急性白血病患儿脑脊液PCR扩增HCMV—DNA的研究

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增和洋地黄深针杂交的方法，对５３例急性白血病（ＡＬ）患儿脑脊液（ＣＳＦ）样本进行了检测，经过ＰＣＲ扩增，可见明显的人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）４００ｂｐ扩增带，经洋地黄探针特异性杂交鉴定，ＡＬ患儿ＣＳＦ标本ＰＣＲ扩增产生的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为８３．０２％。本实验为ＡＬ病人ＣＳＦ的ＨＣＭＶ检测提供了一个简便方法。     

应用增强化学发光法检测PCR扩增的人巨细胞病毒核酸

本文报道用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测ＰＣＲ扩增的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）核酸。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化物酶复合物（ＨＲｐ－ＰＢＱ－ＰＥＩ＋－ＮＨ３＋）与探针结合制成酶标基因探针。探针与靶ＤＮＡ结合后ＨＲＰ可催化检测系统中的发光底物，经增强剂将光信号放大，杂交信号通过Ｘ光片显影。实验证明，用ＥＣＬ检测ＰＣＲ扩增的ＨＣＭＶＤＮＡ产物，敏感性可达０．０１ｆｇ的ＤＮＡ片段，且仅与ＨＣＭＶＤＮＡ的扩增产物杂交。临床应用表明，此方法具有快速、简便、敏感、安全的特点。     

巨细胞病毒宫内感染的诊断及对胎儿的影响

采用地高辛探针斑点杂交技术和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５１例人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）血清学抗体ＩｇＭ阳性孕妇的羊水、脐血和产后两周内的新生儿尿液，进行ＨＣＭＶＤＮＡ检测。同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测脐血、羊水中ＨＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果，地高辛探针斑点杂交检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２１．５７％，脐血３３．３３％，新生儿尿液２７．４５％。ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２９．４１％，脐血４３．１４％，新生儿尿液３Ｓ，２９％。羊水ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为１１．７６％，脐血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为２３．５３％。脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性的新生儿平均出生体重明显低于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿，而脐血ＨＤＷ－ＤＮＡ阳性的新生儿肝功能异常、血小板减少以及低Ａｐｇａｒ评分的发生率明显高于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿。结果表明：采用ＥＲ技术检测羊水、脐血或产后两周内新生儿尿液ＨＣＭＶＤＮＡ有助于ＨＣＭＶ官内感染的早期诊断，便于临床早期干预，ＨＣＭＶ官内感染严重影响胎儿的生长发育，可造成胎儿肝功能异常、血小板减少和新生儿窒息的发生。     

应用YAC探针进行荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病BCR基因重排

为检测慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中ＢＣＲ基因重排，采用酵母人工染色体（ＹＡＣ）ＤＮＡ的Ｉｎ－ｔｅｒ－Ａｌｕ－ＰＣＲ产物为探针进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）研究了１０例ＣＭＬ，其中包括初诊患者２例，ＣＭＬ急变并接受化疗２例，α干扰素治疗２例，自体骨髓移植术（ＡＢＭＴ）后３例和Ｐｈ染色体阴性ＣＭＬ１例。同时进行细胞遗传学和ＲＴ－ＰＣＲ检测。结果：９例ＣＭＬ的４６％～１００％的可分析核型显示ｔ（９；２２）易位，其中携带ｔ（９；２２）细胞最少者为１例自体骨髓移植术后８个月的患者，其６４％的分裂相存在ｔ（９；２２），３６％为正常核型；１例Ｐｈ（－）ＣＭＬ未见ＢＣＲ基因易位，而ＲＴ－ＰＣＲ（＋），提示ＡＢＬ基因片段插入２２ｑ１１，造成隐匿性Ｐｈ染色体。结果表明：应用ＹＡＣ探针进行原位杂交的定位明确。ＦＩＳＨ检测微小残留病（ＭＲＤ）比常规细胞遗传学方法更敏感，而且可以完成ＰＣＲ方法不易进行的定量分析。     

PCR技术用于我国新疆皮肤利什曼病病原体SSUrDNA的扩增及其同源性研究

本文采用引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，对来自我国新疆克拉玛依地区的１２份皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织标本进行ＰＣＲ扩增。结果显示１２例ＣＬ患者病变组织均出现预期的３９７ｂｐ的阳性扩增区带。同时用地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针进行斑点杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。斑点杂交结果显示：Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针只与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ出现阳性杂交信号，与Ｌ．ｔｕｒａｎｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ无阳性杂交信号，上述探针与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交均出现阳性杂交区带。以上结果证实Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ与我国新疆克拉玛依地区皮肤利氏曼病病原体ＳＳＵｒＤＮＡＰＣＲ扩增产物存在同源关系     

巨细胞病毒mRNA表达与活动性感染关系的研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ在９０年代初已广泛应用，但其亚临床型或潜伏感染均呈阳性反应。本文用两对引物对ＨＣＭＶｍＲＮＡ进行即刻早期（ＩＥ）、晚期（Ｌ）基因反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增，首次在国内从临床标本中检测出...     

乙型肝炎病毒(HBV)相关性肾炎患者肾活检组织中HBV DNA分布的分子生物学检测

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肾炎的发病机理，应用地高辛素标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位分子杂交（ＩＳＨ）和直接原位聚合酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）技术，对２０例临床诊断为ＨＢＶ相关性肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片检查。在ＩＳＨ中采用ＨＢＶＤＮＡ两种探针：用全长段探针，８５％（１７／２０）ＨＢＶＤＮＡ阳性，这１７例阳性肾组织切片再用ＨＢＶＤＮＡＳ加Ｃ段探针检测，１４例阳性（８２．３５％）。在ＩＳ－ＰＣＲ中本组病例８５％（１７／２０）亦阳性。发现ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒弥漫沉积于肾小球毛细血管袢、系膜区、肾小管，表现形式以浆核型、核型为主。同组病例肾组织免疫组化染色法（ＬＳＡＢ）显示，ＨＢｓＡｇ与ＨＢＶＤＮＡ的存在部位基本一致。提示ＨＢＶ引起的肾脏病变不仅是免疫介导的损害，亦可能有病毒侵犯参加免疫反应。     

乙型肝炎病毒（HBV）相关性肾炎患者肾活检组织中HBVDNA分布…

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肾炎的发病机理，应用地高辛素标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位分子杂交（ＩＳＨ）和直接原位聚合酶链反应（Ｓ－ＰＣＲ）技术，对２０例临床诊断为ＨＢＶ相关性肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片检查。在ＩＳＨ中采用ＨＢＶ ＤＮＡ两种探针；用全长段探针；８５％（１７／２０）ＨＢＶＤＮＡ阳性，这１７例阳肾组织切片再用ＨＢＶＤＮＡＳ加Ｃ段探针检测，１４例阳性（８２．３５％）。在ＩＳ－ＰＣＲ中     

反义Gαq／11亚基ODNs对平滑肌细胞DNA合成和PC蛋白表达的 …

目的：探讨Ｇｑ蛋白介导血管活性多肽对ＶＳＭＣＤＮＡ合成及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。方法：用硫代的Ｇαｑ／１１亚基反义寡聚脱氧核苷酸，以６μｍｏｌ／Ｌ的浓度加入含１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ刺激无血清ＤＭＥＭ培养基中体外培养ＶＳＭＣ。用＾５Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＶＳＭＣＤＮＡ合成，免疫细胞化学技术检测ＶＳＭＣＰＣＮＡ蛋白表达。结果：Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ可明显抑制ＶＳＭＣＤＮＡＲ的合成，在     

PCR和ELISA检测单纯疱疹病毒的比较

依据ＨＳＶ ＤＮＡ多聚酶基因核苷酸序列设计并合成一对引物，建立了ＰＣＲ方法。用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ平行检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２标准毒株感染的细胞，拟诊ＨＳＶ脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）及多种对照标本。结果表明，两方法特异性完全一致；ＰＣＲ检测阳性率高，比ＥＬＩＳＡ敏感近２０倍，更适用于ＨＳＶ脑炎的早期诊断。     

PCR－ECL在乙型肝炎病毒基因检测中的应用及与其他方法的比较

ＰＣＲ－ＥＣＬ在乙型肝炎病毒基因检测中的应用及与其他方法的比较史云青，周斌，陈常庆，顾士民，傅龙亭，蒋伟伦经聚合酶链反应（ＰＣＲ）将微量血清中的ＨＢＶＤＮＡ扩增后，以生物素标记的探针与ＨＢＶＤＮＡ进行斑点杂交，采用新型的加强化学发光法检测乙肝病毒。这...     

应用PCR法检测新生儿肝炎综合征患者HCMV－DNA

应用ＰＣＲ法检测新生儿肝炎综合征患者ＨＣＭＶ－ＤＮＡ长春市儿童医院应用ＰＣＲ检测３０例临床诊断为新生儿肝炎综合征（ＮＨＳ）患者和１４例正常新生儿尿中人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）。结果阳性率分别为６６．７％和１４．２９％，两者差异显著。ＨＣＭ...     

肾综合征出血热病毒76－118株的反转录及聚合酶链反应扩增、鉴定的初步研究

用反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）７６－１１８株ＭＲＮＡ３＇－端２３７ｂｐ基因片段。制备了长臂光敏氨基已酸生物素标记的２３７ｂｐ探针。经琼脂糖电泳和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹，生物素－亲和素系统杂交和显色，对２３７ｂｐ扩增产物进行了特异性和灵敏性鉴定。ＰＣＲ技术与反转录技术相结合可用来对一些ＲＮＡ病毒进行研究和诊断，并能快速制备出质量较好的标记探针。     

用PCR技术产前诊断人巨细胞病毒感染

用ＥＬＩＳＡ法筛选早孕妇女血人巨细胞病毒ＩｇＭ（ＨＣＭＶ－ＩｇＭ），在孕１２￣２０周用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测其羊水中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，对胎儿巨细胞病毒感染作出产前诊断。在３８４例孕妇中，筛选出血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性２６例为实验组，其羊水ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为３４．６２％；从２５８例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阴性中选出２０例为对照组，其羊水ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为１０．０％，两组比较有显著性差异（     

构建T载体快速克隆丙型肝炎病毒5′端非编码区扩增产物

为探讨自行构建Ｔ载体的简便方法，克隆丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５′端非编码区（５′ＮＣＲ）扩增产物，并为制备ＨＣＶ检测探针作准备。以ＳｍａⅠ消化质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋），酶切产物纯化后在仅含有脱氧腺苷酸的聚合酶链反应（ＰＣＲ）缓冲液中７０℃作用２小时，构建成Ｔ载体。根据ＰＣＲ扩增产物３′端存在一个非模板依赖的脱氧腺苷酸原理，将扩增产物直接克隆入Ｔ载体。同时以ＳｍａⅠ消化的质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）与ＰＣＲ产物平端连接作为对照。限制性酶切长度多肽性分析，ＰＣＲ及ＤＮＡ序列测定等均证实克隆构建成功。ＡＴ克隆的连接效率约为平端连接的４２倍。以上结果表明，构建Ｔ载体经济、简便。ＡＴ克隆快速、有效。所构建的克隆可用作ＰＣＲ实验对照模板或制备探针。     

CLONING AND SEQUENCE CHARACTERIZATION OF THE RE-ARRANDED VH GENE FROM HYBRIDOMA CELLS SECRETING ANTI-HUMAN C1-INHIBITOR McAb

由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，合成与ＶＨ基因ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，以ＲＮＡ反转录合成的第一链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ法克隆出Ｆ７ＶＨ基因的ＤＮＡ片段。将分离获得的目的ＤＮＡ片段亚克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两头进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＨ基因是由３３３个碱基组成，编码１１１个氨基酸残基。通过国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现，Ｆ７ＶＨＤＮＡ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因特征；同源性为６０％～８５％，应归属于Ｉｇ的ＶＨ基因。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＨ基因推导的氨基酸顺序属于小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因的Ⅱ（Ａ）亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３重排产生；其框架区的９和６７位点为脯氨酸（Ｐｒｏ）和赖氨酸（Ｌｙｓ）（非芳香族氨氨酸），符合Ⅱ（Ａ）亚组框架残基结构模式；其ＣＤＲ３区含有７个氨氨酸残基，表明Ｃ１－ＩＮＨ抗原表面结构并不复杂；ＦＲ２和ＦＲ３的２２和８９位点为半胱氨酸残基（Ｃｙｓ），与ＶＨ片段二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＨ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下良好的基础。     

用聚合酶链反应和放射免疫法检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

将５０例肾移植术后发热病人的尿标本接种细胞，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测第１代细胞培养上清中的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果１９例为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为３８．００％，用固相放射免疫法（ＲＩＡ）检测ＨＣＭＶ抗原，阳性的有１５例，阳性率为２７．７７％。将５４倒尿标本接种人胎肺二倍体单层细胞，分离到６株ＨＣＭＶ。用ＥＬＩＳＡ检测６５例病人单份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体，阳性的有１７例，检测４５例病人双份血清ＩｇＧ抗体，１１例的第２份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＧ抗体滴度比第１份有４倍以上升高。上述结果表明，ＰＣＲ检测结果与ＲＩＡ的检测结果基本符合；病人血清抗体的阳性率与ＰＣＲ检测的阳性率基本符合。     

原位PCR技术检测石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒DNA

应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测了２５例尸检畸形胎儿石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ及原位杂交（ＩＳＨ）进行了比较。ＩＳＰＣＲ、ＰＣＲ及ＩＳＨ检测阳性率分别为４４％，３６％及２０％。与ＩＳＨ相比较，ＩＳＰＣＲ不仅检出阳性率高，而且信号强度增强。研究结果提示，ＩＳ－ＰＣＲ是诊断ＨＣＭＶ感染的快速、敏感、特异的实用方法。     

HBcAg/HBeAg对慢性乙型肝炎患者PBMC中Th1/Th2类细胞应答的影响

目的 探讨ＨＢｃＡｇ／ＨＢｅＡｇ对慢性乙型肝炎患者ＰＢＭＣ中Ｔｈ１／Ｔｈ２类细胞应答的影响。方法 用套式ＰＣＲ法检测６４便慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＨＶＢ ＤＮＡ;分别用ＰＨＡ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢｅＡｇ体外培养;ＥＬＩＳＡ法检测ＰＢＭＣ产生Ｔｈ１类细胞因子（ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ）和Ｔｈ２类细胞因子（ＩＬ－４、ＩＬ－１０）的含量。结果 表明ＨＢＶ ＤＮＡ阳性组和阴性组相比,无论是在ＰＨＡ还是在ＨＢｃＡ     

PCR技术和血清抗体检测妊娠期巨细胞病毒感染价值的比较

将ＰＣＲ技术检测孕妇血白细胞中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ检测孕妇血清中ＨＣＭＶ特生ＩｇＭ和ＩｇＧ进行对比研究。结果：ＤＮＡＰＣＲ阳性率为４２．００％，与ＩｇＭ阳性率２５．５８％比较，Ｐ〈０．０５，与ＩｇＧ阳性率６２．７９％比较，Ｐ〈０．０１，说明ＤＮＡＰＣＲ较ＩｇＭ检测敏感，但不如ＩｇＧ。结论：ＤＮＡＰＣＲ更适用于论断先天性ＨＣＭＶ感染和一部分检测不出ＩｇＭ的ＣＭＶ复发感染者，对妊娠期ＣＭＶ感染