测定双胸蚓溶栓酶活性方法的探讨

测定蚯蚓溶栓酶活性的方法很多 ,以酪蛋白为底物紫外法[1] 操作简便 ,但测定蛋白质酶度较低。目前 ,多采用纤维蛋白干板法[1,2 ] 。该法虽能比较溶栓酶对底物纤维蛋白溶解情况 ,但作为定量检查 ,人为误差较大 ,且很难摸准正比线性范围。而采用Ｆｏｌｉｎ 酚法 (Ｌｏｗｒｙ法 )     

分枝杆菌计数方法的比较研究

目的:建立牡牛分枝杆菌的快速检测方法.方法:采用紫外分光光度计法、测湿重法、平板菌落计数法测定细菌数,建立紫外分光光度计法、测湿重法对平板菌落计数法的标准曲线.结果:建立了紫外分光光度计法和湿重法相对于平板计数法的标准曲线,通过准确度分析表明在细菌含量在每毫升105～108之间时,两标准曲线线性关系良好.结论:该方法可用于牡牛分枝杆菌的快速计数.     

用Folin-酚试剂法测定双胸蚓溶栓酶活性

蚯蚓溶栓酶活性测定,目前国内多采用纤维蛋白平板法。该法虽能比较溶栓酶对底物纤维蛋白溶解情况,但作为定量检查,人为误差较大,且很难摸准正比线性范围。以酪蛋白为底物紫外法,操作虽简便,但测定蛋白灵敏度较低。本文以酪蛋白为底物对双胸蚓溶栓酶(bimastos throm-bolytic enzyme,BTE)的研究完全符合酶反应动力学。采用Folin-酚法(Lowry     

琥珀酸半醛脱氢酶抑制剂筛选方法的建立及其在天麻成分筛选中的应用

目的建立琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)抑制剂类抗癫痫神经系统药物筛选模型,并运用此模型对中药天麻有效成分及其类似物进行体外活性筛选和构效关系分析。方法制备琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)酶系液,并以紫外分光光度法评价SSADH活力与吸光度相关性;优化酶催化反应温度、反应时间、底物NAD+浓度、底物琥珀酸半醛(SSA)浓度、缓冲液p H、底物SSADH浓度等因素对SSADH活性的影响,建立SSADH酶系活性筛选方法;采用文献已有报道的对羟基苯甲醛(HBA)为阳性对照验证此方法可靠性,同时,对HBA结构类似物测定结果及作用机制进行分析。结果成功构建SSADH酶抑制剂活性筛选方法,HBA测定结果与前期文献报道抗癫痫作用一致。确定SSADH的紫外光谱(UV)活性检测体系及其检测缓冲液配置组成,其反应条件为37℃,温孵30 min,酶活力相关吸光度在340 nm处测量。HBA和香草醛(Va)对GABA-T的构效关系一致,—OH及苯环上的—CHO为SSADH酶抑制作用必须药效团。结论该模型可应用于SSADH酶抑制剂的高通量筛选,也为研究中药中SSADH酶抑制剂类活性成分的筛选及其作用机制研究提供参考。     

在高于米氏常数的底物浓度下用积分法测定尿酸酶活性

目的:以尿酸酶为模型,考察在底物浓度高于酶米氏常数(Km)时用积分法测定酶活性(Vm)的可靠性. 方法:用293 nm光吸收记录尿酸酶反应曲线. 用以反应时间为自变量的积分速度方程,以尿酸酶Km为常数而本底为非线性参数拟合尿酸酶反应曲线,搜寻对应最好拟合的Vm. 结果:此积分法测定Vm主要受剩余底物浓度影响,本底基本没有干扰. 剩余底物低于2.5 μmol/L时用10～70 μmol/L起始底物所得Vm无差异. 用25和70 μmol/L起始底物浓度时初速度和Vm都与酶量呈正比. 在此两种底物浓度下积分法的下限相同,且与初速度法下限无明显差异. 但用积分法测定酶活性的上限明显高于初速度法,而且起始底物浓度越低则差异越显著. 结论:在积分法中使用以反应时间为自变量的积分速度方程拟合酶反应曲线,在高于Km的底物浓度下能可靠测定酶活性.     

高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用

目的 对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法 改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用.方法 TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析.以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm.根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性.结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10 μmol/L 至 400 μmol/L.精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善.经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L.结论 以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE 酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法 .     

单胺氧化酶抑制药物体外筛选模型的建立

目的：构建一种能用于治疗神经退行性变疾病单胺氧化酶（monoamine oxidase,MAO）抑制药物的体外筛选模型。方法：采用紫外分光光度方法,以苄胺或5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）分别作为MAO-B或MAO-A的反应底物,测定其活性,并对MAO浓度、底物浓度、缓冲液浓度、pH值、反应时间和温度等进行优化。结果：研究确定的模型反应体系条件为：在温度37 ℃、酶预孵育时间20 min和反应时间60 min下,测定MAO-B活性最佳条件为100 mmol/L磷酸钾缓冲液（pH 7.6）,MAO和底物苄胺的终浓度分别为0.15 mg/ml和2.00 mmol/L;测定MAO-A活性最佳条件为100 mmol/L磷酸钾缓冲液（pH 7.4）,MAO和底物5-HT的终浓度分别为0.40 mg/ml和5.00 mmol/L。结论：建立了一种MAO抑制药物体外筛选的模型,该模型具有成本低、操作简便等特点,适合于大规模筛选MAO-B和MAO-A的抑制药物。     

赤子爱胜蚓DNase活性测定方法

目的　研究赤子爱胜蚓 -地龙组织提取物DNase活性测定方法。方法　应用单相酶扩散法和紫外吸收法分别对其酶解底物DNA测定。结果和结论　两种方法同时应用可扩大其测定酶活力范围 ,且两方法的数据结果间存在稳定的函数关系 ,为赤子爱胜蚓DNase以及其他DNase的活力测定提供了可行的实验方法。     

一种新的液相色谱定量法——紫外分光吸收系数法

本文建立了一种新的液相色谱定量方法——紫外分光吸收系数法。当液相色谱用紫外分光光度计作为检测器,成为LC—UV联用时,此时的液相色谱法成为一种经过分离的动态测定紫外分光法。用图解法阐明了在紫外分光光度计流通池内这种动态测定与静态测定的关系,利用它可以E1%/1cm来测定C%。     

差示－导数光谱法测定强力宁注射液中盐酸半胱氨酸的含量

作者根据盐酸半胱氨酸在碱性条件下可产生紫外吸收的原理，将差示与零交导数光谱法（ｚｅｒｏ－ｃｒｏｓｓｉｎｇｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ）结合，建立了测定制剂中盐酸半胱氨酯含量的差示－导数光谱法。该法不经分离可直接测定强力宁注射液中盐酸半胱氨酸的含量。方法简便、快速、可靠，平均回收率为１００．１８±０．５１％。     

纳洛酮的合成工艺改进

目的用价廉试剂完成去氧甲基反应,改进纳洛酮的合成工艺。方法在以蒂巴因为原料,经氧化、氢化、酰化、氰化、去氧甲基、水解、N-烯丙基化得到纳洛酮的合成路线中,分别采用甲磺酸/DL-甲硫氨酸和氢溴酸代替三溴化硼进行去氧甲基化和后续水解反应。结果优化了纳洛酮的合成工艺,甲磺酸/DL-甲硫氨酸法试剂价格低廉,可降低生产成本;而氢溴酸法不但试剂价格更低,还可将去氧甲基化和水解合并为一步反应,使新工艺的总收率提高到59.90%,产品质量符合中国药典。结论采用20%的氢溴酸作为去氧甲基化试剂的新工艺,收率高、成本低、操作简便,适合规模生产。     

乌头碱水解实验和热力学研究

目的探索乌头碱的水解机理,解释附子长时间煎煮解毒的机理;方法采用Am1半经验量子化学方法,对乌头碱水解反应的热力学进行了研究;采用HPLC和液质联用方法,对乌头碱水解产物进行了分析.结果理论上预测了双酯型乌头碱较易生成苯甲酰乌头碱,实验上证实了双酯型乌头碱主要水解为单酯型苯甲酰乌头碱.结论单酯型苯甲酰乌头碱是乌头碱的主要水解产物.理论预测与实验结果相一致,因此Am1半经验量子化学研究乌头碱类大分子化合物是可行的.     

Monitoring the hydrolyzation of aspirin during the dissolution testing for aspirin delayed-release tablets with a fiber-optic dissolution system

The purpose of this study was to investigate the hydrolyzation of aspirin during the process of dissolution testing for aspirin delayed-release tablets. Hydrolysis product of salicylic acid can result in adverse effects and affect the determination of dissolution rate assaying. In this study, the technique of differential spectra was employed, which made it possible to monitor the dissolution testing in situ. The results showed that the hydrolyzation of aspirin made the percentage of salicylic acid exceed the limit of free salicylic acid (4.0), and the hydrolyzation may affect the quality detection of aspirin delayed-release tablets.     

鸡毛水解制备复合氨基酸工艺条件的正交试验

目的　优选盐酸水解鸡毛制备复合氨基酸的工艺条件。方法　采用3因素3水平正交试验法,以氨基酸转化率为考察指标,对影响鸡毛水解的因素进行研究。结果　酸料比为1∶3,盐酸浓度8m ol·L- 1 ,水解时间10 h,水解效果最佳。结论　通过优选盐酸水解鸡毛制备复合氨基酸的工艺条件,可以得到较高的收率。     

半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒的制备及性质评价

目的 制备具有半乳糖基和稳定磁性的半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒,并对半乳糖白蛋白磁性纳米粒的糖化比率、磁性及药物含量进行检测.方法 将乳糖和白蛋白用还原胺法合成半乳糖基人血白蛋白(galactosylated human serum albumin,Gal-HAS);采用滴定水解法制备直径在70mm左右Fe3O4磁性纳米粒.再将半乳糖白蛋白、Fe3O4磁性纳米粒及纯盐酸阿霉素按一定的比率混合,通过在精制棉子油中超声乳化、加热固化变性、乙醚洗涤等工艺制备出半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒;用苯酚-硫酸比色法测定半乳糖白蛋白的糖化比率;用乙醇提取法提取半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒中的阿霉素,并用液相色谱仪测定其含量.将纳米粒溶于生理盐水中,并在光学显微镜下观察在磁场的作用下,半乳糖基磁性纳米粒的运动情况,用激光粒度分析仪、原子力显微镜和透射电子显微镜观察纳米粒粒径的大小和内部结构.结果 半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒的糖化比率为32;Fe3O4纳米粒径在(70±30)nm左右,粒径均匀;阿霉素的含量为58.45μg/g,阿霉素的包含率为97.53%;半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒溶液在光学显微镜下观察,在磁场的作用下,纳米粒迅速向磁铁的方向移动并发生聚集,当磁铁与纳米粒的距离加大时,纳米粒运动速度减慢,并沿磁力线的方向成串珠状聚集.透射电子显微镜下观察Fe3O4颗粒均匀分布在半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒中.结论 半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒具有较高糖化比率、稳定的磁性、靶向性强、药物包含率高以及释药速率可控制等特点,为靶向药物治疗,提供了可靠的载药工具.     

石墨炉原子吸收炉内直接消化测定冷饮中铅的探讨

目的应用石墨炉原子吸收炉内直接消化测定冷饮中铅的方法。方法样品经水解或稀释后直接进样测定。结果冷饮中铅的加标回收率为95.6%～104.3%,相对标准偏差在1.85%～3.16%之间。结论此条件下检测冷饮中的铅可以在最少的样品前处理步骤下快速准确地进行。     

催眠药替马西泮的合成

以４－氧化物１为原料，经甲基化、酰化和水解三步反应合成了替马西泮。并分离鉴定了替马西泮产品中的杂质５。     

2-甲氧基雌二醇合成方法的改进

 目的 合成新生血管抑制剂2-甲氧基雌二醇。 方法 以雌二醇为原料经过双乙酰化,四氯化锆催化下发生2-位乙酰基重排,溴苄保护3-位羟基,Baeyer-Villiger氧重排反应后产物再经过碱水解,2-位甲醚化,最后用盐酸脱去3-位苄基共6步合成2-甲氧基雌二醇。 结果 将文献报道路线缩短了一步,与原文献相比将改进的六步反应总收率提高了10%。合成获得的2-甲氧基雌二醇成品进行了结构确证。 结论 通过改进2-甲氧基雌二醇的合成工艺,简化操作,缩短反应时间,与原文献相比改进后的合成条件更温和更环保,更有利于规模化生产需要。     

柱前衍生化HPLC法分析人工栽培金线莲中多糖的单糖组成

目的 建立一种金线莲多糖(ARPS)中单糖组成的柱前衍生化高效液相(HPLC)测定方法. 方法 以三氟乙酸(TFA)水解ARPS,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,梯度洗脱HPLC测定,并分别对衍生化过程的pH、PMP的用量和水解过程的TFA浓度作了优化. 结果 人工栽培ARPS由甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,且各单糖的物质的量的比为:甘露糖∶核糖∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=1.00∶ 8.47∶47.30∶1.17∶ 1.19. 结论 该方法简便可行,重复性良好,适用于分析ARPS中单糖组成.     

LXT101及其系列结构修饰物在胰酶体系中的稳定性评价研究

目的 探索系列多肽结构修饰物的功能性基团与抑制酶降解能力之间的关系,以期寻找到能有效抑制蛋白酶对多肽降解的功能基.方法 应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究新药LXT101及其结构修饰物LZN系列和LMP系列在胰混合酶体系中的体外代谢性质,检测波长均为225 nm.结果 多肽药物的浓度在4.0~400μg/ml范围内与其峰面积呈良好线性关系(r>0.9990),绝对回收率为95.0%~98.7%,日内相对标准偏差(RSD)<1.5%,日间RSD<2.5%.半衰期为LZN系列>LMP系列>LXT101.结论 LZN和LMP系列达到了结构修饰的目的,即具有质子给体或受体的基团如氨甲酰基(Cbm)、乙酰基(Ac)、对氨基苯丙氨酸(Aph)和对脲基苯丙氨酸(Uph)等的修饰可延长此类多肽化合物的代谢半衰期,为研发长效、高活性的肽类药物提供了重要信息.