FTY720对大鼠心脏移植急性排斥反应的影响

目的观察FTY720对大鼠心脏移植急性排斥反应(AR)的影响并探讨其相关机制。方法利用Cuff技术建立颈部异位心脏移植模型,受体大鼠随机分为对照组和FTY720组,每组12只。FTY720组自术前3 d至术后11 d管饲FTY720(3 mg·kg~(-1)),对照组管饲等量生理盐水。2组均于术后第5天随机选6只动物抽取外周血后留取标本,其余6只观察存活期。苏木素-伊红染色光镜下观察排斥反应级别;流式细胞仪检测外周血CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞。结果FTY720组心脏移植物平均存活时间长于对照组,排斥反应级别低于对照组,CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞阳性率低于对照组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论FTY720能明显减轻大鼠心脏移植AR。     

小鼠-大鼠颈部及腹部异种心脏移植模型的建立及比较

目的:建立并比较小鼠—大鼠颈部和腹部协调性异种心脏移植模型。方法:用昆明小鼠和Whister大鼠分别做供体和受体,将小鼠的升主动脉和肺动脉和肺动脉分别与大鼠的右颈总动脉和右颈外静脉端端吻合,建立颈部异种心脏移植模型;将小鼠的升主动脉和肺动脉分别与大鼠的腹主动脉和下腔静脉端侧吻合,建立腹部异种心脏移植模型。通过取心时间、血管吻合时间及并发症对颈部和腹部模型进行比较。结果:正式实验阶段颈部和腹部模型的移植成功率分别为90％和93.3％,移植心平均存活时间分别为2.67±0.73和2.43±0.69天,并发症发生率明显低于预实验阶段。病理检查移植心呈典型的急性血管性排斥改变。结论:小鼠—大鼠颈部和腹部心脏移植模型有各自的特点,经过一定时期的训练,均可稳定的用于实验,是研究协调性异种移植的理想模型。     

异种心脏移植急性血管排斥反应期动物模型的建立

为建立异种心脏移植急性血管排斥反应期动物模型,选择豚鼠和SD大鼠分别作为供体和受体。豚鼠升主动脉与大鼠腹主动脉端侧吻合,豚鼠主肺动脉与大鼠下腔静脉端侧吻合,受体鼠术前静脉注射眼睛蛇毒因子(CVF)60U/kg,术后腹腔注射CVF60U·kg-1·8h-1,抑制超急性排斥反应,另腹腔注射细胞免疫排斥反应抑制剂(FK506)0.25mg·kg-1·6h-1。结果显示:移植成功率88.9%(16/18),平均存活时间24.00±3.05h,病理学检查发现排斥心脏内广泛血栓形成,间质出血及炎症细胞浸润,部分心肌有局灶梗塞和凝固性坏死,符合急性血管排斥反应期的表现。该模型手术操作简单,不需显微镜,稳定可靠,是研究异种心脏移植急性血管排斥反应期较理想的动物模型。     

豚鼠至大鼠异种小肠移植超急性排斥的初步观察

目的 建立袖套法豚鼠至大鼠异种小肠移植模型,初步观察异种小肠移植超急性排斥反应的过程。方法 行异种异位全小肠移植,移植小肠脾性系膜上动脉（腹主动脉）与受体肾以下腹主动脉作端侧吻合,切除受体左肾,移植小肠肠系膜上静脉（门静脉）与受体左肾静脉行袖套吻合;在手术显策镜下观察超急性排斥的大体变化。结果 共实施异种小肠移植４０例,成功３４例,供受体手术时间平均１５０ｍｉｎ,血管吻合成功率达９０％。再灌流后１     

豚鼠-大鼠异种心脏移植急性血管排斥反应期组织因子mRNA的表达

目的 通过检测组织因子mRNA在异种心脏移植急性血管排斥反应期的动态表达与排异反应强度之间的关系，初步了解组织因子在该反应期的意义。方法 建立豚鼠-大鼠异种异位心脏移植动物模型，使用CVF抑制超急性排异反应，FK506抑制细胞免疫排斥反应，分别在移植术后4、8、12、16、24h切取移植心脏，通过病理切片观察排异反应和凝血强度，同时通过RT—PCR方法检测组织因子mRNA表达强度，未移植豚鼠心脏作对照。结果 在移植后，移植心脏的排异反应和凝血逐渐加重，豚鼠组织因子mRNA表达强度逐渐减弱，大鼠组织因子mRNA表达强度逐渐增强。结论 组织因子在异种心脏移植急性血管排斥反应期中起重要作用，其中供体的组织因子可能与凝血的激发有关，受体的组织因子可能与凝血的发展有关。     

不同剂量FTY720对颅脑损伤大鼠神经功能的保护作用

目的揭示FTY720对颅脑损伤大鼠脑保护作用的剂量疗效关系。方法将80只大鼠随机分成假手术组、模型组、小剂量组和大剂量组,每组20只,采用Feeney自由落体损伤装置建立大鼠颅脑损伤模型。小剂量组和大剂量组大鼠分别给予1、5mg/kgFTY720腹腔注射,检测每组10只大鼠外伤后24h损伤皮层凋亡神经细胞比例、Caspase-3蛋白活性和IL-1β、TNF-α及IL-6水平,记录每组剩余10只大鼠Morris水迷宫实验时逃避潜伏期、改良神经功能缺损程度评分。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P＜0.01）,改良神经功能缺损程度评分明显增高（P＜0.01）,大鼠损伤皮层凋亡神经细胞比例、Caspase-3蛋白活性和IL-1β、TNF-α、IL-6水平均明显升高（均P＜0.01）;小剂量组、大剂量组较模型组大鼠上述指标均明显下降（均P＜0.01）,且作用效果呈剂量依赖性。结论FTY720可能通过抑制中枢炎症反应从而减少颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡以达到脑保护作用,且疗效呈剂量依赖性。     

FTY720对大鼠同种异体异位心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响

目的:观察FTY720对同种异体异位心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响并探讨其相关机制.方法:利用Cuff技术建立颈部异位心脏移植模型.FTY720组(n=6)受体鼠自术前3 d开始至手术当日管饲FTY720,剂量为3 mg/kg;对照组(n=6)受体鼠自术前3 d开始至手术当日管饲生理盐水,剂量为1 mL/kg.于移植后8 h切取移植心脏,电镜下观察心肌组织超微结构变化;TUNEL法测细胞凋亡,计算凋亡指数;测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性.结果:移植后8 h,FTY720组心肌细胞形态基本正常,仅轻度水肿,间质水肿和炎性细胞浸润不明显;电镜超微结构显示心肌肌丝排列整齐,肌原纤维间轻度水肿,线粒体饱满,嵴密,水肿不明显,无明显的肌丝断裂现象.FTY720组只有少量心肌细胞凋亡,凋亡指数为(9.20±1.12),对照组心肌细胞凋亡明显,凋亡指数为(16.10±1.65)(t=8.475,P<0.001).FTY720组SOD活性较对照组升高[(51.03±5.54)mmol/g vs.(28.39±2.38)mmol/g],而MDA含量[(10.90±1.93)U/g vs.(16.27±1.36)U/g]和MPO活性[(4.38±1.43)mU/g vs.(9.26±1.41)mU/g]下降(t分别为9.197、5.571和5.592,P均<0.001).结论:FTY720能减轻大鼠移植心脏缺血-再灌注损伤.     

FTY720对蛛网膜下腔出血大鼠神经功能的作用及机制

目的探讨FTY720对蛛网膜下腔出血大鼠神经功能的作用及相关机制。方法将96只大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组和治疗组,每组24只,采用枕大池二次注血建立蛛网膜下腔出血大鼠模型。治疗组按1mg/kg腹腔注射FTY720,其他3组腹腔注射0.9%氯化钠溶液1ml。24h后每组取12只断头处死并分离海马组织,采用Westernblot法检测NF-资B蛋白表达,采用免疫组化染色法检测小胶质细胞OX-42蛋白表达;每组剩余12只大鼠用于神经功能评估。结果模型组大鼠海马组织NF-资B蛋白表达水平、小胶质细胞OX-42蛋白表达水平均较正常组、假手术组明显增加（均P＜0.05）,治疗组较模型组明显减少（P＜0.05）。前肢放置实验评分、平衡实验评分和改良神经功能缺损程度评分术后7、14、21、28d比较,治疗组较模型组均明显下降（均P＜0.05）。结论FTY720可改善蛛网膜下腔出血大鼠神经功能,其作用机制可能与FTY720的中枢炎症抑制作用有关。     

FTY720对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用

目的:探讨新型免疫抑制剂FTY720对急性百草枯(PQ)中毒小鼠肺损伤的保护机制。方法:8周龄C57BL/6j小鼠随机分为百草枯40mg/kg染毒对照组(PQ组)、百草枯40mg/kg染毒+FTY720 0.5mg/kg/d干预组(PQ+FTY720组)、生理盐水对照组(Control组)。PQ组和PQ+FTY720组分别经腹腔注射PQ40mg/kg,PQ+FTY720组于2小时后腹腔注射FTY720 0.5mg/kg,每日一次,连续14天;Control组腹腔注射等量生理盐水。各组分别于第3、第28天处死,观察28天生存率,留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。HE染色观察各组肺组织病理变化。BCA法测定BALF中总蛋白含量。ELISA法检测BALF中IL-6水平。Real-time PCR法测定肺组织中alpha-smooth muscle actin(α-SMA)、type I col1agen、type Ⅲcollagen mRNA的表达水平,免疫组化法观察肺组织中α-SMA的表达。结果:28天生存率PQ组与PQ+FTY720组分别为50%和70%。 HE染色显示FTY720干预后小鼠肺损伤程度较PQ组减轻。PQ+FTY720组在急性期BALF总蛋白含量、IL-6水平明显低于PQ组,慢性期肺组织中α-SMA、type I col1agen、type Ⅲcollagen在mRNA水平上表达较PQ组下调,且均具统计学意义。肺组织α-SMA阳性表达颗粒较PQ组减少。结论: FTY720可抑制部分肺损伤/纤维化相关因子的表达,对百草枯中毒肺损伤有治疗保护作用。     

Effects of long-term administration of low-dose FTY720 on survival of murine cardiac allograft

This study examined the effect of long-term administration of low-dose FTY720 on survival of murine cardiac allograft and the possible mechanism. Murine models of abdominal heterotopic heart transplantation were established. Low-dose FTY720 (0.3 mg/kg) was administrated to the animals 4 days before the transplantation of cardiac allografts until the occurrence of rejection or the observation terminals. The animals without FTY720 treatment and those with syngeneic cardiac grafts transplanted served as controls. The mean survival time (MST) of grafts, and T lymphocyte subsets in grafts, periph-eral blood and lymphoid organs were measured by histopathological examination or flow cytometry, and compared among groups. The results showed that the MST of allografts in FTY720-treated mice was more than 40 days, significantly longer than that in the untreated group (MST=8 days, P<0.01). After the long-term administration of FTY720, the proportion of CD4+ and CD8+ lymphocytes in pe-ripheral blood was diminished significantly, but the proportion of CD4+ lymphocytes was increased in mesenteric lymph nodes (MLNs) and spleen. Immunofluorescence staining revealed that the infiltration of CD4+ and CD8+ lymphocytes in allografts was significantly inhibited after long-term administration of low-dose FTY720. It was concluded that low-dose long-term administration of FTY720 could pro-mote T lymphocytes in lymphatic organs and decrease their infiltration in allografts, resulting in the in-hibition of rejection and the long-term survival of allografts.     

FTY720-P对成骨细胞分化成熟的作用

目的 以FTY720-P作用于成骨细胞后,分析相关蛋白和基因表达的变化,明确FTY720-P对成骨细胞的作用机制.方法 取Wistar大鼠乳鼠颅盖骨进行成骨细胞原代培养.将不同浓度的FTY720-P(0、200、300、400 ng/mL)作用于成骨细胞,MTT试验和流式细胞术进行生长速率和细胞周期的检测,碱性磷酸酶(ALP)染色和钙化结节染色对比FTY720-P用药前后对细胞形态学功能的影响,并分别采用ELISA、Western blot和Real Time RT-PCR检测相关蛋白和基因的表达.结果 MTT显示FTY720-P对细胞生长影响不大.流式细胞术结果提示,细胞阻滞在G2期,对周期影响不大.ALP染色显示对照组蓝紫色颗粒更加明显;茜素红染色可见数量较多和更加明显的钙化结节.PCR结果中ALP的表达是下调的,骨钙素(OCN)和胰岛素样生长因子(IGF)的表达是上调的;而在ELISA实验中,OCN和IGF的分泌是增加的,Western blot检测中,胞外胶原蛋白I型分泌也增加,而在ALP活性实验中,胞内ALP活性是降低的.结论 FTY720-P可以促进成骨细胞细胞外基质的成熟和矿化,但对细胞增殖和周期没影响.     

FTY720对胆管癌细胞系QBC939增殖及侵袭的影响

目的：探讨FTY720对体外培养QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。方法：体外培养QBC939细胞系,将其分为对照组、FTY720不同浓度给药组。通过MTT法、流式细胞仪检测周期和凋亡、细胞侵袭等实验观察FTY720对QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。结果：当FTY720浓度为2400 ng/ml时,体外培养的QBC939细胞系的增殖受到明显抑制,抑制率为65．4％（ P〈0．05）;流式细胞仪检测提示QBC939细胞系被阻滞于G1期,并促进其发生凋亡;侵袭实验显示FTY720可以明显抑制QBC939细胞系的侵袭,当FTY720浓度为2400 ng/ml时,侵袭抑制率可达80％。结论：FTY720可抑制体外培养QBC939细胞系的增殖,诱导该肿瘤细胞凋亡,并且抑制其侵袭。     

不同剂量FTY720对颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用

目的 揭示不同剂量FTY720对颅脑损伤大鼠海马组织神经细胞凋亡的影响及相关机制。方法 将175只大鼠随机分成假手术组、模型组、小剂量组、中剂量组和大剂量组,每组35只,再根据2、6、12h、1、2、3和5天7个时间点分成7个亚组,每组5只。采用Feeney自由落体损伤装置建立大鼠颅脑损伤模型。小剂量组、中剂量组和大剂量组大鼠分别按0.5、1和2mg/kg剂量予FTY720腹腔注射,其他组大鼠腹腔注射1ml生理盐水。检测各时间点海马组织凋亡神经细胞、caspase-3蛋白活性和白介素-1β、肿瘤坏死因子-α及白介素-6浓度。结果 模型组大鼠海马组织凋亡神经细胞比例、caspase-3蛋白活性和白介素-1β、肿瘤坏死因子-α和白介素-6浓度较假手术组显著升高,小剂量组、中剂量组和大剂量组大鼠海马组织上述指标均较模型组显著下降,且作用效果呈现剂量依赖性。结论 FTY720可能通过抑制中枢炎性反应从而减少颅脑损伤大鼠海马组织神经细胞凋亡,且呈现剂量依赖性。     

FTY720联合吉西他滨对非小细胞肺癌肿瘤相关细胞株增殖和凋亡作用的研究

目的 探讨FTY720与吉西他滨用药对人非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤细胞株A549和H520增殖和凋亡的影响作用.方法 分别选取0、2、4、6、8、10 μmol/L浓度的FTY720对体外培养得到NSCLC细胞株A549及H520做干预影响,于培养24、48、72 h后分别检测吸光度值,观察各浓度条件下FTY720对A549及H520的抑增殖作用;对A549及H520细胞株加分别单独加7 μmol/L FTY720和0.2 μmol/L吉西他滨及37 μmol/L FTY720结合0.2μmol/L吉西他滨,观察各组细胞培养48 h后抑制和凋亡差异.结果 不同浓度FTY270抑制NSCLC细胞株A549、H520增殖,差异有统计学意义(P＜0.05),FTY720对NSCLC细胞株A549、H520的增殖抑制作用和浓度、时间具有相关性,FTY720联合吉西他滨抑制A549、H520细胞和凋亡率显著强于两种药品的单独使用(P＜0.05).结论 FTY720联合吉西他滨可显著抑制人NSCLC细胞株A549及H520的增殖,并可有效促进癌细胞凋亡的作用,临床价值较高.     

环孢素和舒莱单一或联合应用对大鼠同种异体心脏移植抗排斥的作用

目的：观察环孢素A和舒莱单一或联合用药对大鼠同种异体心脏移植的作用，评价联合用药的药效。方法：不同剂量环孢素A和舒莱单一或联合用于大鼠心脏移植，术后观察移植心存活时间，取移植心行病理组织学检查，检测血清IL-2和IL-4水平。结果：单一及联合用药均能延长移植心的存活时间，而且移植心存活时间越长，其发生排斥反应的程度就越轻。在急性排斥时血清IL-2水平明显升高，而移植心长期存活者IL-4水平明显升高。结论：环孢素A和舒莱可有效地抑制同种异体的移植排斥反应，联合应用有明显的协同作用。     

ＨＯ-１持续高表达对ＤＡ到Ｌｅｗｉｓ大鼠肝移植急性排斥反应的影响

目的:探讨血红素氧化酶-1(hemeoxygenage-1,HO-1)在DA到Lewis大鼠肝移植中对急性排斥反应的影响及其机制.方法:建立DA到Lewis大鼠肝移植急性排斥模型,实验分3组,各12对.A组供体术前24 h阴茎背静脉注射5ml/kg生理盐水作为对照;B组供体术前24 h阴茎背经脉注射HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP),C组供体给予HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP),移植后持续予相同处理直至受体死亡.术后7天,各组处死6只,取外周血及肝脏标本,测定血清ALT,DBIL水平,组织病理观察排斥反应程度,RT-PCR及Western blot法测定移植物内HO-1 mRNA,Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况,余观察生存期.结果:术后7天,B组血ALT,TBIL水平与A组,c组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);病理示B组移植肝排斥反应程度轻于A,C组;B组HO-1和Foxp3 mRNA及其蛋白的表达均强于A,C组;B组受体存活时间(29.83±1.40)天较A组(13.00±0.52)天与C组(11.67±0.42)天显著延长(P＜0.01),而A,C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:诱导移植肝HO-1持续高表达,可通过促进移植物内Foxp3表达增强,发挥免疫抑制作用,减轻移植肝急性排斥反应.     

ICAM-1在同种大鼠肝移植物中的表达及其意义

目的细胞粘附现象与移植免疫排斥的关系愈来愈为人们所关注,本研究通过对细胞间粘附分子-1（ICAM-1）在大鼠同种肝移植物中的表达情况的分析,探讨ICAM-1与急性肝移植排斥反应的关系.方法采用免疫组织化学技术ABC法检测大鼠移植肝组织ICAM-1的表达.结果30例移植肝组织中,均见肝细胞膜、胆管上皮及炎性细胞有大量的ICAM-1表达,中央静脉内皮细胞呈低表达,而正常大鼠肝细胞无一例有ICAM-1表达.结论大鼠肝移植后ICAM-1在移植肝组织中的诱导表达可能是产生急性排斥的主要步骤,其机制可能是通过促进移植物浸润细胞的粘附而加剧移植排斥反应的进程.