胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药机制的研究

目的探讨胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的可能机制。方法以体外诱导建立的人胰腺癌耐药株SW1990/Fu为模型,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学(ICC)方法测定耐药相关基因在SW1990/Fu产生获得性耐药前后的变化;罗丹明外排实验检测SW1990/Fu细胞膜上的P-gp泵功能。结果RT-PCR结果显示多药耐药基因1(MDR)和肺耐药相关蛋白基因(LRP)在SW1990/Fu中的表达率分别为0.97±0.23和0.95±0.34,而在SW1990中的表达率仅分别为0.67±0.19和0.53±0.16,两者差异有统计学意义(P<0.05);多药耐药相关基因(MRP)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)在2株细胞中的表达水平无明显变化。ICC与RT-PCR的结果一致。在罗丹明浓度为0.5mg/L时,只检测到(11.4±2.5)%的SW1990/Fu细胞内有荧光染科积蓄,在亲本细胞中罗丹明阳性细胞为(57.9±5.4)%,而在P-gp阴性的HL60细胞中,(99.5±3.3)%的细胞内存在罗丹明的积聚。当罗丹明浓度增加时,其在SW1990/Fu细胞内的积聚也明显增加。结论耐药基因MDR1和LRP表达增强可能是胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的主要机制。     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU—87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞抗株ＢＩＵ－８７主亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较产本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ），表阿霉素，长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的叉耐药性，但对顺铂，丝裂霉素无交叉耐药性，与亲本细胞相比耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＩＲ蓄积减少，     

Hedgehog信号通路相关蛋白在人胰腺癌SW1990耐药株中的表达及意义

目的:探讨Hedgehog信号通路蛋白在人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990中的表达,为克服胰腺癌获得性耐药提供实验基础。方法:采用浓度梯度递增法建立人胰腺癌SW1990耐药株,采用噻唑蓝法测定SW1990亲代与耐药细胞IC50。实时荧光定量PCR检测亲代与耐药细胞mRNA中hedgehog信号通路成员Shh、SMO、Gli-1的表达差异。Western印迹法检测亲代与耐药细胞中上述蛋白质的表达。结果:人胰腺癌耐药株SW1990的IC50从亲代的(3.1±0.2)μmol/L提高到(232.2±12.3)μmol/L。荧光定量PCR结果显示耐药株中Shh、Gli-1的表达提高了(12.07±1.71)倍和(4.15±0.42)倍。亲代SW1990中未检测到SMO表达,而耐药细胞中却可以检测到SMO的表达。Western印迹结果同样显示,人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高表达上述蛋白质。结论:人胰腺癌耐药株中高表达部分hedgehog信号通路蛋白。针对hedgehog信号通路的靶向治疗可能为克服胰腺癌耐药提供新的理论基础。     

NF-κB decoy寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM化疗敏感性的研究

目的研究NF-κB decoy寡核苷酸增强肝癌耐药细胞株HepG2／ADM对阿霉素化疗敏感性的变化。方法通过培养液中阿霉素(adriamycin，ADM)的浓度梯度增加法，长期筛选培养，建立肝癌HepG2／ADM耐药细胞株，荧光定量PCR检测MDRl的表达，转染FITC标记的NF-κB decoy寡核苷酸，通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察，凝胶迁移率实验检测转染前后NF-κB结合活性的变化，加入化疗药物阿霉素(ADM)，MTT比色法检测细胞增殖，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测观察转染NF-κB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化。结果HepG2／ADM细胞是一个明确的多药耐药细胞模型，转染荧光标记的NF-κB decoy寡核苷酸1h，倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内，凝胶阻滞分析实验(electrophoreretic mobility shift assay，EMSA)分析示NF-κB decoy寡核苷酸能够降低NF-κB核内结合，加入化疗ADM(0．1mg／L)后，MTT显示HepG2／ADM细胞的增殖明显抑制，ADM作用24h后出现细胞凋亡，流式细胞术、TUNEL法检测NF-κB decoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞诱导的凋亡，与对照组相比，凋亡指数增加。结论NF-κB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后，能够抑制NF-κB的激活，逆转耐药细胞对化疗药物的耐受，增加其对化疗药物的敏感性。     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

人肝细胞癌耐阿霉素细胞亚株SMMC-7721/ ADM的诱导及其特征研究

目的 建立人肝细胞癌多药耐药亚株并对其主要特征进行研究。方法 应用SMMC-7721细胞株，通过不断提高培养液中阿霉素(ADM)的浓度，长期筛选培养，得到了人肝细胞癌多药耐药亚株SMMC-7721／ADM后，对其特征进行研究。结果 ①SMMC-7721／ADM对ADM的抗药性提高了33．3倍，对长春新碱的抗药性提高了16．8倍，对顺铂的抗药性提高了2．8倍；②耐药细胞与亲代细胞的生长速度基本相同，倍增时间分别为32．0h和30．5h，呈现相似的生长曲线；③利用扫描和透射电镜发现，耐药细胞与亲代细胞形态上的明显差别是前者微绒毛变得粗短、稀疏、分布不均；④耐药细胞保持着肝细胞癌的特征，能在裸小鼠皮下移植再现；⑤SMMC-7721／ADM在去药培养1个月和2个月后耐药指数下降为28．0％和9．2％。而在ADM(0．04μg／ml)存在下生长2个月后，耐药倍数可保持稳定(35．4倍)。结论 SMMC-7721／ADM细胞亚株具有稳定的耐药性细胞株的基本特征。     

胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM的建立及耐药机制的初步探讨

目的 构建胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM,通过动态监测诱导耐药过程,探讨其耐药的可能机制.方法 逐步增加阿霉素浓度对BxPC-3细胞进行诱导,在不同的阿霉素诱导浓度,MTT法检测细胞对多种化疗药物的耐药指数,RT-PCR和Western印迹法检测细胞MDR1和MRP mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建多药耐药细胞株BxPC-3/ADM;在0.05 μg/ml至8 μg/ml阿霉素诱导浓度,细胞对5-Fu、MMC和Gem的耐药指数无明显增加;在16 μg/ml浓度3种化疗药物的耐药指数有较明显上升,同时伴有MDR1 mRNA表达的明显增加;至32 μg/ml 5-Fu和Gem的耐药指数未再有继续上升,而MMC的耐药指数则继续上升,同时MDR1 mRNA表达未再增加,而MRP mRNA表达则明显增加.Western印迹实验显示MDR1和MRP蛋白表达变化与mRNA表达变化趋势一致.结论 MDR1基因在诱导早期的耐药中起主导作用,在后期则和MRP基因协同发挥作用.     

人胰腺癌细胞株放射敏感性的体外研究

目的通过体外实验探讨人胰腺癌细胞株的放射敏感性。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990、Capan-1、AsPC-1、MIAPaCa-2、PANC-1、P3，应用集落形成实验测定胰腺癌细胞在6MVX线不同剂量照射后的存活分数，计算各株细胞的放射生物学参数。结果胰腺癌细胞株MIAPaCa-2对放射治疗最敏感，SF2为0．388，而Capan-1对放射治疗最不敏感，SF2为0．758，MIAPaCa-2与As-PC-1、AsPC-1与SW1990之间的放射敏感性无显著差异，其余各株胰腺癌细胞之间存在显著差异。结论不同胰腺癌细胞株的放射敏感性存在差异。     

胃肠道间质瘤Imatinib耐药细胞株的建立及其生物学特性

目的 建立胃肠道间质瘤耐药细胞模型GIST882-R.方法 采用间歇浓度梯度倍增法体外诱导胃肠道间质瘤细胞株GIST882对Imatinib靶向治疗耐药,建立耐药细胞模型GIST882-R.光学显微镜观察亲本细胞GIST882-S和耐药细胞GIST882-R的细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期的变化;噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间及细胞半数致死浓度(IC50);基因测序检测细胞耐药前后突变位点有无变化.结果 (1)耐药细胞的细胞形态呈上皮样,核浆比增加;高倍镜下可见多核细胞、胞质内颗粒样物质增多.(2)耐药前后细胞周期分别为S期20.23%比17.38%,G0/G1期68.33%比72.25%,G2/M期11.44%比10.37%,变化差异有统计学意义(P＜0.01).(3)GIST882-R的倍增时间(47.10±2.01)h,长于亲本细胞株GIST882-S(39.56±1.18)h(P＜0.01);耐药细胞GIST882-R较GIST882-S对Imatinib的IC50显著增高,分别为(1.549±0.366)μmol和(0.136±0.025)μmol,耐药指数为11.39(P＜0.01).(4)对GIST882-R和GIST882-S进行Kit基因测序,两者均存在13外显子K642E突变,但在CIST882-R中未发现新的基因突变.结论 成功获得耐药细胞GIST882-R,CIST882-R对Imatinib靶向治疗的敏感性明显降低.

Abstract：

Objective To establish the Imatinib-resistant model GIST882-R.Methods The intermittent concentration gradient doubling method was used to get Imatinib-resistant cell line GIST882-R.Changes of cell morphology were observed and compared under the optical microscopy.Changes of cell cycle were assayed and compared by using flow cytometer.The growth curvature,doubling time and IC50 were calculated by using methylthiazol tetrazolium (MTT) assay.Gene sequencing was applied to detect DNA mutation.Results (1) Significant changes occurred to the morphologic profiles,such as epithelioid shaped,the increased ratio of nucleolus to cytoplasm,emerging multinucleate cell,increase of granule substances;(2) The cell cycle of GIST882-S and GIST882-R was respectively 20.23% and 17.38% in S phase,68.33% and 72.25% in G0/G1 phase,11.44% and 10.37% in G2/M phase respectively (P＜0.01 );(3) The doubling time of GIST882-S and GIST882-R was (47.10 ±2.01 ) h and (39.56 ± 1.18)h respectively (P ＜0.01 ).IC50 for GIST882-S and GIST882-R was ( 1.549 ±0.366) μmol and (0.136 ±0.025) μmol respectively (P＜ 0.01 ).The resistance of GIST882-R to Imatinib was 11.39 fold of GIST882-S cells;(4) K642E mutation of exon 13 was found in both GIST882-S and GIST882-R.Conclusion The sensitivity of GIST882-R to Imatinib treatment is decreased significantly.     

纳米金增加阿霉素耐药肝癌细胞株敏感性的实验研究

目的：观察纳米金（GNP）人耐药肝癌细胞株耐药性的逆转作用。
　　方法：采用氯金酸柠檬酸三钠还原法制备并鉴定;分别用GNP与阿霉素（ADM）组单独或联合作用于ADM耐药的肝癌细胞株HepG2/ADM,以未处理的HepG2/ADM细胞为对照,用MTT法检、流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡情况;紫外分光光度计检测HepG2/ADM细胞经ADM单独作用以及GNP与ADM联合作用后细胞内ADM浓度。
　　结果：与对照细胞比较,ADM单独作用及GNP与ADM联合作用后,HepG2/ADM的增殖均明显抑制、凋亡率明显升高,但后者的作用明显强于前者（均P<0.05）,而GNP单独作用对细胞的增殖与凋亡无明显影响（均P>0.05）;GNP+ADM作用后,HepG2/ADM细胞内的ADM含量较ADM单独作用后的ADM含量明显增加[（2.92±0.13）μg/Lvs.（1.68±0.74）μg/L,P<0.05]。
　　结论：GNP可增加HepG2/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与其增加HepG2/ADM细胞内的ADM浓度有关。     

南瓜蛋白对人胰腺癌SW1990细胞株的诱导凋亡作用

目的 探讨南瓜蛋白体外对人胰腺癌SW1990细胞株的诱导凋亡作用.方法 MTT法检测南瓜蛋白对SW1990细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡表现,流式细胞仪检测其凋亡率,Western blot法检测caspase-3蛋白的表达.结果 不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00及80.00 μg/ml)南瓜蛋白作用不同时间(24、48及72 h)后,南瓜蛋白对胰腺癌细胞具有生长抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P<0.05).40.00 μg/ml南瓜蛋白作用72 h后,透射电镜下可见细胞出现明显的凋亡改变,并可见凋亡小体;不同浓度(0、2.50、10.00、40.00μg/ml)南瓜蛋白作用72 h后,细胞的凋亡率分别为(0.30±0.11)%、(18.93±1.06)%、(28.00±2.07)%及(49.93±3.25)%,随着药物浓度的升高,细胞的凋亡率逐渐增加,呈浓度依赖性(P<0.05);caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增强,呈浓度依赖性(P<0.05).结论 南瓜蛋白可能通过上调caspase-3蛋白的表达诱导胰腺癌细胞凋亡.     

吉西他滨与胰腺癌化疗耐药

目的探讨胰腺癌对吉西他滨化疗产生耐药性的相关机理。方法复习近年国、内外相关文献，对介导胰腺癌吉西他滨耐药性的主要基因及信号通路加以综述。结果癌基因c—Src与bcl—X1、NF-κB炎症信号通路、细胞因子IL-1β及NO等与介导胰腺癌对吉西他滨的耐药性密切相关；多药耐药基因MDR1／P-gP与胰腺癌吉西他滨耐药的相关性仍有待研究。结论癌基因c—Src与bcl—X1、NF-κB炎症信号通路等可能成为新的治疗靶点以增加胰腺癌的化疗敏感性；介导胰腺癌化疗耐药的关键基因与中心信号通路尚有待阐明。     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

目的 建立吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株SW1990/GZ,并探讨SW1990/GZ和胰腺癌肿瘤干细胞的相关性.方法 应用间歇浓度梯度倍增法建立吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株SW1990/GZ;倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法计算耐药指数(RI);荧光定量PCR检测ABCB1、ABCC1及ABCG2基因的表达水平;裸鼠皮下种植瘤试验观察SW1990和SW1990/GZ的成瘤能力;流式细胞仪通过侧群细胞(SP)法和表面特异抗原标记法(CIM4+CD24+)检测肿瘤干细胞含量.结果 在形态学上,SW1990/GZ较SW1990发生明显改变;SW1990/GZ的耐药指数是亲代SW1990的77.2倍;与亲代SW1990相比,耐药株SW1990/GZ中ABCB1、ABCC1及ABCG2的表达水平明显增高(P<0.01),裸鼠皮下成瘤能力增强(P<0.01);耐药株SW1990/GZ中SP细胞比例为(11.0±1.0)%,亲代SW1990中SP细胞比例为(4.6±0.9)%,CD44+CD24+细胞在两者中的比例分别为(8.7±0.8)%和(1.1±0.4)%(P<0.01).结论 吉西他滨耐药胰腺癌细胞株SW1990/GZ能高效富集胰腺癌肿瘤干细胞,CD44与胰腺癌获得性耐药关系密切,可能为克服胰腺癌获得性耐药提供新的治疗靶点.     

辣椒素诱导HSP27高表达结肠癌SW480细胞凋亡机制

目的:探讨辣椒素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法:不同浓度辣椒素处理SW480细胞,CCK-8细胞计数试剂盒法检测生长抑制作用,流式细胞术检测早期凋亡,RT-PCR和Western blot方法检测细胞HSP27、casepase-3、casepase-9 mRNA及蛋白水平表达。结果:辣椒素可显著抑制SW480细胞生长,作用呈时间、剂量依赖性,并可促进细胞早期凋亡,下调HSP27、上调casepase-3、casepase-9 mRNA和蛋白水平的表达。结论:辣椒素可通过下调SW480细胞HSP27表达、上调casepase-3及casepase-9表达,而起到诱导细胞凋亡、抑制细胞生长的肿瘤抑制作用。     

肺耐药蛋白在胰腺癌细胞中的表达及意义

目的探讨肺耐药蛋白(lungresistanceprotein,LRP)在胰腺癌细胞株中的表达及意义。方法采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测8株胰腺癌细胞株(SW1990、PCT-2、PCT-3、PCT-4、Aspc-1、Capan-1、Mia-PaCa-2及Panc-1)中LRP在基因水平和蛋白水平的表达。结果RT-PCR结果显示,在胰腺癌细胞株PCT-2中未检测到LRPmRNA的表达,在PCT-4、Aspc-1和Panc-1中,LRPmRNA表达条带较强;在SW1990、PCT-3、Capan-1和Mia-PaCa-2中LRPmRNA表达条带较弱;半定量平均表达水平为0.56±0.33。免疫细胞化学结果证实,在PCT-2细胞中无LRP蛋白表达,PCT-3细胞中LRP蛋白弱表达,SW1990、Aspc-1和Capan-1细胞中LRP蛋白中度表达,而在PCT-4、Mia-PaCa-2和Panc-1细胞中可见LRP蛋白的过度表达。结论在胰腺癌细胞中存在LRP的先天性表达,LRP过表达可能是介导胰腺癌细胞先天性耐药的重要机理之一。     

丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1与胰腺癌细胞获得性耐药的关系

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸酶1（MKP-1）在介导胰腺癌耐药细胞株SWl990／Fu产生获得性耐药过程中的可能机制。方法 采用Northern印迹杂交和Western蛋白免疫印迹杂交方法,检测MKP-1在体外诱导建立的人胰腺癌耐药细胞株SWl990／Fu、亲本细胞株SWl990和胰腺癌细胞株MiaPaCa-2中的表达,分析MKP-1在SW1990／Fu产生获得性耐药前后的变化。结果 Northern印迹杂交结果显示,在SWl990／Fu、SWl990和MiaPaCa~细胞株中均检测到2400bp的MKP-1mRNA,MKP-1在SWl990／Fu的表达水平明显低于SWl990和MiaPaCa-2。在蛋白水平上,Western蛋白免疫印迹杂交结果也表明,与SWl990和MiaPaCa4相比,MKP-1蛋白在SWl990／Fu细胞中的表达水平明显降低。结论 MAPK家族的关键调节酶MKP-1可能参与SWl990／Fu获得性耐药的产生,推测细胞信号转导系统的改变可能是导致胰腺癌细胞产生获得性耐药的机制之一。     

胰腺癌发生的炎症机理及治疗策略

目的 探讨胰腺癌发生与炎症之间的关系以及其相应的治疗策略。方法 对其相关文献进行综述。结果 胰腺炎症与胰腺癌有一定的相关性，胰腺癌发生的炎症机理可能涉及细胞因子、核因子-κB、环氧合酶-2、过氧化物酶体增生激活受体-γ、DNA损伤及基因改变等，针对上述靶标的药物已进行相应研发。结论 胰腺炎症反应的累积效应可引起遗传物质的改变，进而导致胰腺癌的发生，针对胰腺癌发生的炎症机理的药物治疗有助于防治肿瘤。     

转人GM—CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性

经逆转录病毒载体将人GM-CSF基因导入人膀胱癌细胞株BIU-87细胞中,建立了转基因细胞株BIU/GM。经流式细胞仪行细胞DNA周期分析表明GM-CSF基因的导人及表达对BIU-87细胞的增长无影响。免疫荧光测定发现转GM-CSF基因及表达不能促进BIU-87细胞表面HLA-ABC、DR、DQ抗原的表达。转基因瘤细胞株经6000rad X射线照射灭活后,丧失增殖能力,逐步死亡,但能维持一定水平的GM-CSF分泌活性达两周以上。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

Objectives To establish a gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/ GZ,and to explore the relationship between drug-resistant cell line SW1990/GZ and pancreatic cancer stem cell. Methods Gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/GZ was obtained by treating parental cell line SW1990 in vitro with increasing dosage of gemcitabine in culture medium intermittently for 24 weeks. Stable cultures were obtained which were 77. 2-fold increased in resistance relative to parental cells. Gene expressions of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP were determined by real-time PCR. Tumorigenic potential was performed by nude mice xenograft transplant experiments. Side population analysis and CD24CD44 positive cells explore were determined by flow cytometry to examine cancer stem cell proportion. Results Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ underwent obvious morphological and functional changes. Compared with the parental cell line,SW1990/GZ cell was small and turned into round shape. SW1990/GZ had a higher gene expression level of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP than SW1990(P <0. 01). Nude mice xenograft transplant experiments showed that only 1 x 105 SW1990/GZ cells were sufficient for tumor formation, whereas an injection of 1 x 105 SW1990 cells did not initiate tumors. Flow cytometry analysis showed that SP proportion in SW1990/GZ was (11.0±1.0)%, whereas in parental SW1990 it was ( 4. 6 ± 0. 9 ) % , CD44CD24 positive cells was (8. 73±0. 81) % in SW1990/GZ, whereas (1.1±0. 4)% in SW1990. Conclusions Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ has a higher proportion of pancreatic cancer stem cells compared to its parental cell line SW1990. CD44 is mainly responsible for acquired drug resistance,which can be a potential target to overcome acquired drug resistance in pancreatic cancer.     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

Objectives To establish a gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/ GZ,and to explore the relationship between drug-resistant cell line SW1990/GZ and pancreatic cancer stem cell. Methods Gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/GZ was obtained by treating parental cell line SW1990 in vitro with increasing dosage of gemcitabine in culture medium intermittently for 24 weeks. Stable cultures were obtained which were 77. 2-fold increased in resistance relative to parental cells. Gene expressions of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP were determined by real-time PCR. Tumorigenic potential was performed by nude mice xenograft transplant experiments. Side population analysis and CD24CD44 positive cells explore were determined by flow cytometry to examine cancer stem cell proportion. Results Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ underwent obvious morphological and functional changes. Compared with the parental cell line,SW1990/GZ cell was small and turned into round shape. SW1990/GZ had a higher gene expression level of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP than SW1990(P <0. 01). Nude mice xenograft transplant experiments showed that only 1 x 105 SW1990/GZ cells were sufficient for tumor formation, whereas an injection of 1 x 105 SW1990 cells did not initiate tumors. Flow cytometry analysis showed that SP proportion in SW1990/GZ was (11.0±1.0)%, whereas in parental SW1990 it was ( 4. 6 ± 0. 9 ) % , CD44CD24 positive cells was (8. 73±0. 81) % in SW1990/GZ, whereas (1.1±0. 4)% in SW1990. Conclusions Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ has a higher proportion of pancreatic cancer stem cells compared to its parental cell line SW1990. CD44 is mainly responsible for acquired drug resistance,which can be a potential target to overcome acquired drug resistance in pancreatic cancer.