环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法加不同浓度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol/L塞来昔布作用于A549细胞48 h,RT-PCR方法检测各组细胞的VEGF基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的VEGF蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48 h后,相比于对照组,RT-PCR方法检测发现塞来昔布组细胞VEGF m RNA表达显著降低(P0.01),Western blot方法检测发现塞来昔布组细胞VEGF蛋白表达显著降低(P0.01)。结论塞来昔布可能通过调节VEGF的表达抑制A549细胞增殖。     

环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Fas表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Fas表达的影响。方法加不同浓度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol·L~(-1)塞来昔布作用于A549细胞48 h,RT-PCR方法检测各组细胞的Fas基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的Fas蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48h后,相比于对照组,塞来昔布组Fas mR NA和蛋白在A549细胞的表达水平显著升高(P0.01)。结论 T塞来昔布抑制A549细胞增殖可能与上调Fas的表达相关。     

芹菜素对人肺癌A549细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究芹菜素对人肺癌 A549细胞增殖抑制和凋亡诱导作用与 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法10~80μmol/L 不同浓度芹菜素作用 A549细胞,采用 MTT 法检测芹菜素对 A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察芹菜素诱导细胞凋亡形态学的变化;流式细胞仪 AnnexinV- FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡率;Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Bax 和 Bcl-2表达的变化。结果 MTT 法显示,芹菜素对 A549细胞有显著的增殖抑制作用（P <0.01）,且具浓度和时间依赖性;荧光显微镜下观察到芹菜素处理组细胞出现典型的凋亡形态学改变：细胞核固缩、染色质凝集和核碎片化等;流式细胞仪分析结果显示,芹菜素呈浓度依赖性诱导 A549细胞凋亡;Western blot结果显示,促凋亡蛋白 Bax 随着芹菜素浓度升高表达增加,抗凋亡蛋白 Bcl-2随着芹菜素浓度升高表达减少。结论芹菜素具有抑制人肺癌 A549细胞增殖,诱导其凋亡的作用,其机制可能与上调 Bax 蛋白表达和下调 Bcl-2蛋白表达有关。     

miR-206及Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨mi R-206及Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达,以及抑制或过表达mi R-206对Bcl-2蛋白表达的影响。方法实时定量PCR方法检测NSCLC组织mi R-206的表达水平,Western blot方法检测NSCLC组织Bcl-2蛋白表达;将mi R-206 inhibitors及mi R-206 mimics转染至A549细胞,通过CCK-8法测定A549细胞增殖能力的变化,Western blot方法检测转染后Bcl-2蛋白表达变化。结果 mi R-206在非小细胞肺癌组织中的表达量较癌旁组织明显降低(0.01),Bcl-2蛋白在癌组织中较癌旁组织表达明显增高(0.05);转染mi R-206 inhibitor的细胞增殖能力与对照组相比显著升高,细胞内Bcl-2蛋白水平亦明显升高(0.05),转染mi R-206 mimics的细胞增殖能力与对照组相比显著降低,细胞内Bcl-2蛋白水平亦明显降低(0.05)。结论mi R-206在NSCLC组织中低表达,mi R-206抑制能够促进A549细胞增殖和Bcl-2蛋白表达。     

厄罗替尼联合塞来昔布阻断EGFR和COX-2抑制肺癌A549细胞增殖

目的探讨厄罗替尼联合塞来昔布对肺腺癌A549细胞系凋亡、表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法厄罗替尼、塞来昔布单独或联合干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞抑制率;Hoechst33258法和TUNEL法检测细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期;免疫荧光检测EGFR和COX-2蛋白表达。结果厄罗替尼联合塞来昔布组相比单药组A549细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆开始脱落;二者联合作用时抑制作用更强(P<0.05),厄罗替尼与塞来昔布均能诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高(P<0.05),并使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05),进一步下调了EGFR和COX-2蛋白的表达(P<0.05)。结论厄罗替尼与塞来昔布联合应用可协同介导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR和COX-2信号途径。     

敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 将HepG2细胞接种于6孔板,分为3组：siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂。通过Western blotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被最大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。 结果 与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高（P<0.05）,Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低（P<0.05）,而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化（P>0.05）。结论 敲低膜联蛋白A7可促进HepG2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值。     

PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

STIM1 对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析

目的：探讨STIM1对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析。方法：以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照,Western blot检测乳腺癌 MCF7、HCC1569、MDA-MB-231、BT549细胞中STIM1的蛋白表达;将STIM1的靶向siRNA序列（STIM1-siRNA组）转染MDA-MB-231细胞,并设置阴性对照组和空白对照组,转染48 h后检测各组细胞STIM1的蛋白表达;MTT法检测转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率;RT-PCR检测IL-6 和TNF-α 的mRNA表达;Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：乳腺癌细胞中STIM1的蛋白表达均显著高于在MCF-10A细胞表达（P<0.05）;转染STIM1的siRNA后MDA-MB-231细胞中STIM1的蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）;与空白对照组比较,STIM1-siRNA 组细胞在48 h和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,IL-6 和TNF-α 的mRNA表达显著降低,PCNA、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达显著降低,Bax和Caspase3蛋白表达显著升高。结论：STIM1基因在乳腺癌细胞高表达,通过RNA干扰抑制其表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡、提高免疫及下调STAT3信号。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞株CD44v6表达水平的影响

目的 研究塞来昔布(COX-2选择性抑制剂)对鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力的影响及可能机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖活性的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,通过重组人工基膜实验检测细胞侵袭力的改变;RT-PCR检测鼻咽癌细胞CD44v6 mRNA的表达情况;用Western blot和免疫细胞化学检测鼻咽癌细胞CD44v6蛋白表达变化.结果 MTT法结果显示,塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖有明显抑制作用,呈剂量依赖性关系(P<0.01).塞来昔布作用细胞24 h后,肿瘤细胞的侵袭力明显下降(P<0.05).RT-PCR结果显示,塞来昔布可以明显抑制CD44v6 mRNA的表达水平(P<0.01).Western blot和免疫组化结果显示,随着药物浓度的增加,CD44v6蛋白表达水平逐渐减少(P<0.01).结论 塞来昔布可能通过下调CD44v6表达而降低鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力.     

BAG2基因影响A549细胞增殖的机制研究及其临床意义

目的:研究Bcl-2相关抗凋亡基因2(Bcl-2-associated athanogene,BAG2)对人肺腺癌A549细胞增殖能力的影响及作用机制,并探讨其临床意义。方法:以Western blot法分析BAG2在A549细胞与正常上皮细胞系HBE中的蛋白表达水平;在体外以RNA干扰(RNAi)技术敲低A549细胞中BAG2基因的表达,并采用CFSE染色结合流式细胞术、WST-1法和Western blot法对A549细胞增殖和细胞周期相关蛋白进行评价。此外,我们利用q PCR检测BAG2在肺癌组织c DNA芯片中的表达情况,同时分析了GEO数据库中BAG2表达与肺癌患者预后之间的关系。结果:与HBE细胞比较,A549细胞中BAG2的表达显著升高(P0.05);干扰BAG2基因后,A549细胞在48 h和72 h时点时增殖均被抑制;在48 h时点,干扰BAG2可导致细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1表达显著下调(P0.05)。在人肺癌组织中,BAG2基因表达显著高于癌旁组织,并与肺癌患者生存预后呈显著负相关(P0.01)。结论:BAG2基因可能通过上调细胞周期蛋白cyclin B1与cyclin E1影响A549细胞的增殖,其表达量与肺癌患者预后呈显著负相关。     

Expression of endothelin 2 and localized clear cell renal cell carcinoma

Despite the rising incidence of clear cell renal cell carcinoma, the molecular events that support its development and progression remain unclear. Herein, we evaluate the association of endothelin 2 expression with both clear cell renal cell carcinoma development and progression-free survival. We conducted real-time polymerase chain reaction to determine endothelin 2 expression levels on 238 patients who underwent nephrectomy for localized clear cell renal cell carcinoma, 161 of whom also had adjacent normal kidney samples available for analysis. To evaluate associations with clear cell renal cell carcinoma development, linear mixed models were used to compare differential expression between tumor and a normal kidney as well as to explore interactions with clinicopathologic features. To evaluate associations with prognosis, Cox proportional hazards models were used to assess the association of progression-free survival and endothelin 2 expression in tumor tissue. Overall, endothelin 2 expression was higher in tumor samples versus patient-matched normal kidney samples, with an average fold change of 1.99 (95% confidence interval, 1.48-2.60; P < .0001). This overexpression in tumor versus normal kidney samples was more pronounced in low- compared with high-grade tumors (interaction, P = .0002), in early- compared with late-stage tumors (interaction, P = .001), and in tumors without compared with those with necrosis (interaction, P = .001). Moreover, an increasing endothelin 2 expression in tumors was associated with a longer progression-free survival (hazard ratio, 0.89; 95% confidence interval, 0.80-0.99; P = .03); however, after controlling for known clinicopathologic factors, this association was attenuated (hazard ratio, 0.99; 95% confidence interval, 0.89-1.09; P = .7). Up-regulation of endothelin 2 is a common and early event in localized clear cell renal cell carcinoma. Higher tumor expression of endothelin 2 is associated with a longer progression-free survival but not after adjustment for well-known pathologic indices. Thus, although endothelin 2 does not appear to be an independent prognostic marker, there is evidence of a putative role in clear cell renal cell carcinoma progression. If supportive mechanistic data can be produced, endothelin 2 could represent a potential target for chemopreventive or neoadjuvant therapeutics for clear cell renal cell carcinoma.     

Species conservation of the T cell lymphocyte CD2 cell surface antigen

A rabbit polyclonal antiserum was raised against a synthetic peptide, termed CD2-300, comprizing 18 amino acid resides which are conserved among the cytoplasmic domains of the human, rat and mouse CD2 antigens. Cross-depletion experiments showed that the CD2 monoclonal antibody OKT11 and purified CD2-300 antibodies (Ab) precipitated the same molecules from the surface of human T lymphoblasts. The results of immunoprecipitation analyses indicated that the purified CD2-300 Ab were specific for human and mouse CD2, and that the CD2-300 peptide competitively and specifically inhibited precipitation by CD2-300 Ab in both species. When employed to stain murine tissues, the CD2-300 Ab gave the anticipated pattern of distribution for the CD2 antigen, although there was some nonspecific labeling of non-T cells.     

NF-E2相关因子2对视网膜细胞保护作用的研究进展

核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化还原通路在细胞氧化应激损伤过程中起到重要的保护作用。在氧化应激的刺激下,Nrf2可以启动多种细胞保护性基因的表达从而维持细胞稳态。因此,在治疗氧化应激损伤的疾病时,药物诱导Nrf2通路表达上调成为了一个新的研究方向。我们主要从视网膜神经细胞和视网膜血管内皮细胞两个方面总结了Nrf2在视网膜病变中的细胞保护作用的相关研究进展。     

T cell immunity to SARS-CoV-2

Exceptional efforts have been undertaken to shed light into the biology of adaptive immune responses to SARS-CoV-2. T cells occupy a central role in adaptive immunity to mediate helper functions to different arms of the immune system and are fundamental to mediate protection, control, and clearance of most viral infections. Even though many questions remain unsolved, there is a growing literature linking specific T cell characteristics to differential COVID-19 severity and vaccine outcome. In this review, we summarize our current understanding of CD4⁺ and CD8⁺ T cell responses in acute and convalescent COVID-19. Further, we discuss the T cell literature coupled to pre-existing immunity and vaccines and highlight the need to look beyond blood to fully understand how T cells function in the tissue space.     

2-甲氧雌二醇对人肺癌细胞的放射增敏作用

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对肺癌细胞A549和GLC-82的放射增敏作用及其对细胞周期的影响,并从分子角度初步探讨2-ME可能的增敏机制。方法:将体外培养的人肺癌细胞A549和GLC-82分为实验组和对照组,其中实验组加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME。通过MTT法定量检测2-ME对2株细胞增殖的抑制作用,集落形成实验测定2-ME对这2株细胞的放射增敏作用,流式细胞术检测细胞周期分布的变化,通过免疫沉淀法检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)活性的改变。结果:分别以2-ME对人肺癌细胞GLC-82和A549的最小有效浓度(0.15625×10-6mol/L和1.25×10-6mol/L)作为放射增敏浓度,均可增加细胞对X线的敏感性,2株细胞存活曲线均见2-ME增敏组比单纯照射组整体下移,D0、Dq值均降低,增敏比:GLC-82细胞为1.98;A549细胞为2.06。细胞周期的检测表明2-ME使细胞周期阻滞于G2/M期,并呈剂量依赖性。2-ME作用后2株细胞CDK2活性均无明显改变。结论:2-ME可通过对细胞周期的调节增加非小细胞肺癌(NSCLC)细胞GLC-82和A549对射线的敏感性。     

早期B细胞因子3对HepG2细胞周期的影响

目的:克隆人早期B细胞因子3 (EBF3)基因,构建真核表达载体pEGFP/EBF3,研究人EBF3对肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响.方法:提取人胎盘组织总RNA,采用RT-PCR技术克隆人EBF3基因,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1,重组质粒双酶切鉴定,并进行序列测定.将重组质粒转染HepG2细胞,Western blot确证EBF3-EGFP融合蛋白的表达及亚细胞定位,流式细胞术分析转染细胞周期.结果:成功获得全长人EBF3基因,经双酶切和序列测定鉴定,真核表达质粒pEGFP/EBF3构建正确,将pEGFP /EBF3导入HepG2细胞24小时后,在倒置荧光显微镜下可观察到EBF3-EGFP融合蛋白主要表达于核内.Western blot证实转染pEGFP/EBF3后24小时和48小时细胞质和细胞核中均检出相对分子质量(Mr)为87 000的EBF3-EGFP融合蛋白.转染pEGFP/EBF3后48小时和72小时,S期细胞比例均明显高于pEGFP-N1转染细胞组,表明EBF3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展,从而促进细胞增殖.结论:成功构建了真核表达质粒pEGFP/EBF3,pEGFP /EBF3转染组S期细胞比例高于pEGFP-N1转染组,提示EBF3对人肝癌细胞株HepG2细胞有促进增殖作用.     

mPer2对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖作用的影响

目的:研究mPer2对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖作用的影响。方法:将构建好的mPer2全长表达质粒(pcDNA3.1-mPer2)转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中,并以pcDNA3.1空质粒转染为对照,通过平板克隆形成实验和MTT法检测两组细胞的增殖情况。结果:平板克隆形成实验和MTT法检测结果均显示Period2转染组小鼠黑色素瘤细胞B16较空质粒对照组明显降低。结论:mPer2的高表达能显著性的抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的生长。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤梭形细胞变异二例

例1男,57岁。左上腹疼痛1月余,加重2天。以往无任何自觉症状和体征。2003年9月19日因意外撞击伤在外院急诊,CT检查提示脾脏血肿。留院观察,但症状未见缓解,且近2天疼痛加剧,转来我院就诊。外周血检查未见异常。脾脏切除术中,见脾脏肿大呈结节状,最大结节约8cm,脾门见一直径1cm肿大淋巴结。腹主动脉旁及其他处未见淋巴结肿大。术中冷冻病理诊断为恶性梭形细胞肿瘤。