抗人骨桥蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗人骨桥蛋白(hOPN)的单克隆抗体(mAb),用于其功能研究.方法:构建OPN的原核表达载体pTriEx-1-hONP载体,转化Tuner(DE3)placI感受态大肠杆菌,用IPTG进行诱导表达.利用镍柱亲和层析纯化OPN蛋白,纯化蛋白经超滤浓缩洗涤后即为免疫原.以重组纯化的OPN蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/O进行常规融合,通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得分泌鼠抗人OPN蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法检测其特异性,并用免疫组化方法检测了正常月经周期子宫内膜OPN的表达.结果:pTriEx-1-hONP表达的OPN蛋白主要为可溶性形式,经镍柱纯化后,蛋白纯度可达85%以上.纯化的OPN重组蛋白免疫小鼠后经融合筛选,得到2株稳定分泌抗人OPN的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为1E7和587,两株mAb的免疫球蛋白亚类分别IgG1和IgG2a.通过ELISA和Western blot等方法鉴定,抗OPN的mAb能与OPN蛋白特异性结合.通过免疫组织化学方法对不同时期的正常子宫内膜的OPN的检测表明,子宫内膜腺上皮在增生期、分泌早期,OPN呈弱阳性表达;分泌中、晚期OPN呈强阳性表达.结论:以纯化的重组hOPN为免疫原成功制备了鼠抗hOPN的mAb,并初步进行了应用,为研究hOPN的功能打下了良好基础.     

抗人脑神经元特异性烯醇化酶单克隆抗体的制备和鉴定

本文采用离子交换和凝胶过滤层析技术，分离纯化了人脑神经元特异性烯醇化酶，并以此为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过杂交瘤技术，获得了两株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为５Ｂ１和３Ａ８。两株杂交瘤细胞均分泌ＩｇＧ１型类抗体。间接ＥＬＩＳＡ实验显示：５Ｂ１与ＮＳＥ有特异性反应。与ＮＳＥ的同工酶－非神经元特异性烯醇化酶不发生交叉反应；３Ａ８与ＮＳＥ和ＮＮＥ有同等强度的阳性反应。免疫印迹实验结果表明：     

两株新的抗肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及特异性鉴定

以外科手术切除的肝癌标本制备的细胞悬液和新建株的肝癌细胞为免疫原。籍多免疫除经致敢ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经２０次融合，从近１０，０００个融合孔中，筛选出两株（ＨＡＢ２５，ＨＡｂ２７）肝癌单克隆抗体，在９４例肝癌１４１例其他肝病组织，２６种正常组织，１２９例各组织系统的肝外恶性肿瘤组织上做了交叉反应，除ＨＡｂ２７与毛细胆管有弱的反应外，两株抗体与肝癌细胞结合的阳性率高（８３．１５％，８５．１１％），仅与     

抗丝氨酸磷酸化序列特异性单克隆抗体的制备

蛋白质磷酸化是最普遍最重要的一种蛋白质翻译后修饰,在哺乳细胞中大约有三分之一的蛋白质经磷酸化被修饰[1]。细胞在信号转导过程中,受体胞质区和信号分子的磷酸化和去磷酸化决定着众多生物学功能的调控作用,也是蛋白质组研究的一个重要方面。我们应用小鼠淋巴细胞杂交瘤技术,     

抗碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备及特异性分析

以纯化的重组碱性成纤维细胞生长因子为抗原，免疫小鼠取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞的融合，获得了多株稳定分泌抗碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体杂交瘤细胞株；并以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和单克隆抗体抑制碱性成纤维细胞生长因子促进ＢＡＬＢ／Ｃ ３Ｔ３细胞生长作用以及ＡＢＣ免疫组化分析了抗体的特异性。     

骨桥蛋白与肿瘤转移

骨桥蛋白是一种分泌型、黏附性的糖基化磷蛋白,与其主要受体整合素和CD44相互作用,参与多器官、多组织的生理病理过程,具有多种功能,如介导细胞移行、抑制钙化、调节免疫细胞功能、控制肿瘤细胞表型以及抑制凋亡等。近年来的研究揭示,骨桥蛋白在肿瘤细胞的黏附、移行、浸润、血管新生以及肿瘤的微环境中起关键作用。本文对骨桥蛋白在肿瘤中的信号转导、基因表达与调控以及肿瘤转移过程中的作用予以综述。     

禽流感病毒非结构蛋白1单克隆抗体的制备及其特异性分析

为研制禽流感病毒(H5N1)非结构蛋白1(NS1)的特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性,本研究在分别表达了具有良好抗原性的A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白基础上,用A/Viet-nam/1194/04(H5N1)-NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光和免疫印迹对抗体的特异性进行鉴定,通过竞争抑制实验对单抗识别的抗原位点进行分析。结果共获得19株能识别4个H5N1-NS1蛋白不同抗原位点的mAb,亚类测定显示,5株为IgG2a、1株为IgG2b,另外13株为IgG1。这些mAb均与A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白特异性结合,免疫荧光检测均与A型流感病毒(H1N1和H3N2)有交叉反应,而与B型流感病毒无交叉现象。表明成功获得特异性针对H5N1-NS1蛋白的mAb,为进一步研究禽流感病毒NS1蛋白的结构与功能奠定基础。     

抗人c-erbB2单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的:制备小鼠抗人c-erbB2mAb,并进行特异性鉴定。方法:应用计算机软件分析人源c-erbB2抗原表位,人工合成羧基端含优势表位的13肽,与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化和免疫组化染色法筛选出稳定分泌抗天然人源c-erbB2mAb的杂交瘤细胞株。用交叉反应试验和阻断试验检测mAb的特异性。结果:获得1株可稳定分泌抗天然人源c-erbB2抗体的杂交瘤细胞株。该mAb与已知的c erbB2抗原阳性的乳腺癌标本起反应;与其他不表达c-erbB2分子的细胞不起反应。用合成的13肽阻断后,失去与c-erbB2抗原的反应性。结论:用合成的13肽作为免疫原成功地制备出1株抗c-erbB2的mAb。     

抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得4株可稳定分泌抗hSLPI mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。Western blot分析表明,此株mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为12000。免疫组化染色表明,mAb与肺和结肠组织的上皮细胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,4株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞中的SLPI均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质内。结论成功地制备抗hSLPI mAb,为变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。     

抗赭曲霉毒素A单克隆杂交瘤细胞系的建立及特性

用杂交瘤技术制备了4株稳定产生抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1A9、5F2、5G5和6G11。1A9、5G5和6G11的Ig亚类为IgG1,5F2的亚类为IgG2a。抗体腹水效价为500000～1000000。6G11检测纯毒素的线性范围为2～500ng/ml,最低检出量为1ng/ml。交叉反应的结果还表明,该单抗与共试的其他结构类似物无反应,具有较高的特异性。     

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against human apolipoprotein E

Laboratory of Lipoproteins, All-Union Research Center for Preventive Medicine, Ministry of Health of the USSR. Laboratory of Molecular and Cellular Cardiology, All-Union Cardiologic Scientific Center, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR V. N. Smirnov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 112, No. 8, pp. 179–181, August, 1991.     

抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1)mAb进行比较。方法:经RT-PCR获得AR基因,将基因插入pGEX-4T-1(His)6C中,构建重组质粒pGEX-4T-1(His)6C-AR,以重组质粒转化E.coliRosetta诱导表达GST-AR蛋白。以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定。使用Clustalx和Antheprot软件,比较AR与ARL-1的同源性,表达GST-dAR[80~142氨基酸(aa)],与ARL-1差异较大;并分析AR的抗原性,表达GST-dA1(1~79aa)、GST-dA2(80~99aa)、GST-dA3(111~142aa)、GST-dA4(143~316aa)。利用AR全长及截短蛋白,采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位。结果:获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、AR7B3G4和ARF10。3株抗GST-AR的mAb均为IgG1(κ型),腹水mAb效价为1∶4×105,细胞培养上清mAb效价为1∶1×104,3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应,而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应。它们分别为抗GST-dA1、GST-dA3和GST-dA4蛋白的mAb。结论:成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的1~79、111~142、143~316位氨基酸。将它们与抗ARL-1mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能,并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具。     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗人肿瘤相关核仁抗原单克隆抗体的建立

本研究以A549细胞系和人肺腺癌组织细胞核仁为抗原,建立了7株McAbs,并用ELISA技术对其反应性进行了初步分析。结果表明:各株McAb均能与人癌细胞核仁起反应,但各自的抗原却不尽相同。MA1、MA2、MA3和MA6株的抗原可能是HMNA类物质;MA4、MAS和ML1株的抗原可能是属于核仁的正常成份,但优势表达于癌细胞中。本组抗体的建立,对于研究肿瘤细胞核仁的分子组成和生物学功能,并进而利用HMNA为临床肿瘤病理服务可能有重要意义。     

小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

[目的]制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb).[方法]以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系.并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定.[结果]共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为k型.经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应.[结论]成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础.