罗布麻宁减轻D-半乳糖诱导的老化大鼠听皮层线粒体氧化损伤

目的研究NADPH氧化酶抑制剂罗布麻宁(Apocynin, APO)对D-半乳糖诱导的老化大鼠听皮层线粒体氧化损伤的作用。方法 36只1月龄雄性Sprague-Dawley大鼠适应性喂养1周后随机分为3组(每组12只):①对照组:大鼠颈背部皮下注射生理盐水,每日1次,连续8周;②D-半乳糖组:大鼠颈背部皮下注射500mg/kg D-半乳糖,每日1次,连续8周;③D-半乳糖+罗布麻宁组:大鼠颈背部皮下注射500mg/kg D-半乳糖+腹膜内注射50mg/kg罗布麻宁,每日1次,连续8周。我们利用酶化学法检测H2O2、总超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase, T-SOD)活性、ATP和线粒体膜电位水平,利用免疫组织化学法检测DNA氧化损伤标记物8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-hy?droxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG),利用透射电子显微镜观察听皮层线粒体超微结构。结果和对照组相比较,D-半乳糖组大鼠听皮层H2O2和8-OHdG水平显著增加,而T-SOD活性、ATP和线粒体膜电位水平则显著降低。和D-半乳糖组相比较,D-半乳糖+罗布麻宁组大鼠听皮层H2O2和8-OHdG水平显著降低,而T-SOD活性、ATP和线粒体膜电位水平则显著增加。同时,我们也观察到罗布麻宁可有效保护D-半乳糖诱导的老化大鼠听皮层线粒体超微结构。结论罗布麻宁可有效保护中枢听觉系统老化过程中线粒体氧化损伤。     

D-半乳糖诱导的小鼠耳蜗带状突触损伤

目的研究D-半乳糖诱导的衰老小鼠耳蜗带状突触数量的变化。方法 1)D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的构建:24只5周龄雄性C57BL/6J小鼠适应性喂养1周后随机分为2组(每组12只):①对照组:小鼠颈背部皮下注射同体积的生理盐水,每日1次,连续6周;②D-半乳糖组:小鼠颈背部皮下注射1000mg/kg D-半乳糖,每日1次,连续6周;2)ABR检测听小鼠听功能;3)免疫组织化学染色检测小鼠耳蜗线粒体DNA氧化损伤产物8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG)的表达;4)免疫组织化学染色检测小鼠耳蜗带状突触突触前标记物CtBP2的数量;5)Western blot检测小鼠耳蜗CtBP2蛋白的表达。结果 1)D-半乳糖诱导的衰老小鼠听功能表现为ABR I波幅值的降低,而无阈值的改变;2)8-OHdG在D-半乳糖诱导的衰老小鼠耳蜗表达明显增加;3)D-半乳糖耳蜗带状突触数量明显减少;4)CtBP2蛋白在D-半乳糖诱导的衰老小鼠耳蜗表达明显减少。结论耳蜗带状突触是D-半乳糖诱导的衰老小鼠耳蜗早期出现的病变部位,D-半乳糖诱导的衰老小鼠可作为研究老年性聋耳蜗带状突触损伤的动物模型。     

NADPH氧化酶在D-半乳糖诱导的老化大鼠听觉系统氧化损伤过程中的作用

目的研究NADPH氧化酶（NADPH oxidase,NOX）在D-半乳糖诱导的老化大鼠外周听觉系统耳蜗和中枢听觉系统听皮层组织中的表达,探讨老年性耳聋氧化性损伤的发生机制。方法 48只1个月龄雄性Spragua-Dawley大鼠按数字随机法分成两组,每组各24只。D-半乳糖组：每日颈背部皮下注射D-半乳糖（500 mg/kg）,连续8周;对照组：每日颈背部皮下注射同体积的生理盐水,连续8周。造模完成后,取两组大鼠外周听觉系统耳蜗和中枢听觉系统听皮层组织,利用免疫组织化学法检测DNA氧化损伤生物标记物8-羟基-2-脱氧鸟苷（8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHdG）;利用实时定量PCR检测线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）普遍缺失（common deletion,CD）和NOX基因的表达;利用Western blot检测NOX蛋白表达;应用Taqman PCR检测mt DNA CD。所有实验数据采用两样本的t检验进行分析。结果 D-半乳糖组和对照组大鼠相比较,D-半乳糖诱导的老化大鼠8-OHdG的表达在耳蜗和听皮层组织中明显增多,两组比较差异具有统计学意义（t分别为6.341、10.589,P均〈0.05）;NOX3基因和蛋白的表达在耳蜗组织中明显增强,两组比较差异具有统计学意义（t分别为8.491、18.983,P均〈0.05）;NOX2基因和蛋白的表达在听皮层组织中明显增强,两组比较差异具有统计学意义（t分别为3.548、8.219,P均〈0.05）;mtDNA CD的累积在耳蜗和听皮层组织中明显增多,两组比较差异具有统计学意义（t分别为9.796、7.901,P均〈0.05）。结论在听觉系统老化过程中,NOX是活性氧的重要来源,可能是导致老年性耳聋氧化性损伤发生的重要原因。     

电针耳穴对D-半乳糖致年龄相关性听力损失豚鼠听觉中枢丙二醛表达的影响

目的探讨丙二醛在豚鼠年龄相关性听力损失发病中的作用和电针对年龄相关性听力损失的防治作用及机制。方法 4月龄豚鼠30只分为三组,每组10只,D-半乳糖模型组:豚鼠颈背部皮下注射D-半乳糖300mg.kg-1.d-1,每日1次,连续注射6周;D-半乳糖+电针组:D-半乳糖的用法用量同模型组,同时电针刺听宫、翳风两个穴位;对照组:给予等量生理盐水颈背部皮下注射,每天1次,连续6周。2年龄豚鼠10只(老年组)自然喂养。实验结束后各组行ABR检测,采用硫代巴比妥酸法(TBA)检测听皮层、下丘和耳蜗核组织中丙二醛的表达。结果①D-半乳糖模型组ABR波Ⅲ潜伏期比对照组延长(P<0.05);D-半乳糖+电针组ABR波Ⅲ潜伏期比D-半乳糖模型组缩短(P<0.05);②D-半乳糖模型组和老年组豚鼠听皮层、下丘和耳蜗核丙二醛含量明显高于对照组(P<0.05);与D-半乳糖模型组相比,D-半乳糖+电针组三个部位的丙二醛含量显著降低(P<0.05),但D-半乳糖模型组与老年组相比无明显差异(P>0.05)。结论豚鼠听觉中枢的老化可能与丙二醛含量升高所导致的脂质过氧化有关;针刺听宫和翳风两个穴位可通过降低丙二醛的表达,在一定程度上抑制D-半乳糖所致的豚鼠听觉中枢的老化过程。     

Bax在D-半乳糖诱导的老化大鼠耳蜗中的作用

目的研究Bax介导的细胞凋亡在D-半乳糖诱导的老化大鼠耳蜗中的作用,探讨老年性耳聋外周听觉系统细胞凋亡的发生机制。方法 36只1月龄雄性Spragua-Dawley大鼠随机分成2组(各18只):1 D-半乳糖组:每日颈背部皮下注射D-半乳糖(500mg/kg),连续8周;2对照组:每日颈背部皮下注射同体积的生理盐水,连续8周。造模完成后,取两组大鼠耳蜗,利用实时定量PCR检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)普遍缺失(common deletion,CD)的累积;利用western blot检测Bax蛋白的表达;利用免疫组织化学检测Cleaved caspase-3蛋白的表达;利用原位末端转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl transferase(Td T)-mediated deoxyuridine triphosphate(d UTP)nick-endlabelling,TUNEL)染色检测大鼠耳蜗细胞凋亡发生的情况。所有实验数据采用两样本的t检验进行分析。结果和对照组的大鼠相比较,D-半乳糖诱导的老化大鼠mt DNA CD的累积在耳蜗组织中明显增多,差异有统计学意义(t值为6.631,P值<0.01);Bax和Cleaved caspase-3蛋白的表达在耳蜗组织中明显增强,差异有统计学意义(t值分别为20.914、20.043,P值均<0.01)。对照组的大鼠耳蜗没有检测到凋亡细胞,而D-半乳糖诱导的老化大鼠耳蜗底回血管纹检测到少量凋亡细胞。结论 Bax介导的细胞凋亡参与了D-半乳糖诱导的耳蜗老化过程,可能是导致老年性耳聋外周听觉系统细胞凋亡发生的重要原因。     

不同给药途径对拟老化豚鼠听功能的影响

目的探讨通过耳后局部注射和腹腔注射神经生长因子（NGF）对拟老化豚鼠内耳的作用和机制。方法选择4月龄耳廓反应灵敏的纯种豚鼠30只。随机分为3组。每组10只。A组（对照组）腹腔注射5％D-半乳糖300mg／kg;B组分别腹腔注射5％D-半乳糖300mg／kg和NGF 1000U／kg;C组分别腹腔注射5％D-半乳糖300mg／kg和耳后皮下注射NGF 1000 U／kg。每组每日注射2次,连用4周。各组豚鼠实验前后行ABR测试,处死后分别做透射电镜和TUNEL检测。结果C组豚鼠较B组豚鼠ABR阈值明显降低,TUNEL阳性的毛细胞、螺旋神经节细胞明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论耳后注射较腹腔注射NGF能更有效地保护拟老化豚鼠的听功能。     

蛋白磷酸酶1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中的表达

目的 观察D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)的定位表达及作用.方法 40只昆明小鼠随机分为对照组和D-半乳糖组,每组20只.D-半乳糖组颈背部皮下注射D-半乳糖(800mg·kg-1·d-1),对照组每日皮下注射等量生理盐水,连续给药8w;停药后检测血浆总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;免疫荧光法定位PP1在耳蜗的表达,re-al-time PCR法检测耳蜗中PP1 mRNA水平,Western blot法检测小鼠蛋白磷酸酶1核目标亚基(protein phos-phates 1 nuclear targeting subunit,PNUTS)、PP1及caspase-3的表达.结果 与对照组比较,D-半乳糖组小鼠总SOD活力降低而MDA水平升高(均为P<0.01);PP1主要定位表达于小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞及血管纹细胞的胞核和胞浆中,且给予D-半乳糖后,小鼠耳蜗中PP1 mRNA及其蛋白表达水平显著升高,而PNUTS表达减少,caspase-3表达增加(均为P<0.05).结论 PP1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节及血管纹细胞中表达,且参与了其耳蜗老化过程.     

内耳拟老化大鼠模型对噪声损伤易感性研究

目的:应用本研究小组建立的内耳拟老化模型,研究其对噪声损伤的敏感性,并探讨线粒体DNA缺失(mtDNA)在大鼠对噪声损伤易感的可能作用.方法:2月龄Wistar大鼠32只随机分为4组,A组每日皮下注射D-半乳糖150 mg/kg体重,持续8周;继而暴露于声强为110 dB SPL的噪声环境中,每日连续刺激4 h,持续2 d.B组每日皮下注射0.9%生理盐水150 mg/kg体重,持续8周,然后给予噪声暴露,噪声条件同A组.C组用药方法同A组,D组用药方法同B组,C组和D组均不予噪声暴露.造模后2周测试ABR反应阈改变,并测试各组大鼠膜迷路总超氧化物歧化酶活力(T-SOD)、丙二醛(MDA)水平,同时应用巢式PCR(nest PCR)方法检测大鼠膜迷路mtDNA 4834缺失突变,并对PCR 产物进行测序.结果:A组大鼠ABR反应阈改变[(66.250±6.409)dB SPL]较B组[(35.625±4.955)dB SPL]明显提高,差异有统计学意义(P<0.01).A组T-SOD显著下降,MDA水平明显提高,与B组差异有统计学意义(P<0.01).大鼠内耳组织mtDNA4834缺失突变率分别为:A组87.5%(7/8),B组12.5%(1/8),C组75.0%(6/8),D组0(0/8).结论:内耳拟老化模型大鼠对噪声性聋易感,大鼠内耳组织mtDNA缺失突变可增加模型大鼠对噪声性听力损伤的易感性.     

神经生长因子对拟老化豚鼠听功能的保护

目的探讨神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)对拟老化豚鼠内耳的作用和机制.方法选择4月龄纯种豚鼠24只,双耳廓反应灵敏,随机分为3组,各8只.A组(对照组)给生理盐水2 ml/kg;B组给5%D-半乳糖300 mg/kg;C组分别给5%D-半乳糖300 mg/kg和NGF1000 U/kg.均腹腔注射,每日2次,连用4周.各组豚鼠实验前后行ABR测试,处死后分别做透射电镜和TUNEL检测.结果 C组豚鼠较B组豚鼠ABR阈值明显降低,TUNEL阳性的毛细胞、螺旋神经节细胞明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论NGF能够有效保护拟老化豚鼠的听功能.     

微小RNA通过SIRT1调控小鼠耳蜗老化HEI-OC1细胞凋亡的研究

目的 构建小鼠耳蜗毛细胞株HEI-OC1(house ear institute-organ of Corti 1)老化模型,探索微小RNA-96(miR-96)可否通过SIRT1调控老化HEI-OC1凋亡。方法 CCK-8筛选D-半乳糖浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测p53、p38、caspase-3蛋白表达。q RT-PCR检测miR-96、SIRT1 mRNA表达,Western blot检测SIRT1蛋白表达。miR-96模拟物转染HEI-OC1细胞,qRT-PCR检测miR-96、SIRT1 mRNA表达,Western blot检测SIRT1、caspase-3蛋白表达。结果 HEI-OC1细胞在15 mg/ml D-半乳糖条件下培养72 h后,凋亡较对照组显著增加（P<0.01）,且p53、p38(P<0.05)及caspase-3(P<0.0001)蛋白表达明显增加。老化组miR-96与SIRT1 mRNA和蛋白表达均明显减低（P<0.05）。miR-96过表达后,SIRT1 mRNA及蛋白较对照组表达升高,caspas...     

石杉碱甲对D-半乳糖诱导老年性聋大鼠听觉功能的影响评估

目的通过测试听性脑干反应和复合动作电位评估石杉碱甲对D-半乳糖致老年性聋大鼠听觉功能的改变。方法出生后3～4 W的Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,模型组用5%D-半乳糖(200 mg/kg)行颈背部皮下连续注射8 W制备大鼠老年性聋模型;干预组用5%D-半乳糖(200 mg/kg)和石杉碱甲(0.1 mg/kg)行大鼠颈背部皮下注射;空白组作为对照。用药前、后分别检测大鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)以检测听觉敏感性;复合动作电位(compound actionpotential,CAP)测试耳蜗输出幅度;以成对短声(pair clicks)为时间紧张性刺激,通过各CAP2/CAP2(20 ms)比值与短声间隔的关系函数反映耳蜗时间分辨能力。β-半乳糖苷酶染色下丘衰老细胞。结果 3组动物用药前后ABR阈值无明显改变(P>0.05);和模型组相比,干预组8kHz下80 dBSPL时ABRⅢ波潜伏期、I～V波间期缩短,提示听觉信号从外周到中枢的传入时间减少;以成对短声CAP响应所代表的耳蜗时间分辨力干预组高于模型组,但仍低于对照组;模型组下丘衰老细胞密度最高,干预组次之,对照组最少。结论石杉碱甲可以提高D-半乳糖致老年性聋大鼠与言语识别相关的听觉处理能力,为临床寻找改善老年患者听觉功能药物提供实验支持。     

大鼠内耳拟老化伴线粒体突变模型的建立

目的:探讨建立大鼠内耳拟老化伴线粒体突变模型,为进一步揭示老年性聋发病机制及其防治策略奠定基础。方法:Wistar大鼠24只,随机分为2组:A组14只,5%D-半乳糖颈部皮下注射(150mg·kg-1·d-1),共8周,继以生理盐水腹腔注射10d;B组10只,仅给予生理盐水注射。听性脑干反应(ABR)检测2组大鼠听阈,比色法检测2组大鼠膜迷路谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力。利用巢氏聚合酶链反应技术检测内耳组织线粒体DNA4834bp缺失突变的发生情况。结果:用药后A组大鼠线粒体DNA4834bp缺失突变发生率为100%(28/28),B组无线粒体DNA4834bp缺失突变检出。A组GSH-PX活力[(59.07±8.70)U]明显低于B组[(142.10±7.02)U],其差异具有统计学意义(P<0.01)。而A组ABR听阈平均提高(5.36±3.08)dBpeSPL,B组为(6.50±3.37)dBpeSPL,经t检验,A组和B组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:D-半乳糖可以诱导大鼠内耳组织拟老化,此模型大鼠内耳组织线粒体DNA4834bp缺失突变率极高,但听阈无明显提高。     

大鼠内耳拟老化模型对卡那霉素耳毒性的易感性

目的 研究大鼠内耳拟老化模型对卡那霉素的易感性.方法 Wistar大鼠50只,随机分为4组,A组(半乳糖组,14只)5%D-半乳糖颈部皮下注射(150 mg·kg-1·d-1),共8周,继以生理盐水腹腔注射10 d;B组(半乳糖加卡那霉素组,14只)皮下注射半乳糖同A组,8周后,腹腔注射硫酸卡那霉素(500 mg·kg-1·d-1)10 d;C组(卡那霉素组,12只)前8周用生理盐水代替半乳糖,后10 d注射卡那霉素同B组;D组(空白对照组,10只)仅给予生理盐水注射.听性脑干反应(auditory brainstem respones,ABR)检测各组大鼠反应阈,比色法检测各组大鼠膜迷路谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性.利用巢式聚合酶链式反应技术检测内耳组织线粒体DNA4834 bp缺失突变的发生情况.结果 用药后A组大鼠线粒体DNA 4834 bp缺失突变发生率为100%(28耳/28耳),B组为92.86%(26 耳/28耳),C组和D组均无线粒体DNA 4834 bp缺失突变检出.A组GSH-PX活性为(59.07±8.70)U(-x±s,下同),B组(63.29±12.40)U,C组(136.67±9.53)U,D组(142.10±7.02)U;A组和D组之间差异具有统计学意义(P=0.000),A组和B组、C组和D组之间差异无统计学意义(P值分别为0.307和0.151).ABR阈值(峰值等效声压级)A组平均提高(5.36±3.08)dB,B组为(61.79±11.20)dB,C组为(34.17±4.69)dB,D组为(6.50±3.37)dB;A组和D组之间差异无统计学意义(P=0.398),B组和D组、B组和C组、C组和D组之间差异具有统计学意义(P值均为0.000).结论 D-半乳糖可以诱导大鼠内耳拟老化模型,内耳组织中线粒体DNA 4834 bp缺失突变率极高,该模型对卡那霉素耳毒性的易感性增强.     

益肾活血通窍法对老化模型大鼠听皮层PEDF和氧化应激的影响

目的 观察益肾活血通窍方对老化模型大鼠听皮层PEDF、GSH、MDA、ROS表达水平的影响。方法 将45只大鼠随机分成空白组、模型组、中药组各15只。空白组腹腔注射生理盐水,模型组、中药组腹腔注射D-半乳糖。空白组、模型组灌服生理盐水,中药组灌服益肾活血通窍方,连续8周。检测各组大鼠听皮层GSH、MDA、ROS、PEDF表达水平。结果 与空白组相比,模型组听皮层MDA、ROS表达程度增高,PEDF、GSH表达程度降低。与模型组相比,中药组听皮层MDA、ROS表达程度降低,PEDF表达程度增高。结论 益肾活血通窍方通过调控PEDF及氧化应激水平起到保护老化模型大鼠听皮层的作用。     

新霉素损伤后小鼠耳蜗毛细胞的改变

目的 观察新霉素对小鼠听功能及耳蜗毛细胞形态学变化的影响.方法 选取C57BL/6小鼠16只在出生后第8天开始连续10 d皮下注射硫酸新霉素,对照组(10只)皮下注射等量生理盐水.停药后1、4、8、12w进行听性脑干反应(ABR)检测.每次ABR检测后,新霉素组随机取3只小鼠,对照组随机取2只小鼠,处死后,取耳蜗进行冰...     

听觉剥夺和耳蜗内电刺激引起幼鼠听觉通路bdnf和c-fos基因及蛋白改变

目的 观察耳聋幼鼠及耳聋后单耳植入电极电刺激后,其听皮层和下丘、耳蜗核三个部位的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, bdnf)、c-fos基因、蛋白表达水平的变化情况。方法 将66只SD幼鼠随机分为6组,每组11只,分别为注射药物后耳聋4周组(A1组)及对照组(A2组),耳聋6周组(B1组)和及对照组(B2组),注射药物后3周接受耳蜗内电刺激组(C组),5周接受耳蜗内电刺激组(刺激时间为1周,D组)。于幼鼠颈背部、两侧下腹部皮下注射庆大霉素(总量为350mg/kg),0.5h后于相同部位注射呋塞米(总量为200mg/kg)。分别于注射药物后不同时间取听皮层、下丘及耳蜗核三个部位的组织行实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法,观察bdnf及c-fos基因及蛋白表达的变化。结果 A1组在听皮层、下丘及耳蜗核部位的bdnf及c-fos基因及蛋白表达均较A2组上升,较C组下降(P＜0.05)。B1组在听皮层、下丘及耳蜗核部位bdnf及c-fos基因及蛋白表达均较B2组和D组下降(P＜0.05)。各组之间的差异均有统计学意义。结论 听觉剥夺可导致幼鼠听皮层、下丘和耳蜗核部位的bdnf及c-fos基因及蛋白早期表达增多,而晚期表达下降。耳蜗植入电极电刺激可导致幼鼠听皮层、下丘和耳蜗核部位的bdnf及c fos基因及蛋白表达增多。bdnf及c-fos基因及蛋白表达的动态变化反映三个部位的可塑性变化。     

D-半乳糖制造老年性聋模型方法的改进

目的观察D-半乳糖制造老年性聋模型改进的有效性.方法健康豚鼠40只,随机分为4组,即对照组和三个不同剂量D-半乳糖(150、200、300mg/kg)造模的老年性聋模型组.观察各组动物ABR改变,肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、耳蜗及蜗核冰冻切片螺旋神经节细胞和蜗核神经细胞改变及脂褐素沉淀情况.结果各模型组ABR和Ⅰ、Ⅲ波潜伏期显著延长,仅300mg/kg组阈值升高,肝组织SOD活性不同程度下降.模型组螺旋神经节细胞与蜗核神经细胞稀少、肿胀,尼氏小体减少,内皮细胞增生,螺旋神经节细胞核旁可见大量脂褐素颗粒.结论D-半乳糖造模改进法是制造老年性聋动物模型的有效方法.     

听觉剥夺及耳蜗内电刺激幼鼠听皮层和下丘核CREB 和 NMDAR1蛋白表达变化

目的：观察耳聋幼鼠及其耳聋后单耳植入电极电刺激后幼鼠听皮层和下丘核环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cyclic AMP response element － binding protein ,CREB）和N －甲基－D－天冬氨酸受体－1（N －methyl－D－aspartic acid receptor one ,NMDAR1）表达水平的变化。方法将66只12天龄SD幼鼠随机分为2大组,分别为耳聋造模后4周组（33只）及耳聋造模后6周组（33只）。将耳聋造模后4周组再分为对照1组、耳聋造模后4周组（4周组）及耳聋造模后3周耳蜗内电刺激组1（刺激时间为1周,简称“电刺激1组”）,每组11只大鼠;将耳聋造模后6周组再分为对照2组、耳聋造模后6周组（6周组）及耳聋造模后5周耳蜗内电刺激组2（刺激时间为1周,简称“电刺激2组”）,每组11只大鼠;对照1、2组均正常饲养。除对照1、2组外,在其余4组幼鼠颈背部、两侧下腹部皮下注射庆大霉素（总量为350 mg／kg ）,半小时后于相同部位注射呋塞米（总量为200 mg／kg ）,两周后行ABR检测,于耳聋造模成功后第3、5周分别对电刺激1、2组的幼鼠植入电极,在耳蜗内进行电刺激,每天3小时,持续7天。于耳聋造模后4、6周分别处死4、6周组大鼠取听皮层和下丘组织,通过免疫组织化学方法,观察CREB和NMDAR1表达水平的变化。结果耳聋造模成功后幼鼠ABR阈值均大于93 dB SPL ,4周组听皮层、下丘CREB和NMDAR1的表达较对照1组增加,电刺激1组CREB和NMDAR1的表达较4周组增加。6周组听皮层和下丘CREB和NMDAR1的表达较对照2组下降,电刺激2组CREB和NMDAR1的表达较6周组增加。结论听觉剥夺可导致幼鼠听皮层和下丘CREB和NMDAR1早期表达增加而晚期表达下降。耳蜗植入电极电刺激可导致幼鼠听皮层和下丘CREB和NMDAR1的表达增加,反映这两个部位神经元的可塑性变化。     

水杨酸钠抗庆大霉素耳毒性作用机理研究

观察水杨酸钠预防庆大霉素(ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ ,ＧＭ)耳毒性作用。一、材料及方法1 实验动物 :耳廓反射正常的杂色豚鼠 36只 ,体重 2 5 0～ 35 0ｇ,分为 4组 ,每组 9只。ＧＭ组 :硫酸庆大霉素 1 2 0ｍｇ/ｋｇ体重皮下注射 ,每日 1次 ;水杨酸组 :水杨酸钠 1 1 6ｍｇ/ｋｇ体重皮下注射 ,每日 2次 ;ＧＭ 水杨酸组 :ＧＭ和第一次水杨酸钠同时注射 ,剂量同上。对照组 :生理盐水等量皮下注射 ,每日 1次。 4组均连续注射 1 9ｄ。2 实验程序 :用药前及用药后 9、1 9、2 8和 42ｄ检测ＡＢＲ。1 9ｄ检测听性脑干反应 (ａｕｄｉｔｏｒｙｂｒａｉ…     

封闭环境对C57BL/6J小鼠听功能及听皮层GABA能神经元凋亡的影响

目的探讨封闭环境对老年性聋动物模型C57BL/6J小鼠听皮层GABA能神经元凋亡的影响。方法构建封闭环境,将2、10月龄C57BL/6J小鼠(实验组,各20只)放入其中,并将另2、10月龄C57BL/6J小鼠各20只设立为开放环境对照组,饲养2月后比较不同环境各组动物ABR反应阈变化,免疫荧光法及tunel法检测听皮层GABA能神经元凋亡水平。结果实验组各频率ABR阈值明显高于对照组,尤其以高频明显(P<0.05);tunel检测证实实验组动物听皮层GABA能神经元凋亡显著增多。结论封闭环境能促进老年性聋动物模型C57BL/6J小鼠听皮层GABA能神经元的凋亡,可能是老年性聋的重要环境因素。