枸杞多糖对四氧嘧啶损伤的离体大鼠胰岛细胞的保护作用

目的:观察枸杞多糖(LBP)对四氧嘧啶(alloxan)诱导的胰岛细胞损害的保护作用。方法:应用体外培养的大鼠胰岛细胞,分别检测alloxan、LBP及其联合对胰岛细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)生成的影响。结果:LBP明显增强受损胰岛细胞内SOD的活性,提高了胰岛细胞的抗氧化能力,减轻了过氧化物对细胞的损伤,降低MDA的生成量。结论:LBP对alloxan损伤的离体大鼠胰岛细胞有一定的保护作用。     

建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究

四氧嘧啶是胰岛B细胞毒剂，通过产生超氧自由基破坏B细胞，使细胞内DNA损伤，并激活多聚ADP核糖体合成酶的活性，从而使辅酶I含量下降，导致mRNA功能受损。B细胞合成前胰岛素减少．最终导致胰岛素缺乏。四氧嘧啶诱导的动物糖尿病模型与人类I型，即：胰岛素依赖性糖尿病类似。四氧嘧啶动物糖尿病模型是评价抗糖尿病药物疗效安全性常用模型，建立四氧嘧啶糖尿病模型应注意动物品种、品系、性别、体重等的选择；还要注意四氧嘧啶及其给药途径，给药剂量的选择。对建立四氧嘧啶糖尿病模型的有关问题进行了综述。     

药物筛选模型和技术及其在中药活性成分研究中的应用

现代生物技术的发展和药物作用靶标的揭示 ,为中药活性成分的研究提供了新的技术和手段。本文就整体动物模型、受体模型和分子生物色谱、细胞模型和细胞膜色谱、基因芯片技术 4种药物筛选模型和技术及其在中药活性成分研究中的应用进行了分析、综述 ,为推动中药活性成分研究、加速中药现代化步伐提供参考。     

枸杞多糖对四氧嘧啶损伤的离体大鼠胰岛细胞的作用

目的　观察枸杞多糖 (LBP)对四氧嘧啶 (AXN)诱导的胰岛细胞损害的作用。方法　应用体外培养的大鼠胰岛细胞 ,分别检测AXN、LBP及其联合对胰岛细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性、丙二醛 (MDA)和一氧化氮 (NO)生成的影响。结果　LBP明显增强受损胰岛细胞内SOD的活性 ,提高了胰岛细胞的抗氧化能力 ,减轻了过氧化物对细胞的损伤 ,降低MDA的生成量。结论　LBP对AXN损伤的离体大鼠胰岛细胞有一定的保护作用     

玉竹多糖对四氧嘧啶糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用

目的研究玉竹多糖(PoPs)对实验性糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用及其机制。方法将四氧嘧啶按180mg/kg一次性腹腔注射诱导实验性糖尿病,给予玉竹多糖干预。观察体重、空腹血糖(FBG)的变化,并检测给药30d后大鼠的血清胰岛素(INS)以及胰腺中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平,取胰腺组织做HE染色观察胰岛损伤情况。结果四氧嘧啶诱导的实验性糖尿病大鼠胰岛细胞存在明显的氧化应激损伤。PoPs呈计量依赖性地改善糖尿病大鼠的体重下降,降低FBG,使胰腺组织MDA含量降低,SOD,GSH-Px,CAT活力增强,HE染色显示胰岛损伤减轻,与糖尿病模型组比较具有明显的统计学差异(P<0.05),但PoPs对INS无明显影响。结论玉竹多糖具有降血糖、抗氧化应激作用,对四氧嘧啶糖尿病大鼠的胰岛β细胞损伤有明显的保护作用。     

巨噬细胞甘露糖受体模型的初步建立及其在中药复方筛选中的应用

目的:建立巨噬细胞甘露糖受体(MMR)模型,用于筛选中药中以甘露糖受体(MR)为靶标的活性物质.方法:将小鼠腹腔臣噬细胞分别与不同浓度的D-甘露糖和D-半乳糖共孵,用流式细胞仪和荧光显微镜检测D-甘露糖和D-半乳糖对Mψ结合算硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白(M-FITC-BSA)的拮抗作用,优化实验条件,建立MMR筛选模型;将上述模型用于筛选四物汤等6个复方多糖中的MR结合成分.结果:两种检测方法均显示:随D-甘露糖浓度的上升,M-FITC-BSA标记的Mψ检出率逐步下降(P＜0.01),而这种现象在D-半乳糖组中未观察到;当D-甘露糖达到0.080mmol/L浓度时,便能明显拮抗Mψ结合M-FITC-BSA(P＜0.05或P＜0.01).复方多糖的筛选结果显示:在一定浓度下,四君子汤、六味地黄汤和玉屏风散多糖组分能明显拮抗小鼠腹腔Mψ与M-FITC-BSA的结合,且具有浓度组间差异性(P＜0.05或P＜0.01).结论:MMR模型对MR结合成分的筛选作用稳定而敏感,用于中药MR结合物的筛选,对快速筛选中药免疫调节成分、研究中药免疫调节机制具有重要意义.     

体视学方法在分析“消渴停”胶囊对糖尿病大鼠胰岛B细胞的免疫细胞化学影响中的应用

本文通过体视学定量分析的方法，运用免疫细胞技术观察研究了“消渴停”胶囊对四氧嘧啶造成的实验性糖尿病大鼠胰岛Ｂ细胞的影响。结果实验组和消渴丸对照组的Ｂ细胞数密度（Ｎｖ）值分别为３９７９．４４×１０２ｍｍ－３、３９０９．０６×１０２ｍｍ－３，而模型组仅为２２２２．３０×１０２ｍｍ－３，这表明“消渴停”胶囊可以改善四氧嘧啶造成的大鼠胰岛Ｂ细胞的损伤，而体视学方法也使得这一分析更加直观、客观性更强     

细胞模型在中药研究中的应用

随着中药现代化进程日趋加快,细胞模型开始广泛应用于中药的各项研究。综述细胞模型在中药研究中的应用,包括其用于研究中药的筛选与毒性评价、吸收转运机制、药理学及药效学评价等方面。对细胞模型用于中药研究的前景进行了阐述与分析。     

建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究

四氧嘧啶是胰岛B细胞毒剂 ,通过产生超氧自由基破坏B细胞 ,使细胞内DNA损伤 ,并激活多聚ADP核糖体合成酶的活性 ,从而使辅酶Ⅰ含量下降 ,导致mRNA功能受损 ,B细胞合成前胰岛素减少 ,最终导致胰岛素缺乏。四氧嘧啶诱导的动物糖尿病模型与人类Ⅰ型 ,即 :胰岛素依赖性糖尿病类似。四氧嘧啶动物糖尿病模型是评价抗糖尿病药物疗效安全性常用模型 ,建立四氧嘧啶糖尿病模型应注意动物品种、品系、性别、体重等的选择 ;还要注意四氧嘧啶及其给药途径 ,给药剂量的选择。对建立四氧嘧啶糖尿病模型的有关问题进行了综述。     

Ⅳ型胶原酶模型的建立及其在中药活性成分筛选中的应用

目的建立Ⅳ型胶原酶筛选模型,并运用此模型对中药活性成分进行评价。方法利用Ⅳ型胶原酶特异性水解明胶释放的末端氨基与2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)发生显色,吸光度值可以衡量Ⅳ型胶原酶含量,优化Ⅳ型胶原酶浓度、琥珀酰凝胶浓度、显色剂用量及时间参数。结果确定了Ⅳ型胶原酶筛选模型的条件:5.0×10^-5 g/L酶溶液、20 g/L琥珀酰凝胶溶液、60μl 0.05%TNBS、显色30 min,阳性药盐酸四环素在1.0 g/L下对该酶的抑制率是19.39%,并呈现一定的量效关系,表明成功建立该筛选模型。应用该模型筛选发现,阿魏酸和川芎嗪具有明显的抑制Ⅳ型胶原酶活性,而水杨酸和小檗碱则具有促进作用。结论Ⅳ型胶原酶的筛选模型成功建立并应用到中药活性成分筛选中,为快速评价中药活性成分及其作用机制提供了有益参考。     

血红素加氧酶/一氧化碳系统在百令胶囊水提物对抗STZ损伤大鼠胰岛细胞的作用

目的 观察百令胶囊(Corbrin Capsule,CC) 水提物对胰岛细胞的保护作用及其机制与血红素加氧酶/一氧化碳系统的关系.方法 Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立Ⅰ型糖尿病模型,腹腔注射CC水提物和(或)HO的特异抑制剂锌原卟啉(Zinc protoporphrin IX,ZnPP),分糖尿病组(DM)、正常对照组(NC)、CC水提物组、CC水提物组+ZnPP,28 d后检测血糖,血清胰岛素分泌量、CO含量、HO-1活性.离体培养乳鼠的胰岛细胞,检测STZ、CC以及ZnPP作用后细胞活性、细胞培养上清液中胰岛素的基础、高糖刺激分泌量,细胞HO-1以及CO的变化,同时设立正常对照组.结果 经CC水提物作用后,STZ糖尿病大鼠血清中血糖降低,胰岛素增加,CO、HO-1水平升高(P＜0.01).ZnPP作用后血清HO-1水平降低,CO含量减少.STZ与胰岛细胞孵育20 h后与ZnPP加入CC组,均表现出细胞活性降低,基础和高糖刺激胰岛素分泌减少;细胞HO-1活性降低,CO生成减少(P＜0.01).与CC共同孵育细胞活性显著升高,胰岛素基础和高糖分泌量增多,HO-1活性水平和CO生成量显著提高(P＜0.01).结论 通过实验证实CC水提物对STZ损伤的胰岛细胞有保护作用,机制与增加HO-1活性,CO生成增多有关.     

非中医期刊中医药文献的筛选与获取

在非中医期刊中筛选中医药文献,首先要熟悉文献的类型,其次是多学科、全方位的从一些临床小学科期刊中筛取相关内容,并注意隐形提示的主题词和关联信息.     

Caco-2细胞体外吸收模型的建立及评估

目的:建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法:将细胞接种在Transwel转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值(TEER)和表观渗透系数(Papp)及碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果:培养21d后,细胞间形成紧密连接,跨膜电阻值达到恒定值,为500Ω/cm2,表观渗透系数低于0.5×10-6cm/s;肠腔侧碱性磷酸酶活性显著高于基底侧酶活性。结论:在本实验室条件下构建的Caco-2细胞模型在形态上与小肠上皮细胞相似,细胞已产生极性,可作为小肠吸收的体外模型。     

高通量中药单体筛查方法及应用

随着现代化学、生物学及药学等领域日新月异的进步,相关现代技术在中药现代化的研究中得到了广泛的应用,特别是对中药单体的药效和药代研究的进展,为中药走向国际提供了基础。如何获得目的中药单体成为目前研发的热点和焦点。本文就目前国内外有关中药单体的筛选方法、不同筛选类型原理、局限性及意义进行了阐述。     

正肝方药物血清诱导人肝癌细胞分化的体外实验研究

目的：探讨正肝方对Bel-7402人肝癌细胞分化的诱导作用,及对其端粒酶活性的影响。方法：正肝方水煎液灌喂正常大鼠,采血制备药物血清。以正常鼠血清为阴性对照,维甲酸(RA)为阳性对照,将药血清温育Bel-7402人肝癌细胞。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,图像分析系统测定细胞核质比,放射免疫法测定甲胎蛋白(AFP)含量,动态比色法测定γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(ALP)活性,多聚酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR—ELISA法)检测细胞端粒酶活性。结果：正肝方药物血清可抑制人肝癌细胞的增殖,显著降低细胞核质比,抑制细胞分泌AFP,降低细胞γ-GT活性,升高ALP活性,并有显著抑制人肝癌细胞端粒酶活性的作用。结论：正肝方具有诱导人肝癌细胞分化的作用,其主要机理可能是抑制了Bel-7402细胞端粒酶活性。     

稳定表达人寡肽转运体1的细胞模型构建及应用

 目的 构建稳定表达人寡肽转运体1（hPepT1）的马丁-达比犬肾细胞模型(MDCK-hPepT1),并将其应用于中药单体中人寡肽转运体1抑制剂的筛选。方法 构建重组质粒pcDNA3.1(+)-hPepT1,将其转染马丁-达比犬肾系细胞,经G418筛选后以有限稀释法挑选单克隆细胞。以人寡肽转运体1荧光底物β-Ala-Lys(AMCA)和经典底物Glysar对单克隆细胞转运活性进行验证;通过反转录聚合酶链式反应验证人寡肽转运体1在转录水平的表达。以中药单体对Glysar摄取的影响实现人寡肽转运体1抑制剂的筛选。结果 获得的两株单克隆细胞（D19、A11）对β-Ala-Lys(AMCA)摄取均显著高于转染空载体的马丁-达比犬肾系细胞,对Glysar的摄取分别为转染空载体细胞的24、11倍;D19、A11中hPepT1的mRNA水平亦显著高于转染空载体的细胞;已知的人寡肽转运体1抑制剂（底物）显著减少单克隆细胞D19和A11对Glysar的摄取;部分中药单体对Glysar摄取产生不同程度的抑制。结论 本实验成功构建了稳定高表达人寡肽转运体1的马丁-达比犬肾系细胞模型,并应用该模型筛选出对人寡肽转运体1具有潜在抑制作用的中药单体。     

肺转移前微环境体外模型的建立与双参颗粒干预机制

目的:构建肺转移前微环境体外模型,观察S1pr1-stat3信号通路在模型成熟过程中的作用,同时验证双参颗粒对该模型的干预作用,探讨其可能的机制。方法:体外构建小鼠Lewis肺癌细胞和原代骨髓细胞共培养模型,并用S1pr1激活剂SEW2871干预髓系细胞分化的过程,观察相关蛋白MMP9、Lox、Version及Fibronectin的表达情况,并检测模型中骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)细胞的分化情况及双参颗粒对模型的干预效果。结果:S1pr1可以明显促进肺转移前微环境体外模型的成熟构建,S1pr1-stat3是该模型成熟的关键信号通路,双参颗粒不仅显著降低模型中该信号通路相关蛋白的表达,同时对微环境成熟的关键蛋白的表达也具有抑制作用,还可显著降低该信号通路相关的骨髓细胞向MDSCs细胞的分化(P0.05),同时对转移前微环境中部分肿瘤源性细胞因子如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及转化生长因子(TGF-β)有显著抑制作用(P0.05)。结论:双参颗粒通过抑制S1pr1-stat3信号通路及部分肿瘤源性细胞因子的表达,抑制肺转移前微环境模型的成熟。     

HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及在筛选两色金鸡菊活性化合物中的应用

目的:体外建立人肝癌细胞(HepG2)胰岛素抵抗模型,并初步筛选两色金鸡菊中可有效改善胰岛素抵抗的萃取部位及活性化合物。方法:用不同浓度的胰岛素、棕榈酸或葡萄糖分别对HepG2细胞进行不同时间的诱导,通过MTT法对细胞活性进行评价及葡萄糖氧化酶法对HepG2细胞葡萄糖消耗量测定,明确建立稳定的HepG2胰岛素抵抗模型的试剂诱导浓度及诱导时间。模型建立后,应用不同浓度的两色金鸡菊粗提物、各萃取部位及七个单体化合物奥卡宁(Okanin,2)、3',4',8-三羟基黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3',4',8-trihydroxyflavone-7-O-β-D-glucopyranoside,3)、槲皮素(Quercetin,4)、黄诺马苷(Flavanomarein,5)、马里苷(Marein,6)、豆甾醇(Stigmasterol,13)、紫铆花素(Butein,16)预处理细胞24 h,再用55 mmol·L-1葡萄糖刺激24h,用葡萄糖氧化酶法或2-NBDG荧光标记葡萄糖法分别观察不同浓度的上述成分对胰岛素抵抗模型HepG2细胞糖消耗或糖吸收的影响。MTT法对各组细胞活性进行评价。结果:HepG2细胞在10-7mol·L-1浓度的胰岛素中作用24 h,或在55 mmol·L-1的葡萄糖中刺激24 h,细胞葡萄糖消耗量明显减少(P0.01)且稳定性良好,并且对细胞存活率未造成影响,可作为胰岛素抵抗模型;而棕榈酸组虽然糖消耗显著下降但细胞存活率也显著降低。两色金鸡菊总提物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位及2号、3号、5号和16号化合物均有改善细胞胰岛素抵抗作用,其中5号黄诺马苷和6号马里苷效果较好。结论:黄诺马苷和马里苷可能是两色金鸡菊中改善胰岛素抵抗的主要活性成分。     

黄嘌呤氧化酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用

 目的建立适用于高通量筛选的黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XO)抑制剂筛选模型,并以此模型进行XO抑制剂筛选。方法建立XO活性的紫外检测法及其抑制剂体外高通量筛选模型,并用此筛选模型对71760化合物与粗提物进行筛选。结果通过对筛选条件优化,建立了可靠的筛选模型,并对71760样品进行了初筛,发现27个活性化合物,命中率0.038%,其中17个有较好量-效关系。结论建立了稳定灵敏的适用于高通量筛选的XO抑制剂体外筛选模型,并发现了一些具有较好活性的化合物。