白表达水平和GLUT2蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。与M组比较,给药组大鼠FBG和糖化血红蛋白水平显著降低(P0.05),ISI、肝糖原含量、G6PD mRNA表达水平、GS蛋白表达水平和GLUT2蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。结论:EGCG对2型糖尿病大鼠有显著的降血糖作用,其机制可能与GLUT2-G6P-GS信号通路有关。     

灯盏花素对人视网膜色素上皮细胞和糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的:观察灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19中VEGF、VEGFR2和pERK蛋白的表达及对2型糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响。方法:培养ARPE-19细胞,分为对照组、灯盏花素组、高糖组和高糖+灯盏花素组,ELISA检测VEGF的分泌水平,Western blot检测细胞VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白水平;取正常大鼠,随机分为正常对照组、灯盏花素组、糖尿病模型组和糖尿病灯盏花素治疗组,16周后取各组大鼠眼球,观察大鼠视网膜的病理变化并评分,免疫组化观察VEGF的表达情况。结果:(1)细胞实验结果显示,灯盏花素组VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白水平与正常对照组比较均减低(P0.05);高糖组细胞上述蛋白水平与正常对照组比较均增加(P0.05);高糖+灯盏花素组上述蛋白水平与高糖组比较表达均减少(P0.05);(2)大鼠视网膜病理学评分显示糖尿病组与正常对照组、糖尿病灯盏花素治疗组相比差异显著,灯盏花素组与正常对照组相比差异无统计学意义。糖尿病大鼠与正常对照组、灯盏花素组相比,视网膜VEGF的表达增加;糖尿病灯盏花素治疗组中VEGF的表达较糖尿病组有所降低(P0.05)。结论:灯盏花素可以降低ARPE-19细胞VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白表达水平,抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达,提示灯盏花素可能通过降低糖尿病大鼠视网膜细胞和组织中VEGF的表达,缓解其糖尿病视网膜病变进程。     

miR-140-5p靶向HMGB1/IκB-α轴对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)miR-140-5p通过靶向调节高迁移率族蛋白1(HMGB1)/核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)轴对糖尿病大鼠视网膜病变的影响。方法 将糖尿病大鼠随机分为模型组、miR-140-5p激动剂(miR-140-5p agomir)组、激动剂阴性对照(agomir-NC)组，10只/组，另取10只正常大鼠作为对照组。分离血清及视网膜组织，RT-qPCR检测血清和视网膜组织miR-140-5p、HMGB1 mRNA表达水平；HE染色检测病理学变化；ELISA检测血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量；TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡；双荧光素酶报告基因实验检测miR-140-5p、HMGB1的靶向关系；Western blot检测视网膜组织HMGB1、IκB-α、NF-κB p65蛋白表达。结果 HMGB1为miR-140-5p的靶基因。模型组、agomir-NC组MCP-1、TNF-ɑ、ICAM-1含量、HMGB1、NF-κB p65表达、凋亡细胞及组织损伤较对照组增加，miR-140...     

莱菔硫烷对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用

目的:研究莱菔硫烷(SF)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应,并初步探讨其作用机制。方法:通过一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型;通过测定活性氧簇(ROS)的生成、TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡和计数存活的视网膜神经节细胞(RGCs)等方法作为指标观察SF对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应;以免疫组织化学染色和Western blot法检测视网膜核因子E2相关因子2(Nrf2)的核转移和血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化。结果:SF能抑制糖尿病大鼠视网膜ROS的生成,抑制视网膜神经细胞的凋亡并增加糖尿病大鼠视网膜RGCs的存活数量;同时SF还可促进Nrf2的激活及HO-1蛋白表达;使用HO-1抑制剂锌原卟啉可明显减弱SF对糖尿病大鼠视网膜RGCs凋亡的抑制作用。结论:SF可能通过激活Nrf2/HO-1抗氧化通路改善糖尿病大鼠视网膜氧化应激状态,减少视网膜神经细胞凋亡,减轻糖尿病大鼠的视网膜损伤。