弹性蛋白酶和激肽释放酶的联产工艺

本文探讨了利用阴离子交换树脂直接从J_2树脂分离弹性蛋白酶后的母液中吸附胰激肽释放酶,然后经NH_4Ac洗涤和洗脱及丙酮沉淀而获得胰激肽释放酶的最佳工艺路线。每千克猪胰脏平均可得弹性蛋白酶3.09g(纯度为56u/mg),胰激肽释放酶2.72g(纯度为7.44u/mg).胰激肽释放酶回收率为56.6%。     

弹性蛋白酶肺气肿表面活性物质蛋白A，B的基因表达

目的 研究肺气肿发生,发展过程中表面活性物质蛋白A、B（SP－A、B）的基因表达变化。方法 金黄地鼠气道一次性注入弹性蛋白酶,分别于注酶后的7,14,21,30,60和90天处死。动物右肺组织福尔马林灌注固定后,石蜡包埋,切片,分别行HE和抗SP－A、B的免疫组化染色,并进行显微－微机形态定量。左肺液氮冷冻后,保存于－70度,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,甲醛变性胶电泳,转移至尼龙膜,扩增,酶切质粒,并回收,632P标记SP－A、B DNA片断。最后,行Northem Blot,放射自显影后,测定光密度。结果1,免疫组化显示：注酶7－30天SPA、B阳性细胞百分离逐步降低,其中,30天SP－A、B阳性细胞百分率与正常组有明显差异（P＜0．01）,由30－90天SPA、B阳性细胞百分率明显回升,但仍低于正常组,2．Northern Blot结果：注射30天SP－1和Bm RNA量明显低于正常组,但是,到达90天后SP－A、B,mRNA量基本与正常组无明显差异,结论 肺气肿发病过程中SP－A、B基因表达的动态变化提示,表面活性物质蛋白A、B变化可能参与肺气肿的发生和发展。     

鼠脊神经节硫胺素单磷酸酶阳性神经元的P物质免疫反应及外周投射

用酶组化、免疫组化和辣根过氧化物酶(HRP)追踪法探讨大鼠脊神经节内硫胺素单磷酸酶(TMPase)和P物质(SP)的定位关系,胃幽门部是否接受TMPase阳性神经支配.在C5～8脊神经节内,一些小型神经元有TMPase活性,SP阳性神经元主要为小型,绝大多数TMPase阳性神经元不具有SP-IR;另有一部分小型神经元既无TMPase活性,又无SP-IR。将CB-HRP注于幽门部,在双侧T_6～L_1脊神经节见少量HRP标记细胞,约4％HRP标记细胞为TMPase阳性。     

小檗碱型生物碱对弹性酶的抑制作用

试验表明小檗碱型生物碱及一些结构相近的生物碱对猪胰脏的弹性酶(PPE)和人痰的弹性酶(HSE)有抑制作用。小檗碱、黄连碱和血根碱的盐酸盐较明显地抑制这2种酶的促弹性组织离解活性,而四氢小檗碱对这种活性没有影响。看起来生物碱的四价氮在抑制促弹性组织离解活性方面起了重要的作用。然而,所试过的所有生物碱对弹性酶促酰胺基分解活性均没有影响。     

大鼠盆神经节内投射至膀胱VIP、SP及NOS阳性神经元的研究

用辣根过氧化物酶（HRP）逆行追踪法与免疫组织化学、NADPH－d酶组织化学结合法，对大鼠盆神经节中支配膀胱的神经元进行了研究。结果显示：在盆神经节中支配膀胱的神经细胞中存在HRP－VIP、HRP－SP及HRP－NOS双标细胞，提示膀胱功能的调节是多因素的，神经肽（VIP，SP）和NO在其中起重要作用。     

大孔树脂分离纯化红花黄色素的研究

目的研究D101、AB-8、SP825、HP20、D4020、SP70六种大孔树脂对红花黄色素的吸附性能。方法采用静态吸附和动态吸附对树脂的吸附性能进行比较。结果D-101树脂比上柱量为44.48 mg/g,比吸附量为25.79 mg/g,比洗脱量为23.51 mg/g。结论D-101树脂分离纯化红花黄色素效果较好。     

用亲和层析法纯化胰弹性蛋白酶

本文提供了一种纯化胰弹性蛋白酶的特异、简便方法。经 AmberliteCG-50树脂初步分离的胰弹性蛋白酶,通过弹性蛋白——纤维素亲和柱,一次精制,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳纯弹性蛋白酶。     

豚鼠耳蜗核SP阳性神经元向下丘的投射-HRP逆行追踪与免疫组化双标

目的 研究豚鼠耳蜗核P物质（SP）免疫反应阳性产物的分布特点及SP标记神经元向下丘投射方式。方法 采用辣根过氧化物酶（HRP）逆行追踪及免疫组织化学技术。结果 SP免疫反应（SP－IR）阳性的纤维和终末主要分布在耳蜗背侧核,而SP－IR阳性神经元主要分布在耳蜗腹侧核,在腹侧核尚可见SP阳性终末包绕SP阳性胸体形成环形结构,一侧下丘中央核注入HRP后,对侧耳蜗核HRP标记细胞分布于耳蜗前腹核及背侧核,耳蜗后腹核呈阴性反应。同侧耳蜗后腹核HRP标记神经元数量也较少,在对侧耳蜗前腹核,HRP－SP双标神经元约占标记细胞的44％,SP单标细胞占标记细胞的50％,HRP单标细胞占6％。耳蜗背侧核内侧也可见少量的双标细胞。结论 SP是耳蜗核上行投射神经元的递质或调质。     

淋巴细胞内β—葡萄糖醛酸酶超微结构定位研究

应用低温包埋，紫外线照射，胶体金标记免疫电镜技术，首次在透射电镜下确定Ｗｈｉｔｅ树脂包埋淋巴细胞内β－葡萄糖醛酸酶在超微结构水平的精确定位，观察到淋巴细胞的内质网，高尔基复合体，溶酶体内散在分布着标记β－葡萄糖醛酸酶的金颗粒，表明该酶主要分布于这几种细胞器内。     

不同吸附剂对血甲基对硫磷灌流清除率的实验研究

目的比较HA230树脂、包膜活性炭、三菱化学SP825树脂和AmberliteXAD16树脂做灌流吸附材料对中毒血样中甲基对硫磷的灌流清除率。方法中毒血样反复流经装有吸附剂的灌流柱,灌流后血样用乙酸乙酯萃取净化,毛细管气相色谱法（火焰光度检测器）测定甲基对硫磷残留量,计算清除率。结果血液中甲基对硫磷浓度较低时,4种吸附剂均有较高的清除率;随着毒物浓度增加,清除率下降,但三菱化学SP825树脂的清除率优于其它3种吸附剂。当每毫升血甲基对硫磷加标量为30μg,吸附剂用量80mg时,三菱化学SP825树脂、HA230树脂和AmberliteXAD16树脂清除率接近,分别为98.6%、97.0%和98.2%,呈现平台趋势;而包膜活性炭120mg用量时,清除率可达96.0%,并可出现近似呈现平台现象,表明对甲基对硫磷的清除已近完全。结论 4种吸附剂中,三菱化学SP825树脂对血中甲基对硫磷清除效果最佳,HA230树脂次之,包膜活性炭和AmberliteXAD16树脂清除效果较前两种吸附剂稍差。     

肺泡表面活性物质在金黄地鼠实验性慢性阻塞性肺病中的防治作用

目的探讨肺泡表面活性物质(PS)对慢性阻塞性肺病(COPD)的防治作用.方法通过给金黄地鼠吸入烟雾或气道内注入弹性蛋白酶两种方法,经1～3个月建立COPD动物模型,并应用外源性PS进行防治.对动物肺组织行光镜、电镜观察及显微微机图像分析进行形态定量.免疫组织化学法观察肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性物质蛋白A(SP-A)的表达情况.结果吸烟3个月及气道内注入弹性蛋白酶1和3个月,动物有明显的慢性支气管炎和肺气肿的病理变化.应用PS防治1个月,肺组织病变无明显改善;防治3个月后,肺组织损伤明显减轻,肺泡Ⅱ型上皮细胞的数量明显多于模型组,SP-A的表达比模型组增加(P＜0.01).结论经3个月的外源性PS干预,可减轻吸烟及弹性蛋白酶对肺组织的损伤,保护肺泡Ⅱ型上皮细胞的结构和分泌PS的功能,从而可有效减轻COPD的肺部病变.     

以龈沟液中性粒细胞弹力酶最高活性率作为定量检测牙周状况的指标

目的:研究人类龈沟液中性粒细胞弹力酶的动态活动方式和最高活性率,从而探讨其作为一项定量检测牙周状况指标的可能性.方法:利用滤纸条法,从33例慢性牙周炎患者提取217份龈沟液样本,用中性粒细胞弹力酶的特异性底物对该酶在龈沟液中的活性进行动态定量测量,从而计算该酶最高活性率(MR-EA,单位为每个牙部位mAbs*min-1),并将结果与临床牙周状况进行综合比较分析.结果:龈沟液中性粒细胞弹力酶可分为5种不同的酶活动方式(A,B,C,D,E),其相应的MR-EA存在显著差异(P＜0.01).在临床牙周状况相同的牙部位,弹力酶活动差异有显著性,各种临床部位的弹力酶活动方式高(A%+B%)/低(D%+E%)分布情况如下:健康部位0%/92%,牙龈炎部位6%/72%和牙周炎部位21%/54%.健康部位的MR-EA值≤3.0,而病变部位的MR-EA值存在明显差异,具体分布如下:75%牙龈炎部位的MR-EA≤3.0,13%＞6.0,4%＞10.0;而60%牙周炎部位的MR-EA值≤3.0,30%＞6.0,21%＞10.0.结论:MR-EA能作为定量测定龈沟液中性粒细胞弹力酶活动的适当指标,可以用来定量检测牙周状况.     

阳离子交换树脂催化三丙酮胺的合成

以强酸性阳离子交换树脂作为三丙酮胺合成的催化剂,考察了反应温度和反应压力对三丙酮胺收率的影响。通过离子交换使树脂负载上不同的阳离子,考察了改性后的树脂对三丙酮胺合成的催化活性,并采用傅里叶变换红外光谱、紫外光谱等手段对树脂催化剂进行了分析。结果表明：载铁的树脂作为催化剂,三丙酮胺的收率高达26%;而且该催化剂经重复使用6次后,仍有较高的活性。     

替莫普利对大鼠血管平滑肌细胞弹性蛋白酶的影响

 目的研究替莫普利对大鼠球囊损伤动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的弹性蛋白酶水平、表达和活性的影响。方法建立大鼠损伤动脉再狭窄模型,实验组给予盐酸替莫普利,对照组给予药品溶剂。动脉损伤后第2、3、5 天测定两组VSMC 的弹性蛋白酶芋B阳性细胞率;采用原位杂交的方法测定两组弹性蛋白酶域mRNA阳性细胞率;测定两组弹性蛋白酶活性值。动脉损伤后第3 天对两组进行原位明胶酶谱分析。动脉损伤后第10 天测定两组内膜面积。结果替莫普利组与对照组比较,大鼠损伤动脉VSMC 的弹性蛋白酶芋B、弹性蛋白酶域mRNA阳性细胞率显著降低,弹性蛋白酶活性显著降低;同时明胶酶水平显著降低,内膜面积显著减小。结论替莫普利可能通过抑制大鼠损伤动脉VSMC 的弹性蛋白酶水平、表达和活性及抑制明胶酶水平,抑制损伤动脉内膜肥厚。     

弹性蛋白酶在球囊损伤后血管中膜平滑肌细胞迁徙中的作用

目的 探讨弹性蛋白酶在球囊损伤后动脉中的表达。方法 2F球囊导管损伤Wistar大鼠主动脉。用大鼠胰腺丝氨酸弹性蛋白酶Ⅱ的RNA探针进行原位杂交和Northem印迹杂交、抗弹性蛋白酶抗体进行免疫组化、胰腺弹性蛋白酶底物测定其活性；电镜观察迁徙细胞与其周围弹性纤维的连接处的数量。结果 球囊损伤后，迁徙细胞弹性蛋白酶mRNA、蛋白表达及其活性均有明显增加，细胞周围弹性纤维的连接处数量显著减少。结论 弹性蛋白酶是降解细胞外基质和动脉血管内弹性板、促使平滑肌细胞向内膜迁徙的重要原因。     

罗汉松叶中总黄酮的提取与纯化富集工艺研究

目的 优选提取罗汉松叶总黄酮的乙醇体积分数及D101型大孔吸附树脂分离纯化罗汉松叶总黄酮的工艺条件.方法 以酪氨酸酶抑制率为指标确定提取罗汉松叶总黄酮的乙醇体积分数;以罗汉松叶总黄酮质量分数为指标,研究D101型大孔吸附树脂分离纯化罗汉松叶总黄酮的工艺条件,包括上样流速、洗脱速率、上样浓度和乙醇洗脱体积.结果 体积分数70%乙醇的罗汉松叶提取物对酪氨酸酶抑制率最高;大孔树脂分离纯化罗汉松叶总黄酮的最佳工艺条件为:上样浓度4.00 mg/mL,上样流速2.0 mL/min,4 BV体积分数80%乙醇以2.0 mL/min速率洗脱,回收率为60.80%.结论 D101型大孔吸附树脂可富集罗汉松叶中的总黄酮,是纯化前的2.85倍,该工艺简单且成本低,可为进一步开发罗汉松叶总黄酮提供依据.     

弹性蛋白酶损伤肺致炎的地鼠血清中一氧化氮和肿瘤坏死 …

目的 观察由弹性蛋白酶损伤肺致炎的地鼠血清中一氧化氮（ＮＯ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的动态变化,并初步探讨两者在炎症中的作用。方法 建立弹性蛋白酶损伤肺致炎金黄地鼠模型,用组化和免疫组化方法检测气道上皮细胞和肺内单核巨噬细胞一氧化氮合酶活性,测定血清中ＮＯ和ＴＮＦ－α的动态变化。结果 弹性蛋白酶损伤肺致炎地鼠气道上皮细胞和肺内单核巨噬细胞ＮＯＳ活性明显加强,在炎症早期血清中ＮＯ和ＴＮＦ－α含量     

大孔吸附树脂纯化黄芪总皂苷的研究

目的研究黄芪总皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺,为黄芪总皂苷的工业化生产提供参考。方法采用AB-8大孔吸附树脂对黄芪总皂苷进行吸附纯化,以黄芪总皂苷的收率、质量分数为考察指标综合评价。结果60%乙醇提取树脂吸附后用不同体积分数乙醇洗脱,黄芪总皂苷主要集中在40%～80%乙醇部位。树脂对黄芪总皂苷的动态吸附率为10.78mg/mL树脂;不同浓度NaOH溶液对杂质的洗脱效果不同,以0.1%NaOH溶液洗脱效果较好。结论黄芪提取物上AB-8树脂柱,以水和0.1%NaOH洗脱后以80%乙醇洗脱黄芪总皂苷部位可使黄芪总皂苷的收率和质量分数达到较满意效果。     

呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿中性粒细胞活化及蛋白酶平衡的研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒毛细支气管炎(毛支)气道局部中性粒细胞活化及蛋白酶平衡状况.方法 收集符合毛支诊断标准的住院患儿30例,根据入院Lowell评分,≥10分为重度组(11例),<10分为轻度组(19例);20例治疗7～12 d后症状缓解采取标本作为恢复组,细菌性肺炎(肺炎)组24例,对照组15例.测定各组鼻咽吸出物中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、白细胞介素(IL)-8浓度、α1抗胰蛋白酶(α1AT)和蛋白酶抑制力.结果 毛支组中性粒细胞比例、NE、IL-8浓度(0.528、6.39×107kg/L、13.62×109kg/L)均明显高于对照组(0.074、2.53×107kg/L、2.64×109kg/L,均P<0.05)和恢复组(0.306、1.23×107kg/L、5.95×109kg/L,均P<0.05).恢复组中性粒细胞比例和IL-8浓度仍高于对照组(均P<0.05),重度毛支组该两项指标均高于轻度组(均P<0.05).毛支组α1AT表达高于恢复组(0.49比0.09,P<0.05),与对照组(0.26)比较差异无统计学意义.毛支组出现游离NE活性为6/30,与肺炎组7/24比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 呼吸道合胞病毒毛支气道局部存在大量中性粒细胞聚集活化和蛋白酶系统失衡,并可能在其发病中起重要作用.