姜黄素诱导胃癌BGC细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨姜黄素促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,20mg/L。姜黄素处理24 h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20 mg/L姜黄素处理24 h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。     

鲨鱼软骨制剂通过下调Bcl-2诱导K562细胞凋亡

目的探讨鲨鱼软骨制剂(SCP)诱导人红白血病细胞系(K562)凋亡的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的K562细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达。结果SCP明显抑制K562细胞生长,IC50值为1mg/ml以下;荧光显微镜下可见50%以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;免疫细胞化学检测显示SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低。结论SCP诱导K562细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达有关。     

塞来昔布诱导不表达环氧合酶-2的胃癌细胞凋亡研究

目的： 探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib诱导COX-2不表达胃癌细胞MGC-803凋亡。 方法： 应用MTT法研究celecoxib对细胞存活率的影响；Hoechst33258染色，DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术分别检测celecoxib处理后细胞形态学改变，DNA断裂情况和DNA含量的变化。 结果： COX-2高表达于AGS胃癌细胞株，而MGC-803中未检测到COX-2表达; 选择性COX-2抑制剂 celecoxib呈浓度和时间依赖性诱导MGC-803细胞凋亡。 结论： Celecoxib 可诱导不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803凋亡。     

鲨鱼软骨抽提物诱导人胃癌细胞凋亡并下调Bcl-2表达

目的：探讨鲨鱼软骨抽提物(SCP)诱导人胃癌MGC80—3细胞调亡的作用机制。方法：以不同浓度SCP加入体外培养的MGC80—3细胞中，用MTT比色法检测细胞存活率；Hoeehst33342／PI荧光染色，荧光显微镜分析凋亡细胞百分率；流式细胞术进行细胞凋亡定量；琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带；免疫细胞化学染色法检测Bel-2蛋白的表达。结果：SCP明显抑制(MGC80—3细胞生长，IC50值为1mg／ml；荧光显微镜下可见60％以上细胞为凋亡细胞的形态学改变；琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)；免疫细胞化学检测显示Bcl-2表达明显降低。结论：SCP诱导人胃癌MGC80—3细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关。     

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

苦碟子对恶性黑色素瘤细胞抑制及凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达的影响

目的观察不同浓度中药苦碟子对恶性B16黑色素瘤细胞的抑制作用和凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达的变化,探讨中药苦碟子抑制B16黑色素瘤细胞生长的可能机制。方法通过细胞培养和MTT实验,检测苦碟子对B16黑色素瘤细胞的生长抑制情况,Western blot测定凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达,免疫荧光染色检测Bcl-2/Bax蛋白在不同浓度苦碟子处理的黑色素瘤细胞中的表达。透射电镜观察不同浓度梯度中药苦碟子诱导细胞凋亡,其细胞结构的特征性变化。结果随着苦碟子药物浓度的增加,黑色素瘤细胞活细胞数目逐渐减少,细胞存活率显著下降(<0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平呈现下降趋势,而促凋亡蛋白Bax呈现上升趋势(<0.05),免疫荧光染色显示Bcl-2表达逐渐减少,Bax表达逐渐增加;电镜下凋亡小体数目不断增加,核固缩逐渐明显,细胞间隙增大,线粒体数目减少。结论中药苦碟子有浓度依赖性抑制黑色素瘤细胞生长,促进细胞凋亡,凋亡蛋白Bcl-2/Bax变化呈线性关系。     

褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响。方法:将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内(15~75μmol/L)内能显著抑制HSC-T6细胞的活力(P0.01),呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示,24 h后高浓度(60μmol/L)组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著(P0.01),G_1期比例显著下降(P0.01),G_2期和S期的比例显著升高(P0.01),48 h后低浓度(15μmol/L)和中浓度(30μmol/L)组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性(P0.05);低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性(P0.05)。蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调(P0.05)。结论:褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡。     

Hedgehog信号通路通过调控缝隙连接蛋白43表达影响胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡

探讨Hedgehog信号通路对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用及对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探索其在胃癌细胞增殖和凋亡作用中的可能作用机制。用不同浓度的Hedgehog信号通路抑制剂cyclopamine(5、10、20、30、40、50μmol/L)处理MGC-803细胞24、48、72 h,同时设立空白对照组(0μmol/L),MTT法检测各组细胞增殖抑制率。以0、30、40μmol/L cyclopamine处理MGC-803细胞48 h,TUNEL原位检测细胞凋亡,qRT-PCR检测Cx43 mRNA的表达,免疫印迹检测Cx43蛋白表达。与空白对照组相比,各浓度cyclopamine组MGC-803细胞增殖抑制率明显增高,且随着cyclopamine浓度增加及作用时间延长,其增殖抑制作用增强;30、40μmol/L cyclopamine处理48 h,MGC-803细胞凋亡率明显升高,qRT-PCR检测显示Cx43 mRNA表达显著升高,免疫印迹检测显示Cx43蛋白表达明显升高。Hedgehog信号通路可影响胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡,机制可能与调控Cx43 mRNA及蛋白表达有关。     

牛蒡子苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的：通过牛蒡子苷对肿瘤细胞的体外实验，探讨牛蒡子苷是否对人肝癌细胞（HepG2）具有生长抑制及诱导凋亡作用。方法：HepG2细胞培养液中加入不同浓度的牛蒡子苷，培养72 h，观查HepG2细胞的增殖率；倒置显微镜及投射电子显微镜观察HepG2细胞的形态变化；流式细胞仪（FCM）检测HepG2细胞周期及凋亡率；TUNEL法检测HepG2细胞凋亡率；免疫细胞化学检测HepG2细胞的增殖凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)表达。结果： 牛蒡子苷抑制HepG2细胞生长；阻滞HepG2细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡(P＜0.05)；通过下调Bcl-2蛋白表达（P＜0.01），上调Bax蛋白表达（P＜0.05）诱导HepG2细胞凋亡。结论： 牛蒡子苷对体外培养的HepG2细胞生长有抑制作用,其作用机制之一是通过诱导细胞凋亡。     

异土木香内酯通过介导ROS 产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

目的:探讨异土木香内酯通过介导ROS 产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela 细胞凋亡机制。方法:不同终浓度异土木香内酯体外诱导Hela 细胞24 h 及加入抑制剂NAC 作为实验组,以正常细胞作为对照组,MTT 测定细胞活性;Hoechst 33258 染色观察Hela 细胞凋亡细胞核变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期和ROS 产生变化和MMP 水平;Western blot 方法测定细胞色素C 蛋白、Bcl-2、Bax 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:异土木香内酯以浓度依赖性抑制Hela 细胞生长;20 mol/ L 和40 mol/ L 终浓度异土木香内酯处理Hela 细胞24 h 后,细胞核出现典型的核固缩及核碎裂凋亡形态,细胞凋亡率增加,可抑制细胞生长于S 期,细胞内均可诱导ROS 的产生。ROS 抑制剂NAC 可以明显阻断异土木香内酯对Hela 细胞生长的抑制作用,降低细胞凋亡率;20 mol/ L 和40 mol/ L 终浓度异土木香内酯处理Hela 细胞24 h后,Bax 蛋白表达水平明显增加而Bcl鄄2 蛋白表达水平明显降低,同时Caspase-3 蛋白也被活化,出现cleaved Caspase 蛋白,线粒体内细胞色素C 蛋白释放增加。结论:异土木香内酯在体外可通过介导ROS 产生及线粒体损伤来抑制人宫颈癌Hela 细胞生长且诱导其凋亡,且伴随Bax 蛋白表达上调、Bcl-2 蛋白表达下调及Caspase-3 活化相关变化。