恙螨体内汉滩病毒检测及定位的研究

采用分子生物学方法对小盾纤恙螨的媒介意义进行研究。结果表明：用ＲＴＰＣＲ和ＮｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ从恙螨体内检测到汉滩病毒ＲＮＡ;用原位分子杂交技术在恙螨的卵巢细胞、支肠细胞等组织中检测到汉滩病毒ＲＮＡ。以上结果为恙螨的媒介意义提供了具有分子水平的直接证据,对ＨＦＲＳ的流行病学和预防具有重要的理论意义和实用价值。     

恙螨体内肾综合征出血热病毒基因的套式PCR检测

目的：检测恙螨体内微量肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）基因。方法：选择ＨＦＲＳＶ膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成两对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及点印迹杂交证实具有特异性。结果：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离恙螨５０只组，经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只、１０只和５只组，游离螨１０只和５只组均未见明显扩增带。进一步用ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未检测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，最低检出为５只螨组。并用核酸分子杂交技术进一步证实了上述结果。结论：ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，从分子生物学角度为恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了直接证据。     

革螨及恙螨体内肾综合征出血热病毒定位的研究

目的 确定紧综合征出血热病毒（HFRSV）在螨体内的定位。方法 用原位RT－PCR技术检测HFRSV在螨体内的分布。结果 HFRSV多见于革螨及恙螨的卵巢卵细胞、中肠及中肠支囊上皮细胞的细胞核周围,呈弥散分布,前体组织细胞少,其他组织细胞未见。革螨子4代、子3代和恙螨若虫阳性颗粒多于革螨子2代、子1代和恙螨幼虫。结论 从分子生物学水平进一步证明革螨及恙螨可作为紧综合征出血热的传播媒介。     

肾综合征出血热病毒在恙螨体内生存空间和时间的初步研究

目的：检测肾综合征出血热病毒（HFRSV）在恙螨体内的生存空间与时间。方法：将自然界采集的鼠体恙螨幼虫、小黑板采集的游离恙螨幼虫和饲养孵化出的若虫进行石腊包埋切片，应用IFAT检测。结果：发现HFRSV多分布于恙螨的腹部，前体部分较少，个别恙螨前足和中足亦可检测到。取不同时间饲养的恙螨幼虫和饲养孵化出的若虫进行病毒分离，20、80、100和115天后的若虫均分离到HFRSV。结果：该病毒在恙螨体内存在时间较长，并可经期传递。     

对肾综合征出血热传播媒介小盾纤恙螨的研究

目的 探索小盾纤恙螨在肾综合征出血热(HFRS)传播中的作用及传播疾病的关系.方法 在疫区捕获野鼠,采集小盾纤恙螨,用Vero-E6细胞组织培养及间接免疫荧光法(IFA)检测汉坦病毒(HV)感染情况,并用RT-PCR检测螨体内HV-RNA,观察螨体内HV增殖,原位RT-PCR分子杂交法进行螨体内HV定位.结果 IFA检测HV抗原阳性鼠寄生小盾纤恙螨HV自然感染率为66.7%,IFA检测阴性鼠寄生螨HV自然感染率为25.0%;该螨通过叮刺和经卵传播HV.结论 小盾纤恙螨为野鼠型HFRS主要传播媒介之一,在传播HFRS中的作用不容忽视.     

革螨、恙螨传播肾综合征出血热病毒的实验研究

目的 研究革螨、恙螨在肾综合征出血热病毒（hemorrhagic fever with renal syndrome virus ,HFRSV）传播中的媒介作用。方法 采集自然界鼠窝螨及饲养繁殖的子代革螨和鼠体恙螨幼虫以及从小黑板采集游离恙螨幼虫及饲养孵化的若虫,进行螨细胞培养分别观察螨细胞传播HFRSV的作用。结果 发现螨细胞培养第15d和第20d可从螨细胞内检测到HFRSV,其中HFRSV检出数和荧光强度在革螨子4代、子3代和恙螨若虫均多于和强于子1代、子2代及恙螨幼虫。结论 革螨、恙螨对HFRSV的传播有一定的媒介作用,在维持HFRSV的自然循环中起重要作用。     

原位分子杂交检测HFRSVRNA方法研究

采用非放射性标记物－地高辛碱性磷酸酶标记肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）ｃＤＮＡ制备分子探针，检测ＨＦＲＳＶ在鼠肺、恙螨体内分布定位，并对原位分子杂交的各环节进行探讨。结果表明：鼠肺的吞噬细胞、支气管粘膜上皮细胞、血管内皮细胞等均见有阳性颗粒，在恙螨卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞也存在阳性颗粒；在前处理中，明胶硫酸铬钾与多聚赖氨酸的铺片效果相似；室温２ｈ，４２℃１ｈ，４％多聚甲醛处理冰冻切片，可有效防止脱片，且保持良好的细胞形态结构；探针ＰＣＲ标记法优于随机引物标记法；预杂交液加入ｓｐｅｒｍＤＮＡ和ｙｅａｓｔｔＲＮＡ，不用硫酸萄聚糖，可有效地减少背景染色；４２℃杂交１６ｈ，显色７ｈ可得到理想结果     

原位分子杂交检测HFRSV—RNA方法研究

采用非放射性标记物－地高辛碱性磷酸酶标记肾综合征出血热病毒ｃＤＮＡ制备分子探针，检测ＨＳＦＲＳＶ在鼠肺，恙螨体同分布定位，并对原位分子杂交的各环节进行探讨。结果表明：鼠肺的吞噬细胞，支气管膜上皮细胞，血管内皮细胞等均见有阳性颗粒，在恙螨卵巢细胞，中肠及支囊上皮细胞也存在阳性颗袜因前处理中，明胶－硫酸铬钾与多聚     

小盾纤恙螨自然感染肾综合征出血热病毒和恙虫病立克次体的调查

目的：为有效控制肾综合征出血热（HFRS）和恙虫病提供科学依据。方法：采用龙笼法捕活鼠，收集鼠体外恙螨，分别用Vero-E6细胞和小鼠接种分离HFRS病毒（HFRSV）与恙虫病立克次体（R.t).结果：1995年5月至1996年4月，捕活鼠421只，鼠体外收集恙螨11762只，其中小盾纤恙螨出现在9－12月，高峰为11月，是当地10－11月鼠体外绝对优势螨种，分别从小盾纤恙螨分离到5株HFRSV和10株R.t.结论：小盾纤恙螨分别存在HFRSV和R.t的自然感染，具备HFRS和恙虫病传染媒介的先决条件。     

套式反转录-聚合酶链反应检测革螨体内肾综合征出血热病毒的初步研究

用ＨＴＮ病毒姬鼠型Ｍ基因型特异性引物，异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，ｎｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ检测鼠肺和厩真厉螨体内７６１１８株病毒ＲＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和点印迹杂交证实。结果表明，姬鼠型７６１１８株病毒液和叮刺感染病毒乳鼠后第１０天厩真厉螨组织悬液接种乳鼠第９天鼠肺、叮剌后第１０天和３０天螨，均检出病毒ＲＮＡ。３０只螨样本提取ＲＮＡ也能扩增出病毒ＲＮＡ。家鼠型ＵＲ株感染样本不能被扩增。该方法具有较高特异性和敏感性，操作简单，结合原位分子杂交，可用于螨媒传播ＨＦＲＳＶ的研究。     

发展中国家道路交通伤害和健康公平国际学术会议纪要

由哈佛人口与发展研究中心、世界卫生组织 (ＷＨＯ)、哈佛伤害控制研究中心、华盛顿大学伤害预防研究中心、美国疾病控制中心国家伤害预防与控制中心和儿童生存与发展特别工作组共同发起的“发展中国家道路交通伤害和健康公平国际会议” ,于 2 0 0 2年 4月 10～ 12日在美国马萨诸塞州坎布里奇 (剑桥 )的哈佛大学公共卫生学院举行。参加这次学术会议有来自亚洲、非洲、拉丁美洲和加勒比地区 ,包括中国、韩国、泰国、越南、肯尼亚、加纳、莫桑比克、赞比亚、特立尼达和多巴哥、哥伦比亚、墨西哥等 11个发展中国家以及来自于ＷＨＯ、美国、加拿…     

恙螨与肾综合征出血热传病关系的调查研究

目的 :探索恙螨与HFRS的传病关系。方法 :观察鼠窝中恙螨的分布及季节消长、在鼠和人体的吸血能力 ,对HFRSV进行PCR分析 ,感染HFRS病毒情况。结果 :恙螨是黑线姬鼠(HFRS的主要宿主 )鼠窝中的优势螨种 ,其季节消长与发病相关 ,可通过鼠和人的正常皮肤叮刺吸血 ,有HFRS的自然感染 ,能通过叮刺在鼠间传播和在螨体内经卵传递HFRSV ,且与鼠、螨和人所分离HFRSV的抗原性一致。结论 :该螨可作为野鼠型HFRS鼠间的传播媒介 ,并可能兼有储存宿主作用     

革螨、恙螨体内肾综合征出血热病毒结构蛋白及基因检测

目的：对革螨、恙螨体内ＨＦＲＳ病毒结构蛋白及基因进行检测。方法：采用免疫组化法和套式ＰＣＲ检测。结果：革螨、恙螨体内均可检测到ＨＦＲＳＶ结构蛋白ＭＰ、ＮＰ片段,而恙螨体内ＨＦＲＳＶ随滴度的增高其检出强度亦增加。结论：用分子生物学方法进一步证明革螨、恙螨体内存在ＨＦＲＳＶ。     

革螨、恙螨与HFRS传病关系的调查研究

为探索革螨,恙螨与ＨＦＲＳ的传病关系,我所对革螨、恙螨与ＨＦＲＳ的关系进行了一系列调查研究。结果证明,革螨、恙螨是黑线姬鼠（ＨＦＲＳ的主要宿上）鼠窝中的优势螨种,ＨＦＲＳＶ的自然感染,能通过叮刺在鼠间传播和在螨体内经卵巢表明这两种螨可作为野鼠型ＨＦＲＳ鼠间的传播媒介,并可能兼有储存宿主的作用。     

陕西省姬鼠型出血热疫源地宿主动物和恙螨的调查研究

本文报道１９９２年１２月至１９９３年１２月对户县惠安化工厂肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）自然疫源地宿主动物和恙螨的调查结果。１．捕获４０３只小兽，隶属２目７属８种，黑线姬鼠占捕获数的７３．７％为优势种，其带螨率较高（７４．６５％）；鼠密度高峰在１０～１２月份，１１月份最高。２．收集恙螨３９２３９只，隶属３亚科５属６种，亚须纤恙螨占６０．３４％，季节高峰在１１，１２月份，指数分别为３１４．８３和２３９．７５，占该两月恙螨总数的９９．３％和９９．６％；小盾纤恙螨占３９．３９％，季节高峰在１０月份，指数为５１４．４８，占该月份恙螨总数的９９．９％。３．大仓鼠寄生恙螨６种，黑线姬鼠寄生４种；亚须纤恙螨和小盾纤恙螨宿主广泛，无特异宿主。４．本文结果表明：亚须纤恙螨在ＨＦＲＳ传播中可能起重要作用，这为进一步开展病毒学研究提供了线索。     

从革螨和恙螨中检测到发热伴血小板减少综合征病毒核酸

目的调查革螨、恙螨携带发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)情况。方法收集黑线姬鼠和山羊体表革螨和恙螨,按属种分类,用荧光定量PCR和常规RTPCR法检测革螨和恙螨体内是否携带SFTSV基因组核酸。结果黑线姬鼠体表收集的5组小盾纤恙螨SFTSV基因组核酸均为阳性,黑线姬鼠体表收集的3组毒棘厉螨和山羊体表收集的1组毒棘厉螨SFTSV基因组核酸均为阳性。基因测序结果显示,与SFTSVJS4株NP基因比对,其同源性在99%～100%。结论小盾纤恙螨和毒棘厉螨均可携带SFTSV,具有传播SFTS的可能。