Survivin反义寡核苷酸逆转K562/A02细胞的耐药研究

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸(an-tisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)对K562/A02细胞耐药的作用和机制。方法:以脂质体转染SurvivinASODN,以MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADM)和SurvivinASODN ADM对K562/A02细胞的IC50,以RT-PCR、蛋白印迹、荧光分光光度计和流式细胞术分别检测SurvivinmRNA、蛋白表达及半胱氨蛋白水解酶-3(Caspase-3)的活性和细胞凋亡的变化。结果:ADM和ASODN ADM对K562/A02细胞的IC50分别为45·56和19·01mg/L,SurvivinmRNA和蛋白水平表达分别降低36·2%和71·5%,Caspase-3活性增加67·5%,凋亡率较对照组增加[(14·5±5·6)%vs(2·4±1·0%),P<0·05]。结论:SurvivinASODN通过抑制Survivin表达激活Caspase-3,诱导凋亡,逆转耐药。     

RNA干扰Survivin基因沉默对卵巢癌SKOV3及SKOV3/ADM细胞凋亡的影响

背景与目的:RNA干扰技术被广泛应用于肿瘤基因治疗、抗病毒感染、基因药物筛选等许多领域。Survivin基因在卵巢癌细胞株SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM中高表达,是进行卵巢癌基因治疗理想的靶点。本研究探讨Survivin基因沉默后对卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM凋亡的影响。方法:将重组质粒pshRNA鄄Survivin以脂质体转染至SKOV3、SKOV3/ADM细胞。分别用半定量RT鄄PCR、Westernblot检测细胞内SurvivinmRNA和蛋白表达的变化,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法、TUNEL及流式细胞仪检测重组质粒诱导细胞凋亡的情况。结果:转染pshRNA鄄Survivin后,SKOV3、SKOV3/ADM细胞中SurvivinmRNA拷贝数明显减少,抑制率分别为83.79%和91.56%,蛋白质的表达水平显著降低;干扰组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,Survivin沉默后48h,SKOV3、SKOV3/ADM的细胞凋亡率分别为14.05%和21.02%,而在对照组未检测到明显凋亡。结论:重组质粒pshRNA鄄Survivin可明显抑制SKOV3、SKOV3/ADM细胞内SurvivinmRNA和蛋白的表达,介导卵巢癌细胞凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸抑制EC9706细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 观察Sunrivin反义寡核苷酸(ASODN)对人食管癌细胞系EC9706细胞增殖和凋亡的影响.方法 人工合成Survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染 EC9706 细胞;应用 RT-PCR 和 Western Blot 检测 SurvivinmRNA和蛋白表达;应用MTT法检测 Survivin ASODN 对 EC9706 细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率.结果 体外培养的 EC9706 细胞可表达较强的 Survivin mRNA 和蛋白;Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 Survivin mRNA 和蛋白表达,50μmoL/L ASODN 几乎可以完全抑制.MTT 研究结果表明,Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 EC9706 细胞增殖,50μmol/L ASODN 对细胞生长的抑制率可达78.5%,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M 期.Survivin SODN 对 Survivin mRNA 和蛋白以及 EC9706 细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用.结论 脂质体介导转染 Survivin 反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞G2/M 期阻滞而促进细胞凋亡.     

碳纳米管-树形分子载体递送 Survivin 反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖的作用

目的〖HT5"SS〗： 探讨碳纳米管(CNT)树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物的形态结构;然后将复合物与人肝癌HepG2细胞共培养,同时设立对照,采用透射电镜观察碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物在细胞中的定位,采用MTT法检测复合物对癌细胞生长的抑制作用。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗AFM与凝胶电泳分析证实碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物被成功制备。透射电镜观察证实碳纳米管树形分子反义核苷酸复合物位于细胞质。MTT法检测表明,CNTPAMAMASODN浓度为1.0 μmol/L时,即可抑制(4597±4.28)%的HepG2细胞增殖,而ASODN组和CNTPAMAM组在此浓度条件下对HepG2细胞的抑制率则分别为(933±0.85)%和(6.37±0.69)%; 当CNTPAMAMASODN达到1.50 μmol/L时,细胞抑制率为(70.22±7.25)%,而且抑制作用随培养时间的延长与浓度的增加而增强,实验组与对照组之间细胞抑制率存在显著性差异(P<0.01)。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 碳纳米管树形分子复合物是一种高效的基因递送载体,能够携带Survivin反义寡核苷酸进入肝癌细胞,并高效抑制HepG2细胞的增殖,显著增强反义寡核苷酸的作用效果。     

LMP1通过Survivin抑制60Co诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　研究EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)介导凋亡抑制蛋白 (Survivin)表达对辐射效应的影响。方法　利用LMP1可调控表达鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 )诱导LMP1表达 ,同时 60 Co照射 5Gy ,采用形态学观察、流式细胞术和半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)活性检测等方法 ,分析LMP1表达对60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响。用反义Survivin寡核苷酸阻断Survivin表达 ,观察Sur vivin表达阻断对60 Co辐射效应的影响。结果　LMP1表达抑制60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡 ,LMP1表达60 Co照射组形态学和流式细胞术检测凋亡率 (32 .7%± 2 .1% ,6 .3% )明显低于LMP1表达阴性组 (6 6 .0 %± 3.0 % ,2 9.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;转染Survivin反义寡核酸后细胞凋亡率 (5 9.3%± 3.2 % ,3.0 % )明显高于对照组 (2 6 .0 %± 2 .6 % ,8.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;同样转染Survivin反义寡核酸组Caspase 3活性 (3.78nmol/ 10 6)高于对照组 (2 .79nmol/ 10 6)。结论　提示LMP1通过介导Survivin表达而抑制60 Co照射诱导凋亡 ,Survivin反义核酸协同辐射诱导肿瘤细胞凋亡 ,Survivin作为增敏放射治疗靶 ,具有潜在的临床意义。     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡中mdr1和Survivin基因的表达

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡过程中mdr1和Sur vivin基因的表达变化。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,细胞形态学、DNA片段化和细胞周期改变观察K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)测定Caspase3活性;RT PCR检测Sur vivin和mdr1mRNA的表达。结果:ATO可抑制K562/ADM细胞增殖,并出现典型凋亡形态改变,DNA电泳出现梯状条带(DNAladder);细胞周期分析显示,2～5μmol/LATO作用24h,细胞被阻滞在G2/M期,G1期细胞减少;72h时Sub G1期细胞分别为25.6%和52.9%。2～5μmol/LATO作用24～48h,mdr1mRNA和SurvivinmRNA表达水平明显下降,48h时mdr1mRNA的抑制率分别为83.4%和87.8%,SurvivinmRNA为21.6%和68.6%。ATO作用后,Caspase3活性明显增强,活化Caspase3由17.9%增加到47.4%。结论:ATO降低K562/ADM细胞mdr1和Survivin基因表达,解除P gp和Survivin对Caspases的抑制效应而促进耐药细胞凋亡。     

反义survivin-脂质体复合物对肝癌细胞生长凋亡和细胞周期的影响

目的探讨反义survivin-脂质体复合物（survivin-ASODN）对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用及其机制,为肝癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法用脂质体介导survivin-ASODN转染肝癌细胞系HepG2细胞;通过RT-PCR和Western blot检测survivin表达水平;以MTT法测量细胞生长情况;以流式细胞术测定caspase-3活性及凋亡率,电镜观察细胞形态学变化,并应用流式细胞仪同步分析survivin-ASODN对肝癌细胞系HepG2增殖周期的影响。结果surviving-ASODN可有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,其IC50值为250nmol／L,最大效应浓度为600nmol／L;可抑制细胞生长,激活caspase-3活性,诱导细胞凋亡,使其出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。细胞周期的同步分析显示,surviving-ASODN对HepG2细胞增殖周期有明显影响,HepG2先出现细胞周期阻滞,紧接着出现细胞凋亡;低浓度处理后,可将细胞先后阻滞在S期和G2／M期;高浓度时,S期阻滞被加强,可快速诱导细胞凋亡,并且,细胞凋亡率随着药物浓度的增加和作用时间的延长明显上升。结论surviving-ASODN对肝癌细胞有强的生长抑制效应,其机制是与阻断细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

树形分子递送survivin反义寡核苷酸对HepG2细胞的抑制效应

目的:研究利用聚酰胺(polyamidoamine,PAMAM)树形分子递送survivin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy- nucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的效应。方法:采用第1至第5代的聚酰胺树形分子室温下与反义survivin寡核苷酸混合制备树形分子与反义寡核苷酸的复合物(PAMAM-asODN),应用琼脂糖凝胶电泳及原子力学显微镜观察复合物的形态结构。PAMAM-asODN复合物转染HepG2细胞,同时设survivin反义寡核苷酸转染细胞作对照。共聚焦荧光显微镜检测复合物细胞转染效果;RT-PCR分析转染后细胞survivin mRNA的表达水平;MTT法检测复合物对HepG2细胞增殖的抑制效应。结果:琼脂糖凝胶电泳分析表明,树形分子与survivin反义寡核苷酸具有高效络合作用,形成了大小为25 nm左右的复合物;共聚焦荧光显微镜检测显示,与对照相比,PAMAM-asODN复合物转染细胞的效率显著提高;RT-PCR的结果表明,转染PAMAM-asODN复合物的肿瘤细胞中survivin mRNA表达显著降低;MTT结果表明,树形分子递送survivin反义寡核苷酸进入细胞后,HepG2细胞增殖明显受抑制,增殖抑制率随培养时间、复合物浓度、树形分子代数的增加而增加,6.0μmol/L G4.0 PAMAM-asODN与细胞培养96h可使抑制率达55%以上。结论:PAMAM树形分子能高效递送survivin asODN进入细胞,并抑制HepG2肿瘤细胞的增殖。树形分子可能是一种高效基因药物递送载体,在肿瘤治疗中具有潜在应用价值。     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响

目的 检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响,探讨bFGF作为肝癌治疗靶点的有效性.方法 以脂质体作为转染载体,转染bFGF反义寡核苷酸于HepG2细胞,用共聚焦显微镜和Western blot方法,检测转染bFGF反义寡核苷酸后肝癌细胞株HepG2中bFGF蛋白的表达,用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后HepG2细胞的凋亡率.结果 与转染错义寡核苷酸组相比,bFGF反义寡核苷酸对HepG2细胞中bFGF蛋白表达有明显抑制作用,转染bFGF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 bFGF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肝癌增敏治疗的有效靶点.     

Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察Survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响.方法：设计合成特异性Survivin 反义寡核苷酸,转染肝癌SMMC-7721细胞,MTT法测定Survivin ASODN对细胞增殖抑制情况的影响,FCM法检测对细胞周期、凋亡及Survivin蛋白表达的影响.结果：Survivin ASODN可抑制SMMC-7721细胞的生长增殖,并呈浓度和时间依赖性.ASODN转染组可诱导SMMC-7721细胞凋亡（P＜0.01）,细胞周期阻滞于G2/M期（P＜0.05）.ASODN转染组Survivin蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）.结论：Survivin ASODN能下调SMMC-7721细胞Survivin表达,并可抑制其增殖并诱导凋亡.     

阿霉素联合p21CIP1基因转染对人肝母细胞瘤细胞株HepG2增殖的影响

背景与目的:阿霉素类药物是治疗肝母细胞瘤的传统化疗药,但近年来其疗效不佳是困扰临床的一大问题,目前配合基因治疗提高阿霉素的疗效,是肝母细胞瘤治疗发展的新趋势。本实验研究阿霉素与p21基因转染联合对人肝母细胞瘤HepG2细胞增殖的影响。方法:实验分为空白对照组、单独加药组、pcDNA3转染对照组、p21转染组及p21转染 药物联合组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后HepG2细胞的生长趋势,联合处理后细胞增殖抑制状况;荧光定量PCR检测转染后p21mRNA的表达情况,联合处理后survivinmRNA的水平变化。结果:转染后,p21转染组在第3d和第4d的生长速度明显慢于两对照组(P<0.01);经鉴定其有p21mRNA表达量的增高,是空白对照组的155倍(P<0.05)。以空白组为对照,在第3～5d,联合组增殖抑制率明显高于单独加药组和p21转染组(第3d:43.92%vs.32.97%、35.77%,P<0.01;第4d:59.86%vs.39.35%、40.96%,P<0.01;第5d:51.81%vs.33.91%、10.68%,P<0.01);且1～4d内随联合用药时间的延长,抑制效应增强(r=0.91,P<0.05),并在第4d时较显著(Q=1.07)。荧光定量PCR显示,联合组survivinmRNA水平显著低于p21转染组(P<0.01);与单独加药组比较,联合作用仅在48h时差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在一定时间范围内p21可增强阿霉素对HepG2细胞的增殖抑制作用,降低胞内survivinmRNA的表达。     

survivin反义脱氧寡核苷酸对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨survivin反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞株BGC-823凋亡、增殖的作用及分子机制.方法 分别以survivin ASODN-1、survivin ASODN-2和survivin ASODN-3转染人胃癌BGC-823细胞株,采用共聚焦显微镜检测转染率,四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞凋亡指数、增殖指数和细胞周期分布及survivin、血管内皮生长因子(VEGF)、Smac/DIABLO蛋白表达改变,逆转录聚合酶链反应检测survivin、VEGF、Smac/DIABLO mRNA表达改变.结果 转染各序列survivin ASODN均可下调survivin蛋白的表达,且以ASODN-2作用最为显著.以600 nmol/L survivin ASODN-2转染BGC-823细胞48 h后,G0/G1期细胞比例[(72.25±2.95)%]明显高于空脂质体对照组[(56.25±0.75)%,均P＜0.05],凋亡指数[(11.31±0.38)%]明显高于空脂质体对照组[(1.62±0.36)%,均P＜0.05],增殖指数[(27.77±2.97)%]低于空脂质体对照组[(43.80±0.80)%,均P＜0.05].转染后survivin mRNA及蛋白表达(0.523±0.091,0.733±0.009)低于空脂质体对照组(0.861±0.047,0.997±0.233;均P＜0.05),VEGF mRNA及蛋白表达(0.519±0.076,0.75±0.006)低于空脂质体对照组(0.779±0.059,1.000±0.01;均P＜0.05),Smac/DIABLOmRNA及蛋白表达(0.899±0.113,1.637±0.023)高于空脂质体对照组(0.558±0.041,1.000±0.049;均P＜0.05).结论 survivin ASODN具有诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用,其作用是通过下调survivin和VEGF、上调Smac/DIABLO基因表达实现的.

Abstract：

Objective To explore the effects of antisense oligodeoxynucleotides (ASODN)on proliferation and apoptosis in gastric cancer cell line BGC-823 cells and the molecular mechanisms induced by ASODN.Methods survivin ASODN-1, survivin ASODN-2 and survivin ASODN-3 were transfected into BGC-823 cells by LipofectamineTM 2000 transfection reagent.The growth activity of BGC-823 cells was detected by MTT assay.Apoptosis index (AI), proliferation index ( PI), cell cycle and expressions of survivin, VEGF and Smac/DIABLO proteins were detected by flow cytometry (FCM).The changes of survivin mRNA, VEGF mRNA and Smac/DIABLO mRNA were detected by RT-PCR.Results The expression of survivin was down-regulated by the three ASODN sequences, especially the ASODN-2 was best.At 48 hours after transfection with 600 nmol/L survivin ASODN-2, the cells in G1/G0 phase were significantly increased [(72.25 ± 2.95 ) %], apoptotic index increased [( 11.31 ± 0.38 ) %], proliferation index decreased [(27.77 ± 2.97 ) %], compared with those in the control group [( 56.25 ± 0.75 ) %,(1.62 ±0.36)%, (43.80 ±0.80)%, all P ＜ 0.05].The survivin mRNA and protein levels (0.523 ±0.091,0.733 ±0.009) were down-regulated compared with those in the control group (0.861 ±0.047,0.997 ± 0.233 ), VEGF (0.519 ± 0.076, 0.75 ± 0.006) were down-regulated compared with those in the control group (0.779 ± 0.059, 1.000 ± 0.01 ), while those of Smac/DIABLO (0.899 ± 0.113, 1.637 ±0.023) were up-regulated compared with those in the control group (0.558 ± 0.041, 1.000 ± 0.049, all P＜0.05).Conclusions Survivin ASODN can induce apoptosis and inhibit the proliferation of gastric cancer cell line BGC-823 cells.Those effects are induced through up-regulation of Smac/DIABLO and downregulation of survivin and VEGF expression simultaneously.     

survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制

目的 研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）诱导肺癌细胞凋亡的作用,探讨survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制。方法 在脂质体介导下,分别以100mmol／L、300mmol／L和500mmol／L浓度的survivin ASODN,作用于肺癌细胞株NCI-H44624h、48h和72h后,用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA及蛋白表达,流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化;ELISA法检测胞浆细胞色素C（cyt C）浓度;比色法检测胞浆内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）、caspase-3的活性;Western blot检测caspase-8蛋白表达;加入环孢霉素A（CsA）后,以FCM检测细胞凋亡。结果 与各对照组相比,survivin ASODN显著下调了survivin mRNA表达,且呈时间和浓度依赖性,其中以500mmol／L作用72h时效果最佳,抑制率达62．7％,其蛋白表达也显著下调。NCI-H446细胞的凋亡指数（AI）为48．35％,明显高于对照组（3．75％）、空脂质体组（3．41％）、无义寡核苷酸（NSODN）组（4．69％）、100和300mmol／LASODN组（19．85％和34．39％）;增殖指数（PI）为24．38％,明显低于上述各组（75．54％、73．12％、71．76％、51．03％和38．94％,P均〈0．01）。survivin ASODN导致细胞△ψm逐渐下降,并相继引起cytc的释放、caspase-9和caspase-3的激活,而caspase-8酶原无变化。CsA显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论 survivin通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用;survivin ASODN能够显著下调survivin mRNA及蛋白表达,诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

白藜芦醇上调BTG2表达抑制肝癌HepG2细胞增殖

目的:初步探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝癌HepG2细胞增殖及BTG2表达的影响。方法:不同浓度Res(终浓度分别为20、40、80 μmol/L)处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞周期分布变化,RT-PCR、Western blot技术检测BTG2 mRNA和蛋白水平表达的变化。结果:Res可以显著抑制HepG2细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性(P＜0.01),药物作用48 h后IC50为34.58 μmol/L。Res可使HepG2细胞周期阻滞在G2/M期;随着Res作用浓度的升高,抗增殖基因BTG2 mRNA和蛋白的表达逐渐增加(P＜0.01)。结论:Res能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖,对细胞周期具有阻滞效应且有浓度依赖性,其机制可能与其上调抗增殖基因BTG2表达相关。     

反义寡核苷酸抑制survivin基因表达及肝癌细胞生长的研究

目的:采用反义寡核苷酸抑制肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的作用.方法:采用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,Western blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测凋亡细胞比率,检测转染前后细胞贴壁率变化,并绘制细胞生长曲线.结果:survivin反义寡核苷酸转染后,肝癌细胞survivin蛋白及mRNA表达均显著降低,细胞贴壁率显著降低,细胞增殖活性明显受抑,细胞凋亡率显著增加.结论:survivin反义寡核苷酸转染可以有效降低细胞内survivin基因的表达,诱导细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞生长.     

Downregulation of survivin expression and elevation of caspase-3 activity involved in pitavastatin-induced HepG 2 cell apoptosis

The aim of the present study was to research the apoptosis of human hepatocellular carcinoma cell line HepG 2 induced by pitavastatin. HepG 2 cells were treated with increasing doses of pitavastatin or with mevalonic acid for 48 h. The proliferation of cells was detected with WST-8. The morphology of the nucleus was observed under a microscope by Hoechst 33258 staining. The apoptosis peaks were examined by flow cytometry. The expression of survivin mRNA was examined with RT-PCR. The caspase-3 activity was detected with caspase-3 colorimetric protease assay. We found that growth inhibitory effects were observed for treatment with pitavastatin at 10-50 microM. Pitavastatin at 10 microM induced granular apoptotic bodies of HepG 2 cells. Furthermore, pitavastatin at 10 microM increased the appearance of sub-G1 population of HepG 2 cells. Finally, pitavastatin at 10 microM downregulated the expression of survivin mRNA and upregulated the caspase-3 activity, which was clearly related to the HMG-CoA reductase activity. These results suggest that pitavastatin at 10 microM induces apoptosis of HepG 2 cells, which is associated with the decreased expression of survivin mRNA and increased caspase-3 activity of HepG 2 cells.     

阿霉素诱导人肝癌细胞多药耐药株的建立及其生物学特性评价

背景与目的:多药耐药(multidrugresistance,MDR)是肿瘤治疗的主要障碍,为探讨体外逆转肿瘤MDR的新方法,本研究建立人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/Adm,并研究其生物学特性。方法:以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增诱导法,建立HepG2/Adm。观察细胞的生长规律;用MTT法检测多药耐药性;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因(mdr1)的表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)、肺耐药蛋白(lung-relatedprotein,LRP)及谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)的表达;逆转录PCR半定量检测4种MDR基因mRNA表达量。结果:与HepG2细胞比较,HepG2/Adm细胞倍增时间延长30.01h,S期细胞减少(5.6±0.03)%,G1、G2期细胞增多犤(4.2±0.09)%,(1.5±0.08)%犦。该细胞对多种抗肿瘤药物耐药,HepG2/Adm对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的26倍,细胞表面多药耐药蛋白P-gp、MRP及GST的表达显著增加,LRP表达有一定的增加;上述四种耐药蛋白基因的表达均明显增加。结论:HepG2/Adm细胞具有多药耐药特性,其耐药性与P-gp、MRP及GST的过表达有关。     

干扰NBS1表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨干扰NBS1基因表达对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响。方法:应用Lipofectamine 2000将NBS1特异性小干扰RNA（siNBS1）转染至肝癌细胞HepG2中,以空载脂质体作为对照组。采用RT-PCR及Western blot法检测NBS1基因表达情况,采用CCK-8法检测转染质粒后siNBS1对HepG2细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测siNBS1对HepG2细胞凋亡的影响。结果:不同浓度siNBS1（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L）均能抑制HepG2细胞中的NBS1基因在mRNA水平上的表达（P＜0.05或P＜0.01）。最高浓度siNBS1（50 nmol/L）能抑制NSB1蛋白产物的表达水平（P＜0.05）。CCK-8实验显示,转染不同浓度siNBS1的HepG2细胞与对照组相比,细胞活力明显减弱（P＜0.05或P＜0.01）,转染48 h后增殖率下降最为显著;流式细胞检测结果显示,细胞凋亡的比率在转染后明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,并随浓度增加而更为显著。结论:干扰NBS1基因的表达可以明显抑制HepG2细胞的增殖,并促进癌细胞凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸诱导SMMC-7721细胞凋亡及对化疗药物敏感性作用的研究

目的：观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其对化疗药物敏感性的作用。方法：设计合成特异性survivin的ASODN，脂质体转染肝细胞癌SMMC-7721细胞，透射电镜观察细胞超微结构变化；RT—PCR法检测survivinmRNA的表达变化；FCM法检测对细胞周期、凋亡及survivin蛋白表达的影响；MTT法测定survivin表达抑制前后细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂敏感性的影响。结果：ASODN转染后细胞呈现凋亡的形态学改变，survivin mRNA和蛋白表达减弱（P〈0．05），诱导SMMC-7721细胞凋亡（P〈0．01），细胞周期阻滞于G2／M期（P〈0．05）。ASODN转染组可增加SMMC-7721细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性（P〈0、01）。结论：Survivin ASODN转染能下调survivin表达，诱导SMMC-7721细胞凋亡，提高对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性。