血管内皮生长因子抗体靶向血管治疗对增生性瘢痕Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)抗体靶向血管治疗对人增生性瘢痕Ⅰ型胶原蛋白在裸鼠体内表达的影响。方法将1％TBSA深Ⅱ度创面愈合后的增生性瘢痕组织块(取自1例女性烧伤患者)植入48只BALA／C裸鼠肩胛部皮下,建立裸鼠增生性瘢痕移植模型。术后3周,将裸鼠分为大剂量组、中剂量组、小剂量组及对照组,每组12只,分别用0．01 mol／L灭菌磷酸盐缓冲液(PBS)稀释的15、10、5μg／ml VEGF单克隆抗体200μl以及等量、同浓度的PBS进行瘢痕内直接注射,每周2次,持续3周。术后45 d,测量各组裸鼠瘢痕组织的大小,计算体积;以HE染色行组织学观察;采用逆转录聚合酶链反应与蛋白质印迹法分析瘢痕组织Ⅰ型前胶原蛋白mRNA和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果大剂量组、中剂量组、小剂量组瘢痕体积分别为(55．3±4．1)、(67．9±5．7)、(78．9±5．5)mm3;与对照组(85．0±7．3)mm3比较,大剂量组、中剂量组瘢痕体积明显变小(P< 0．05)。大剂量组、中剂量组血管和成纤维细胞较少,胶原纤维减少,排列较整齐。与对照组比较,大剂量组和中剂量组Ⅰ型前胶原蛋白mRNA和Ⅰ型胶原蛋白表达明显降低;小剂量组与之接近。结论VEGF抗体靶向血管治疗可抑制增生性瘢痕血管形成、胶原表达及瘢痕生长。     

重组血管生成抑制因子-1对增生性瘢痕组织血管及其相关因子的影响

目的 研究基因转染血管生成抑制对兔耳增生性瘢痕组织血管及其相关因子表达的影响.方法 将基因重组血管抑制剂Ad-METH-1作用于兔耳增生性瘢痕,用微循环显微镜检、组织学染色、免疫组织化学染色等方法,研究Ad-METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探讨基因转染血管生成抑制对增生性瘢痕的影响.结果 Ad-METH-1注射后30 d,实验组瘢痕组织微血管计数为12.38±2.56,VEGF阳性细胞百分比为17.64%,bFGF阳性细胞为18.24%;对照组微血管计数为48.12±6.46,VEGF阳性细胞百分比为31.34%,bFGF阳性细胞为28.26%.结果 显示,实验组瘢痕组织微血管计数低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.01);实验组瘢痕组织VEGF及bFGF的阳性细胞百分比均低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Ad-METH-1对兔耳瘢痕组织增生、血管生成及VEGF、bFGF表达产生了明确的抑制作用,早期行血管抑制治疗可抑制增生性瘢痕的形成.基因转染血管抑制治疗有望成为一种有效的增生性瘢痕防治方法.     

联合转染血管内皮生长因子165和组织纤溶酶原激活物基因抑制兔血管损伤后内膜增生的研究

目的观察血管局部联合转染血管内皮生长因子165(VEGF165)和组织纤溶酶原激活物(tPA)基因对损伤动脉内膜增生的影响并探讨可能机制。方法采用显微外科手术方法建立兔动脉损伤模型;用微注射装置将基因转染液注入损伤血管壁,按实验终点(术后2d、1周、2周、4周和8周)分为5个亚组(每个亚组8只兔);术后各实验终点取损伤段血管用于病理学检测、电镜观察、RTPCR和免疫组织化学检查。结果术后各时间点基因转染组血管壁的VEGF165基因的mRNA表达量和tPA阳性细胞数明显高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,术后各时间点基因转染组血管内膜面积和狭窄率均显著减小(P<0.01),术后8周时基因转染组管腔狭窄率比对照组降低了59.0%。结论局部联合转染VEGF165和tPA基因可抑制血管新生内膜增生及血管再狭窄。     

靶向血管治疗增生性瘢痕的实验研究

目的 探讨靶向血管治疗烧伤后增生性瘢痕的可行性和方法。方法 通过建立增生性瘢痕的裸鼠移植模型，使用不同剂量血管内皮生长因子(VEGF)的单克隆抗体，进行瘢痕内注射治疗，观察瘢痕Ⅰ型、Ⅲ型胶原和血管的量以及其超微结构的变化。结果 靶向血管治疗3周后，增生性瘢痕的体积明显减小，瘢痕胶原、血管明显减少，瘢痕内大量成纤维细胞坏死、凋亡，代之成熟的纤维细胞，失去了典型增生性瘢痕的特征。结论 血管内皮生长因子可能对增生性瘢痕中的大量血管新生起支持作用，大量血管对增生性瘢痕的胶原合成可能起着促进作用，针对VEGF的靶向血管治疗可能是治疗增生性瘢痕的的一种有意义的方法。     

肝癌的血管生成与VEGF-B

肝癌是典型的多血供肿瘤,血管生成在肝癌起始到转移过程中均起中重要作用.血管内皮生长因子B(VEGF-B)是最近研究的促进肿瘤血管生成的因子之一,其在肿瘤的血管生成中具有重要意义.该文就肝癌的血管生成研究现状,VEGF-B的作用机制及与血管生成的关系,此项研究的临床意义加以综述.     

VEGF抗体靶向血管治疗增生性瘢痕的研究

目的探讨VEGF抗体靶向血管治疗对烧伤后增生性瘢痕的治疗作用。方法将人的增生性瘢痕植入裸鼠肩胛部皮下,建立裸鼠增生性瘢痕移植模型。3周后,用不同剂量血管内皮生长因子单克隆抗体进行瘢痕内注射治疗。治疗3周后解剖取材,通过测量瘢痕的大小观察瘢痕的体积变化,用Masson染色和免疫组化技术观察移植瘢痕胶原和微血管数量的变化。结果与PBS对照组相比,靶向血管治疗3周后,增生性瘢痕的体积明显减小,瘢痕胶原和微血管明显减少。结论VEGF抗体靶向血管治疗具有抑制增生性瘢痕微血管生成、胶原合成及抑制瘢痕生长的作用。     

增生性瘢痕增生过程中转化生长因子β表达的动态研究

通过对３４例不同时期增生性瘢痕组织标本进行ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ斑点杂交和原位杂交检测，结果发现：随着增生性瘢痕的发生、发展成熟，ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ的总表达量明显呈由强至弱的变化，在１至６个月瘢痕组织内表达丰富，９个月时明显减弱，１２个月以后的瘢痕组织及正常皮肤对照标本中含量很少；ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ表达的定位检测显示：除真皮层组织细胞有部分表达外，许多瘢痕表皮基底细胞内有较强表达。由此可见：①ＴＧＦβ表达与瘢痕增生发展有着密切联系；②ＴＧＦβ在瘢痕表皮组织中的表达对其自身增殖起抑制作用，导致表皮萎缩。     

成纤维细胞生长因子结合蛋白在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕中微血管形成的作用

目的探讨成纤维细胞生长因子结合蛋白（FGF—BP）mRNA在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕组织中的表达及其与微血管形成之间的关系。方法设计地高辛标记的FGF-BP寡核苷酸探针，对10例烧伤后肉芽组织，33例增生性瘢痕和9例正常皮肤进行原位杂交实验，检测各组织中FGF-BPmRNA的表达差异；采用免疫组织化学方法检测各组织中微血管数目差异。结果烧伤后肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）FGF-BPmRNA表达明显升高，FGF-BPmRNA在增生性瘢痕6个月后逐渐下降至正常水平。肉芽组织组和增生性瘢痕（〈6个月）微血管数目明显高于其他各组。FGF-BPmRNA表达与微血管数目成正相关（Spearman R=0．463，P〈0．01）。结论FGF．BP可能是影响烧伤后创面愈合和早期瘢痕增生过程中微血管形成的重要因子。     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

Glucose-regulated protein 78 silencing down-regulates vascular endothelial growth factor/vascular endothelial growth factor receptor 2 pathway to suppress human colon cancer tumor growth

Background

Up to 20% of colorectal cancer (CRC) is diagnosed with distant metastasis. The combination of chemotherapy with anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) antibody can improve patient survival. Glucose-regulated protein 78 (GRP78) has an important role in cancer progression, but little is known about its role in VEGF production in CRC. The aim of this study was to explore the mechanism of GRP78 in two human colon cancer cell lines.

Methods

We first checked the expression of GRP78 in human normal and colon cancer tissues and two colon cancer cell lines. Glucose-regulated protein 78 was knocked down using GRP78 small interfering RNA (siRNA) in HT29 and DLD-1 cells. We examined knockdown cells by the cell growth kinetics in vitro and tumor growth rate in vivo, respectively. We also investigated the effect of GRP78 siRNA on the expression of hypoxia inducible factor (HIF-1α), VEGF, and VEGF receptor 2 (VEGFR2).

Results

Compared with their adjacent normal tissue, we detected high expression levels of GRP78 of surgically removed colon cancer tissues. Using GRP78 siRNA, we reduced the expression of GRP78 in HT29 and DLD-1 cells. The GRP78 knockdown cells had a lower proliferation rate with fewer colony-forming units in vitro and produced smaller tumors in vivo. In dissecting the mechanism underlying the reduced cell growth, we found that the down-regulation of GRP78 decreased the production of HIF-1α, VEGF, and VEGFR2 and suppressed angiogenesis.

Conclusions

Silencing GRP78 not only inhibits tumor, but also decreases the expression of VEGF and VEGFR2. Collectively, therapy targeting for GRP78 may inhibit the formation of colon cancer tumors via the HIF-1α/VEGF/VEGFR2 pathway.     

Expression of vascular endothelial growth factor and its two receptors in normal human endometrium

<正> Objectives:We try to demonstrate the expression of vascular endothelial growthfactor (VEGF) and its receptors,flt-1 and KDR,in normal human emdometrium duringthe menstrual cycle.Methods:Immunohistochemical method was used to observe the expression ofVEGF and its two receptors in emdometrium throughout the normal menstrual cyclemeanwhile the isoforms of VEGF were also detected by Western blot analysis.The en-dothelial cells of micro-vessels were marked with VIII factor antibody.Results:VEGF and its receptors existed in endometrial glandular,stromal and vas-cular endothelial cells of human endometrium.Their expressions were higher in the mid-secretory phase of menstrual cycle and highest at menstruation.VEGF_(121) and VEGF_(165)were the predominant isoforms in normal human endometrium.Conclusion:The expression of VEGF and its two receptors showed cycle-dependentin human endometrium,probably involved in embryonic implantation and endometrialproliferation and differentiation.     

FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤中的表达

目的　研究FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤中表达的差异。方法　用免疫组织化学、Western -blot、流式细胞仪分析等方法检测FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤组织及相关细胞中的表达差异以及在成纤维细胞中的亚细胞分布状况。结果　FGFR1阳性细胞主要存在于角质形成细胞、汗腺、皮脂腺、血管内皮细胞及成纤维细胞等 ,细胞爬片观察到阳性颗粒主要位于细胞核 ,细胞浆中不如细胞核中明显。FGFR1在单个细胞中的表达量无明显差异。结论　FGFR1在增生性瘢痕和正常皮肤中表达无差异     

PIGF及其受体Flt-1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨眙盘生长因子（PIGF）及其受体血管内皮生长因子受体-1（Flt-1）-5胃癌血管形成和临床病理特点的关系。方法：应用免疫组织化学染色法检测84例胃癌组织及20例正常胃组织中的PIGF和Flt-1,并计算以CD34为标志的微血管密度（MVD）,分析其与胃癌临床病理因素及预后的关系。结果：PIGF和Flt-1在胃癌组织中的表达均高于正常胃组织（P〈0．05）。PIGF表达与胃癌的组织学分化程度、浸润深度、Borrmann分型、淋巴结转移有关（P〈O．05）;Flt-1表达与胃癌的浸润深度、Borrmann分型有关（P〈0．05）;MVD与肿瘤浸润深度、Borrmann分型、淋巴结转移有关（P〈0．05）。PIGF与Flt-1表达阳性患者的5年存活率分别为45．5％、40.4％。浸润深度、Flt-1阳性表达为影响胃癌患者生存的独立预后因素。结论：PIGF／Flt-1通路可能在胃肿瘤血管发生及发展过程中起重要作用,从而影响胃癌的进展及预后。