应用PCR技术检测淋巴结病理切片中的IgCDR—Ⅲ基因重排

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测Ｂ细胞－非何杰金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）的单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排，ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后为１００￣１２０ｂｐ的特异性ＤＮＡ区带。检测石蜡病理切片标本中非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）１７／２３例、反应性增生２／５例发现单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排；反应性增生３／５例及淋巴结转移癌４例未见单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排。     

应用PCR技术检测淋巴结病理切片中的IgCDR－Ⅲ基因重排

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测Ｂ细胞－非何杰金淋马巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）的单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排，ＰＣＲ扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后为１００～１２０ｂｐ的特异性ＤＮＡ区带。检测石蜡病理切片标本中非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）１７／２３例、反应性增生２／５例发现单克隆性ＩｇＣＤＲ－Ⅲ基因重排；反应性增生３／５例及淋巴结转移癌４例未见单克隆性ＩｇＤＲ－Ⅲ基因重排。     

何杰金病单克隆抗体免疫组化研究

应用标记Ｒ－Ｓ细胞、Ｂ淋巴细胞和Ｔ淋巴细胞的５种单克隆抗体ＬｅｕＭ_１、ＢｅｒＨ_２、ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１对４３例何杰金病（ＨＤ）的石蜡标本进行了免疫组织化学染色，以Ｔ、Ｂ细胞淋巴瘤各１５例作对照研究。结果：非淋巴细胞为主型何杰金病（ｎｏｎＬＰＨＤ）的Ｒ－Ｓ细胞对ＬｅｕＭ_１的阳性率为６４．３％，对ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１呈阴性反应；而非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ），ＬｅｕＭ_１仅偶在Ｔ细胞淋巴瘤中呈阳性（６．７％），ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１标记ＮＨＬ、Ｂ－ＮＨＬ和Ｔ－ＮＨＬ阳性率分别是８３．３％、７３．３％和６６．７％。因此，在石蜡切片上联合应用ＬｅｕＭ１、ＬＣＡ、Ｌ_（２６）和ＵＣＨＬ_１对鉴别ＨＤ与ＮＨＬ有重要的参考价值。淋巴细胞为主型何杰金病（ＬＰＨＤ）的Ｒ－Ｓ细胞对ＬＣＡ和Ｌ_（２６）的阳性率为５３．３％和６０％，ｎｏｎＬＰＨＤ中Ｒ－Ｓ细胞对ＢｅｒＨ_２的阳性率为２１．４％。提示ＬＰＨＤ的Ｒ－Ｓ细胞来源于Ｂ淋巴细胞，ｎｏｎＬＰＨＤ的Ｒ－Ｓ细胞可能与活化的淋巴细胞有关。     

应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

弓形体感染与先天性心脏病的关系

目的：探讨弓形体感染与先天性心脏病发生的相互关系．方法：采用病例对照研究方法对６６例先心病（ＣＨＤ）组与３８例对照组心脏组织进行弓形体特异的ｐ３０表面蛋白的基因序列２８２ｂｐ片段聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测．结果：①６６例ＣＨＤ心脏组织中ＴＯＸ－ＤＮＡ阳性１０例（占１５％），而３８例对照组中ＴＯＸ－ＤＮＡ阳性公１例（３％），两组比较有显著性差异（Ｐ〈０．０５）．②在１１例新生儿ＣＨＤ中ＴＯＸ－ＤＮＡ     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

48例非霍奇金淋巴瘤中的p53基因突变

采用ＡＢＣ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法在４８例ＮＨＬ中研究ｐ５３基因外显子５～８中发生突变的类型、频率与突变型ｐ５３蛋白的表达以及它们与病理分型、恶性程度的相关性。结果：突变型ｐ５３蛋白在ＮＨＬ中的阳性率为４１．７％，其中在弥漫型大细胞性淋巴瘤（ＤＬＣＬ）为７５％，在非ＤＬＣＬ为３５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５）；在ｐ５３蛋白表达阳性的ＮＨＬ中ＰＣＲＳＳＣＰ阳性主要见于ＤＬＣＬ，检出率为１５％，在非ＤＬＣＬ中ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均为阴性（Ｐ＜０．０５）。表明国人ＮＨＬ，尤其在恶性程度很高的ＤＬＣＬ中存在ｐ５３基因突变，各型ＮＨＬ都有不同程度的突变型ｐ５３蛋白表达     

维生素E,普罗布考对溶血卵磷脂引起的脑微血管细胞损伤和增殖的…

目的：研究维生素Ｅ（ＶＥ）、普罗布考（ＰＲＢ）对溶血卵磷脂（ＬＰＣ）引起的脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）损伤的保护作用和脑微血管平滑肌细胞（ＢＣＭＳＭＣ）增殖的抑制作用。方法：以乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放及结晶紫染色法分别测定ＢＣＭＥＣ损伤和ＢＣＭＳＭＣ的增殖。结果：ＶＥ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３６．８±１．０）％～（１６．２±２．９）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（３７．６±７．０）％～（６１．３±０．６）％。ＰＲＢ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３４．２±３．３）％～（１９．１±２．４）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（４０．９±２．４）％～（４７．０±３．７）％。结论：ＶＥ和ＰＲＢ对ＬＰＣ引起的ＢＣＭＥＣ损伤有保护作用，对ＢＣＭＳＭＣ增殖有抑制作用。     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ     

丙型肝炎患者HCV基因的检测,分型及临床分析

运用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测临床肝炎患者血清中ＨＣＶ ＲＮＡ对５４例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用限制性内切酶Ｓａｕ３ＡＩ／ＨａｅⅢ春５’ＮＣ区扩增产物进行酶切。结果显示４种酶切类型：ＨＣＶ Ⅰ型感染３．７％（２／５４），ＨＣＶⅡ型感染７７．８％（４２／５４），ＨＣＶⅢ，Ⅳ型感染１１．１％（６／５４），ＨＣＶⅡ／Ⅲ，Ⅳ型混合感染７．４％（４／５４）；     

48例非霍奇金淋巴瘤的P53基因突变

采用ＡＢＣ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法在４８例ＮＨＬ中研究Ｐ５３基因外显子５－８中发生突变的类型、频率与突变型Ｐ５３蛋白的表达以及它们与病理分型、恶性程度的相关性。结果：突变型Ｐ５３蛋白在ＮＨＬＫ 的阳性率为４１．７％，其中在弥漫型大细胞性淋巴瘤（ＤＬＣＬ）为７５％，在非ＤＬＣＬ为３５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５）；在Ｐ５３蛋白表达阳性的ＮＨＬＫ ＰＣＲ－ＳＳＣＰ阳性主要见于ＤＬＣＬ，检出率为１５％，在     

PCR法在疱疹病毒性脑炎诊断及疗效观察中的应用

选择疱疹病毒科病毒ＤＮＡ多聚酶基因高保守区中的一对引物，一次ＰＣＲ可同时扩增疱疹病毒科的４种病毒［单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ１）、单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ２）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）、及巨细胞病毒（ＣＭＶ）］相应的ＤＮＡ片段。根据扩增产物分子的大小及对扩增产物酶切分析，可将标本中的４种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者（对照组）的脑脊液（ＣＳＦ），脑炎组ＣＳＦ阳性率３０％（９／３０），对照组ＣＳＦ阳性率６．７％（２／３０）；其中８例为ＨＳＶ１阳性，２例为ＣＭＶ阳性，１例为ＨＳＶ２阳性。２例病毒脑炎患者经用无环鸟苷抗病毒治疗７～１０ｄ后其ＣＳＦ中的ＨＳＶ１ＤＮＡ由阳转阴。由此说明ＰＣＲ法不仅可早期诊断疱疹病毒性脑炎，还可显示抗病毒药物的疗效。     

BCOPP／CHOP─B治疗非何杰金淋巴瘤疗效观察

应用ＢＣＯＰＰ／ＣＨＯＰ－Ｂ交替联合化疗方案，治疗６０例中度及高度恶性非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ），完全缓解率（ＣＲ）为６０％，３年生存率为５６．８％。中度恶性组、体力状况０及１级、临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期和Ａ组患者３年生存率分别为８０．６％、８７．１％、６３．１％和７４．８％，高度恶性组、体力分级≥２级、Ⅳ期、Ｂ症状和血清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）≥３．３４μｍｏｌ·Ｓ／Ｌ患者预后不良，３年生存率分别为２７．５％、７．０％、３４．２％、１２．８％和２２．５％。上述结果表明本化疗方案更适用于治疗较早期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）的中度恶性ＮＨＬ患者。     

恶性淋巴瘤的临床病理与免疫分型

２２２０例淋巴结病变分析表明：恶性淋巴瘤（ＭＬ）居第三位（２５．５％），其中何杰金病（ＨＤ）占７．６％，非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）占１７．９％。免疫组化染色显示：ＨＤ中最多见的亚型为混合细胞型（３８．９％），淋巴细胞消减型发病率最低（９．３％），淋巴结原发者显著高于结外（３．３∶１），尤以颈部为著。ＮＨＬ中Ｂ系淋巴瘤占８１．６％，其中弥漫型大无裂细胞性淋巴瘤发病率最高（３８．６％），小淋巴细胞性淋巴瘤发病率最低（２．６％）。原发部位结性与结外无显著差异（１．１∶１），前者以颈部（２２．３％）、后者以肠道（１１．７％）发病率最高。     

乙型肝炎病毒基因多重PCR的临床观测

为探讨多重多聚酶链反应（ＰＣＲ）在慢性乙型肝炎检测中的应用价值，选用ＨＢＶＤＮＡ的Ｓ区、Ｃ区及Ｘ区的３对引物Ｓ１／Ｓ２，Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２，同时扩增ＤＮＡ。结果发现，３个基因区的表达情况不同。７７例慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别是Ｓ区６１０％，Ｃ区４５５％，Ｘ区３９０％；且三区联合检出率为７５３％，与单独Ｃ区检出有明显差异（Ｐ＜００５）。提示多重ＰＣＲ能对ＨＢＶＤＮＡ同一模板的各基因区同时扩增，从而可以得到Ｃ区以外的其它保守基因区特异性的扩增片段，提高了对乙型肝炎病毒患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

心肌疾病线粒体DNA突变研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增扩张型心肌病（ＤＣＭ）及急性心肌梗塞（ＡＭＩ）病人活检或尸检心肌及淋巴细胞线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）缺失常发区之一，并与正常对照比较。结果发现病人及正常对照ｍｔＤＮＡ８５３０～６００位之间（相距８．７ｋｂ）均存在不同程度的多重缺失，２例ＡＭＩ病人心肌及１０例ＤＣＭ病人心内膜心肌活检标本均扩增出１．ｌｋｂ片段，而２８例ＤＣＭ病人和１４例正常对照淋巴细胞内则多可扩增出４个片段，对应缺失长度在７／７～８．８ｋｂ之间，心肌内ｍｔＤＮＡ缺失几乎均可在淋巴细胞ｍｔＤＮＡ反映，１．ｌｋｂ片段阳性率有随年龄增大而升高的趋势，含缺失区的ｍｔＤＮＡ所占比例与年龄成正比；占总ｍｔＤＮＡ的比例小于１０％，ＳＳＣＰ分析发现Ｌ８５３／Ｈ９３３扩增片段存在有点突变。     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

代谢性酸中毒犬脑脊液［HCO－_3］与Pco_2的关系

作者旨在探讨代谢性酸中毒时脑脊液（ＣＳＦ）［ＨＣＯ－３］与ＰＣＯ２的相互关系。两组代谢性酸中毒模型均由静脉内输入０．２ｍｏｌ／ＬＨＣＩ产生，［ＨＣＯ－３］ａ１ｈ内下降到（１２２）ｍｍｏｌ／Ｌ。实验６ｈ时ＣＳＦ［ＨＣＯ－３］：１组（正常碳酸血性代酸）下降了１．６ｍｍｏｌ／Ｌ；组（低碳酸血性代酸）下降了７．０ｍｍｏｌ／Ｌ．ＣＳＦ［ＨＣＯ－３］与ＣＳＦＰｃｏ２，显著正相关（ｒ＝０．８３４，Ｐ＜０．０ｌ）．结果说明代谢性酸中毒时ＣＳＦ［ＨＣＯ－３］并不受［ＨＣＯ－３］ａ的明显影响，主要取决于ＣＳＦＰｃｏ２的变化，其调节机制与脉络丛上皮细胞内ＣＯ２的水化作用和ＣＡ活性有关。     

乙型病毒性肝炎的基因诊断

对１２０例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ用ＰＣＲ技术进行检测，结果表明，ＰＣＲ法的敏感性阳性检出率７５．８％，明显高于ＥＬＩＳＡ法（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＣＡｂ）的阳性率分别为６１％、３８％和６２％）；ＰＣＲ检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢＡｂ一血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为２６％、５２％和２４％，ＰＣＲ检测三者均为阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为１００％慢性迁延肝炎、慢性活动性肝炎     

应用PCR—SSCP银染技术检测非小细胞癌p53基因点突变

我们应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术对３１例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｐ５３基因第５，６，７，８，外显子进行检测，结果发现有１５例（４８．３８％）发生基因突变，其中第７外显子８例，第５，８外显子各３例，第６外显子１例，说明５～８外显子为突变热点区域；ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一种敏感，快速，经济，实用检测点突变方法。