顺铂对人卵巢癌细胞系A2780/DDP和A2780影响的差异表达蛋白质分析

目的:比较不同浓度的顺铂作用人卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780/DDP和敏感系A2780 48h的双向凝胶电泳(2-DE)图谱的变化,从整体蛋白质水平对卵巢癌顺铂耐药机制进行初步探讨。方法:MTT法观察顺铂对A2780/DDP和A2780细胞系生长的抑制效果。利用2-DE分离顺铂培养48h的A2780/DDP和A2780细胞总蛋白,Image master图像分析系统分析,从中选取部分分离较好的差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析获取肽质量指纹图谱,PeptIdent软件搜索数据库鉴定蛋白质。结果:获取重复性和分辨率较好的顺铂作用人卵巢癌细胞系A2780/DDP和A2780的2-DE图谱。获取5张肽质量指纹图谱。初步鉴定3种可能影响顺铂抑制A2780/DDP或A2780细胞系生长的蛋白质。结论:建立了5μmol/L和20μmol/L顺铂作用A2780/DDP和A2780的2-DE图谱,并识别鉴定出部分差异表达蛋白质,为阐明卵巢癌顺铂耐药机制提供了实验依据。     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

卵巢上皮性癌细胞系铂类药物耐药相关蛋白的比较蛋白质组分析

目的 对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系进行铂类药物耐药相关蛋白的比较蛋白质组分析.方法 应用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）寻找对铂类药物敏感（SKOV3和A2780）及耐药（SKOV3/CDDP、SKOV3/CBP、A2780/CDDP和A2780/CBP）卵巢癌细胞系的差异表达蛋白质.RT-PCR、蛋白印迹法分别验证差异表达蛋白质在各细胞系中mRNA和蛋白的表达水平.结果 共发现5种蛋白质（膜联蛋白A3、破解蛋白、辅酶Ⅱ依赖的异柠檬酸脱氢酶1、谷胱甘肽转移酶omega 1和丝切蛋白1）在3种及3种以上耐药细胞中均有差异表达,膜联蛋白A3的表达差异最显著.膜联蛋白A3基因的mRNA和蛋白表达水平,SKOV3/CDDP、SKOV3/CBP、A2780/CDDP和A2780/CBP细胞较SKOV3和A2780细胞明显升高.结论 应用蛋白质组学技术对SKOV3和A2780细胞系及其4种耐药细胞系进行比较蛋白质组分析,共识别鉴定出5种蛋白质,膜联蛋白A3、破解蛋白、辅酶Ⅱ依赖的异柠檬酸脱氢酶1、谷胱甘肽转移酶omega 1和丝切蛋白1可能参与卵巢癌铂类药物耐药机制的形成.     

APE1 siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究

目的:本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref-1)小分子干扰核糖核酸(siRNA)对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响,探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。方法:应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达,并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1 siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。结果:MTT药物敏感试验表明,20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31.62μmol/L分别降低为13.38μmol/L和3.48μmol/L,有统计学差异(P<0.01)。20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39.73μmol/L和12.43μmol/L,较对照组(64.20μmol/L)分别下降了38.12%和80.64%,有统计学差异(P<0.01)。TUNEL凋亡原位检测表明,40MOI APE1 siRNA处理后,A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为(42.16±3.61)%和(46.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、4.94倍,有统计学差异(P<0.01)。结论:抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。     

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制，为临床化疗提供有效的依据。方法:(1)通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中，分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异，并筛选出高表达基因和低表达基因；使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。(2)利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。(3)利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。(4)利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:(1)两组数据集的高表达共同耐药基因共37个，低表达共同耐药基因共2个。(2)GO分析结果显示：生物学过程(BP)分析结果表明，耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等；细胞组成(CC)分析表明，耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面；分子功能(MF)分析表明，耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示，耐药基因主要在细胞因子与细胞因子...     

利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性

目的:利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性。方法:超速离心法从卵巢癌细胞A2780、SKOV3、CAOV3培养上清及卵巢癌患者血清中提取外泌体。MTT法检测顺铂对卵巢癌细胞株的24h时半数抑制浓度(IC_(50)),检测出顺铂敏感细胞及耐药细胞。MTT法检测敏感细胞A2780在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的增殖。Caspase 3/7活性凋亡检测A2780细胞在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的凋亡。MTT法检测A2780细胞在卵巢癌患者血清外泌体与顺铂共培养条件下的增殖,并随访卵巢癌患者病情进展情况。结果:通过超速离心法能从卵巢癌细胞系培养上清及卵巢癌患者外周血清中分离出外泌体。MTT分析证实A2780为顺铂敏感细胞,SKOV3、CAOV3为顺铂不敏感细胞。细胞系来源的外泌体能显著降低A2780对顺铂的敏感性(P<0.05),同时削弱顺铂对A2780中Caspase 3/7的活性(P<0.05),其中SKOV3和CAOV3外泌体的抑制作用显著高于A2780。基于A2780细胞+顺铂模型,将30例卵巢癌患者分为顺铂敏感组和不敏感组,其中不敏感组的13例患者的血清外泌体降低A2780对顺铂敏感性(P<0.05),术后1年已有5例患者有复发情况,而敏感组无复发。结论:利用A2780细胞模型分析外泌体对顺铂杀伤作用的影响,能在一定程度上评估卵巢癌患者对顺铂的敏感性。     

S100A4与卵巢癌细胞顺铂耐药相关性的研究

目的:探讨钙结合蛋白S100A4与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:MTT法测定顺铂对卵巢癌顺铂敏感细胞株A2780和耐药株CP70的半效抑制浓度(IC50);分别应用免疫细胞化学、Western blot和实时荧光定量PCR检测A2780和CP70细胞株中S100A4的差异表达,观察顺铂处理CP70细胞后S100A4在蛋白水平及基因水平的动态变化。结果:顺铂对A2780和CP70的IC50分别为20.88μmol/ml和57.10μmol/ml。S100A4蛋白在二者中均以胞浆表达为主;CP70中S100A4 mRNA水平和蛋白水平的表达均显著高于A2780;经顺铂处理CP70后,S100A4的表达呈剂量-时间依赖性。结论:S100A4的高表达与卵巢癌顺铂化疗耐药有关。     

microRNA let-7e逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:研究人类microRNA let-7e(hsa-let-7e)在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测let-7e在卵巢癌亲本细胞株A2780及耐顺铂卵巢癌细胞A2780/CP中的表达;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测A2780细胞和A2780/CP细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)mRNA和蛋白的表达。将let-7e模拟物(mimics)及阴性对照(negative control,NC)转染A2780/CP细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测EZH2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的半数抑制浓度(IC50),台盼蓝染色实验检测经顺铂作用不同时间后的细胞存活率。结果:与A2780细胞比较A2780/CP细胞中let-7e呈低表达、EZH2mRNA和蛋白相对表达水平显著增高,差异均有统计学意义(P0.05)。A2780/CP细胞转染let-7e mimics后,EZH2 mRNA和蛋白的相对表达水平较阴性对照组明显下降(P0.05),细胞对顺铂的敏感性显著增强,其半数抑制浓度(IC50值)与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。顺铂作用于转染let-7e mimics的A2780/CP细胞后,细胞的存活率较阴性对照组明显降低(P0.05)。结论:let-7e在卵巢癌耐药细胞A2780/CP中异常低表达,上调其表达可部分逆转细胞耐药性。let-7e可能通过作用于靶蛋白EZH2参与卵巢癌细胞顺铂耐药的发生和发展。     

卵巢癌顺铂敏感株C0C1与其耐药亚株C0C1/DDP间的差异蛋白组学分析

随着后基因组时代的到来及蛋白质组学理论及技术的迅速发展及完善，从蛋白质这一全新的角度探讨卵巢癌的顺铂耐药机制已成为可能。本研究采用差异凝胶电泳（difference gel electrophoresis，DIGE）技术比较分析了卵巢癌顺铂敏感株（C0C1）及耐药株（C0C1／DDP）的差异蛋白，期待找到与顺铂耐药相关的关键分子。     

肝素结合表皮生长因子在顺铂耐药卵巢癌中的表达及相关性研究

目的检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在顺铂耐药卵巢癌中的表达水平并探讨HB-EGF与卵巢癌对顺铂耐药性的关系。方法①体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌亲本细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中HB-EGF蛋白的表达。分别予以HB-EGF抑制剂CRM197治疗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖能力,酶标仪检测加药前后caspase-3蛋白的活性;②体内实验：建立A2780组和A2780/CDDP组卵巢癌裸鼠移植瘤模型,免疫组化法检测2组移植瘤中HB-EGF蛋白的表达。分别予以CRM197治疗观察移植瘤的生长情况并计算CRM197抑瘤率。结果体内外实验结果表明,与A2780组相比,HB-EGF在A2780/CDDP组中高表达。CRM197可有效地降低A2780/CDDP细胞的增殖能力和caspase-3的表达,抑制A2780/CDDP组裸鼠移植瘤的生长（P〈0.001）。结论 HB-EGF在顺铂耐药卵巢癌中高表达,并与卵巢癌对顺铂的耐药性相关。     

白细胞介素6诱导卵巢上皮性癌细胞对化疗药物产生耐药的机制研究

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞对化疗药物产生耐药的机制及相关信号传导通路.方法 应用外源性重组IL-6短期处理或将正义IL-6基因(ssIL-6)稳定转染至A2780细胞(不表达IL-6但表达其受体、对顺铂和紫杉醇敏感),同时将反义IL-6基因(asIL-6)稳定转染至SKOV3细胞(高表达IL-6及其受体、对顺铂和紫杉醇耐药),应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、逆转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白印迹法(western blot)观察IL-6是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对可能的信号传导通路进行研究.结果 (1)外源性重组IL-6处理A2780细胞后,对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为6.25和7.31倍;ssIL-6转染A2780细胞后(内源性过表达IL-6),IL-6低、中、高表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为7.13、7.47和8.34倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为7.61、8.27和10.70倍;而asIL-6转染SKOV3细胞后(抑制内源性IL-6表达),IL-6中、高抑制表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为0.15和0.10倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为0.10和0.08倍,可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性.(2)外源性IL-6作用后,上调了A2780细胞中耐药相关基因MDR1和GST-π以及凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL和XIAP mRNA和蛋白的表达;与此相一致,ssIL-6转染的A2780细胞中MDR1、GST-π及bcl-2、bcl-xL、XIAP mRNA和蛋白的表达水平增加,而asIL-6转染的SKOV3细胞则明显降低.(3)有丝分裂原活化的蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂--PD98059和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--wortmannin能分别阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)的活化作用,且两者均能阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药,细胞生长明显减少.结论 IL-6诱导的卵巢癌细胞化疗耐药很可能与其上调卵巢癌细胞耐药相关基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL、XIAP的表达以及活化MEK/ERK和PI3K/Akt信号传导通路有关.     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

TWEAK激活自噬增强上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP顺铂敏感性的研究

目的:观察TWEAK对上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP的顺铂(DDP)耐药性的影响,并初步探讨其机制。方法:CCK8法测定不同浓度TWEAK刺激后A2780/DDP的顺铂半数细胞致死量(IC50)。Western blot法检测TWEAK刺激A2780/DDP后Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3)及成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的表达水平。激光共聚焦显微镜检测绿色荧光-LC3蛋白(GFP-LC3)在A2780/DDP细胞内的分布情况。用TWEAK刺激敲除Fn14表达的A2780/DDP细胞,Western blot法检测Beclin-1、LC3的表达。结果:CCK8检测结果显示,10、100ng/mlTWEAK组的顺铂IC50分别为(31.940±0.118)μg/ml、(28.769±0.090)μg/ml,均显著低于0ng/ml组(36.358±0.106)μg/ml(P均<0.05)。Western blot法结果显示,TWEAK可呈剂量和时间依赖性诱导Beclin-1、LC3及Fn14表达上调,而特异性敲除Fn14表达后,Beclin-1、LC3表达明显下调。激光共聚焦显微镜检测结果显示,TWEAK可诱导GFP-LC3致密斑形成。结论:TWEAK可增强人卵巢癌细胞耐药株A2780/DDP的顺铂敏感性;呈剂量和时间依赖性激活A2780/DDP的自噬活性,且主要通过与其受体Fn14结合介导。     

卵巢癌顺铂耐药细胞模型中14-3-3蛋白的差异表达

目的探讨卵巢癌顺铂化疗耐药模型中14-3-3蛋白的差异表达,为深入研究卵巢癌顺铂耐药机制提供理论依据。方法分别提取卵巢癌顺铂耐药和敏感细胞的蛋白质,应用差异凝胶电泳(DIGE),通过DecyderTM分析软件获得差异表达蛋白质点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析、鉴定。结果经过二维电泳技术分离,MALDI-TOF-MS成功鉴定出2个14-3-3蛋白亚型,即14-3-3σ和14-3-3ζ,在耐药细胞中表达分别上调31%和38%,t检验P值分别为0.0049和0.0032。结论差异蛋白14-3-3σ和14-3-3ζ的鉴定为探讨这类蛋白在卵巢癌顺铂耐药中的作用奠定了基础,并提供了候选治疗靶点。     

化疗对卵巢癌细胞凋亡和P53、Bcl-2蛋白表达的影响

探讨卵巢癌细胞凋亡过程相关基因及其蛋白表达的变化 ,为解决卵巢癌化疗耐药提供理论依据。方法 :应用不同浓度顺铂处理HO - 8910细胞 ,HE染色观察细胞形态改变 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解 ,SP免疫组化染色观察细胞凋亡过程中P53、Bcl - 2蛋白表达的变化。结果 :由于使用顺铂 ,HO - 8910细胞呈凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。在细胞凋亡的同时 ,P53蛋白表达逐渐升高 ,Bcl- 2蛋白表达逐渐降低 ,二者的变化分别和凋亡细胞数呈正、负相关性。结论 :顺铂通过细胞内P53、Bcl - 2蛋白表达的变化 ,诱导人卵巢癌细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一。卵巢癌细胞对顺铂耐药的产生可能和P53、Bcl- 2蛋白表达有关。     

bcl-2反义寡核苷酸逆转人卵巢上皮性癌细胞耐药的体外研究

目的探讨体外bcl2反义寡核苷酸(AODN)对人卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞顺铂(DDP)耐药的逆转作用。方法以卵巢癌DDP耐药细胞株A2780/DDP为模型,实验组以脂质体为载体,分别将bcl2AODN、bcl2正义寡核苷酸(SODN)、bcl2随机寡核苷酸(RODN)分别转染到A2780/DDP细胞内;阴性对照组细胞以同体积的培养基转染;空白对照组细胞不转染。采用计数法检测细胞增殖变化;RTPCR技术检测bcl2mRNA表达水平;免疫荧光技术检测bcl2蛋白表达。将DDP作用于细胞,观察实验组、阴性对照组、空白对照组对DDP敏感性的差异。采用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DDP对细胞的抑制率。结果实验组转染AODN的A2780/DDP细胞增殖被抑制,细胞倍增时间延迟了24h;A2780/DDP细胞的bcl2mRNA及蛋白的表达量下降,16μg/ml的AODN转染72h后,bcl2mRNA的表达量为0.76±0.01,bcl2蛋白表达量为171.30±3.09,分别与空白对照组bcl2mRNA(1.56±0.03)、bcl2蛋白(105.34±1.72)的表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.01);与相同浓度SODN、RODN转染的A2780/DDP细胞以及阴性对照组A2780/DDP细胞分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组转染AODN的卵巢癌细胞对DDP的敏感性提高,细胞抑制率为(97.49±1.00)%,与阴性对照组的(3.33±0.17)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论AODN可通过下调bcl2mRNA及bcl2蛋白表达水平,抑制细胞的生长,增加细胞对DDP的敏感性,在一定程度上逆转了卵巢癌细胞的耐药性。     

Wnt通路抑制因子甲基化与卵巢癌耐药的相关性

目的探讨Wnt通路抑制因子甲基化与卵巢癌耐药的相关性。方法2008年在四川大学华西第二医院采用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR检测卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR-8(紫杉醇耐药),A2780及A2780/D(顺铂耐药)中,Wnt通路抑制因子SFRP-1、2、4、5,WIF-1、DKK-3的甲基化状态、mRNA水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法比较DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后,OVCAR-8细胞耐药逆转的情况,并检测WIF-1基因甲基化状态、mRNA表达水平的改变。结果WIF-1基因在OVCAR-8细胞中为高甲基化表达抑制,5-Aza-CdR可使其去甲基化后重新表达,并部分逆转OVCAR-8细胞的紫杉醇耐药。结论WIF-1基因的高甲基化状态与卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8的紫杉醇耐药相关,去甲基化后可部分逆转耐药,这为逆转卵巢癌耐药提供了新的研究方向。     

人卵巢癌细胞阿霉素耐药株的建立及其耐药机制的研究

目的：建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对阿霉素的耐药特征和机制。万法；应用浓度递增和短时间作用法，从人卵巢癌细胞A2780中培养出对阿霉素耐药细胞亚株（A2780／ADM）。采用MTT法检测耐药细胞的耐药指数及对抗癌药物的敏感性，用高效液相色谱仪捡测耐药细胞内阿霉素含量，以及应用RT-PCR法和免疫组化法检测MDR1和GST－π的表达情况。结果：（1）A2780／ADM对ADM的耐药指数为38．2，而且其倍增时间较A2780细胞延长，对VCR、MTX呈高度耐药状态，对KSM、CARP、PYM、VP16、CTX和5－FU均有不同程度的耐药。（2）耐药细胞内阿霉素含量明显低于A2780细胞。（3）耐药细胞MDR1的表达呈阳性，而GST－π只有在高浓度的耐药细胞内才呈弱阳性。结论：A2780细胞对阿霉素的耐药是获得性的，并呈多药耐药特征，其耐药的主要原因是细胞内MDR1的过度表达，导致药物在耐药细胞内浓度降低。此项研究结果有助于卵巢癌患者化疗选用药物时作为参考。     

EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系

目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系.方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Rea...     

mda-7/IL-24基因对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨抑癌基因mda-7/IL-24对卵巢癌细胞株A2780和耐药株A2780/ DDP耐药性的影响。方法:构建人mda-7/IL-24基因重组腺病毒,感染A2780和A2780/ DDP的两种卵巢癌细胞株,MTT法检测细胞感染对顺铂(DDP),阿霉素(ADM),5-氟尿嘧啶(5-FU),泰素(Taxol)4种化疗药物敏感性的变化。结果:重组腺病毒载体Ad．mda-7/ IL-24经测序、酶切电泳检测正确;感染后A2780细胞对DDP、5-FU、Taxol的耐药性降低, DDP的药物敏感性提高了15．45倍,5-FU和Taxol的药物敏感性分别提高了2．15倍和3．63倍;A2780/DDP细胞对5-FU药物敏感性提高了2．62倍。结论:成功构建了Ad．mda-7/IL-24重组腺病毒载体,感染卵巢癌细胞A2780可提高对DDP、5-FU和Taxol的敏感性。