重组鼠肝素辅因子Ⅱ在大肠杆菌的表达及纯化

重组鼠肝素辅因子Ⅱ（ｒＨＣⅡ）ｃＤＮＡ在ＰＥＴ一５ａ质粒载体被构建，克隆到大肠杆菌株ＤＨ５ａ；ｒＨＣⅡ蛋白在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）被表达为非糖基化蛋白。用肝素琼脂糖柱，ＭｏｎｏＱ和ＭｏｎｏＳ柱层析纯化ｒＨＣⅡ，获得高活性和纯度单一的ｒＨＣⅡ。ｒＨＣⅡ在免疫反应及硫酸皮肤素或肝素依赖性凝血酶抑制活性方面，与天然鼠血浆ＨＣⅡ无明显差异。     

人钙调素基因Ⅲ表达载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

目的：用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人ＣａＭ蛋白。方法：用ＰＣＲ方法获得人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ），将其插入表达载体ｐＢＶ２００，构建重组表达质粒ｈＣａＭⅢ／ｐＢＶ２００，用酶切、ＤＮＡ测序、ＰＣＲ扩增鉴定阳性克隆。用ＣａＣｌ２法转化大肠杆菌ＤＨ５α使其表达ＣａＭ蛋白。结果：阳性重组子在大肠杆菌ＤＨ５α中经温度诱导可高效表达ＣａＭ蛋白，经１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可观察到一分子量与理论值相符（约１７０００）的诱导表达条带，其表达量占菌体蛋白总量的２０％。进一步分析表达产物的性质表明，ＣａＭ主要以可溶性形式表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果证实，１７０００的表达条带可与标准鼠抗ＣａＭＭｃＡｂ起特异反应。结论：重组人ＣａＭ在大肠杆菌中的成功表达，为进一步研究ＣａＭ的生物学功能及研制抗ＣａＭ单克隆抗体奠定了基础     

谷氨酸对培养的皮质神经元Ca~(2 )/CaMPKⅡ活性的影响

目的研究谷氨酸（Ｇｌｕ）对皮质神经元的损伤及对Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性的影响。方法５００μｍｏｌ／ＬＧｌｕ作用１０ｍｉｎ，测Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性。结果Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性和正常对照相比下降４６．３％，１００μｍｏｌ／Ｌ氯胺酮几乎完全保护该酶活性；ＬＤＨ活性在１ｈ时无明显变化，２４ｈ时明显升高。结论（１）Ｇｌｕ对皮质神经元损伤致Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性下降早于ＬＤＨ变化；（２）Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性下降主要由ＮＭＤＡ受体介导，与非ＮＭＤＡ受体无关。     

钙调素拮抗剂对非酶体系中羟自由基水平影响的研究

研究了钙调素拮抗剂，与抗坏血酸体系产生的羟自由基（．ＯＨ）的相互作用。结果显示，小檗胺（Ｅ０）及其衍生物（Ｅ５、Ｅ６）、蝙蝠葛碱（Ｄ１）及氯丙嗪（ＣＰＺ）在高浓度时均有清除．ＯＨ的作用；除Ｅ０和ＣＰＺ外，其它药物在低浓度均可促进．ＯＨ的生成。研究表明，研究钙调素（ＣａＭ）与自由基的相互关系时，在合理的浓度范围内使用ＣａＭ Ａ作为研究手段是可行的。     

HCMV即刻早期基因在大肠杆菌中的表达

①目的 在大肠杆菌中表达人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株即刻早期基因ＵＬ３７×１,并检测原核表达蛋白的免疫原性。②方法 将原核表达质粒ｐＩＥ１转入大肠杆菌ＤＨ５α菌中,并通过温控的方式诱导目的基因的表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ实验分析原核表达蛋白的表达情况及其免疫原性。③结果 获得了ＨＣＭＶ即刻早期基因的原核表达产物。④结论 ＨＣＭＶ即刻早期基因ＵＬ３７×１的原核表     

人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析

目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５ａ中的表达,为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源,方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序,然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４￣５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００,薄层扫描分析表明该蛋白占菌体     

DDPH抑制HECCM促PASMC增殖时第二信使变化的研究

采用ＭＴＴ比色、荧光技术和放免技术观察了猪肺动脉低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和１－（２,６－二甲基苯氧基）－２－（３,４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对猪肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ）增殖、第二信使（〔Ｃａ＾２＋〕和ｃＡＭＰ）的影响。结果显示：①ＨＥＣＣＭ促进ＰＡＳＭＣ增殖,而ＤＤＰＨ可抑制之,抑制率为７７．４６％。②ＨＥＣＣＭ升高ＰＡＳＭＣｓ内〔Ｃａ＾２＋〕,而ＤＤＰＨ可对     

联合化疗对人食管癌裸鼠移植瘤株的治疗研究

目的：用抗癌药物平阳霉素（ＢＬＭＡ５）和顺氯氨铂（ＰＤＤ）对人食管腺（ＨＥＣ６）和人食管鳞癌鳞癌（ＨＥＣ２）两种裸鼠移植瘤株进行治疗的研究。方法：用同一种药物对两种不同瘤株进行治疗；用不同药物治疗同一种瘤株；用单药或联合用药的方法进行药物疗效的比较。结果：ＢＬＭＡ５在单药的情况下对ＨＥＣ６有一定的抑制作用，对ＨＥＣ２相对不明显。ＨＥＣ６和ＨＥＣ２对ＰＤＤ单药都不敏感，但ＢＬＭＡ５和ＰＤＤ联合用药时对ＨＥＣ６和ＨＥＣ２移植瘤都显示出极明显的抑制作用。且在显著抑制肿瘤生长的剂量下，对内脏无明显损害。结论：对人类食管腺鳞癌和鳞癌的治疗，ＢＬＭＡ５与ＰＤＤ联合用药优于单药治疗     

HCMV即刻早期基因在大肠杆菌中的表达

目的在大肠杆菌中表达人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株即刻早期基因ＵＬ３７×１,并检测原核表达蛋白的免疫原性。②方法将原核表达质粒ｐＩＥ１转入大肠杆菌ＤＨ５α菌中,并通过温控的方式诱导目的基因的表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ实验分析原核表达蛋白的表达情况及其免疫原性。③结果获得了ＨＣＭＶ即刻早期基因的原核表达产物。④结论ＨＣＭＶ即刻早期基因ＵＬ３７×１的原核表达产物具有一定的免疫原性,可与ＨＣＭＶ感染者阳性血清起反应。     

穿心莲有效成分API_0134抗血小板聚集的机理

ＡＰＩ０１３４是一种新的穿心莲有效成分，为黄酮类化合物。体外研究证实ＡＰＩ０１３４能有效地抑制ＡＤＰ诱导的人血小板聚集，其半抑制浓度（ＩＣ５０）为７０ｇ／ｍｌ；ＡＰＩ０１３４能强烈的抑制钙调蛋白（ＣａＭ）的活力，ＩＣ５０为３４ｇ／ｍｌ，但其对ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ｉ）的基础活力无影响。在浓度增高时ＡＰＩ０１３４也能抑制ＣａＭ不依赖性磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ⅱ）活力，ＩＣ５０为２４０ｇ／ｍｌ；动力学分析的结果表明，ＡＰＩ０１３４虽不能改变ＰＥＤ－Ⅱ的表观Ｋｍ值但可降低Ｖｍａｘ。这就表明ＡＰＩ０１３４对（ＰＤＥ－Ⅱ）的抑制为非竞争性。本文的结果揭示，抑制ＣａＭ和ＰＤＥ活力可能是ＡＰＩ０１３４抗血凝的作用机理之一。     

香烟烟雾提取物对气道平滑肌细胞增殖及内皮素释放的影响

探讨气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）自分泌的内皮素（ＥＴ）是否介导了吸烟对ＡＳＭＣ的作用。方法在体外培养的家兔ＡＳＭＣ上加入香烟烟雾提取物（ＣＩＳＥ）测定细胞存活率，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，并用Ｈ－ＴｄＲ掺入法及放射免疫方法观察ＣＳＥ对ＡＳＭＣ的增殖作用，及对ＥＴ－１释放的影响。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验，观察低浓度（５％）ＣＳＥ对ＡＳＭＣ增殖的影响及与ＥＴ的关系。结果１０％和３０％ＣＳＥ对ＡＳＭＣ呈现明显毒性作用，表现为细胞存活率降低，脂质过氧化终产物丙二醛（ＭＤＡ）含量增加和细胞ＬＤＨ漏出随时间进行性增加。５％ＣＳＥ呈时间依赖地刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１并促进ＡＳＭＣ（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入（较对照组增加５９．９％，Ｐ＜０．０１）。内皮素Ａ受体（ＥＴＡ受体）拮抗剂ＪＫＣ－３０１呈浓度依赖地抑制５％ＣＳＥ促ＡＳＭＣ增殖作用。结论吸烟可以刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１且通过ＥＴＡ受体介导ＡＳＭＣ增殖     

老年NIDDM患者微量白蛋白尿与脂质代谢的关系及临床意义

为了研究老年非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者尿微量白蛋白与血脂、脂蛋白的关系，测定了老年ＮＩＤＤＭ伴微量白蛋白尿（ＵＡＥ）患者和ＮＩＤＤＭ不伴ＵＡＥ患者及正常对照组的甘油三酯（ＴＧ）、胆固醇（ＴＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ Ｃ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ Ｃ）、载脂蛋白Ａ（ａｐｏＡ）、载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）、脂蛋白（ａ）〔ＬＰ（ａ）〕。结果：老年ＮＩＤＤＭ伴有微量蛋白尿患者的ＴＧ、Ｌｐ（ａ）显著高于不伴ＵＡＥ的ＮＩＤＤＭ患者及对照组，而ａｐｏＡ及ＨＤＬ Ｃ明显低于不伴ＵＡＥ的ＮＩＤＤＭ患者及对照组。结果提示：老年ＮＩＤＤＭ伴有微量白蛋白尿患者的心血管病的发病率及死亡率的增加可能与血脂及脂蛋白代谢异常有关。     

两面针碱对钙调蛋白依赖环核苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

以钙调蛋白依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＣａＭ－ＰＤＥ）为分子模型，应用正文试验证实两面针碱（Ｎｉ－ｔｉｄｉｎｅ，Ｎｉｔ）是一种新的ＣａＭ拮抗剂。实验结果表明：①：Ｎｉｔ抑制ＣａＭ－ＰＤＥ活性ＩＣ５０为８６μｍｏｌ／Ｌ。②７５μｍｏｌ／ＬＮｉｔ对０～８０ｎｇ／ｍｌＣａＭ存在下，ＣａＭ－ＰＤＥＶｍａｘ基本不变，半激活浓度（ＡＣ５０）增大，抑制常数（Ｋｉ）为６６μｍｏｌ／Ｌ。提示Ｎｉｔ以竞争方式拮抗ＣａＭ对其靶酶（ＰＤＥ）的活化。③７５μｍｏｌ／ＬＮｉｔ对ＣａＭ－ＰＤＥ抑制动力学研究：改变底物（ｃＡＭＦ）浓度，ＣａＭ－ＰＤＥ的Ｖｍａｘ减少，米氏常数（Ｋｍ）值增大，Ｋｉ为６４μｍｏｌ／Ｌ，α＞１。提示Ｎｉｔ对ＣａＭ－ＰＤＥ的抑制作用是非竞争一竞争性混合型抑制。由此推测Ｎｉｔ可能通过与ＣａＭ竞争酶分子上的ＣａＭ结合位点从而抑制ＣａＭ－ＰＤＥ的激活活性。     

谷氨酸介导皮质神经元Ca^2＋／CaM PKⅡ活性下降的机理研究

目的 研究谷氨酸对Ｃａ＾２＋／ＣａＭ ＰＫⅡ活性的影响及其原因。方法 以培养的胎鼠皮质神经元为材料，采用＾３２Ｐ掺入滤纸片法测Ｃａ＾２＋／ＣａＭ ＰＫⅡ活性，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳及放射为影研究Ｃａ＾２＋／ＣａＭ依赖怀内源蛋白后磷酸化水平变化。     

从APACHE预测评分系统观察ICU多发伤病人的临床特点

利用ＡＰＡＣＨＥⅡ预测评分系统并联合ＳＩＲＳ及ＭＯＤＳ记分对７６例ＩＣＵ多发伤患者进行临床分析。结果显示：７６例患者ＡＰＡＣＨＥⅡ平均分为１８４分;平均ＩＣＵ停留时间为９１５ｈ;死亡６例（７９％）;并发ＭＯＤＳ１３例（１７１％）,ＡＲＤＳ１０例（１３２％）,严重感染２０例（２６３％）。ＡＰＡＣＨＥⅡ评分越高,患者ＩＣＵ停留时间越长,ＭＯＤＳ发生率及死亡率越高。     

β－内啡肽和强啡肽A在急性缺血性大脑皮层水肿中的作用及作用机制的研究

本工作采用原子吸收分光光度法测定侧脑室微量注射β－内啡肽（β－ＥＰ）、强啡肽Ａ（ＤｙｎＡ）和纳洛酮（Ｎｘ）后，对于沙土鼠急性缺血大脑皮层Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋和Ｈ２Ｏ含量的影响；利用氢清除法观察了动物大脑皮层局部血流量以及静脉注射β－ＥＰ和Ｎｘ后，对于皮层局部血流量的影响，探讨β－ＥＰ和ＤｙｎＡ在沙土鼠急性缺血性大脑皮层水肿中的作用及作用机制。结果表明：侧脑室注射β－ＥＰ后，在缺血大脑皮层水肿加重的同时，大脑皮层Ｃａ２＋含量升高非常显著（Ｐ＜０．０１），而注射ＤｙｎＡ后，使皮层Ｃａ２＋含量明显降低（Ｐ＜０．０５）；侧脑室注射Ｎｘ后，沙土鼠缺血大脑皮层ｃａ２＋含量明显降低（Ｐ＜０．０１）的同时，皮层组织Ｍｇ２＋含量显著增加（Ｐ＜０．０５），缺血性大陆皮层水肿明显减轻（Ｐ＜０．０１）；尾静脉注射β－ＥＰ和Ｎｘ后，动物大脑皮层局部血流量和相应对照组相比没有显著改变。提示，β－ＥＰ加重或促进缺血性脑水肿的作用与大脑皮层局部血流量的改变无明显相关，内源性阿片肽在缺血性脑水肿中的作用及其差异可能和它们调节组织内Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋代谢及Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋含量的变化有关。     

高血压病人红细胞变形能力与红细胞ATP酶活性及细胞内离子水平关系的研究

通过观察６６例高血压病（ＥＨ）病人红细胞变形能力（ＥＤ）和红细胞ＡＴＰ酶活性，细胞内离子浓度变化及其相互关系。结果显示，ＥＨ病人红细胞滤过指数（ＩＦ）较对照组明显增高（Ｐ＜０．００１），红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性、细胞内Ｋ＋，Ｍｇ２＋－浓度明显降低（Ｐ＜０．００１），而细胞内Ｎａ＋，Ｃａ２＋浓度明显增高（Ｐ＜０．００１），且随着ＥＨ病程进展而逐渐明显（Ｐ＜０．００１）。ＥＨ病人红细胞ＩＦ与红细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性及Ｋ＋，Ｍｇ２＋浓度呈明显负相关（Ｐ＜０．００１），与Ｃａ２＋，Ｎａ＋浓度呈正相关（Ｐ＜０．００１）。结果提示ＥＨ病ＨＥＤ降低与红细胞膜ＡＴＰ酶活性降低及离子浓度异常有关。     

从APACHE预测评分系统观察ICU多发伤病人的临床特点

利用ＡＰＡＣＨＥⅡ预测评分系统并联合ＳＩＲＳ及ＭＯＤＳ记分对７６例ＩＣＵ多发伤患者进行临床分析。结果显示：７６例患者ＡＰＡＣＨＥⅡ平均分为１８．４分;平均ＩＣＵ停留时间为９１．５ｈ;死亡６例（７．９％）;并发ＭＯＤＳ１３例（１７．１％）,ＡＲＤＳ１０例（１３．２％）,严重感染２０例（２６．３％）。ＡＰＡＣＨＥⅡ评分越高,患者 长,ＭＯＤＳ发生率及死亡率越高。     

内源性高甘油三酯血症患者血浆高密度脂蛋白亚类分析

内源性高甘油三酯血症（ＨＴＧ）常伴血浆ＨＤＬ－Ｃ含量下降及ＨＤＬ组成异常。为了研究ＨＴＧ患者血浆ＨＤＬ亚类的改变,作者建立了密度梯度聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法（ＧＧＥ）,对２５例ＨＴＧ患者（血浆ＴＧ＞２．２６ｍｍｏｌ／Ｌ,ＴＣ＜６．７２ｍｍｏｌ／Ｌ）及２５例年龄、性别匹配的血脂正常者（血浆ＴＧ＜１．６９ｍｍｏｌ／Ｌ,ＴＣ＜５．１７ｍｍｏｌ／Ｌ）的ＨＤＬ亚类——ＨＤＬ２ａ、ＨＤＬ２ｂ、ＨＤＬ３ａ、ＨＤＬ３ｂ和ＨＤＬ３ｃ进行了分析,同时对血浆及ＨＤＬ中脂质及载脂蛋白（ａｐｏ）ＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ１００、ＣⅡ、ＣⅢ及Ｅ进行了测定。结果发现,ＨＴＧ患者空腹血浆ＴＧ、ａｐｏＢ１００、ａｐｏＣⅡ、ａｐｃＣⅢ及ａｐｏＥ显著增加（Ｐ＜０．００１）,ＨＤＬ－Ｃ及ａｐｏＡⅠ显著降低（Ｐ＜０．００１及Ｐ＜０．０５）;患者血浆ＨＤＬ组成异常,ＨＤＬ中ＴＧ含量显著增加（Ｐ＜０．００１）,ＴＣ、ａｐｏＡⅠ、ａｐｏＣⅡ、ａｐｏＣⅢ及ａｐｏＥ含量下降（Ｐ＜０．０１）;患者血浆ＨＤＬ亚类含量改变,ＨＤＬ２ｂ显著降低（Ｐ＜０．０２）,ＨＤＬ２ａ及ＨＤＬ３ａ增加（Ｐ＜０．０５）,且随血浆ＴＧ含量的升高而升高,ＨＤＬ３ｂ及ＨＤＬ３ｃ则未见改变     

DEPRESSIVE SYMPTOMS AND THEIR CORRELATES IN HEALTH SCHOOL STUDENTS

ＤＥＰＲＥＳＳＩＶＥＳＹＭＰＴＯＭＳＡＮＤＴＨＥＩＲＣＯＲＲＥＬＡＴＥＳＩＮＨＥＡＬＴＨＳＣＨＯＯＬＳＴＵＤＥＮＴＳＬｉｕＸｉａｎｃｈｅｎ，（刘贤臣）ＳｕｓｕｍｕＯｄａ，ＭａＤｅｎｇｄａｉ，（马登岱）（Ｄｅｐｔ．ｏｆＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，Ｓｈａｎｄｏ...