长托宁介导NLRP3炎性小体调控IKKβ/IKKα/NF-κB通路抑制脊髓损伤大鼠细胞焦亡

目的 探索长托宁对脊髓损伤大鼠细胞焦亡的影响及可能机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤模型组（Allen’s法建立SCI大鼠模型）和长托宁治疗组（PHC组,腹腔注射长托宁2mg/kg,连续给药14 d）。各组大鼠进行运动功能（BBB）评分;HE、尼氏染色观察脊髓病理学变化;ELISA检测IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-18的含量变化;TUNEL检测脊髓细胞凋亡;Western blot方法检测NLRP3、procaspase1、pro-IL1β、IKKβ、IKKα、P-IKKβ、P-IKKα、NF-κB的表达水平。结果 长托宁减轻SCI大鼠脊髓损伤,抑制炎症反应,抑制IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-18释放,抑制细胞凋亡,下调炎症小体相关蛋白表达水平,降低NLRP3、pro-caspase1、pro-IL1β表达水平,抑制IKKβ/IKKα/NF-κB信号通路活性。结论 长托宁减轻SCI大鼠炎症反应,抑制NLRP3炎性小体,与调控IKKβ/IKKα/NF-κB通路有关。     

大鼠白介素-1β在异氟烷预处理脊髓损伤中的作用

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)在异氟烷预处理大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)时的作用。方法:雄性成年SD大鼠75只,体重250~300 g,将大鼠随机分为3组(n=25):假手术组(S组)、脊髓损伤组(SCI组)、异氟烷预处理组(ISO组)。采用打击法制作脊髓损伤模型。ISO组吸入2%异氟烷2 h,24 h后制备脊髓损伤模型。连续7 d采用BBB评分进行神经功能缺陷评分,免疫荧光标记神经元特异性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,NeuN)和白介素-1β的表达,其余动物处死,采用Western Blot法测定白介素-1β的表达水平。结果:与S组比较,SCI组和ISO组神经功能缺陷评分降低,NeuN和IL-1β表达增加,IL-1β蛋白表达上调(P0.05);与SCI组比较,ISO组神经功能缺陷评分增高,NeuN和IL-1β表达下降,IL-1β蛋白表达下调(P0.05)。结论:异氟烷预处理可能通过抑制IL-1β表达,从而减轻大鼠脊髓损伤。     

miR-495调控MAPK/ERK信号通路对大鼠脊髓损伤后神经元自噬的影响北大核心CSCD

目的:探究微小RNA-495(miR-495)调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经元自噬的影响。方法:按每组10只随机将50只SD大鼠分为假手术组、SCI组、agomir-NC组、miR-495 agomir组、miR-495 agomir+Anisomycin组(p38-MAPK特异性激活剂Anisomycin),击打T10段脊髓构建SCI模型,将agomirNC、miR-495 agomir、Anisomycin于造模前3 d(20 nmol/d)注入相应组大鼠脊髓T10段蛛网膜下腔,假手术组、SCI组注射等量生理盐水;qRT-PCR检测脊髓组织中miR-495的表达;运动功能BBB评分评估神经功能恢复情况;HE染色、吖啶橙染色分别观察大鼠脊髓组织病理学情况及神经元自噬;ELISA法检测脊髓组织中炎症因子表达;Western blot检测脊髓组织中自噬及MAPK/ERK通路蛋白表达。结果:与假手术组相比,SCI组大鼠miR-495表达、BBB评分显著降低,脊髓组织病理学程度、自噬小体数目、TNF-α、IL-1β、IL-6、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p-ERK1/2/ERK1/2和p-c-fos/c-fos水平显著增加(P<0.05);与SCI组相比,miR-495 agomir组miR-495表达、BBB评分显著升高,脊髓组织病理学程度、自噬小体数目、TNF-α、IL-1β、IL-6、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p-ERK1/2/ERK1/2和p-c-fos/c-fos水平显著降低(P<0.05);Anisomycin可逆转miR-495 agomir对大鼠SCI后神经元自噬的抑制作用。结论:miR-495过表达可能通过抑制MAPK/ERK信号通路激活来抑制大鼠SCI后神经元自噬。     

舒芬太尼联合右美托咪啶对脊髓损伤大鼠的治疗及可能机制

目的探讨舒芬太尼联合右美托咪啶对脊髓损伤大鼠的治疗及可能机制。方法 Allen's法建立脊髓损伤模型,将SD大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(SCI组)和舒芬太尼与右美托咪啶联合治疗组(SD组);对各组大鼠脊髓运动功能(BBB)进行评分;应用HE染色检测各组大鼠脊髓的组织病理学变化;采用ELISA检测IL-10、IL-6及TNF-α水平变化;化学方法检测各组大鼠脊髓组织中MDA、CAT、SOD、GSH-Px等蛋白的表达情况;IHC检测各组脊髓组织中的HMGB1、TLR4表达;Western blot法检测HMGB1、TLR4、Bcl-2和Bax的表达水平。结果 HE染色结果显示,两种药物的联合治疗能降低脊髓中炎症性中性粒细胞的浸润;与SCI组相比,SD组大鼠BBB评分显著升高,血清SOD、CAT、GSH-Px含量升高,MDA含量降低,脊髓组织中IL-10与Bcl-2的表达水平明显升高,TNF-α、IL-6、Bax、HMGB1及TLR的表达明显下降(P0.05)。结论舒芬太尼与右美托咪啶联合应用能够改善大鼠的脊髓损伤,其机制可能与下调HMGB1/TLR4信号通路有关。     

IL-1β通过JAK2-STAT3促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成

目的探讨IL-1β促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成的机制。方法将大鼠随机分为模型组(采用钳夹脊髓的方法建立SCI模型)、假手术组(sham group)、IL-1β特异性抑制剂组(IL-1RA)、IL-1β组(IL-1β)及IL-1β+JAK2-STAT3特异性抑制剂组(IL-1β+AG490)。假手术组只打开椎板,不作其他处理。在术后相应时间点(术后8及12 h和1、3、7及14 d)进行大鼠后肢BBB评分,用Western blot、免疫荧光和免疫组化技术检测GFAP、vimentin、p-STAT3的表达变化。结果 p-STAT3(术后第8 h和第12 h)及GFAP、vimentin(术后第7和第14天)表达趋势:模型组显著高于假手术组(P0.01),IL-1RA组明显低于模型组(P0.05),但仍高于假手术组(P0.05);IL-1β+AG490组明显低于模型组(P0.05),但仍高于假手术组(P0.05);IL-1β组均显著高于模型组(P0.05)。术后第14天,BBB评分模型组显著低于假手术组(P0.01),IL-1RA组显著高于模型组(P0.05),但仍低于假手术组(P0.01);IL-1β组显著低于模型组(P0.05)。结论 IL-1β可通过JAK2-STAT3促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成,抑制IL-1β或JAK2-STAT3可减弱胶质瘢痕形成,促进脊髓神经功能恢复。     

丹曲林对急性脊髓损伤大鼠脊髓白质的保护作用

目的:探讨丹曲林(dantrolene,DA)对大鼠急性脊髓损伤后脊髓白质的保护作用。方法:采用钳夹法制作大鼠急性脊髓损伤模型(SCI)。将48只成年雄性Sprague-Dawley大鼠体重280~310 g,随机分成3组,每组16只,假手术组(Sham组):只行椎板切除术;SCI组:术前1 d腹腔注射生理盐水;丹曲林处理组(DA组):术前1 d腹腔注射10 mg/kg丹曲林。SCI损伤后3、7、14、21、28 d利用BBB评分量表评估大鼠后肢运动功能恢复情况;术后24 h,利用抗NF200单克隆抗体的免疫荧光组织化学法标记轴突,观察各组轴突的形态和数量变化;Western Blot方法检测各组脊髓损伤部位的髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)和环核苷酸磷酸二酯酶(2’,3’-cyclic nucleotide phosphodiesterase,CNPase)的蛋白表达水平。结果:不同时间点SCI组大鼠的BBB评分显著低于Sham组,提示SCI模型制备成功。注射丹曲林后,不同时间点SCI动物的BBB评分明显升高(P0.05),提示丹曲林可促进大鼠后肢运动功能的恢复。NF200免疫荧光组织化学法显示:Sham组轴突长,排列有序、分布均匀;SCI后24 h,NF200+纤维断裂、数量减少、排列紊乱、部分甚至卷曲;给予丹曲林后,NF200+纤维数量显著增多且较长,排列较规则。Western Blot结果显示:SCI组CNPase,MBP蛋白的表达量较Sham组显著降低(P0.01),给予丹曲林后可明显升高两者的表达(P0.01)。结论:丹曲林对急性脊髓损伤大鼠白质具有一定的保护作用。     

大鼠脊髓损伤对IL-10和原肌球蛋白4在脊髓中表达的影响

目的:探讨脊髓顿挫伤(spinal cord contusion,SCC)后白细胞介素10(IL-10)和原肌球蛋白4(TPM4)在脊髓中的表达变化。方法:成年健康雌性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)和脊髓顿挫伤组(SCC)。用Allen’s打击法建立脊髓顿挫损伤模型,BBB评分评价大鼠运动功能变化;免疫组织化学技术分别显示IL-10和TPM4在脊髓组织的定位情况;并利用q-PCR检测两者的mRNA含量变化。结果:BBB评分结果表明SCC组大鼠运动功能明显障碍,但损伤后7 d(P0.05)、14 d(P0.001)和28 d(P0.001)组逐渐得到改善。免疫组化结果显示,IL-10主要定位于脊髓白质神经胶质细胞的胞体和突起,第28 d在血管内皮细胞也有少量表达。TPM4主要定位于神经元和胶质细胞质和突起。q-PCR结果显示,大鼠术后IL-10 mRNA表达在第1d组明显增加(P0.001),而后逐渐下降到Sham组水平。TPM4 mRNA含量在损伤后第7 d(P0.05)明显降低,后又逐渐上升。结论:脊髓损伤早期,IL-10表达增高可抑制脊髓组织的炎症反应,从而减轻组织损伤。而脊髓损伤后期TPM4表达升高可能与神经元修复有关。     

miR-186-5p修饰骨髓间充质干细胞通过下调FZD3对脊髓损伤大鼠具有神经保护作用

目的 探讨miR-186-5p修饰的骨髓间充质干细胞对脊髓损伤大鼠的神经保护作用及可能机制.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤模型组(SCI组)、骨髓间充质干细胞移植组(BMSCs组)和miR-186-5p修饰的骨髓间充质干细胞移植组(miR+BMSCs组),每组10只;除了Sham组,其余三组通过Allen's法建立SCI大鼠模型,移植后第1、7、14、21天对各组大鼠进行运动功能(BBB)评分;HE染色观察各组大鼠脊髓损伤病理学变化;IF检测NeuN表达情况;ELISA检测NT-3含量变化;利用qRT-PCR检测各组大鼠miR-186-5p的表达;荧光素酶实验验证miR-186-5p与FZD3的关系;Western blot方法检测损伤脊髓组织中的FZD3、β-catenin、c-Myc、cyclinD1的表达水平变化.结果 与SCI组相比,BMSCs组和miR+BMSCs组的BBB评分、损伤脊髓组织中NeuN的表达、NT-3的表达以及β-catenin、c-Myc、cyclinD1的蛋白表达均明显升高(P＜0.05),FZD3的蛋白表达明显下降(P＜0.05).FZD3被预测并确认为miR-186-5p的靶基因.与BMSCs组相比,miR+BMSCs组的BBB评分、损伤脊髓组织中NeuN的表达、NT-3的表达以及β-catenin、c-Myc、cyclinD1的蛋白表达显著升高(P＜0.05),FZD3的蛋白表达呈下降趋势(P＜0.05).结论 miR-186-5p修饰的骨髓间充质干细胞移植可通过下调FZD3对SCI大鼠的神经提供保护作用.     

神经节苷脂对急性脊髓损伤大鼠Fas和Caspase1表达的影响

目的研究神经节苷脂(GM1)对急性脊髓损伤大鼠Fas和Caspase1表达的变化。方法选取72只成年健康SD大鼠,按Nystrom法建立大鼠脊髓损伤模型,按随机数字表法分为假手术组24只、脊髓损伤组24只、GM1组24只,脊髓损伤组和GM1治疗组依据脊髓损伤后的不同时间点再细分为1d、7d和14d三个亚组。伤后第1天、第7天和第14天分别用BBB评分和斜板试验观察大鼠运动功能的恢复情况。免疫组化方法和Western blot方法检测三组大鼠脊髓损伤部位Fas和Caspase1的表达。结果术后7d和14d,GM1治疗组BBB评分和斜板试验明显优于脊髓损伤组(0.05)。假手术组大鼠脊髓仅有少量Fas和Caspase1阳性表达和阳性细胞,脊髓损伤后1d时则明显增多,7 d开始减弱,但仍多于假手术组(0.05)。与相同时间点的SCI组比较,GM1组大鼠脊髓损伤部位的Fas和Caspase1阳性表达和阳性细胞明显减少(0.05)。结论 GM1治疗急性脊髓损伤可能与下调Fas和Caspase1蛋白的表达相关。     

白细胞介素-10通过乙二醛酶1影响脊髓钝挫伤大鼠运动功能的恢复

目的　用慢病毒介导的方法抑制白细胞介素-10（IL-10）的RNA,观察IL-10通过乙二醛酶1（GLO1）影响大鼠脊髓损伤后运动功能恢复。 方法　SD大鼠66只,采用Allen’s法制备脊髓钝挫伤（spinal cord contusion,SCC）模型,随机分为Sham组（n=9）、SCC组（n=27）、Vector组（n=15）和IL-10 SH组（n=15）,分别注射空质粒和包装IL-10 siRNA的质粒;每组再分为3 d、7 d和28 d 亚组。采用BBB（Basso,Beattie,Bresnahan）评分评估大鼠后肢运动功能;免疫组织化学和qRT-PCR技术定位和定量测定IL-10和GLO1的表达变化;用慢病毒包装的RNA构建IL-10的RNA干扰模型（IL-10-SH-LV）评估IL-10和GLO1在脊髓损伤后的功能,GeneMANIA生物信息学预测IL-10和GLO1的关系。 结果　SCC后大鼠双后肢截瘫,后肢运动功能消失,BBB评分在损伤后1 d,3 d,7 d,14 d逐渐恢复,但低于对照组。qRT-PCR结果显示IL-10在脊髓损伤后表达显著降低;SCC后,免疫组织化学结果显示IL-10主要在脊髓前角的神经元和神经胶质细胞中表达。慢病毒干扰IL-10的表达后,随着时间推移,GLO1表达增加,大鼠运动功能BBB评分也逐渐恢复。GeneMANIA结果显示GLO1和IL-10通过共表达的Hpd和Klk1c2、Kcns1、Proc相互作用。 结论　IL-10通过上调抗氧化应激因子GLO1的表达促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.