O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶与肿瘤预见性化疗新策略

克服肿瘤细胞的耐药性是化疗需要解决的重大课题。本项目通过分析20株中国人肿瘤细胞中 O~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(简写 MGMT)的活性与对烷化剂亚硝脲耐药性的关系的实验;通过使用亚硝脲药物治疗移植高和低MGMT 肿瘤细胞的荷瘤裸鼠实验;通过向对烷化剂亚硝脲敏感、耐药的细胞分别转导 MGMT cDNA 以及 MGMT 反义 RNA的实验;证明肿瘤细胞中的 MGMT 水平决定了细胞对烷化     

O6-甲基鸟嘌呤DNA转移酶在神经胶质瘤中的表达及其与亚硝脲耐药的关系

目的 :探讨O6 甲基鸟嘌呤DNA转移酶 (MGMT)在人脑神经胶质瘤中的表达情况及其与亚硝脲耐药之间的关系。方法 :采用免疫组化法对人脑神经胶质瘤石蜡标本中MGMT进行了检测 ,并与临床应用亚硝脲的疗效评价结果进行了比较。结果 :116例神经胶质瘤中MGMT阳性表达率为 6 7.2 %。MGMT阳性表达率最高者为髓母细胞瘤 (10 0 % ) ,表达率最低者为少枝胶质细胞瘤 (35 .7% )。在使用亚硝脲治疗的患者中 ,MGMT阳性表达与亚硝脲化疗效果呈显著负相关 (P <0 .0 5 )。肿瘤细胞的耐药程度与MGMT表达强度无关 ,只与其是否阳性有关。结论 :不同病理类型的神经胶质瘤对亚硝脲的耐药和敏感性明显不同。化疗前检测神经胶质瘤MGMT的表达情况 ,对预测化疗敏感性、指导临床使用亚硝脲化疗具有重要意义。     

DNA修复酶MGMT的研究进展

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）是一种高效的DNA直接修复酶,能修复烷化剂所致的DNA损伤。该酶的结构、功能的异常与肿瘤的发生及特征都有密切关系。本文就近几年对DNA修复酶MGMT的研究和它在肿瘤诊断与治疗中的应用作一综述。     

扶正增效方放射增敏与肿瘤细胞内O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶的关系

目的 探讨扶正增效方放射增敏与肿瘤细胞内O^6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O^6-MT)关系。方法建立裸鼠人肺腺癌PAa模型，分为6组，从接种日始，Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ组裸鼠每天灌服0．6g扶正增效方水煎剂，Ⅰ、Ⅲ组灌服等量无菌生理盐水，35天Ⅴ、Ⅵ组腹腔注射2mg STZ，36天予Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤体：10Gyx线照射，测瘤体直径、O^6-MT含量、MGMT染色及细胞病理学镜检。结果6组中O^6-MT含量Ⅰ组最高，Ⅵ组最少，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组与Ⅰ组相比差异显著，Ⅳ、Ⅵ组相比差异也显著；MGMT染色强度变化与O^6-MT含量一致。瘤体生长Ⅰ、Ⅱ组瘤体放疗第4天起明显增大，Ⅲ组第6天明显增大，与Ⅰ、Ⅱ组相比增长减慢；Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤体在第4天明显减少，以第Ⅵ组最明显；病理学镜检Ⅲ组见小的散在坏死灶，Ⅳ、Ⅴ组坏死区域较Ⅲ组增加，Ⅳ组与Ⅴ组相似；Ⅵ组坏死区域明显增多增大。通过对O^6-MT活性、MGMT染色强度与病理学镜检、瘤体大小对比，细胞内O^6-MT含量与放射敏感性密切相关，O^6-MT含量低组别放疗效果好。结论O^6-MT含量决定其放射敏感性，据O^6-MT活性高低预测其放射敏感性；扶正增效方放射增敏一个重要途径是抑制DNA甲基转移酶活性而实现的。     

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达与脑胶质瘤化疗的关系

胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤之一，目前临床多采取以手术治疗为主并辅以化学治疗和放射治疗。氯乙基亚硝脲类烷化剂（CNUs），以其高脂溶性，易于透过血脑屏障的特性，长期以来被视为治疗脑胶质瘤有效的化疗药物。但耐药性的产生使其临床有效率不足30％，而成为脑胶质瘤化疗失败的主要原因。     

MGMT 基因与头颈肿瘤的相关研究

O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（ O6-methylguanine-DNA methyltransfe-rase, MGMT）是DNA烷化剂损伤的主要修复酶,可保护基因烷化剂损伤导致的致突变、致癌作用。 MGMT的表观遗传调控是影响其表达的主要机制。表达减少与肿瘤的发生发展的密切关系与其高表达增加肿瘤烷化剂化疗的耐药性成为一个互相矛盾的问题,此基因序列的单个核苷酸位点变异亦有可能与肿瘤发病风险相关。就MGMT基因在头颈肿瘤方面的研究做了综述。     

脑胶质瘤MGMT启动区甲基化的研究进展

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT）在脑胶质瘤对烷化剂的耐药中起着重要的作用,在肿瘤组织中的表达与肿瘤耐药密切相关。     

MGMT在肺癌中的研究进展

肺癌是全球最常见的一种恶性肿瘤,其发生与DNA修复机制异常有关。O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是一种DNA修复酶,其能将DNA分子上的甲基转移到自身氨基酸残基上,从而修复烷化剂造成的DNA损伤。MGMT蛋白的表达的缺失及其基因多态性与肺癌的发生密切相关,而MGMT基因的甲基化影响着肺癌细胞对化疗药物的敏感性。对MGMT与肺癌的发生、发展进行研究,有望为肺癌的检测、预防以及治疗提供新的途径。     

MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系的建立

目的：建立由O^6-甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）介导的人脑胶质瘤耐药细胞株U251／BCNU。方法：模拟卡氮芥（BCNU）的临床用药程序,采取恒定药物浓度、周期性使用的方式诱导U251的抗药性。检测U251／BCNU的耐药指数及MGMT mRNA的表达;比较U251及U251／BCNU细胞的体外增殖变化。结果：经过反复总共5次的用药过程,历时4个月,成功地建立了对BCNU具有稳定抗药性的U251／BCNU,其对BCNU的耐受程度约为U251的17倍。RT－PCR显示,U251／BCNU细胞有MGMTmRNA的表达。U251及U251／BCNU细胞的体外群体倍增时间差异无显著性。结论：在体外成功地建立了一株由MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系,为进一步探讨胶质瘤的耐药机制及逆转方式奠定了基础。     

O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因表达与胃癌发生的关系

目的 研究人胃癌组织O^6-甲鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）基因的表达特点及其与胃癌发生的关系。方法 应用加强型原位杂交方法及寡核苷酸探针高效标记技术对76例胃癌组织，73例癌旁组织20例正常胃组织进行MGMT基因标记检测，同时应用自动图像分析系统进行定量分析。结果 胃癌组织MGMT基因阳性表达率为40.8%（37/76），低于正常胃组织的60.0%（12/20）MGMT表达强阻性率为32.3%（10/31），也明显低于正常组织的83.3%（10/12），差异均有显著性意义（P＜0.01或P＜0.05）； 癌旁组织MGMT基因阳性表达率为46.6%（31/73）。MGMT表达强阳性率为41.1%（14/34），与胃癌组织差异无显著性意义。定量分析示，胃癌组织MGMT阳性表达的积分吸光度，阳性单位值明显低于正常组织（P＜0.05）。胃癌组织与癌旁组织，早期胃癌与进展期胃癌组织，癌旁不同程度不典型增生之间MGMT表达无明显差异。结论 人体胃组织存在高度表达的MGMT基因，胃癌发生与MGMT基因表达水平降低有关，MGMT基因异常表达是胃癌形态学改变出现之前的早期行为。     

联合顺铂提高对替莫唑胺耐药的多形性胶质母细胞瘤细胞药物敏感性的研究

目的 探讨多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)细胞中O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6 methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)的甲基化状态在替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药机制中的作用,并检测TMZ与周期非特异性化疗药顺铂(cisplatin,CDDP)联合应用对GBM细胞的增殖抑制效应.方法 将胶质瘤细胞系接种于DMEM培养基(含10％胎牛血清),MTT检测细胞增殖,甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测MGMT甲基化状态,Hoechst33342/PI检测凋亡,Chou-Talalay软件分析联合用药的机制.结果 U87MG细胞不具有MG-MT活性,无MGMT蛋白表达;T98G细胞具有MGMT活性,有MGMT蛋白表达;有MGMT活性的T98G细胞抵抗TMZ诱导的凋亡;MGMT抑制剂O6-BG提高了T98G细胞对TMZ敏感性;TMZ与CDDP联合用药效果在T98G细胞中更明显.结论 无MGMT活性的U87MG细胞对TMZ更敏感;有MGMT活性的T98G细胞对TMZ和CDDP的联合化疗更敏感.     

宫颈癌及宫颈上皮内瘤变MGMT基因甲基化及其相关性研究

目的：探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）患者宫颈脱落细胞中O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态在宫颈癌临床早期诊断和筛查中的作用。方法选取对照组20例,CINI、CINII、CINIII期患者各50例和宫颈癌患者50例,采用甲基化特异性PCR检测宫颈脱落细胞中MGMT基因启动子区甲基化状态并进行比较。结果宫颈癌和CINI、II、III期患者MGMT基因启动子区甲基化阳性率分别为82.0%（41/50）、24.0%（12/50）、50.0%（25/50）和80.0%（40/50）,而对照组未检测到MGMT基因启动子区甲基化。与对照组比,宫颈癌组和CINI、II、III期组MGMT基因启动子区甲基化阳性率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。宫颈癌组中MGMT基因启动子甲基化与其临床分期及组织分化程度有显著相关性（均P＜0.05）。结论 MGMT基因启动子区甲基化可能参与宫颈癌的发生、发展,有助于宫颈癌的早期辅助诊断和筛查。     

MGMT与肿瘤的治疗

O^6甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT）基因定位于10q26,整个基因长度为170kb,其cDNA中的第4外显子中的半胱氨酸残基为烷基受体,是蛋白酶的活性部位。     

O^6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶基因多态性与肿瘤易感性的关系

【目的】通过比较表达在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中野生型和突变型O^6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(AGT)对二氯乙基亚硝脲(BCNU)细胞毒性作用的反应差异，探测AGT错译突变体的功能意义。【方法】将野生型及不同突变型AGT cDNA分别转染CHO细胞，选择稳定表达AGT的细胞株，用BCNU作用细胞，以存活细胞簇的数量作为判断细胞毒性标准。【结果】表达AGT Leu84Phe和ku84Phe／Ilel43Val／Lys178Arg突变体的细胞对BCNU的毒性作用抵抗力显著减弱，与此不同的是，其余突变体Ile143Val、Lys178Arg、Ser184Asn以及Ile143Val／Lys178Arg对BCNU毒性作用的抵抗性较野生型AGT无明显差异。【结论】AGT Leu84Phe突变体在修复BCNU造成的DNA损伤过程中酶活性降低。提示AGT基因多态性可能与肿瘤易感性有关。     

O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在顺铂激活的胃癌细胞自噬中的作用

目的 探讨DNA修复酶O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O-6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)在顺铂(cisplatin)激活的胃癌SGC-7901细胞自噬中的作用.方法 Western blot法检测自噬底物蛋白p62水平、自噬标志分子Ⅱ型和Ⅰ型微管相关蛋白轻链3(mircotuble-associated protein light chain 3,LC3)的比值变化、MGMT蛋白水平;GFP-LC3表达质粒转染胃癌SGC-7901细胞后用激光共聚焦显微镜观察顺铂对细胞自噬小体形成的影响.qRT-PCR法检测MGMT基因mRNA表达水平.结果 顺铂剂量依赖性激活胃癌SGC-7901细胞自噬水平,显著增加SGC-7901细胞中自噬小体数量;MGMT mRNA及蛋白水平随顺铂浓度的增加而降低(P＜0.05);过表达MGMT抑制胃癌SGC-7901细胞的基础自噬水平;过表达MGMT抑制顺铂激活的胃癌SGC-7901细胞自噬.结论 DNA修复酶O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶抑制顺铂激活的胃癌SGC-7901细胞自噬.     

六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因导入增强外周血单个核细胞抗药性

目的研究六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因导人后人外周血单个核细胞（PBMC）对烷化剂抗药性的改变。方法利用脂质体法将含人MGMT基因的真核表达载体导人体外培养的外周血单个核细胞,实时PCR及Western blot检测目的基因mRNA及蛋白水平的表达。四氮唑蓝法（MTT）检测细胞对硝卡芥抗药性的改变。结果转染目的基因组在mRNA及蛋白水平与转空载体及对照相比均为高表达。MTT法结果显示转目的基因组对硝卡芥的IC50是转空载体组及对照组的两倍。结论MGMT基因导人能够增强外周血单个核细胞对烷化剂的抗性从而起到保护作用。     

扶正增效方放射增敏与肿瘤细胞内O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶的关系

目的探讨扶正增效方放射增敏与肿瘤细胞内 O~6-甲基鸟嘌呤 DNA 甲基转移酶(O~6-MT)关系。方法建立裸鼠人肺腺癌 PAa 模型,分为6组,从接种日始,Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ组裸鼠每天灌服0.6g 扶正增效方水煎剂,Ⅰ、Ⅲ组灌服等量无菌生理盐水,35天Ⅴ、Ⅵ组腹腔注射2mg STZ,36天予Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤体10Gy X 线照射,测瘤体直径、O~6-MT 含量、MGMT 染色及细胞病理学镜检。结果 6组中O~6-MT 含量工组最高,Ⅵ组最少,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组与Ⅰ组相比差异显著,Ⅳ、Ⅵ组相比差异也显著;MGMT 染色强度变化与 O~6-MT 含量一致。瘤体生长Ⅰ、Ⅱ组瘤体放疗第4天起明显增大,Ⅲ组第6天明显增大,与Ⅰ、Ⅱ组相比增长减慢;Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组瘤体在第4天明显减少,以第Ⅵ组最明显;病理学镜检Ⅲ组见小的散在坏死灶,Ⅳ、Ⅴ组坏死区域较Ⅲ组增加,Ⅳ组与Ⅴ组相似;Ⅵ组坏死区域明显增多增大。通过对 O~6-MT 活性、MGMT 染色强度与病理学镜检、瘤体大小对比,细胞内 O~6-MT 含量与放射敏感性密切相关,O~6-MT 含量低组别放疗效果好。结论 O~6-MT含量决定其放射敏感性,据 O~6-MT 活性高低预测其放射敏感性;扶正增效方放射增敏一个重要途径是抑制 DNA 甲基转移酶活性而实现的。     

MGMT反义RNA对人脑胶质瘤耐药性逆转的体外研究

亚硝基脲类药物是治疗脑胶质瘤的标准化疗药物，它主要是通过在DNA分子中形成O６-烷基鸟嘌呤，损伤DNA分子的结构而发挥抗肿瘤作用的。DNA修复蛋白O６-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O６-methylguanine-DNA-methytransferase，MGMT）能够有效地修复亚硝基脲类药物所造成的DNA损伤，是肿瘤细胞对亚硝基脲类药物耐药的主要分子机制。本实验利用MGMT反义RNA的表达载体转染人脑胶质瘤耐药细胞U２５１/BCNU，观察反义RNA对细胞中MGMT表达的调节作用，为提高亚硝基脲类药物对胶质瘤的化疗效果提供一种新的途径。pLaMT５SN和pLaM…     

RNA干扰抑制MGMT表达对人脑胶质瘤化疗的影响

目的应用小干扰RNA（siRNA）质粒载体抑制人脑胶质瘤T98细胞系中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基本的表达,了解其对胶质瘤细胞化疗敏感性的影响。方法通过LipofectimineTM2000将针对MG-MT的siRNA质粒载体转入T98细胞中。采用实时定量PCR法测定MGMT mRNA的表达,Western blot测定MGMT蛋白的表达。MTT法测定转染前后T98细胞系对卡氮芥（BCNU）的敏感性变化。结果成功构建针对MGMT基因的siRNA质粒载体;质粒载体转染T98细胞后,对其MGMT mRNA的抑制率达87%,MGMT蛋白表达量明显减少,转染后的T98细胞对BCNU的敏感性增加,提高了约6倍。结论针对MGMT基因的siRNA质粒载体可以靶向抑制MGMT基因在T98细胞系中的表达,增加T98细胞对BCNU的敏感性。     

基于MRI的神经网络模型预测胶质母细胞瘤O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶启动子状态

目的 基于神经网络模型使用术前常规模态磁共振图像预测胶质母细胞瘤O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态。方法 回顾性分析兰州大学第二医院经手术病理证实的129例胶质母细胞瘤患者的T2WI序列和T1WI对比增强序列的磁共振图像，其中MGMT甲基化患者66例，MGMT非甲基化患者63例。基于EfficientNet卷积神经网络分别构建T2-net、T1C-net及两种序列联合的TS-net，通过受试者工作特征(ROC)曲线、曲线下面积(AUC)敏感度、准确度及特异度评价模型预测效能。结果 TS-net在训练和验证数据集的AUC分别为0.944和0.838,T1C-net模型的AUC分别为0.951和0.830,T2-net的AUC分别为0.929和0.781。结论 基于磁共振常规序列图像训练深度学习模型可有效预测胶质母细胞瘤患者的MGMT甲基化状态，帮助制定进一步治疗计划。