大黄素对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用

自中药虎杖中提取的大黄素与常用化学消除剂—吖叮黄、SDS,分别对金黄色葡萄球菌多剂耐药菌株(T_c~rG_m~rS_m~rP_c~r)进行抗生素耐药质粒消除试验。结果表明,大黄素对试验菌(22)的四环素耐药性:消除率与对照相比提高5.8—6.7倍。少数菌落同时消除青霉素、庆大霉素及链霉素的耐药性,消除率与对照相似。据此,初步认为金黄色葡萄球菌(22)可能存在四环素质粒。不能排除另一与青霉素等耐药性有关的质粒存在的可能性。     

中药苍术对痢疾杆菌F_（13）R质粒体外消除作用的实验研究

本实验应用中药苍术作为耐药性（Ｒ）质粒消除剂，以痢疾杆菌Ｆ＿１３株为靶细菌进行Ｒ质粒的体外消除试验。其消除率对耐ＴＣ＋ＳＭ＋ＡＰ和耐ＳＭ分别为０．８％和４６％；对照组的ＥＢ消除率为０．８％，ＳＤＳ消除率为０．６％。对照组的消除子均表现为对单一耐药性的丢失。     

鲍曼不动杆菌质粒指纹图谱分析及质粒与其耐药性关系的研究

目的监测鲍曼不动杆菌的院内感染状况,探讨质粒与其耐药之间的关系.方法用琼脂纸片扩散法(K-B法)测定鲍曼不动杆菌对14种抗生素的敏感性.微量碱裂解法快速提取质粒DNA,通过琼脂糖凝胶电泳获得质粒指纹图谱.对单质粒菌株采用质粒消除试验研究其与耐药性之间的关系.结果抗生素敏感性测试结果表明,大多数菌株显示出多重耐药性.71株临床分离株中有43株检测到质粒,根据质粒图谱可分为8个型别.质粒消除试验显示32.0 kb的质粒消除后耐药性无明显变化,22.0 kb的质粒消除后,该菌对部分抗菌药物的耐药性丢失.结论亚胺培南、舒普深和头孢吡肟具有较高的抗菌活性,可作为鲍曼不动杆菌感染的治疗药物.质粒指纹技术仍可作为院内感染流行病学调查的一种重要手段,其结果表明该院鲍曼不动杆菌感染呈散发的流行态势.22.0 kg的质粒与该菌对氨苄西林、哌拉西林、庆大霉素、阿米卡星的耐药性有关.     

铜绿假单胞菌普通菌毛与耐药性R质粒的关系

目的：检测铜绿假单胞菌耐药株PA36的耐药性R质粒与菌毛及粘附性的关系。 方法：应用琼脂糖凝胶电泳试验、电镜照片制备及观察、粘附试验及质粒消除试验。 结果：PA36含有一条相对分子质量是3.3×10⁶的R质粒;电镜下观察PA36具有周毛型菌毛;粘附试验于光镜下可见该菌大量粘附到脱落的尿道上皮细胞上;该R质粒消除后该菌株的耐药性与菌毛一起消失,粘附性明显减弱。 结论：铜绿假单胞菌菌株PA36编码普通菌毛、决定粘附性的基因主要是在相对分子质量为3.3×10⁶的一个R质粒上。     

铜绿假单胞菌普通菌毛与耐药性R质粒关系的探讨

目的检测铜绿假单胞菌PA38耐药株的耐药性R质粒与普通菌毛及粘附性的关系。方法应用琼脂糖凝胶电泳试验、电镜照片制备、粘附试验及质粒消除试验。结果铜绿假单胞PA38菌株含有一条相对分子质量是3.3×106的R质粒;电镜下观察该菌株具有周毛型菌毛:粘附试验可见该菌大量粘附到脱落的尿道上皮细胞上;该R质粒消除后该菌株的耐药性与普通菌毛一起消失,粘附性明显减弱。结论铜绿假单胞菌PA38菌株编码普通菌毛、决定粘附性的基因主要是在相对分子质量为3.3×106的一个R质粒上。     

中药苍术对痢疾杆菌F13R质粒体外消除作用的实验研究

本实验应用中药苍术作为耐药性质粒消除剂，以痢疾杆菌Ｆ１２株为靶细菌进行Ｒ质粒的体外消除试验。其消除率对耐ＴＣ＋ＳＭ＋ＡＰ和耐ＳＭ分别为０．８％和４６％；对照组的ＥＢ消除率为０．８％，ＳＤＳ消除率为０．６％。对照组的消除子均表现对单一耐药物性的丢失。     

药物在体外消除肠道杆菌携带的耐药质粒pRsT98的研究

目的 探讨用中西药在体外消除肠道杆菌携带的耐药质粒pRST98的可能性。方法 将原存在于伤寒杆菌中的耐药质粒pRST98经接合转移分别导入大肠杆菌和鼠伤寒杆菌，选用双黄连和氧氟沙星对上述3种细菌进行亚抑菌浓度的消除试验，并对实验前后的受试菌分别进行K－B纸片扩散法和最小抑菌浓度法（MIC）药敏试验及质粒电泳检测。结果 两种药物在体外未能将受式菌携带的pRST98消除；但该质粒编码的耐药标志减少；部分菌株对原有药物的耐药程度明显下降。结论 双黄连和氧氟沙星能降低pRST98宿主菌的耐药性，但药物作用后同一质粒在不同宿主菌中耐药性变化的差异，显示该质粒表达的多样性和复杂性。     

社区环境中食源性沙门菌的分布菌型及耐药性消除试验

目的研究H市社区食源性沙门菌的分布、菌型、耐药性及耐药性消除。方法按GB/T4789—2003分离、鉴定沙门菌并用标准血清分型,纸片琼脂扩散（K—B）法测定耐药性,SDS高温处理消除耐药性。结果自5类食品（130份样本）分离到沙门菌47株,属3群6个血清型,主要是鼠伤寒沙门菌（25株,53．19％）,其次是肠炎沙门菌、猪霍乱沙门菌。三型沙门菌的多重耐药株分别是60．00％（15／25）、33．33％（3／9）、28．57％（2／7）。经SDS高温处理可使80,00％的耐药株的耐药性逆转。结论H市食源沙门菌菌型集中,主要是鼠伤寒沙门菌,耐药性严重,它们中有60．00％菌株是多重耐药株,但对哌拉西林、亚胺培南、环丙沙星敏感。SDS高温处理可使80．00％菌株的多重耐药性消除。     

耐药质粒在肠道杆菌间的接合传递研究

选用１３种抗菌药物对１８株肠道杆菌进行药敏试验、质烂检测并用传统及改良两种接合转移试验方法，以５株伤寒杆菌的不相容性Ｃ群（ｉｎｃＣ）Ｒ质粒、６株大肠杆菌及２株鼠伤寒杆菌的Ｒ质粒作供体，研究其在肠道杆菌间的传递。结果显示，Ｒ质粒能在４种肠道杆菌间互相传递，其中伤寒杆菌ｉｎｃＣ群Ｒ质粒能在这４种菌中稳定复江表达耐药性。质粒的可传递性给阻断耐药性的传播和疾病的防治带来很大困难，单纯消除某个菌中的耐药质粒     

耐药质粒消除的研究概况与展望

质粒是细菌内染色体外具有独立复制能力的对细菌生存非必需的小型共价闭合环状双链DNA分子。耐药质粒上携带着耐药基因 ,赋予了细菌对某些抗生素耐药。耐药质粒可自宿主细胞内自发消除 ,但很缓慢 ,其消除频率为 10 - 2 - 10 - 8。含质粒的细菌用正常的培养基培养同时经某些物理、化学方法处理 ,由于质粒的复制受到抑制而染色体的复制仍继续进行 ,故可使子代细菌中的质粒消除 ,其消除频率比自发消除增加 10 0 - 10 0 0 0 0倍[1] 。质粒消除后细菌的耐药性也随之丧失 ,质粒与染色体突变不同 ,质粒消除后其耐药性不再回复 ,除非外源质粒再次…     

ExperimentalStudyofRPlasmidEliminatingActionofRhizomaCoptidisonE．Coli

ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＲＰｌａｓｍｉｄＥｌｉｍｉｎａｔｉｎｇＡｃｔｉｏｎｏｆＲｈｉｚｏｍａＣｏｐｔｉｄｉｓｏｎＥ．ＣｏｌｉＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＲＰｌａｓｍｉｄＥｌｉｍｉｎａｔｉｎｇＡｃｔｉｏｎｏｆＲｈｉｚｏｍａＣｏｐ...     

金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒DNA的抽提及检测

本文报道了用溶菌酶合并使用少量溶葡萄菌素作为破壁酶提取金黄色葡萄球菌质粒DNA,然后用琼脂糖凝胶电泳来检测的方法。比较研究了一株自南京地区分离的金黄色葡萄球菌多剂耐药株(22)及用大黄素处理后所得的不同耐药性消除菌株的质粒DNA。结果证明,在金黄色葡萄球菌(22)中含有4条质粒带。分子量较小的二条质粒带可能与四环素耐药性及青霉素耐药性有关。它们的分子量约为2.6及2.0 Mdal。     

喹诺酮类抗菌药对金黄色葡萄球菌抗生素耐药质粒的消除作用

以喹诺酮类药物作为质粒消除剂,进行抗生素耐药质粒定位实验。通过10株金黄色葡萄球菌耐药株的实验,确定其中3株菌具有氯霉素、四环素和红霉素耐药质粒。并比较了喹诺酮类与SDS的消除作用,发现在不同浓度的消除剂及不同菌株中其消除作用不相同。     

Epidemic strain Shigella dysenteriae Type 1 Dt66 encodes several drug resistances by chromosome

BACKGROUND: Multiple antibiotic-resistant strains of Shigella dysenteriae type 1 were isolated from an epidemic in West Bengal, India (1984). During the past two decades, much attention was given to reevaluation of treatment recommendations. However, there are no useful data on drug resistance encoded by chromosome. METHODS: A total of 300 strains of Shigella dysenteriae type 1 were isolated from an epidemic. Strains were biochemically identified by API 20E system and further confirmed serologically. Antibiotic susceptibility was determined by disk diffusion method and plasmid DNA was prepared by alkaline lysis procedure. Elimination of plasmids was achieved by curing with acridine orange from a representative epidemic strain S. dysenteriae 1 Dt66. PFGE was performed for typing of wild-type and plasmid-cured strains. Southern blot of PFGE separated XbaI digested chromosomal DNA was done onto positively charged nylon membrane. For Southern hybridization, plasmid DNA was used as probe. RESULTS: All isolates showed identical drug resistance patterns and plasmid profiles. All these isolates contained six plasmids ranging in sizes from 3 to 145 kb. We have eliminated all the plasmids from a representative strain of S. dysenteriae 1 Dt66 by using acridine orange as curing agent. All epidemic Shigella isolates were resistant to amoxycillin, ampicillin, bacitracin, carbenicillin, cefixime, ceftazidime, chloramphenicol, clarithromycin, erythromycin, fusidic acid, methicillin, penicillin G, polymixin B, streptomycin, rifampicin, tetracycline and vancomycin, among 29 antibiotics used. Out of 17 resistant antibiotics, 12 were encoded by chromosome. Resistance to ampicillin, chloramphenicol, streptomycin, tetracycline and ceftazidime was plasmid encoded. Southern blot hybridization showed the recognition of two clear sites in the chromosome used plasmid DNA of Dt66 strain as probe, which reveled some sequential genetic homology between chromosome and plasmids. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was performed for typing of the chromosome of plasmidless strains of Dt66 and wild-type strain Dt66 (having plasmids) that remain unaltered. CONCLUSIONS: Seventy percent drug-resistant loci of Shigella dysenteriae 1 Dt66 are present in chromosome and the remaining are plasmid mediated.     

金银花水煎剂对绿脓杆菌P29株R质粒体内体外消除作用的实验研究

目的 :探讨金银花对绿脓杆菌 R质粒消除作用。方法 :体外试验　金银花水煎剂亚抑菌浓度作用绿脓杆菌 P2 948h后 ,影印培养 ,计数消除子 ;体内试验　建立肠道去污染小鼠动物模型后 ,经口感染绿脓杆菌 ,同时给金银花水煎剂 ,灌胃给药 ,2 mg/只 ,2 4 h后再次给药 ,剂量同上 ,48h后处死小鼠 ,分离培养细菌 ,计数消除子数。消除子经质粒抽提琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 :金银花水煎剂对绿脓杆菌 P2 9株 R质粒体外消除率为 0 ,体内消除率为 8%。结论 :金银花水煎剂对去污染小鼠感染绿脓杆菌 P2 9株 R质粒具有消除作用 ,消除子主要表现对单一抗生素恢复敏感性 ;体外没有消除 R质粒作用。     

分化抑制因子1相互作用蛋白AGGF1的筛选

目的 利用酵母双杂交方法,筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子1(Id1)相互作用的蛋白.方法 PCR方法扩增Id1的编码序列并定向克隆入诱饵质粒pHybLex/Zeo,构建重组诱饵质粒pHybLex/Zeo-Id1,酶切鉴定后转化人酵母株EGY48/pSH18-34,检测重组诱饵质粒有无非特异激活报告基因Leu2、LacZ作用;扩增并提取成人肺组织文库质粒,将文库质粒及重组诱饵质粒转化入酵母细胞,依次筛选Leu2 ,Leu2 LacZ 克隆;设置阴性及阳性对照,重复筛选Leu2 LacZ 克隆并排除假阳性克隆,获取真阳性文库质粒,进行测序和同源性比对.结果 酶切证实,重组诱饵质粒构建成功.重组诱饵质粒转化入酵母细胞后.经检测无非特异激活报告基因作用.扩增并筛选成人肺组织文库.获得198个Leu2 及19个Leu2 LacZ 克隆.经排除假阳性克隆,最终获得1个Leu2 LacZ 真阳性克隆,经测序和同源性比较证实该克隆与蛋白AGGF1高度同源(556/559,99.5%),Westem blotting证实其在酵母细胞中有表达.结论 利用酵母双杂交方法,通过筛选成人肺组织文库,发现Id1与AGGF1存在相互作用.     

产KPC酶超耐药阿斯肠杆菌EaH7的发现及其耐药伴生质粒的遗传特征

 目的  分析1株亚胺培南抗性阿斯肠杆菌(Enterobacter asburiae)的耐药机制及其遗传特征。方法  Vitek-2 Compact系统初步鉴定菌株并测定抗生素最小抑菌浓度,对16s rRNA基因测序以确定菌株;PCR法扩增β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类等17种耐药基因并测序确认;以CaCl₂诱导的化学法转化质粒;构建伴生质粒DNA文库并测序,以Glimmer 3.02 和BLASTP软件注释并预测伴生质粒序列的编码基因功能;采用接合试验验证伴生质粒对耐药性质粒转移的作用。结果  该菌株为阿斯肠杆菌,对亚胺培南等15种β-内酰胺及氨基糖苷类抗生素耐药,仅对左氧氟沙星和环丙沙星敏感;该菌株同时含有2种质粒,其中耐药性质粒pEa-1携带耐药基因blaKPC-2、blaCTX-M-15和blaTEM-1,而伴生质粒pEa-2则携带4种转移蛋白基因mobA、mobB、mobC和mobD;pEa-2可促进耐药质粒pEa-1接合转移。结论  在国内首次报道了产KPC-2酶的阿斯肠杆菌,该菌携带的质粒pEa-2具有促进耐药性质粒pEa-1接合转移的作用。     

院内感染耐药黄杆菌携带β-内酰胺酶基因的研究

目的探讨临床分离黄杆菌耐药株携带β-内酰胺酶(bla)基因类型及基因介导方式.方法研究对象为临床分离所得的6株黄杆菌临床耐药株.产β-内酰胺酶情况采用纸片法定性检测;细菌质粒和染色体以市售试剂盒抽提;酶编码基因类型用PCR检测分析.结果6株黄杆菌均产bla,在其染色体、质粒上共发现7种不同类型的bla基因,其中菌株02-23存在染色体和质粒共同介导的PSE-1基因,02-237存在质粒介导的SHV、PSE-1基因,02-244存在质粒介导的TEM、AmpC.PSE-1基因,02-258除存在由质粒介导的SHV、OXA-1、CTX-M-1基因外,尚由染色体介导SHV、TEM基因,02-332存在染色体介导的TEM基因,02-372存在质粒介导的OXA-1、Sme-1基因.结论西南医院临床分离的耐药黄杆菌携带bla酶基因种类较多,可由质粒、染色体分别介导或两者共同介导,耐药株的产生可能与大量、长疗程使用抗生素有关.     

抗鼻咽癌质粒 pFY 转化和菌种筛选的研究

目的：筛选携带抗鼻咽癌质粒 pFY 的稳定高产菌株。方法以 CaCl2法制备大肠杆菌 JM109感受态,将抗鼻咽癌质粒 pFY 转化 JM109感受态,对琼脂平板上获得的菌落进行筛选,选出符合标准的单菌落为菌种,进行菌种稳定性实验。用质粒提取试剂盒检测质粒含量。将抗鼻咽癌质粒 pFY 转染到细胞 CNE-2中,四氮唑蓝(MTT)比色法观察转染试剂及质粒载体对细胞生长增殖的影响。结果筛选得到菌株的培养液中质粒 DNA 含量为30 mg/mL,超螺旋 DNA 比例为92%。经电泳和酶切鉴定,该菌株的50子代所携带质粒与原代一致。质粒 pFY 对 CNE-2细胞株生长有明显的抑制作用。结论成功筛选出携带抗鼻咽癌质粒 pFY 的稳定高产菌株,为大批量制备临床应用级质粒奠定了基础。     

不动杆菌感染及耐药性的研究

目的 了解不动杆菌院内感染现状,研究其耐药机制,为制定预防和控制其院内感染措施提供依据。方法 对我院不动杆菌的感染进行调查,采用药敏试验、质粒抽提和限制性核酸内切酶分析法、质粒消除试验。结果 不动杆菌在我院病房检出率为０～１８．２４％,以烧伤病房检出率最高。结论 各病房有特定的流行株,不同质粒编码不同耐药性。