尾静脉注射脂肪间充质干细胞修复大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨经尾静脉注射脂肪间充质干细胞是否对脑缺血再灌注损伤有一定的修复作用及相关机制。方法 45只SD大鼠随机均分为假手术组(sham),模型组(I/R)和治疗组(ADMSCs)。I/R和ADMSCs组大鼠采用线栓法大脑中动脉脑缺血再灌模型(MCAO)建立局灶性脑缺血再灌动物模型。缺血2h后再灌注,6ADMSCs组再灌注0和12h经尾静脉注射2.0×10个(0.5ml)脂肪间充质干细胞,I/R组注射等量的生理盐水。再灌注24h后处死大鼠并迅速取脑组织。通过TTC染色计算脑梗塞面积;TUNEL检测缺血部分脑组织中的细胞凋亡情况;Western blot检测缺血部分脑组织中i NOS和bcl-2/bax的表达水平。结果 ADMSCs组显著降低了脑梗塞体积,抑制神经细胞凋亡,减少Bax/bcl-2蛋白比,i NOS的表达水平明显下调。结论尾静脉注射ADMSCs修复脑I/R损伤可能与抑制神经细胞凋亡和i NOS表达相关。     

新生大鼠神经干细胞移植对脑缺血再灌注损伤的治疗作用

目的:探讨新生大鼠神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性及疗效.方法:体外培养新生大鼠神经干细胞.采用改良的线栓法制作脑缺血再灌注模型,3d后用脑立体定位仪经脑室移植神经干细胞,移植时间点及再灌注1～7周对移植大鼠进行神经功能损伤程度评分(NSS).再灌注1、 2、 3、 5、 7周末麻醉处死大鼠,脑组织石蜡包埋.免疫组织化学方法观察移植后神经干细胞的存活、分布.结果:神经干细胞表达巢蛋白,在血清条件下分化为表达微管相关蛋白(MAP2)的神经元和表达胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)的星形胶质细胞.神经干细胞移植组NSS评分在各个时间点均显著低于对照组.移植的神经干细胞分布于缺血侧皮质、纹状体,再灌注后3、 5、 7周,皮质、纹状体阳性细胞数分别较1、 2周显著增多,第3、 5、 7周之间差异无统计学意义.前3周组织结构疏松,缺损严重,而第5、 7周组织结构较前3周完整致密.结论:移植的神经干细胞能在脑缺血大鼠脑内存活、迁移,并能改善缺血后大鼠的神经功能状况.     

人脂肪组织来源的神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨人脂肪组织来源的神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效。方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)2 h再灌注模型。体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞。移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源的神经干细胞悬液(2×106/mL)。用MNSS量表测定神经功能,TTC、HE染色观察脑梗死体积及脑组织病理变化。结果移植治疗组再灌注14、21和28 d的神经功能评分低于缺血再灌组(P<0.05或P<0.01)。移植治疗组第14天脑梗死体积(40.20±9.52 mm3)小于缺血对照组(66.60±14.24 mm3)(P<0.01)。移植治疗组的神经细胞变性、坏死数量较缺血再灌组明显减少。结论 人脂肪组织来源的神经干细胞移植治疗可改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,具有神经保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤对成年大鼠脑内源性神经干细胞的影响

目的：研究局灶性脑缺血再灌注损伤（focal cerebral ischemic and reperfusion injury，fCIRI）对成年大鼠脑内源性神经干细胞（endogenetic neural stern cells，eNSCs）的影响。方法：采用线栓法模拟局灶性大脑中动脉阻塞（middle cerebreal artery occlusion，MCAO）制造成年大鼠fCIRI，持续脑缺血2h后再灌注。将动物随机分组为fCIRI组和假手术对照组。腹腔注射5溴脱氧尿嘧啶（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）标记具有增殖活性的细胞。在不同时间点取脑，应用免疫组化（免疫荧光法）观察eNSCs的表达。结果：与假手术对照组比较，fCIRI组缺血损伤同侧的侧脑室下区（subventricular zone，SVZ）eNSCs数量明显增多（P〈0．01）。fCIRI后eNSCs的数量变化与时间呈正相关性（P〈0．01）。结论：fCIRI能促进激活成年大鼠脑eNSCs使其进行增殖。     

脂肪来源的干细胞移植对大鼠脑缺血后TGF-β1表达的影响

目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSC)移植促进大鼠脑缺血后微血管生成作用的可能机制。方法:108只成年雄性Sprague-Darley大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)、溶剂对照组(vehicle组)和ADSC治疗组(ADSC组),采用改良的Longa线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,ADSC移植前用CFSE标记,ADSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入30μL的ADSC细胞悬液,内含1×106细胞,vehicle组则注射同等剂量的PBS。术后4d、7 d和14 d分批断头取脑,检测缺血区脑组织TGF-β1表达的变化。结果:ADSC组术后4 d、7 d和14 d脑组织中TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均较MCAO组和vehicle组明显增高,同时显示脑缺血后经侧脑室移植的ADSC能够存活并分泌生长因子TGF-β1。结论:ADSC移植促进脑缺血大鼠缺血区微血管生成的机制可能与促进TGF-β1的表达有关。     

干细胞对脑缺血损伤的潜在性治疗作用

传统观点认为，神经元属于最终分化细胞，一旦损伤无法再生，通常由胶质细胞瘢痕修复。神经元对缺血损伤特别敏感，这种易感性使临床很难治疗脑缺血损伤。随着科学研究的进展及人们对于干细胞（stem cell）功能认识的加深，尤其是近十多年来对干细胞的研究使人感到，神经元在一定条件下是可以再生的。给干细胞治疗脑缺血带来曙光。下面就干细胞治疗脑缺血性疾病的研究进展进行综述。     

尾静脉移植人脂肪干细胞在脑缺血大鼠脑内的存活

背景：间充质干细胞移植可显著改善缺血性脑血管病神经功能。 目的：观察尾静脉途径移植人脂肪源间充质干细胞对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响。 方法：制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为实验组和对照组,实验组在造模后3 d尾静脉注射5×10⁶脂肪源间充质干细胞,对照组不进行细胞移植。 结果与结论：两组大鼠神经功能缺损行为学评分随着细胞移植后时间延长均逐渐降低。移植后第14,21天,实验组大鼠行为学评分较对照组显著降低(P < 0.05),且实验组改善程度明显优于对照组(P < 0.01);移植的人脂肪源间充质干细胞在局灶性脑缺血大鼠血管周边和缺血周边区聚集并存活。说明尾静脉移植的脂肪源间充质干细胞可在宿主脑内存活,并改善神经功能。     

脂肪干细胞及其移植治疗脑缺血的研究与应用

背景：研究表明,脂肪干细胞移植治疗动物脑缺血可改善其神经功能。 目的：复习相关文献就脂肪干细胞的生物学特性、分化能力及其在脑缺血疾病中的应用研究作一综述。 方法：应用计算机检索CNKI,PubMed数据库中2005/2010关于“脂肪干细胞及其移植治疗脑缺血的研究进展”的文章,以“脂肪干细胞,移植治疗,脑缺血”为检索词进行检索,选择内容为同脂肪干细胞及其在脑缺血治疗中的应用研究相关,同一领域文章则选择近3~5年内发表的文章或权威文章。初检到的中英文共152篇,根据纳入标准选择38篇进行综述。 结果与结论：脂肪干细胞其具有取材方便、来源丰富、扩增迅速、无致瘤性、低免疫原性、无伦理约束等多种优势,临床前期实验已经证实,脂肪干细胞移植可改善神经功能紊乱,缩小脑梗死区域,可促进血管新生,改善病灶区血供,并表达神经特异性标志物。实验中脂肪干细胞的移植途径及时间都不同,实验结果都证实了神经功能的改善,但其具体的治疗机制尚不清楚,仍需要扩大对脂肪干细胞移植治疗脑缺血的临床前期研究数量,进一步完善其治疗机制。     

脂肪来源神经干细胞移植局灶性脑缺血模型大鼠的血管新生

背景：脂肪组织来源的神经干细胞移植可改善脑缺血大鼠神经功能,但其机制尚不明确。 目的：观察人脂肪组织来源神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血后血管新生的影响。 方法：体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞。60只健康雄性SD大鼠分为4组：正常组6只,假手术组6只,缺血对照组24只,移植治疗组24只。后两组线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,又分为缺血2 h再灌注7,14,21,28 d组,每个时点各6只。假手术组不闭塞大脑中动脉。造模成功后24 h,移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源神经干细胞悬液,细胞浓度为2×10⁹ L^-1;缺血对照组经尾静脉注射生理盐水。免疫组织化学法进行微血管密度计数,观察脑缺血区血管增生情况。 结果与结论：免疫组织化学结果显示,与缺血对照组比较,移植治疗组缺血2 h再灌注7,14,21,28 d的微血管密度值均显著高于缺血对照组,差异有显著性意义(P < 0.05~0.01)。提示脂肪组织来源的神经干细胞移植可促进脑缺血区新生血管的形成。     

MnTBAP对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的探讨锰卟啉(MnTBAP)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其可能机制。方法采用线拴法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分为假手术组、缺血组、MnTBAP治疗组。缺血组和治疗组术后立即腹腔注射生理盐水和MnTBAP(10mg/kg体重),缺血24h后处死,用原位末端标记技术(TUNEL)和免疫组织化学方法对缺血侧脑组织神经细胞凋亡和凋亡调控蛋白Caspase-3表达进行检测。结果与假手术组相比,缺血组脑组织神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达水平明显增加(P<0.01);与缺血组相比,MnTBAP治疗组神经细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达水平显著减少。结论 MnTBAP能下调Caspase-3蛋白表达,抑制脑组织神经细胞凋亡,对缺血性脑损伤具有保护作用。     

ADSCs对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的抑制作用

目的探讨脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的抑制作用。方法原代分离培养SD大鼠的ADSCs,鉴定干细胞的相关特性。荧光标记ADSCs并经尾静脉注射入DN大鼠体内,检测肾功。观察ADSCs在肾组织的分布及肾组织形态。Western blotting检测肾组织纤维化相关蛋白及Wnt通路相关蛋白的表达。结果 ADSCs具有间充质干细胞的形态,高表达干细胞相关抗原;经尾静脉注射的ADSCs可归巢入DN大鼠的肾组织内,改善了肾功指标,减轻了肾组织病理变化,纤维化指标及Wnt通路相关蛋白表达量明显下降。结论 ADSCs抑制糖尿病肾病大鼠的肾纤维化,对糖尿病肾病有治疗作用。     

移植GDNF基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用

目的:探讨移植胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的神经干细胞(NSCs)是否比单纯NSCs移植对脑卒中有更好的神经保护.方法:用GDNF重组质粒转染NSCs,构建过表达GDNF的NSCs(GDNF/NSCs).插线法制备大鼠脑缺血卒中模型,再灌注3d,脑立体定位分别移植NSCs、 GDNF/NSCs以及生理盐水到同侧侧脑室,实验分为GDNF/NSCs组、NSCs组和对照组.再灌注第1、 2、 3、 5和7周处死大鼠,用改良的神经功能缺失评分和H-E染色分别评估大鼠神经功能和脑梗死体积;免疫组织化学显色观察移植的NSCs数量与分布和突触蛋白Syn、 PSD-95在脑组织的表达.结果:再灌注2、 3周,GDNF/NSCs组较NSCs组神经功能恢复更好.在各时间点GDNF/NSCs和NSCs组大鼠脑缺血体积较对照组显著减小;GDNF/NSCs组的NSCs细胞数量较NSCs组显著增多.再灌注2和3周,GDNF/NSCs组Syn免疫阳性产物比NSCs组显著增加;各时间点GDNF/NSCs组的PSD-95免疫阳性产物比NSCs组显著增加.结论:GDNF基因修饰的NSCs比NSCs对大鼠脑卒中有更好的神经保护作用.     

γ-分泌酶抑制剂对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经保护作用

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂（3,5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）对脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后的神经保护作用。 方法 SD大鼠33只,脑缺血模型制造成功后,随机平均分为3组：模型组、神经干细胞移植组（移植组）、DAPT+移植组。另假手术组11只仅在麻醉状态下分离暴露血管。NSCs移植后7d观察各组大鼠神经行为学改变;TTC染色观察脑梗死体积;尼氏染色观察脑组织病理形态学变化;免疫荧光双标检测BrdU/神经元核抗原（NeuN）阳性细胞表达。 结果 假手术组神经功能学评分为零,无脑梗死灶,细胞形态完好,尼氏小体丰富,BrdU/NeuN阳性细胞表达阴性;与假手术组相比,模型组神经功能学评分增加,有明显神经功能缺损症状,可见明显脑梗死灶,神经细胞排列紊乱,可见核固缩,尼氏小体稀少,存活神经元数量显著减少(P＜0.05),有少量BrdU/NeuN阳性细胞表达(P＜0.05);与模型组比较,移植组和DAPT+移植组都有不同程度神经功能评分减低,脑梗死体积缩小,神经细胞存活数量增加( P＜0.05),BrdU/NeuN阳性细胞表达增多(P＜0.05),以DAPT+移植组各项指标恢复最为明显。 结论 DAPT能够促进移植的NSCs向神经元分化,对脑缺血大鼠神经干细胞移植后有神经保护作用。     

虫草素对大脑中动脉局灶性脑缺血模型大鼠氧化应激和脑损伤的影响

目的　研究虫草素对大脑中动脉局灶性脑缺血模型大鼠氧化应激指标和脑组织Caspase-3和p53表达的影响。 方法　首先，给药组大鼠每天分别腹腔注射虫草素5、10、20 mg/kg，连续10 d；然后，采用改良Zea Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型；造模24 h后，盲法进行神经功能评分，称重法检测脑含水量，HE染色观察脑组织病理损伤，Tunnel染色检测脑细胞凋亡，RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53 mRNA表达，Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53蛋白表达，试剂盒检测SOD，MDA，GSH水平。 结果　给药组与MCAO组相比，神经功能评分显著降低，脑含水量显著减少，细胞损伤减轻，细胞凋亡率显著减少，Bax mRNA及蛋白表达显著下调，Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著上调，MDA含量显著下降，SOD和GSH含量显著上升，Caspase-3和p53 mRNA及蛋白表达显著下调，且这些效果随着虫草素给药量的增加更加显著。 结论　虫草素能够缓解大脑中动脉局灶性脑缺血引起的神经功能障碍和降低脑缺血引起的脑含水量升高，并能抑制大脑中动脉局灶性脑缺血模型大鼠氧化应激和细胞凋亡，从而减缓大脑中动脉局灶性脑缺血造成的损伤。     

N-乙酰半胱氨酸对肾缺血再灌注致肺损伤氧化应激及炎症反应的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对肾缺血再灌注致肺损伤氧化应激及炎症反应的影响。方法Wistar大鼠30只,体重250~300g,随机分为3组(n=10):假手术组(S组,仅切除右肾,游离左肾动脉)、肾缺血再灌注组(I/R组)和NAC处理组(N+I/R组)。NAC组和I/R组切除右肾,夹闭左肾动脉45min再灌注以制备肾缺血再灌注模型,分别于夹闭动脉前30min给予NAC150mg/kg和等量生理盐水。三组均于再灌注4h处死大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果;比色法检测肺组织谷胱甘肽(GSH)及其过氧化物酶(GSH-Px)、ELISA试剂盒检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及血清及肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-6、IL-10浓度。结果NAC可减轻缺血再灌注致肺损伤,使肾缺血再灌注后肺组织GSH、GSH-Px、SOD含量升高,MDA降低,使血清及BALF中TNF-α、IL-6含量降低,IL-10升高(P0.05)。结论N-乙酰半胱氨酸对肾缺血再灌注肺损伤有保护作用,其机制与抗氧化及抑制炎症反应有关。     

过表达klotho基因的脂肪干细胞对糖尿病肾病大鼠肾脏的修复作用

目的探讨过表达Klotho基因的脂肪干细胞(ADMSCs)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的修复治疗作用。方法原代培养SD大鼠ADMSCs,Klotho过表达载体慢病毒感染ADMSCs,嘌呤霉素筛选,获得ADMSCs(Kl+),检测干细胞抗原表达特性。将细胞经尾静脉注射入DN大鼠体内,移植6周检测指标:计算肌酐清除率和24 h尿蛋白量测定肾功,HE染色观察肾组织病理学变化,Western blotting检测肾脏Klotho及α-SMA,Vimentin,Collagen I纤维化蛋白的表达。结果ADMSCs(Kl+)具有间充质干细胞的形态和特性,注射入DN大鼠体内,肾脏功能明显改善,病理改变减轻,Klotho及α-SMA,Vimentin,Collagen I纤维化相关蛋白表达量明显下降,治疗效果明显优于单纯ADMSCs治疗组。结论过表达Klotho基因的ADMSCs对DN大鼠肾脏具有修复治疗作用,与下调纤维化相关蛋白表达相关。     

Role of serotonin in cerebral oxidative stress in rats

Serotonin or 5-hydroxytryptamine (5-HT) is a monoamine neurotransmitter synthesized by the aromatic amino acid decarboxylase using 5-hydroxytryptophan (5-HTP) as a substrate. It was recently shown that serotonin and its precursor have powerful antioxidant properties. The aim of this study was to evaluate the effect of reduction in 5-HT levels by parachlorophenylalanine (pCPA) and their restoration by 5-HTP administration on lipid peroxidation and antioxidant status in rat brain. Serotonin levels were decreased by p-chlorophenylalanine administration. The effect of p-chlorophenylalanine was counteracted by the intraperitoneal administration of 5-hydroxytryptophan. We evaluated the concentration of serotonin, malonyl dialdehyde and the status of antioxidants (GSH, catalase and superoxide dismutase) in brain. The results showed that p-chlorophenylalanine (300 mg/kg) induced a depletion of serotonin concentration and antioxidant status, as well as enhancing malonyl dialdehyde concentration in brain. The exogenous administration of 5-hydroxytryptophan prevented all effects induced by p-chlorophenylalanine in brain tissue. The recovery of the neurotransmitter concentration in brain was related to the reduction of lipid peroxide generation and improved antioxidant status. In conclusion, our study supports the view that the antioxidant properties of serotonin protect against basal oxidative stress in brain.     

人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的治疗作用

文题释义： 脂肪干细胞：是指从脂肪组织中分离得到的一种间充质干细胞,不但具有跨胚层多向分化潜能,在不同培养条件下可以分化成肌肉、软骨、脂肪组织、神经组织或肝脏组织,而且具备取材方便、来源广阔、增殖能力强、免疫原性低等优点,近年来成为干细胞治疗的热点。 外泌体：是一种细胞主动分泌的大小均一、直径为50-150 nm的脂质双分子层结构囊泡,可由树突细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、间充质干细胞和肿瘤细胞等多种不同细胞类型释放。 背景：肝纤维化具有较高的发病率和死亡率,肝星状细胞的活化和增殖是肝纤维化进程中的关键环节。目前还没有针对单一环节或靶点的有效抗纤维化药物。 目的：分析人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响。 方法：①通过酶溶解法获取健康人群来源脂肪中干细胞,体外培养获取一定数量细胞后通过多重超滤法获取外泌体。体外培养的肝星状细胞经转化生长因子β1活化后利用不同浓度外泌体进行处理,通过定量PCR检测细胞内α-平滑肌动蛋白的表达明确其活化程度,以及分别使用CCK-8及流式细胞术检测各组外泌体处理后活化肝星状细胞的生长率及凋亡率。②通过腹腔注射四氯化碳构建肝纤维化大鼠动物模型,尾静脉注射外泌体进行治疗。检测各组动物的肝功能及血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原,肝组织Ishak评分及肝纤维化半定量,以及通过免疫荧光法检测肝组织内基质金属蛋白酶组织抑制剂1、基质金属蛋白酶9及α-平滑肌动蛋白的表达。实验方案于2017年1月经同济大学动物实验伦理委员会以及医学伦理学委员会批准。 结果与结论：人脂肪干细胞来源外泌体可抑制活化的肝星状细胞增殖,其可能的机制为抑制活化巨噬细胞的增殖,减少胶原纤维、α-平滑肌动蛋白及基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达,并促进基质金属蛋白酶9的表达。提示外泌体可治疗四氯化碳诱导肝纤维化。 orcid: 0000-0002-7141-8135 (Li Hongchao) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

脐带间充质干细胞移植治疗大鼠脑缺血损伤

背景：对于缺血性脑卒中至今尚无确实有效的药物治疗,干细胞因其具有高度自我更新能力和多向分化潜能,使其重建中枢神经系统结构与功能成为可能。 目的：观察脐带间充质干细胞移植治疗缺血性脑卒中模型鼠的效果及安全性,并探讨其可能机制。 方法：体外分离人脐带间充质干细胞,移植前以BrdU标记。将SD雄性大鼠制作大脑中动脉闭塞模型后随机分为3组：移植组于造模后第7天,移植脐带间充质干细胞到损伤侧纹状体,PBS组给予等量PBS,模型组大鼠不做处理。 结果与结论：①人脐带间充质干细胞移植组大鼠mNSS评分恢复优于模型组(P < 0.05);模型组mNSS评分在损伤后35 d内恢复速度慢于模型组(P < 0.05),至第56天与模型组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。②移植组大鼠损伤中心及周围均可见Brdu染色阳性细胞及与 Nestin、微管缔合蛋白2、胶原纤维酸性蛋白、Ⅷ因子、血管内皮生长因子免疫组织化学双染阳性细胞。表明脐带间充质干细胞可以在体外分离培养,移植后能在鼠宿主脑内存活、分化,促进大脑中动脉闭塞模型鼠神经功能的恢复。推测其机制可能与移植后细胞分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞,并分泌或促进宿主分泌神经营养因子、促进新生血管形成有关。关键词：大脑中动脉闭塞;人脐带间充质干细胞;大鼠;胶原纤维酸性蛋白;血管内皮生长因子;神经功能 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.011