三步序贯法对哮喘大鼠气道重塑激素干预模型支气管肺组织病理形态学的影响

目的探讨光镜、电镜观察三步序贯法对哮喘大鼠气道重塑激素干预模型支气管肺组织病理形态学的影响。方法模拟临床激素依赖型哮喘患者激素撤减过程,建立哮喘大鼠气道重塑激素干预模型,150只大鼠随机分为气道重塑组、地塞米松干预组、普米克令舒组、三步序贯组及正常对照组。光镜、电镜下观察各组大鼠支气管肺组织形态学改变,并测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量的变化。结果光镜下肺组织HE染色,各组致敏大鼠可见不同程度炎细胞浸润,三步序贯组炎症反应明显减轻;光镜下Masson三色染色,气道重塑组肺间质胶原纤维大量沉积,地塞米松干预组激素撤减过程中亦出现胶原纤维沉积增多,而三步序贯组及普米克令舒组较以上2组明显减少。支气管壁厚度,激素撤减前三步序贯组与气道重塑组相比明显减低(P0.01),激素撤减中三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比减低(P0.01、P0.05),激素撤减后三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比均明显减低(P0.01);支气管平滑肌厚度,激素撤减前三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比均无差别(P0.05),激素撤减中三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比均减低(P0.05),激素撤减后三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比均明显减低(P0.01);支气管平滑肌细胞核数量,激素撤减前三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比减低(P0.01、P0.05),激素撤减中、后三步序贯组与气道重塑组、地塞米松干预组相比均明显减低(P0.01)。电镜观察,地塞米松干预组激素撤减中、后与气道重塑组情况接近,而三步序贯组及普米克令舒组激素撤减过程中气道上皮细胞纤毛脱落情况明显改善。结论三步序贯法能够明显减轻哮喘模型大鼠支气管肺组织病理形态学方面的炎性改变,从而对气道重塑起到阻抑作用。     

卡介苗对支气管哮喘大鼠气道重塑及血清HIF-1α表达的影响

目的探讨卡介苗（BCG）干预下,支气管哮喘大鼠气道重塑以及血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达情况。方法将30只清洁级健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为对照组、哮喘组和BCG治疗组,每组10只。哮喘组大鼠采用腹腔注射10%卵白蛋白（OVA）+氢氧化铝混合液致敏,再用1% OVA超声雾化吸入的方法进行激发制作支气管哮喘模型;对照组大鼠采用相同的制模方法,但在相应的时间点使用0.9%氯化钠溶液替代致敏剂,进行腹腔注射和超声雾化吸入处理。BCG治疗组大鼠制模方法与哮喘组相同,每天雾化前半小时皮内注射BCG 0.025 mg进行干预治疗。3组大鼠在末次激发24 h后收集血清标本,采用ELISA法检测HIF-1α含量,采血后处死大鼠并制作气管和肺组织病理切片,观察大鼠气道炎症及气管重塑情况。运用图像分析软件测量支气管内径周长（Pi）、支气管管壁面积（WAt）、支气管平滑肌总面积（WAm）等指标, 并与Pi比较进行标化。结果对照组大鼠肺组织中肺泡、气管、血管结构均正常;哮喘组大鼠肺泡壁明显增厚,气管腔可见黏液残留,部分可见肺泡腔内出血;BCG治疗组大鼠肺组织整体结构趋于正常。哮喘组大鼠血清中HIF-1α含量较对照组升高,经BCG干预后,大鼠血清HIF-1α降低（P < 0.01）。HIF-1α和支气管壁厚度（WAt/Pi）之间的相关性呈正相关,和支气管平滑肌厚度（WAm/Pi）之间的相关性呈正相关（P < 0.01）。结论支气管哮喘大鼠经过BCG干预治疗,气道重塑减轻,可能是通过抑制HIF-1α的表达来发挥作用。     

地塞米松对支气管哮喘大鼠气道重塑及内皮素-1的影响

目的观察哮喘大鼠血浆内皮素-1与气道重塑的关系及早晚期使用地塞米松的差异。方法40只大鼠随机分为对照组、模型组、早期干预组、晚期干预组,每组10只。以卵白蛋白致敏并吸入激发制备大鼠哮喘模型。模型组于第1、8天注射卵白蛋白（100g／L）,第15天始雾化卵白蛋白（10g／L）,20min／d。早期干预组同模型组,但雾化卵白蛋白前1h腹腔注射地塞米松,晚期干预组雾化卵白蛋白2周后注射地塞米松,对照组雾化与注射均用生理盐水代替。连续雾化8周。采用特异性放射免疫技术测定大鼠血浆内皮素-1含量。各组大鼠肺组织切片苏木精-伊红染色,计算机彩色图像分析测量大鼠气道形态学参数。结果早期干预组血浆内皮素-1水平高于对照组且低于哮喘组和晚期干预组（P〈0．05）。早期干预组平滑肌厚度、总管壁厚度均高于对照组,均明显低于哮喘及晚期干预组（P〈001）。结论内皮素-1在哮喘气道重塑中有重要作用。地塞米松可抑制气道壁和平滑肌厚度,早期使用可以延缓但不能逆转气道重塑。     

气道重塑大鼠模型的研究现状

筛选30余篇可信度高的关于气道重塑大鼠模型建立的实验研究类论文,总结出复制支气管哮喘气道重塑动物模型的研究现状:品系选择上,SD大鼠、Wistar大鼠和BN大鼠等较小鼠更有优势,近年来SD大鼠在国内被较多采用.国内相关文献查阅中发现SD大鼠的应用率占56％.对于SD大鼠体质量和鼠龄的选用,体质量一般为180 g左右,4～6周龄,致敏原的选择及激发方式以用卵蛋白(OVA)加用免疫佐剂,腹腔注射和皮下注射联合致敏的途径为优.     

PTEN表达变化在哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的 探讨第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)在支气管哮喘大鼠气道中表达的变化及其在气道重塑中的作用.方法 将20只大鼠随机分为对照组和哮喘组,以卵蛋白制成哮喘模型,苏木精-伊红染色观察支气管-肺组织形态学改变,免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(PCNA)、PTEN在气道中的表达,RT-PCR检测气道PTEN mRNA表达.结果 与对照组比较,哮喘组大鼠气道平滑肌增生肥厚,PCNA表达显著增强,PTEN表达则显著减弱,两者呈负相关(r=-0.823,P<0.01).结论 PTEN基因失活可能在支气管哮喘气道重塑的形成中起重要作用.     

吸入糖皮质激素对哮喘大鼠气道重塑的影响

目的研究糖皮质激素对气道重塑指标α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、OVA组即哮喘模型组和布地奈德组各10只。采用免疫组化法测定肺组织中α-SMA的表达水平;酶联免疫吸附法测定成纤维细胞提取物中I型胶原的表达强度;并研究布地奈德(BUD)干预治疗后气道重塑指标α-SMA和I型胶原的表达水平。结果①OVA组肺中支气管的α-SMA的表达较正常对照组增强(P<0.05);布地奈德组肺中支气管的α-SMA的表达较OVA组减弱(P<0.05)。②OVA组的成纤维细胞(LF)提取物中的I型胶原含量高于正常对照组(P<0.05);布地奈德组肺中支气管的I型胶原含量低于OVA组(P<0.05)。结论布地奈德降低α-SMA和I型胶原的表达,能抑制气道重塑的发生。     

地塞米松对RSV诱发哮喘大鼠气道重塑形态学及ICAM-1表达的影响

目的:探究地塞米松对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱发哮喘大鼠气道重塑形态学以及细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,论述地塞米松用于防治哮喘的潜在机制.方法:将60只SD雄性大鼠随机分为6组,...     

升降散对急性肺损伤大鼠肺细支气管粘膜上皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨升降散对急性肺损伤模型大鼠细气管粘膜上皮ICAM-1表达的影响。方法:40只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、升降散大剂量组、中剂量组及小剂量组。给药6天后,舌下静脉注射LPS复制急性肺损伤模型,取肺组织切片,免疫组化检测。采集图像,分析细支气管粘膜上皮细胞胞质的平均灰度。结果:药物治疗组与模型组比较,能明显抑制肺细气管粘膜上皮细胞胞质ICAM-1的表达,有显著性差异。结论:升降散可通过抑制肺细气管粘膜上皮细胞胞质ICAM-1的表达,抑制炎症反应对肺组织造成的急性损伤,对急性肺损伤起到防治作用。     

地塞米松对大鼠支气管哮喘气道重塑及PDGF-BB表达的影响

目的观察大鼠支气管哮喘气道重塑模型中血小板源生长因子-BB（Platelet-derived growth factor-BB PDGF-BB）的表达变化,探讨了PDGF-BB与气道重塑的关系及早晚期使用地塞米松对支气管哮喘气道重塑和PDGF-BB表达变化的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组（C组）、模型组（N组）、早期干预组（E组）和晚期干预组（L组）,每组10只。N组、E组、L组每只大鼠于实验1、8天腹腔注射10%卵白蛋白抗原混悬液致敏,第15天始超声雾化1%卵白蛋白吸入8周20min/d激发哮喘,制备哮喘气道重塑模型。其中,E组、L组每只大鼠分别于雾化的第1、15天始,在每次雾化前1h腹腔注射地塞米松0.5mg/kg。C组以等量的生理盐水代替。肺组织切片HE染色,计算机图像分析气道形态学参数,衡量气道重塑的程度;免疫组化法测定PDGF-BB的表达。数据用SPSS16.0统计学软件进行处理。结果 E组、L组、N组均有不同程度的气道重塑,E组气道重塑程度明显较C组高且低于N组、L组（P〈0.05）。PDGF-BB的表达E组较C组高且低于N组、L组（P〈0.05）。PDGF-BB的含量与气道重塑程度相关（P〈0.001）。结论 PDGF-BB与支气管哮喘气道重塑程度相关,在气道重塑中起重要作用。早期使用地塞米松可延缓但不能逆转气道重塑。     

白细胞介素25在哮喘小鼠肺组织中的表达及其对气道重塑的影响

目的 研究白细胞介素(IL)-25在哮喘小鼠肺组织内表达及其对气道重塑的影响.方法 选取郑州大学基础医学院饲养的90只雌性BALB/C小鼠作为实验对象,分为对照组、实验组各45只.对照组雾化吸入生理盐水,实验组雾化吸入鸡卵清蛋白(OVA)溶液制备动物哮喘模型;采用酶联免疫吸附法测定血清、肺泡灌洗液内IL-25、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)浓度;采用蛋白质印迹法、免疫组织化学法检测肺组织内IL-25、α-SMA;RT-PCR检测IL-25 mRNA表达水平.结果 对照组小鼠血清、肺泡灌洗液内IL-25、α-SMA水平均低于实验组,肺组织内IL-25 mRNA也低于实验组(P＜0.05).免疫组织化学法检测:实验组小鼠肺组织内IL-25、α-SMA水平均呈高表达,对照组小鼠肺组织内IL-25、α-SMA几乎无表达.蛋白质印迹法检测:实验组小鼠肺组织内IL-25、α-SMA水平明显高于对照组(P＜0.05).相关性分析显示,实验组内IL-25、α-SMA呈正相关(r=0.751,P＜0.05).结论 IL-25、α-SMA在哮喘小鼠肺组织中呈相对高表达,可能促进哮喘小鼠产生气道重塑.     

银杏叶提取物对哮喘大鼠气道重塑及转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对支气管哮喘大鼠气道重塑的影响。方法 30只雌性SD大鼠,随机分为三组（每组10只）：对照组、哮喘组和治疗组。采用卵蛋白腹腔注射和雾化吸入激发法复制哮喘大鼠模型。在末次激发24h后取动物肺组织行HE染色和Mas-son观察病理学改变;免疫组化测定转化生长因子β1（TGF-β1）表达。结果与对照组比较,哮喘组大鼠气道纤维化明显,TGF-β1表达增高（P〈0.05）;与哮喘组比较,银杏叶提取物治疗组中大鼠气道纤维化程度及TGF-β1表达减轻（P〈0.05）。结论银杏叶提取物可抑制哮喘大鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过抑制TGF-β1的表达而实现的。     

ERK活化对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的作用。方法原代培养大鼠的平滑肌细胞(ASMCs),给予ERK激动剂表皮生长因子EGF和抑制剂PD98059干预ASMCs生长,依处理方式不同分为5组:(1)正常对照组(2)哮喘对照组;(3)E组:EGF20 ng/mL;(4)P+E组,PD98059 10μmol/L1 h后添加EGF 20 ng/mL;(5)PD组,PD98059 10μmol/L。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖能力,流式细胞术(FCM)测定细胞周期和cyclinD1的蛋白含量,RT-PCR方法检测cyclinD1mRNA表达水平。结果(1)与哮喘对照组比较,E组ASMCs S+G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白阳性表达率和cyclinD1 mRNA的A值均显著升高,PD组均显著降低(P0.05)。P+E组与哮喘对照在此4项指标上比较无明显差异。(2)哮喘(对照组、E组、PD组和P+E组)组与正常对照组,其S+G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白和cyclinD1 mRNA的表达均显著增高(P0.05)。结论ERK活性促进哮喘大鼠ASMCs的增殖,增加cyclinD1在哮喘平滑肌细胞中的表达,导致气道重塑的形成,提示ERK可能对CyclinD1的表达具有调节作用。     

实验性哮喘大鼠气道重塑的形态学变化

目的 为了研究中药治疗哮喘的作用机制，首先通过动态观察哮喘大鼠气道重塑的病理变化，以期对哮喘气道重塑的动物模型作一定的探索。方法 把模型大鼠分为5个观察时间点：激发前，激发第2、4、6、8周。同时把生理盐水处理组作为对照组。通过图象分析测定支气管内周长(Pi)、管壁厚度(d)、气道内腔面积(Ai)、外腔面积(Ao)、气道壁面积(WA)。为了消除管径大小、气道的状态以及切片的方向不同等所造成的差别，把气道壁厚度和面积分别用内周长进行标准化，厚度表示为d／Pi；面积表示为WA／Pi^2。同时把膜性气道分为大、中、小三个等级进行比较。结果 小气道变化最快，幅度较大；中气道变化相对小气道稍迟缓；大气道在激发4周以后才出现较大的结构改变，增长幅度最小。而生理盐水对照组在激发前后未见明显改变。结论 (1)反复、长期、较低浓度的抗原刺激可以复制慢性哮喘大鼠气道重塑模型。(2)气道重塑首先发生在中、小膜性气道，在激发第2周即已出现，小气道增厚的幅度最大；其结构改变随时间呈增长趋势，至第8周时未见消减。(3)其气道结构改变与人类哮喘的气道重塑改变相近，可以作为哮喘气道重塑的研究模型。     

布地奈德对哮喘气道重塑大鼠骨桥蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨布地奈德对气道重塑模型大鼠肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其在哮喘气道重塑中的作用。方法大鼠于第1天和第8天腹腔注射卵清蛋白(OVA)/AI(OH)3,第15天起雾化吸入OVA激发,隔天1次,制备哮喘气道重塑幼年大鼠模型。布地奈德组在雾化吸入OVA前30 min,给予雾化布地奈德混悬液(2ml:1mg)。正常对照组以生理盐水代替OVA。运用彩色医学图像分析系统测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算平滑肌厚度(Wam)和支气管壁厚度(Wat),通过反转录-聚合酶链(RT-PCR)测定各组大鼠肺组织中OPN的mRNA,运用免疫组化法测定各组大鼠OPN蛋白的表达,并对Wat、Wam与OPN的蛋白和mRNA表达进行相关性分析。结果哮喘组Wat及Wam显著高于对照组,布地奈德组较哮喘组显著降低(P均<0.01)。免疫组化检测结果提示,布地奈德组OPN蛋白的表达高于正常对照组,但显著低于哮喘组,差异具有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测结果显示,哮喘组OPN mRNA表达均高于正常对照组,布地奈德组组较哮喘组显著减弱,差异具有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中Wat、Wam与OPN的蛋白、mRNA表达均呈正相关。结论布地奈德能显著抑制哮喘大鼠OPN的表达,缓解气道重塑。     

肺表面活性物质在哮喘大鼠气道重塑中的作用及机制

目的:研究肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)对哮喘大鼠气道重塑的治疗作用并探讨其可能机制.方法:实验分3组:正常对照组(20只)、哮喘对照组(20只)和PS治疗组(20只),取肺组织与不同刺激因素作用后做组织切片,图像分析方法测定气道壁、气道平滑肌厚度及平滑肌细胞数,并计算平滑肌收缩百分比(PMS);免疫组织化学方法检测表皮生长因子(EGF)在各组大鼠小气道中的表达.结果:①PS治疗组的气道重塑程度显著低于哮喘组,与对照组比较无差异.②哮喘组气道平滑肌对腺苷的反应性(以PMS表示)较对照组增加24%,PS治疗组与哮喘组比较,PMS下降15%;哮喘组气道平滑肌对乙酰胆碱的反应性较对照组增加25%,PS治疗组与哮喘组比较,PMS下降16%.③哮喘组EGF的表达较对照组明显增加(P＜0.01),PS治疗组EGF的表达较哮喘组明显减少(P＜0.01).结论:外源性PS可以有效减轻哮喘大鼠气道重塑的程度,这可能与抑制EGF的合成及释放有关.     

抗哮喘药物对大鼠气道重塑模型干预效果的评价

目的：观察辅舒酮和喘乐宁联合用药和孟鲁斯特对大鼠哮喘气道重塑模型的干预效果,阐明哮喘及气道重塑的发病机制。 方法：40只Wistar大鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组（模型组）,给药1组（辅舒酮和喘乐宁雾化吸入）和给药2组（给予孟鲁斯特）,每组10只。采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发, 建立大鼠哮喘气道重塑模型。观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞数目的变化;检测大鼠血清IL-12水平的变化及与气道重塑的关系,观察气道纤毛上皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞结构的变化。结果：与阴性对照组比较,阳性对照组大鼠BALF中炎性细胞数明显升高(P<0.05）;与阳性对照组,给药1组和给药2组大鼠BALF中炎性细胞数明显降低(P<0.05）,但给药1组与给药2组比较差异无显著性(P<0.05）。与阴性对照组比较,阳性对照组大鼠血清IL-12水平明显降低(P<0.05）;与阳性对照组比较,给药1组和给药2组大鼠血清IL-12水平明显升高(P<0.05或P<0.01）;且给药1组与给药2组比较差异有显著性(P<0.01）。与给药2组比较,给药1组大鼠气道纤毛排列整齐,弹力纤维基本正常,胞核及胞质无明显改变;平滑肌轻度增厚,淋巴细胞中度浸润。结论：辅舒酮和喘乐宁联合用药较孟鲁斯特更能抑制炎性细胞浸润,减轻气道慢性炎症,从而减弱哮喘气道重塑,降低气道高反应性,保护气道形态和功能。     

咳喘宁对RSV诱发哮喘大鼠ICAM-1表达的影响

目的：研究咳喘宁对RSV诱发哮喘大鼠气道重塑形态学及ICAM-1表达的影响,阐明其防治哮喘的作用机制。方法将60只幼年SD雄性大鼠随机分为6组,即正常组,模型组,泼尼松与沙丁胺醇治疗组（简称泼+沙治疗组）,咳喘宁大、中、小剂量组,每组10只。用卵清蛋白复制大鼠哮喘模型,并予呼吸道合胞病毒（RSV）激发哮喘。大鼠处死后肺组织行HE染色观察炎症反应;图像分析软件测定支气管壁厚度及气道壁面积;免疫组化pv-9000二步法检测ICAM-1表达水平。结果与模型组相比,各治疗组炎症反应较轻。各治疗组支气管壁厚度及气道壁面积改变较小,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.01）;咳喘宁中剂量组较泼+沙治疗组作用略差,但差异无统计学意义（P>0.05）;咳喘宁大、小剂量组与泼+沙治疗组相比,其作用明显较差,有统计学意义（P<0.05）。各治疗组与模型组比较,其肺组织中ICAM-1表达均降低,有显著性差异(P<0.01);泼+沙治疗组ICAM-1表达稍低于咳喘宁中剂量组,但差异无统计学意义（P>0.05﹚。结论咳喘宁可有效抑制气道重塑,其机制可能与降低肺组织中ICAM-1表达有关。     

不同穴位简易穴位埋线对哮喘大鼠肺组织ICAM-1和NF-KB表达的影响

目的:探讨不同穴位简易穴位埋线对哮喘大鼠细胞间黏附分子-l( ICAM-1)和核转录因子-KB( NFKB)表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分为简易穴位埋线肺俞膻中组(肺俞膻中组)、肾俞组、肺俞膻中肾俞组、地塞米松组、模型组、对照组,每组8只.除对照组外,余5组卵蛋白致敏制造大鼠哮喘模型.末次诱喘后处死大鼠,免疫...     

地塞米松对支气管哮喘大鼠气道重塑及IL-8的影响

目的探讨支气管哮喘大鼠气道重塑与其血清白介素-8（IL-8）表达的关系以及地塞米松的干预作用。方法以卯白蛋白（OVA）致敏并吸入激发制备大鼠哮喘模型。采用计算机图像分析系统及免疫组化技术结合．测定对照组（C）、模型组（N）、地塞米松早期干预组（E）、地塞米松晚期干预组（L）大鼠气道形态学参数及血清IL-8含量。结果E组、L组、N组大鼠出现气道重塑。其中E组气道重塑程度及IL-8含量较轻、N组较重、L组居中,各组问差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IL-8与支气管哮喘大鼠气道重塑程度呈正相关;地塞米松可抑制气道重塑。并且可能通过下调IL-8的表达干预气道重塑。