保留卵丘细胞对短时受精结果的影响

目的:探讨保留卵丘细胞对短时受精结果的影响。方法:行短时受精的患者47例,获卵数均大于10个,精卵结合后4h,根据是否去除卵丘细胞将患者的卵母细胞随机分为两组:无卵丘细胞组,共389个卵母细胞;有卵丘细胞组,共402个卵母细胞。观察卵丘细胞对短时受精的正常受精、多精受精、卵裂率、优质胚胎及胚胎利用率的影响。结果:无卵丘细胞组与有卵丘细胞组,多精受精率分别为11.6%及5.5%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01),两组的正常受精率(71.9%vs76.6%)、1PN受精率(4.9%vs5.2%)、未受精率(10.5%vs12.7%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。无卵丘细胞组与有卵丘细胞组的卵裂率(98.6%vs99.4%)、优质胚胎率(67.0%vs72.9%)、胚胎利用率(86.2%vs87.3%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:短时受精时,在保证患者受精的情况下,将剩余的卵母细胞保留卵丘细胞,可以降低多精受精的发生。     

卵泡刺激素和卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的：研究卵泡刺激素和卵丘颗粒细胞对体外培养的卵母细胞核成熟的影响。方法：未成熟卵母细胞来自人绝经期促性腺激素刺激后的小鼠卵巢。所得生殖泡期卵母细胞分成裸卵组和卵丘-卵母细胞复合物组，在分别添加0．1，0．5和1u／mL卵泡刺激素的合成人输卵管液培养液和不添加卵泡刺激素的合成人输卵管液培养液（对照组）中培养36h。培养过程中在倒置显微镜下观察各组卵母细胞生殖泡破裂和第一极体出现。出现第一极体的卵母细胞判为核成熟。结果：裸卵各卵泡刺激素组与对照组的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率差别无显著性意义（P〉0．05）；卵丘-卵母细胞复合物各卵泡刺激素浓度组比对照组卵丘-卵母细胞复合物有更高的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率（P〈0．05）；但各卵泡刺激素浓度组间卵丘-卵母细胞复合物的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率差别无显著性意义（P〉0．05）。卵丘-卵母细胞复合物各组的卵母细胞生殖泡破裂发生率和第一极体排除率明显高于裸卵各组（P〈0．05）。结论：（1）卵丘细胞对卵母细胞的核成熟有重要作用。（2）卵泡刺激素对卵丘-卵母细胞复合物中卵母细胞核成熟有促进作用，其作用可能是通过颗粒细胞介导的。（3）卵泡刺激素对卵母细胞核成熟的促进作用可能主要是促进减数分裂的恢复。     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的：了解嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响，探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的机制。方法：成年动物脊髓半切损伤模型，进行嗅鞘细胞和培养液移植，在伤后1～14d，应用苏木精一伊红和TUNEL法观测神经细胞存活和细胞凋亡变化。结果：脊髓半切后，神经元数目随时间下降。伤侧和对侧分别在伤后1d和2d，出现以神经元为主的凋亡高峰。7d出现以胶质细胞为主的凋亡高峰，14d凋亡下降。嗅鞘细胞移植可明显降低脊髓损伤后神经细胞凋亡，促进神经细胞存活。     

过氧化氢对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

目的 观察过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞损伤后对线粒体膜电位的影响.方法 向培养的SH-SY5Y细胞加入H2O2 100、200、500 μmol/L作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位.结果 与空白对照组...     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的:了解嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响,探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的机制。方法:成年动物脊髓半切损伤模型,进行嗅鞘细胞和培养液移植,在伤后1～14d,应用苏木精-伊红和TUNEL法观测神经细胞存活和细胞凋亡变化。结果:脊髓半切后,神经元数目随时间下降。伤侧和对侧分别在伤后1d和2d,出现以神经元为主的凋亡高峰。7d出现以胶质细胞为主的凋亡高峰,14d凋亡下降。嗅鞘细胞移植可明显降低脊髓损伤后神经细胞凋亡,促进神经细胞存活。结论:脊髓损伤后嗅鞘细胞移植有对抗神经细胞凋亡作用。     

精索静脉曲张大鼠附睾线粒体钙线粒体与细胞质细胞色素C含量变化及细胞的凋亡

背景：精索静脉曲张可导致男性不育，探讨其机制对治疗男性不育有着重要意义。目的：分析外科所致的精索静脉曲张对大鼠附睾细胞线粒体钙、细胞色素C含量及附睾细胞凋亡和其显微、超微结构的影响。设计：随机对照实验。材料：实验于2003—06／2004—05在佳木斯大学完成。选取青春期雄性Wistar大鼠40只，体质量（220&;#177;20）g，室温下饲养1周后，随机分为假手术组、结扎组，每组20只。方法：假手术组显露左肾静脉建立假手术模型，结扎组部分结扎左肾静脉建立精索静脉曲张模型。术后10周，取双侧附睾，检测附睾头、体部细胞线粒体钙、细胞色素C含量及细胞质细胞色素C含量。以末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，常规制作附睾体部光镜、电镜标本，观察附睾组织细胞形态变化。主要观察指标：细胞线粒体钙、细胞色素C含量；细胞质细胞色素C含量；细胞凋亡；附睾组织细胞形态变化。结果：40只大鼠全部进入结果分析。①结扎组左右侧附睾细胞线粒体钙含量较假手术组显著降低[（4．72&;#177;1．45），（5．90&;#177;1．97），（10．13&;#177;2．34）mg／g，P〈0．011，②结扎组左右侧附睾细胞线粒体细胞色素C含量较假手术组线粒体组显著增高[（0.36&;#177;0．20），（0．19&;#177;0．14），（0．15&;#177;0．07）pmol／LP〈0．051。③结扎组左右侧附睾细胞胞质内细胞色素C含量较假手术组显著增高[（8．17&;#177;1．49），（7．48&;#177;1．60），（5．93&;#177;1．60）mol／L，（P〈0．05）④结扎组左右侧细胞凋亡率较假手术组显著增高[（13．3&;#177;1．9）％，（12．6&;#177;1．5）％，（6．2&;#177;0.3）％，P〈0．011。结扎组左右侧线粒体钙含量、细胞色素C、胞质细胞色素C、凋亡率差别均无显著性意义（P〉0．05）。⑤光镜下主要改变有附睾管萎缩，上皮细胞出现空泡化，上皮内晕、亮细胞数明显增多。⑥电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大，残余小体增加，内质网扩张，线粒体嵴模糊，高尔基复合体空泡化；核染色质致密，形成大小不等的团块，边集于核膜处：上皮细胞游离面微绒毛稀少，可见局灶性断裂和破坏。结论：外科所致精索静脉曲张大鼠附睾组织细胞线粒体有损伤，使线粒体丧失储钙功能，同时细胞色素C通过线粒体外膜被释放进入胞质中，导致Caspase3激活，执行凋亡，使附睾组织细胞凋亡过度，其显微及超微结构明显改变，这些变化可能是影响精索静脉曲张患者生育能力的机制之一。     

氧化低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞早期凋亡的影响

目的：观察低密度脂蛋白(ox—LDL)对培养血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响，探讨ox—LDL致VSMC调亡的相关机制。方法：体外培养Wistar大鼠VSMC并确认细胞指数生长期，用苔盼蓝拒染计数方法观察ox—LDL刺激VSMC对增殖的影响，流式细胞分析检测ox—LDL刺激VSMC凋亡以及COx—2抑制剂NS—398对凋亡的影响。结果：体外培养的VSMC正常生长后，用35mg儿和50mg／Lox—LDL可使培养VSMC的生长期提前到12—24h，表现出明显细胞增殖；NS—398干预ox—LDL组VSMC增殖受到减弱。流式细胞分析ox—LDL组VSMC早期凋亡率较对照组明显增加，而NS—398、ox—LDL刺激VSMC凋亡阳性率亦较对照组明显增加。结论：ox—LDL刺激可使培养VSMC表现明显细胞增殖，虽NS—398可减弱VSMC的增殖，但却协同ox—LDL导致凋亡作用的增强。     

肢体移植大鼠应用FK506对细胞凋亡及其预后的影响

目的：采用大鼠异体肢体移植模型观察同种异体肢体移植急性排斥反应中的细胞凋亡，并探讨FK506对移植肢体细胞凋亡及预后的影响。方法：实验于2003—11／2004—05在哈尔滨医科大学附属第一医院实验动物中心实验室完成、供体为Wistar大鼠，受体为SD大鼠，行大鼠异体肢体移植，对照组不给予任何免疫抑制剂，实验组注射FK506 1mg／(k&;#183;d)，苏木精-伊红(HE)染色进行移植组织排斥反应的病理分级，原位末端标记(TUNEL)法检测移植组织细胞的凋亡情况，计算凋亡指数。结果：对照组移植肢体术后(343&;#177;0．79)d开始出现皮下水肿、皮色变红，平均存活时间为(7．41&;#177;1.72)d．实验组未见明显排斥反应。两组间皮肤组织排斥反应病理分级术后3、5．7d对照组分别为(1．14&;#177;0．38)，(2.28&;#177;0.48)和（2.86&;#177;0.38)级、实验组为[0．42&;#177;0．53)，(0.57&;#177;0．53)和(0.86&;#177;0.38)级(P&;lt;0．01)。发生凋亡的细胞主要是皮下组织内浸润的淋巴细胞，两组间凋亡指数术后3d对照组为(8．85&;#177;2．58)个、实验组为(4．60&;#177;2．42)个(P&;lt;0．05)，术后5，7d对照组为(13．63&;#177;3.12)和(17.59&;#177;4.91)个、实验组为(5．52&;#177;2．46)和(7．35&;#177;2．38)个(P&;lt;0．01)。结论：细胞凋亡是同种异体肢体移植急性排斥反应中组织损伤的重要机制，FK506能明显减少移植肢体细胞凋亡的发生，延长移植肢体存活时间，FK506对移植肢体的保护作用可能是通过抑制移植物细胞的凋亡来实现的。     

缺血预处理对大鼠移植胰细胞凋亡的影响

目的 观察缺血预处理对大鼠移植胰细胞凋亡的影响。方法 6只正常大鼠为对照组，18只糖尿病SD大鼠随机分为缺血再灌注组（I／R组，n=6）、供胰缺血预处理组（DIPC组，n=6）和受体双后肢缺血预处理组（RIPC组，n=6），均行单纯胰腺移植（18只正常SD大鼠为供体）；检测各组大鼠再灌注前、后血糖；再灌注后2h移植胰组织中超氧化物歧化酶（SOD）和髓过氧化物酶（MPO）含量；用TUNEL法观察移植胰组织细胞凋亡情况。结果 与I／R组比较，DIPC组和RIPC组大鼠再灌注后的血糖、MPO活性和移植胰组织细胞调亡指数明显降低，移植胰组织中SOD活性明显增高（均为P〈0．01）。结论 供胰和受体大鼠双后肢缺血预处理能减轻大鼠移植胰细胞的凋亡现象。     

直结肠癌细胞线粒体超微结构与细胞凋亡的关系

目的：研究直结肠癌细胞线粒体的超微结构。方法：收集香港大学玛丽医院直结肠外科手术切除的直结肠癌大体病检标本共18例。用透射电镜观察线粒体，并取正常黏膜作对照组。结果：直结肠癌细胞线粒体肿胀，空泡化．脊稀少，排列紊乱。凋亡细胞的线粒体比非凋亡细胞的线粒体多，形态更接近正常。结论：线粒体超微结构的异常与肿瘤的代谢方式及细胞凋亡有密切关系。     

肢体移植大鼠应用FK506对细胞凋亡及其预后的影响

目的:采用大鼠异体肢体移植模型观察同种异体肢体移植急性排斥反应中的细胞凋亡,并探讨FK506对移植肢体细胞凋亡及预后的影响。方法:实验于2003-11/2004-05在哈尔滨医科大学附属第一医院实验动物中心实验室完成。供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,行大鼠异体肢体移植,对照组不给予任何免疫抑制剂,实验组注射FK5061mg/(kg·d)。苏木精-伊红(HE)染色进行移植组织排斥反应的病理分级,原位末端标记(TUNEL)法检测移植组织细胞的凋亡情况,计算凋亡指数。结果:对照组移植肢体术后(3.43±0.79)d开始出现皮下水肿、皮色变红,平均存活时间为(7.42±1.72)d,实验组未见明显排斥反应。两组间皮肤组织排斥反应病理分级术后3,5,7d对照组分别为(1.14±0.38),(2.28±0.48)和(2.86±0.38)级、实验组为(0.42±0.53),(0.57±0.53)和(0.86±0.38)级(P<0.01)。发生凋亡的细胞主要是皮下组织内浸润的淋巴细胞,两组间凋亡指数术后3d对照组为(8.85±2.58)个、实验组为(4.60±2.42)个(P<0.05),术后5,7d对照组为(13.63±3.12)和(17.59±4.91)个、实验组为(5.52±2.46)和(7.35±2.38)个(P<0.01)。结论:细胞凋亡是同种异体肢体移植急性排斥反应中组织损伤的重要机制,FK506能明显减少移植肢体细胞凋亡的发生,延长移植肢体存活时间,FK506     

菟丝子提取物含药血清对离体小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及分泌功能的影响

[目的]探讨菟丝子提取物含药血清对离体小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及分泌功能的影响.[方法]各取6只SPF级雌性SD大鼠同时间分别灌胃菟丝子提取物溶液893.77 mg/kg、4468.85 mg/kg、等量生理盐水,连续3 d给药,3 d后取腹主动脉血分别得低、高剂量含药血清及空白血清;10只3周龄SPF级SD雌性小鼠每只腹...     

罗哌卡因对人甲状腺癌细胞线粒体呼吸作用的影响

目的探讨局麻药罗哌卡因对人甲状腺癌细胞线粒体呼吸作用的影响。方法将人甲状腺癌细胞系MDA-T120以4×104个/ml的密度接种于细胞培养板,随机分为四组:对照组不进行任何处理,0. 1 m M组在细胞培养板中加入罗哌卡因0. 1 m M,0. 5 m M组在细胞培养板中加入罗哌卡因0. 5 m M,1. 0 m M组在细胞培养板中加入罗哌卡因1. 0 m M组,罗哌卡因处理24 h。24 h后检测细胞增殖和细胞凋亡情况; JC-10染色检测细胞线粒体膜电位,Clark氧电极法检测细胞的耗氧量,分析线粒体呼吸复合物活性、ATP含量及氧化应激水平。结果与对照组相比,0. 1 m M、0. 5m M和1. 0 m M罗哌卡因均可降低甲状腺癌细胞增殖活性(P 0. 05),促进癌细胞凋亡(P 0. 05),降低基线耗氧量和最大耗氧量(P 0. 05),抑制线粒体呼吸复合物I和II的活性(P 0. 05),降低线粒体ATP的水平(P 0. 05),增加超氧化物及8-OHd G水平(P 0. 05),且呈剂量依赖性。但罗哌卡因对复合物Ⅳ和V活性及线粒体膜电位无显著影响。结论罗哌卡因呈剂量依赖性抑制人甲状腺癌细胞增殖,诱导其凋亡。其机制可能与罗哌卡因抑制癌细胞线粒体的呼吸作用,诱导能量耗损、氧化应激及氧化损伤有关。     

不同频率诊断超声对小鼠早孕胚胎组织细胞凋亡影响的对比研究

目的 检测诊断超声不同频率，相同时间照射后对早孕小鼠胚胎组织细胞凋亡影响的差别。方法 应用频率3．5MHz和频率6．5MHz的探头固定持续照射孕鼠腹部，不同频率的照射组又分为0min组，5min组，15min组，30min组，24小时后取出标本，琼脂糖凝胶电泳观察不同频率照射后DNA片段情况。结果 频率为3．5MHz探头照射组，均出现凋亡梯形，且随时间的延长，梯形越明显；频率为6．5MHz照射组，15min照射组开始出现凋亡梯形，30min照射组凋亡梯形更趋明显。结论 不同频率诊断超声持续照射小鼠胚胎可引起不同程度的胚胎组织细胞凋亡，预测使用经阴道高频超声探头检查在诊断中相对更安全。     

卵母细胞分泌因子在卵巢储备功能减退患者中的表达及对胚胎发育的影响

目的 分析卵母细胞分泌因子在卵巢储备功能减退(DOR)患者卵丘颗粒细胞(CCs)中的表达情况,预测不同的促排卵方案对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响,为DOR不孕女性寻找更有效的促排卵方案。方法 收集接受卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的80例DOR患者,425份CCs为研究对象,其中微刺激方案组30例171份CCs,促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-A)方案组30例165份CCs, PPOS方案组20例89份CCs,单卵丘颗粒细胞群与卵母细胞一一对应。提取卵母细胞周围CCs的mRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组CCs中生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)和转化生长因子-β1(TGF-β1)相对表达量。结果 GnRH-A方案组中采用促性腺激素(Gn)天数及Gn剂量明显多于其余两组(P<0.05)。在3种促排卵方案中,MⅡ期GDF-9、BMP-15和TGF-β1相对表达量高于MⅠ和GV期;正常受精组的GDF-9、BMP-15和TGF-β1相对表达量高于异常受精组;优质胚胎组的GDF-9、BMP-15和TGF-β1相对表达量高于非优质胚胎...     

丁酸钠对肝卵圆细胞甲胎蛋白表达的影响

目的　探讨 0 75mM丁酸钠对肝卵圆细胞甲胎蛋白 (AFP)表达和向细胞外分泌AFP的影响。方法从喂饲含 0 1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食 4～ 6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞。噻唑蓝 (MTT)比色法做生长曲线 ,观察 0 75mM丁酸钠对肝卵圆细胞生长的影响。收集 0 75mM丁酸钠处理 4天后的肝卵圆细胞及其培养上清液。将细胞裂解后 ,用WesternBlot检测胞内AFP的表达水平。用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定培养上清液中的AFP浓度。结果　生长曲线的结果显示 0 75mM丁酸钠对肝卵圆细胞的生长有一定的抑制作用。WesternBlot的结果提示0 75mM丁酸钠能显著降低肝卵圆细胞AFP的表达水平 (P <0 0 5 ) ,但ELISA法测定的培养上清液中AFP的含量却没有显著改变。结论　 0 75mM丁酸钠对肝卵圆细胞的生长有一定的抑制作用 ,并能降低肝卵圆细胞AFP的表达水平。     

体外受精后提前去除卵丘细胞对临床结局的影响

目的观察提前去除卵丘细胞对胚胎质量的影响,进一步探讨其临床应用价值。方法将2009年79月行体外受精胚胎移植治疗的患者随机分为两组,试验组共137个周期,于授精后5h去除卵丘细胞;对照组共146个周期,于授精后16～18h去除卵丘细胞。两组均于授精后16～18h观察受精情况,72h对胚胎进行评分,选择1～3枚优质胚胎进行胚胎移植。分别比较两组的年龄、不育年限、获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率和临床妊娠率。结果两组的优质胚胎率差异有统计学意义（P〈0.01）;但年龄、不育年限、获卵数、受精率、卵裂率、胚胎种植率和临床妊娠率比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论体外受精中提前去除卵丘细胞优质胚胎增加,有助于提高临床累积妊娠率。     

精索静脉曲张大鼠附睾线粒体钙线粒体与细胞质细胞色素C含量变化及细胞的凋亡

背景:精索静脉曲张可导致男性不育,探讨其机制对治疗男性不育有着重要意义。目的:分析外科所致的精索静脉曲张对大鼠附睾细胞线粒体钙、细胞色素C含量及附睾细胞凋亡和其显微、超微结构的影响。设计:随机对照实验。材料:实验于2003-06/2004-05在佳木斯大学完成。选取青春期雄性Wistar大鼠40只,体质量(220±20)g,室温下饲养1周后,随机分为假手术组、结扎组,每组20只。方法:假手术组显露左肾静脉建立假手术模型,结扎组部分结扎左肾静脉建立精索静脉曲张模型。术后10周,取双侧附睾,检测附睾头、体部细胞线粒体钙、细胞色素C含量及细胞质细胞色素C含量。以末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,常规制作附睾体部光镜、电镜标本,观察附睾组织细胞形态变化。主要观察指标:细胞线粒体钙、细胞色素C含量;细胞质细胞色素C含量;细胞凋亡;附睾组织细胞形态变化。结果:40只大鼠全部进入结果分析。①结扎组左右侧附睾细胞线粒体钙含量较假手术组显著降低[(4.72±1.45),(5.90±1.97),(10.13±2.34)mg/g,P<0.01],②结扎组左右侧附睾细胞线粒体细胞色素C含量较假手术组线粒体组显著增高[(0.36±0.20),(0.19±0.14),(0.15±0.07)μmol/LP<0.05]。③结扎组左右侧附睾细胞胞质内细胞色素C含量较假手术组显著增高[(8.17±1.49),(7.48±1.60),(5.93±1.60)mol/L,(P<0.05)④结扎组左右侧细胞凋亡率较假手术组显著增高[(13.3±1.9)%,(12.6±1.5)%,(6.2±0.3)%,P<0.01]。结扎组左右侧线粒体钙含量、细胞色素C、胞质细胞色素C、凋亡率差别均无显著性意义(P>0.05)。⑤光镜下主要改变有附睾管萎缩,上皮细胞出现空泡化,(下转第207页)上皮内晕、亮细胞数明显增多。⑥电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大,残余小体增加,内质网扩张,线粒体嵴模糊,高尔基复合体空泡化;核染色质致密,形成大小不等的团块,边集于核膜处;上皮细胞游离面微绒毛稀少,可见局灶性断裂和破坏。结论:外科所致精索静脉曲张大鼠附睾组织细胞线粒体有损伤,使线粒体丧失储钙功能,同时细胞色素C通过线粒体外膜被释放进入胞质中,导致Caspase3激活,执行凋亡,使附睾组织细胞凋亡过度,其显微及超微结构明显改变,这些变化可能是影响精索静脉曲张患者生育能力的机制之一。     

Nur77线粒体转位对细胞凋亡影响研究进展

Nur77在调控细胞生存和凋亡中发挥重要作用,多种生理信号均可诱导Nur77激活,激活的Nur77对细胞周期、动脉粥样硬化、炎症、代谢、DNA修复及凋亡有调节作用,尤其对细胞凋亡的调控作用越来越受到关注。Nur77在多种细胞中可通过线粒体信号通路参与自噬性凋亡,在凋亡信号刺激下从细胞核易位到线粒体,导致线粒体释放细胞色素C,从而诱导凋亡。本文就Nur77线粒体转位对细胞凋亡影响的研究进展作一综述。     

胚胎干细胞源性肝样细胞移植治疗急性肝功能衰竭模型小鼠

背景:采用胚胎干细胞源性肝样细胞进行移植治疗时,诱导分化的肝样细胞致瘤性及其对肝脏生化代谢的影响有待观察.目的:评价胚胎十细胞源性肝样细胞移植对急性肝功能衰竭模型小鼠的治疗效果.设计:随机对照观察.单位:中山大学附属第一医院.材料:实验于2005-01/2006-102在中山大学附属第一医院中心实验室完成.选用转染绿色荧光蛋白基因的小鼠D3-ES细胞(129系小鼠分离建系),由中山大学眼科中心黄冰教授馈赠.选用40只清洁级6周龄D3-129系小鼠,雌雄不限,由中山大学实验动物中心提供,许可证号码为SCXK(粤)2004-0011,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为美国Gibco BRL公司产品.方法:[1]利用转化生长因子、成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子联合诱导小鼠D3-ES细胞分化为肝样细胞,将细胞悬液以2.0×10(6)只注入20只小鼠肝包膜下,其余20只小鼠作为对照组,仅给予生理盐水注射.[2]注射后24h,采用5 μL/20g四氯化碳腹腔注射,诱发两组小鼠急性肝功能衰竭,观察小鼠生存质量及平均生存时间:急性肝功能衰竭24 h,取小鼠后腔静脉血进行总胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白、血糖、凝血酶原时间等肝功能指标检测;小鼠死亡后取肝脏标本,观察有无肿瘤生成,应用苏木精-伊红染色和免疫组化观察移植细胞生长和白蛋白表达情况.主要观察指标:[1]小鼠生存质量及平均生存时间.[2]肝功能指标检测结果.[3]移植细胞体内生长及肿瘤形成情况.结果:[1]小鼠生存质量及平均生存时间:诱发急性急性肝功能衰竭后,对照组先出现共济失调等中枢神经系统症状,对照组14只及移植组8只出现腹水.对照组平均存活时间短于移植组,差异有统计学意义(23,62 h,P<0.05).[2]小鼠肝功能指标检测结果:对照组及移植组总胆红素及谷丙转氨酶较造模前升高,白蛋白及血精较造模前低,凝血酶原时间较造模前延长,差异有显著性意义(P<0.01),移植组总胆红素及谷丙转氨酶较对照组下降,血糖较对照组高,凝血酶原时间较对照组短,差异有显著性意义(P<0.05).[3]移植细胞体内生长及肿瘤形成情况:移植组小鼠死亡后取肝脏标奉做病理切片观察,发现肝脏组织结构无明显改变,无肿瘤形成,移植细胞与小鼠肝样细胞形成很好的排列连接并表达白蛋白.结论:胚胎干细胞源性肝样细胞移植能改善急性肝功能衰竭模型小鼠生活质量,延长小鼠生存时间,移植细胞对肝脏生化代谢起到了较好的支持作用.