食品中单核细胞增生性李斯特氏菌检测及污染现状分析

单核细胞增生性李斯特氏菌（L．m）是一种能引起人畜共患病,又是致病性强的食源性病原菌后其临床症状为人类脑膜炎、菌血症、孕妇流产等。该菌在自然界分布广泛,不易被寒冷、日晒等因素杀灭,多种食品均有不同程度的污染。该菌所致疾病多次在世界上引起爆发,且死亡率在30％左右．它是20世纪90年代的主要致病菌之一。由于近年来不断从食品中分离到致病性李斯特氏菌,在我国也引起了高度重视．在2000年我国启动的全国污染物监测课题中,浙江省绍兴市作为成员之一对近2年市售食品中李斯特氏菌污染状况进行了初步调查。     

武汉市食品中单核细胞增生性李斯特氏菌污染状况调查

单核细胞增生性李斯特氏菌 (LM) ,是重要的食源性疾病的病原菌 ,在自然界分布广泛。该菌致病性强 ,可引起人类菌血症 ,脑膜炎等症状 ,不易被寒冷日晒等强烈因素所杀灭。国外对该菌高度重视 ,WHO将其列为九十年代食品中四大致病菌之一〔1〕。我国虽未报道单核细胞增生性李斯特氏菌食物中毒 ,但此次食品污染状况调查初步了解了单核细胞增生性李斯特氏菌在武汉市食品污染状况 ,为制定食源性致病菌的预防措施提供了依据。1　材料和方法1 1　样品来源和品种　采自武汉三镇市售生肉、熟肉、乳制品 (酸奶、果奶 )、冷饮 (冰淇淋 )、乳 (生奶、消…     

漳州市首次分离出单核细胞增生李斯特氏菌

单核细胞增生李斯特氏菌(简称LM),是李斯特菌属中唯一能引起人类和动物患菌血症、脑膜炎、流产等高病死率的病原菌,也是造成目前国内外食品污染的食源性致病菌之一。LM在自然界分布广泛,可污染蔬菜和多种食品,欧美国家由LM引起的食物中毒不断发生,其发生率在全球大幅度上升,引起世界各国卫生部门的高度重视。我市以往对LM的污染调查尚属空白,为预防它发生和流行,近年来我们对市区居民消费的六大类食品进行采样检测,现将调查结果报告如下:1　材料和方法1.1　样品来源　324份样品采自市区主要14个菜市场、3家大超市和15家食品商店,其中生…     

卤制品中单核细胞增生性李斯特氏菌污染调查

单核细胞增生性李斯特氏菌 (Lm)是人畜共患病病原体 ,致病性强 ,在世界范围内引发了多起严重的食物中毒。因而越来越引起重视。为了解食品Lm污染状况 ,于 2 0 0 1年 5月对武汉市各集贸市场抽取了三类卤制品共 80份作Lm污染调查。并对阳性株作药敏试验 ,发现食品污染严重且抗药性普遍 ,报告如下。1　材料与方法1 1　样品　随机抽取各集贸市场卤制品 (卤牛肚、卤牛肉、卤鸭子 )共 80份。1 2　培养基及试剂1 2 1　培养基　北京陆桥商检新技术公司提供。1 2 2　试剂盒　生物梅里埃公司提供 ,按说明书操作。1 3　试验动物　江汉大学医…     

用PCR检测六类食品中单核细胞增生李斯特氏菌

目的　调查福建省食品中李斯特氏菌的污染状况。方法　用GB4789 30 - 94单核细胞增生李斯特氏菌 (Listeriamonocytogenes简称Lm)的检验方法分离菌株 ,用PCR检测李斯特氏菌的两种致病因子。结果　从福建采集 2 6 5份样品中分离出 17株李斯特氏菌 ,其中 ,2株Lm含有李氏溶血素O (ListerialysinO ,Hly)和内化素基因 (Internalin Inl) ,15株英诺克李斯特氏菌 (Listeria innocua)中 8株含有内化素基因 ,7株两种基因均为阴性。结论　从生鸡肉和生牛肉检出 2株Lm ,表明我省存在李斯特氏菌病的可能性 ,有必要进行深入研究。     

乌鲁木齐市部分食品中单核细胞坛生李斯特氏菌污染的调查

目的调查单核细胞坛生李斯特氏菌在我市部分副食品市场所供应的六类食品污染状况,以预防该菌的传播和食物中毒而提供科学依据. 方法参照GB4789.30-94<单核细胞坛生李斯特氏菌的检验>方法进行. 结果所测460份食品中,单核细胞坛生李斯特氏菌的阳性检出率为4.8%,其中以肉类食品污染较高(7.5%). 结论乌鲁木齐市售食品中存在单核细胞坛生李斯特氏菌的污染,在食品带菌及食物中毒调查时应考虑到该菌污染的可能性.     

2007～2011年甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌监测分析

目的对食源性致病菌单核增生李斯特菌进行监测,了解甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况及分布,并确定高危即食食品的种类。方法按中国疾病预防控制中心营养与食品安全所建立的全国食品污染物监测网的食源性致病菌监测部分操作,2007～2011年从甘肃省14个市(州)农贸市场、超市及酒店餐馆采样,并监测十大类(生食水产、熟肉制品、凉拌菜、即食非发酵豆制品、冰激凌、速冻熟制米面、生食蔬菜、地方特色米面食品、鲜榨果蔬汁、糕点饼干)食品,共计4 447份。结果 4 447份十大类产品中共检出单核细胞增生李斯特菌88株,总检出率为1.98%;糕点饼干未检出,冰激凌检出率达8.33%,其次是凉拌菜(3.14%)、非发酵豆制品(2.56%)、生食蔬菜(1.80%)、地方特色米面(1.73%)、速冻米面制品(1.52%)、熟肉制品(1.35%)、生食水产品(1.09%)、鲜榨果汁(0.70%);不同季节无显著性差异;全省14个市(州)检出率最高的是嘉峪关市,为5.45%,其次为定西、白银,分别为4.55%,2.91%,检出率最低的是陇南市为0.46%;单核细胞增生李斯特菌定量检测,菌落数在0.3～10 MPN/g占72.41%,10～100 MPN/g占20.69%,100～200 MPN/g占9.52%。结论甘肃省即食食品中单核细胞增生李斯特菌的污染严重,14个地(市)中嘉峪关、定西、白银检出率较高;十大类食品中冰激凌、凉拌菜、非发酵豆制品污染单核增生李斯特菌严重。     

单核细胞增生李斯特菌溶血素的研究进展

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）属于李斯特菌属,与其同属的还有伊万诺夫李斯特菌（L．ivanovii）、无害李斯特菌（L．in-nocua）、威斯梅尔李斯特菌（L．welshimeri）和西里杰李斯特菌（L．seeligeri）,L．ivanovii仅感染反刍动物,而LM是人畜共患李斯特菌病的主要病原,亦是四大食源性病原菌之一。     

单核细胞增生性李斯特菌PCR快速检测方法建立及应用

目的　通过扩增hly基因PCR法建立快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌 (Lm )方法。 方法 :用PCR法扩增hly基因来检测标准菌株及临床分离的Lm的纯培养物和模拟污染的生猪肉、水和牛奶 ,并应用于实际食品检验工作中进行验证。结果　 34株Lm的PCR结果呈阳性 ,而其它李斯特菌 ,包括英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌、西尔李斯特菌、威儿李斯特菌和格氏李斯特菌以及非李斯特菌均未出现特异性的片段。表明所扩增的hly基因 3’末段 82 7bp的DNA片段对Lm具有较高的特异性。PCR法对Lm纯培养物的检测限达 10 5CFU/ml,对模拟污染生猪肉、水和牛奶的 30℃ 16h改良LEB增菌培养液用PCR法检测 ,结果检测限达 10CFU/ 2 5 g(ml)。进一步研究表明该PCR扩增体系能检测出 6 .5pg的LmDNA ,整个检测过程只需 2 4h。采用该法对扬州市区 16 9份食品样品检测 ,8份样品Lm呈阳性且结果与传统的生化鉴定方法完全一致。结论　扩增hly基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点 ,可用于食品的Lm的分离     

张家界市2012年食品中单核细胞增生李斯特菌检测分析

<正>单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,下称单增李氏菌)是一种能引起人畜共患病李氏菌病的病原,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多[1]。该菌广泛存在于自然界,食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险。4℃的环境中该菌仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。因此,在食品安全风险监测中,对单增李氏菌检测受到高度重视。现将我市2012年食品中单增李氏菌检测结果分析如下。     

单核细胞增生性李斯特菌溶血素基因的原核表达

目的为获得大量的单核细胞增生性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，Lmo）溶血素（Hemolysin，hty）蛋白，以便研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制方面的作用。方法本文应用Primer Premier5．00设计引物，引入13amHI和x幻工酶切位点。以前期合成构建的pMDl8-T-hly质粒为模板，通过PCR方法扩增出Lmo0586株溶血素基因。相应酶切后，克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中，构建pGEX-6p-hly重组质粒，转化入大肠杆菌BL21（DE3）进行表达。带有重组质粒pGEX-6p-hly的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导后，进行SDS-PAGE及免疫印记分析。结果PCR体外扩增hly基因产物大小约为1624bp，成功构建了重组表达质粒pGEX-6p—hly；SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为72ku，重组蛋白主要以包涵体形式表达。表达量占菌体总蛋白的20．8％；Western免疫印记表明具有良好的反应原性。结论在国内首次构建重组质粒pGEX-6p-hly，并以融合蛋白的形式进行了高效表达，同时该蛋白具有特异的抗原反应性，为研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制中的作用奠定了基础。     

双重PCR法检测冷冻淡水水产品中单核细胞增生性李斯特菌的研究

目的建立一种快速有效地检测出口冷冻淡水水产品中单核细胞增生性李斯特菌的方法。方法以李斯特菌属特异性iap基因和种特异性hly基因为靶序列,建立双重PCR方法;比较和优化3种提取模板的方法;通过干扰实验、模拟污染实验等验证了所建方法的稳定性、特异性、敏感性;并与SN0184-93方法和mini-VIDAS方法进行比较。结果建立的方法稳定性强、特异性和敏感性好,检测限度为3cfu/25g样品,检测结果与SN0184-93方法和mini-VIDAS方法的一致性为100%;该方法可直接使用单核细胞增生性李斯特菌菌液作为模板进行扩增。结论建立的双重PCR方法可快速、敏感,特异地检测出口冷冻淡水水产品中单核细胞增生性李斯特菌。     

利用商品DNA探针对食品中单核细胞增生李斯特菌的快速检测评估

用商品核酸探针 (AccuProbe)对 10 0份市售食品中单核细胞增生李斯特菌进行检测和验证 ,并以酶联免疫荧光分析技术 (VIDAS)和常规培养分离物做生化鉴定 (API)做平行测试比较 ,最终证实基因探针 (AccuProbe)对食品中单增李氏菌的检测具备正确、灵敏、快速、简便等优点 ,适于推广应用     

猪肉产业链中单核细胞增生李斯特菌的流行病学研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是一种重要的人兽共患食源性病原菌,该菌可沿猪肉产业链进行传播,所引起的李斯特菌病时有报道,对消费者健康造成了巨大威胁。猪通过摄食Lm污染的饲料而引起感染,猪李斯特菌病以暴发或散发方式发生,病死率较高。猪体表携带的Lm和排出粪便中的Lm导致饲养环境的污染,从而在养殖场中循环传播。Lm的检出率随着猪屠宰工序的进行逐步提高,肉制品在加工环节可发生交叉污染。销售环节中Lm的污染被进一步放大,生肉和即食性食品中的污染不容乐观。临床研究表明国内人李斯特菌病以散发为主,而国外以暴发为主。本文概述近年来国内外猪肉产业链中Lm的流行规律,为有效预防和控制李斯特菌病奠定了理论基础。     

单核细胞增多性李斯特菌主要毒力因子研究进展

单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称Lm）为重要的食源性人兽共患病原菌，可引起人和动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症、流产等。Lm为侵袭性胞内菌，可穿越宿主的三道屏障，可在巨噬细胞和非巨噬细胞（如上皮细胞等）中存活并增殖。     

单核细胞增生性李斯特氏菌溶血素基因克隆及原核表达载体构建

目的　构建单核细胞增生性李斯特氏菌 (Listeriamonocytogenes,LMO)溶血素基因重组表达质粒。 方法　本文采用PCR方法扩增出LMO 0 5 86株溶血素 (Hemolysin ,hly)基因 ,将其克隆到pMD18-T中 ,筛选带有插入片段的阳性质粒。经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。继而用SalⅠ和XbaⅠ双酶切阳性质粒 ,目的片段定向插入pPROEXTMHTa中进行鉴定。结果　hly基因体外扩增产物大小约为 16 4 6bp。核苷酸序列鉴定后 ,其核苷酸序列与国外报道的LMOF6 789株、LMOF2 36 5株同源性分别为 99 70 %和 99 39%。推导出的氨基酸序列与其相应菌株比较 ,同源性分别为 99 82 %和 98 90 %。重组表达质粒经PCR及酶切鉴定表明为正确重组子。结论　在国内首次克隆到LMOhly全基因 ,并构建出含hly基因的原核表达载体。此项工作为进一步LMO溶血素基因的表达奠定了基础。     

单核细胞增生性李斯特氏菌种、株随机扩增DNA多态性研究

目的　分析单核细胞增生性李斯特氏菌种、株基因组DNA多态性 ,为其分型、鉴定提供理论依据。方法　应用随机扩增多态性DNA技术对李斯特氏菌基因组DNA进行扩增 ,根据DNA指纹图谱分析单核细胞增生性李斯特氏菌种、株的遗传多样性 ,同时构建相似性系数矩阵和树状图。结果　不同序列的随机引物扩增的RAPD图谱的多态性程度不同 ,其中单一引物P-7与复合引物P-1P-3 、P-4P-9扩增产生的指纹图谱对单核细胞增生性李斯特氏菌种、株均具有良好的区分能力。由该 3种引物扩增的RAPD图谱计算出的相似性系数矩阵及由此构建的聚类树状图均能得到李斯特氏菌的系统发育关系。结论　RAPD技术可用于李斯特氏菌的快速鉴定。     

单核细胞增生性李斯特菌作为肿瘤疫苗运送载体的研究进展

单核细胞增生性李斯特菌是一种兼性胞内寄生菌,能直接感染抗原递呈细胞,使所运送的外源抗原可以同时进入MHCⅠ类和MHCⅡ类抗原递呈途径,从而诱导强烈的CD⁺₈T细胞和CD⁺₄T细胞免疫应答。目前,减毒李斯特菌作为一种新型的活疫苗载体,在运送宫颈癌、黑色素瘤等肿瘤相关抗原方面业已取得较好的免疫保护效果,在抗肿瘤治疗中显示出诱人的前景。本文综述了单核细胞增生性李斯特菌的免疫应答特性及其作为治疗性肿瘤疫苗载体的相关研究进展。     

分子分型方法在单核细胞增生性李斯特菌流行病学研究中的应用

单核细胞增生性李斯特菌(Lm)是一种重要的食源性人兽共患病病原菌,所引起的李斯特菌病虽然发病率低,但病死率高。传统的Lm分型方法步骤繁琐、重复性差、分辨率低。目前,多种针对Lm的分子分型方法逐渐完善,而且分辨力、分辨率、操作性和敏感性均优于传统分型方法。就目前Lm分子流行病学研究中常用的分子分型方法(PFGE分型、MLVA分型、MLST分型、MVLST分型、Lineage分型)阐述、比较,为Lm食源性疾病监测、暴发的诊断及溯源提供参考。     

温州海产贝类单核细胞增生李斯特菌的污染检查

目的了解温州市海洋贝类单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)的污染状况。方法 2009年7月在温州沿海地区抽取贝类样品进行微生物检测。结果在100份样品中,Lm阳性3份,占总数的3.00%。结论温州市海洋贝类已受到Lm的污染,应加强卫生监督。