建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究

四氧嘧啶是胰岛B细胞毒剂 ,通过产生超氧自由基破坏B细胞 ,使细胞内DNA损伤 ,并激活多聚ADP核糖体合成酶的活性 ,从而使辅酶Ⅰ含量下降 ,导致mRNA功能受损 ,B细胞合成前胰岛素减少 ,最终导致胰岛素缺乏。四氧嘧啶诱导的动物糖尿病模型与人类Ⅰ型 ,即 :胰岛素依赖性糖尿病类似。四氧嘧啶动物糖尿病模型是评价抗糖尿病药物疗效安全性常用模型 ,建立四氧嘧啶糖尿病模型应注意动物品种、品系、性别、体重等的选择 ;还要注意四氧嘧啶及其给药途径 ,给药剂量的选择。对建立四氧嘧啶糖尿病模型的有关问题进行了综述。     

枸杞多糖对四氧嘧啶损伤的离体大鼠胰岛细胞的保护作用

目的:观察枸杞多糖(LBP)对四氧嘧啶(alloxan)诱导的胰岛细胞损害的保护作用。方法:应用体外培养的大鼠胰岛细胞,分别检测alloxan、LBP及其联合对胰岛细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)生成的影响。结果:LBP明显增强受损胰岛细胞内SOD的活性,提高了胰岛细胞的抗氧化能力,减轻了过氧化物对细胞的损伤,降低MDA的生成量。结论:LBP对alloxan损伤的离体大鼠胰岛细胞有一定的保护作用。     

建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究

四氧嘧啶是胰岛B细胞毒剂，通过产生超氧自由基破坏B细胞，使细胞内DNA损伤，并激活多聚ADP核糖体合成酶的活性，从而使辅酶I含量下降，导致mRNA功能受损。B细胞合成前胰岛素减少．最终导致胰岛素缺乏。四氧嘧啶诱导的动物糖尿病模型与人类I型，即：胰岛素依赖性糖尿病类似。四氧嘧啶动物糖尿病模型是评价抗糖尿病药物疗效安全性常用模型，建立四氧嘧啶糖尿病模型应注意动物品种、品系、性别、体重等的选择；还要注意四氧嘧啶及其给药途径，给药剂量的选择。对建立四氧嘧啶糖尿病模型的有关问题进行了综述。     

灯盏花素对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降血糖作用机理探讨

目的:研究灯盏花素对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降血糖作用与机理。方法:腹腔注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,分别以高、中、低剂量灯盏花素对糖尿病小鼠尾静脉注射5周,测定小鼠的空腹血糖、葡萄糖耐量、血清中胰岛素水平、胰岛素分泌指数和血清SOD含量,并采用Western-Blot方法检测灯盏花素对糖尿病小鼠胰岛β细胞表达的影响。结果:灯盏花素能显著降低糖尿病小鼠的血糖水平,提高葡萄糖耐量水平(P0.05)并使血清中胰岛素含量升高;提高胰岛素分泌指数;提高血清SOD含量(P0.05);同时提高对四氧嘧啶致糖尿病小鼠胰岛β细胞表达水平(高剂量组P0.01,中剂量组P0.05)。结论:灯盏花素具有减轻四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤程度或对这种损伤具有一定程度的保护和修复作用,能促进胰岛β细胞分泌胰岛素,从而达到降血糖的效果。     

两种新的小鼠2型糖尿病胰岛素抵抗模型

目的:复制与临床更为接近的2型糖尿病胰岛素抵抗模型.方法:采用肌肉注射地塞米松造糖耐量降低模型,静脉注射小剂量四氧嘧啶并灌服高浓度葡萄糖造2型糖尿病胰岛素抵抗模型,通过检测糖耐量、血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数、β细胞功能指数、胰岛细胞病理改变来观察造模药物对小鼠的影响.结果:2mg/kg地塞米松可造成小鼠糖耐量降低模型,小剂量四氧嘧啶50mg/kg分别于实验第1、14天注射并灌服高浓度葡萄糖能使血糖升高,胰岛素敏感性下降,胰岛β细胞损伤.结论:2mg/kg地塞米松可造成小鼠糖耐量降低模型;注射小剂量四氧嘧啶并灌服高浓度葡萄糖能造成2型糖尿病胰岛素抵抗模型.     

枸杞多糖对四氧嘧啶损伤的离体大鼠胰岛细胞的作用

目的　观察枸杞多糖 (LBP)对四氧嘧啶 (AXN)诱导的胰岛细胞损害的作用。方法　应用体外培养的大鼠胰岛细胞 ,分别检测AXN、LBP及其联合对胰岛细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性、丙二醛 (MDA)和一氧化氮 (NO)生成的影响。结果　LBP明显增强受损胰岛细胞内SOD的活性 ,提高了胰岛细胞的抗氧化能力 ,减轻了过氧化物对细胞的损伤 ,降低MDA的生成量。结论　LBP对AXN损伤的离体大鼠胰岛细胞有一定的保护作用     

玉竹多糖对四氧嘧啶糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用

目的研究玉竹多糖(PoPs)对实验性糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用及其机制。方法将四氧嘧啶按180mg/kg一次性腹腔注射诱导实验性糖尿病,给予玉竹多糖干预。观察体重、空腹血糖(FBG)的变化,并检测给药30d后大鼠的血清胰岛素(INS)以及胰腺中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平,取胰腺组织做HE染色观察胰岛损伤情况。结果四氧嘧啶诱导的实验性糖尿病大鼠胰岛细胞存在明显的氧化应激损伤。PoPs呈计量依赖性地改善糖尿病大鼠的体重下降,降低FBG,使胰腺组织MDA含量降低,SOD,GSH-Px,CAT活力增强,HE染色显示胰岛损伤减轻,与糖尿病模型组比较具有明显的统计学差异(P<0.05),但PoPs对INS无明显影响。结论玉竹多糖具有降血糖、抗氧化应激作用,对四氧嘧啶糖尿病大鼠的胰岛β细胞损伤有明显的保护作用。     

僵知饮对大鼠实验性糖尿病胰岛β细胞的形态学研究

目的 :探讨僵知饮对实验性糖尿病模型的降糖作用及其作用机制。方法 :采用静脉注射四氧嘧啶诱导大鼠化学性糖尿病 ,选择血糖 >1 1 mmol/L之大鼠 ,分为模型组和治疗组 ,治疗组给予僵知饮 ,观察僵知饮对高血糖大鼠的降糖作用 ,以及对高血糖大鼠胰腺和胰岛β细胞结构形态的影响。结果 :模型组大鼠胰腺结构呈明显损伤改变 ,僵知饮对胰腺结构有修复的功能 ,对糖尿病大鼠胰腺及胰岛 B细胞结构损伤有明显的改善作用。     

番石榴酸抗H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞氧化损伤作用及其机制分析

目的考察番石榴酸(guavenoic acid,GA)对INS-1胰岛β细胞氧化损伤的作用。方法培养INS-1胰岛β细胞,给予番石榴酸0.3、1、3、10、30 nmol·L-1,并设空白对照组、溶媒对照组及阳性药组,药物作用时间均为48 h。650μmol·L-1H2O2干预细胞2 h建立氧化损伤模型,用四甲基偶氮唑蓝法检测药物对INS-1β细胞氧化损伤的保护作用,用核染色法观察细胞核变化,用流式细胞术检测药物对细胞活性氧生成的作用,用双染-流式细胞术检测药物对细胞凋亡的保护作用。结果与氧化损伤模型组比较,低剂量的番石榴酸(0.3、1 nmol·L-1)能显著保护INS-1β细胞活力(P<0.05或P<0.01);核染色结果显示,与氧化损伤模型组相比,低浓度番石榴酸(0.3 nmol·L-1)作用下,细胞荧光强度较弱。0.3、1、3 nmol·L-1番石榴酸均能十分显著地降低二氯荧光黄(DCF)荧光强度(P<0.01),即减少细胞内活性氧的产生。0.3 nmol·L-1番石榴酸能显著抵抗细胞凋亡的发生(P<0.05)。结论番石榴酸能对抗INS-1细胞氧化损伤,可能与其抑制细胞内活性氧的产生、对抗细胞凋亡有关。     

卷柏复方治疗实验性糖尿病及对血液流变学的影响

卷柏复方25g/kg腹腔注射12天,对四氧嘧啶诱发的大鼠实验性糖尿病有明显的降血糖;升高血清胰岛素浓度;降低血清过氧化脂质含量;改善血液流变学异常的作用。胰岛的组织学观察表明,卷柏复方可促进四氧嘧啶所致胰岛B细胞损伤的修复。     

四物汤抑制H2O2诱导神经细胞凋亡的实验研究

目的:探讨传统中药四物汤水提液对人神经母细胞瘤的抗氧化损伤作用及其机制。方法:在人神经母细胞瘤株SK-N-MC细胞以0.5×106/ml的密度接种于6孔板和2×104/ml于96孔板或以2×106/ml于10cm的圆盘后孵育24h。用不同浓度H2O2处理(1～300μM,12h)诱导SK-N-MC细胞损伤以后,通过MTT、DAPI和流式细胞技术,观察传统中药四物汤的作用。结果:H2O2引在1～300μM范围内,对SK-N-MC细胞损伤具有明显的量效关系。四物汤提前预处理2h,可明显减少由H2O2(30μM)预处理引起的SK-N-MC死亡率[由对照组的(59.87±2.04)%,上升到(83.04±5.12)%～(89.47±5.68)%(P<0.01)],抑制细胞凋亡[由对照组的(29.24±3.54)%下降到(7.56±1.96)%(P<0.01)],用30μM的H2O2处理12h后,可以明显的诱导SK-N-MC细胞出现sub-G1期,但是事先用250μg/mL四物汤处理却明显地降低H2O2导致细胞凋亡产生的sub-G1峰。结论:四物汤水提液可能通过抗细胞凋亡等途径,减少SK-N-MC细胞的氧化损伤。     

菩人丹对高糖诱导的INS-1细胞凋亡、BAD和FOXO1蛋白表达的影响

目的: 观察菩人丹(Puren Dan, PRD)对高糖诱导的INS-1细胞凋亡、Bal-xl/Bcl-2相关死亡促进因子(BAD)和叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)蛋白表达的影响,探讨PRD恢复INS-1细胞分泌功能的相关分子机制。 方法: 采用血清药理学方法制备菩人丹含药血清,建立高浓度葡萄糖(33.3 mmol·L^-1)诱导INS-1细胞损伤模型,以菩人丹药物血清干预24 h;实验分为5组,即正常对照组(control组)、高糖模型组(HG组)、菩人丹药物血清高剂量组(H-PRD组)、菩人丹药物血清低剂量组(L-PRD组)和二甲双胍药物血清对照组(MF组);采用CCK8试剂盒检测细胞活力,流式Annexin V-FITC/PI双染法考察细胞凋亡水平,Western blotting assay检测BAD和FOXO1蛋白表达水平及其磷酸化水平。 结果: 与正常组比较高糖能够显著降低INS-1细胞活力、诱导细胞凋亡、降低INS-1细胞BAD,FOXO1丝氨酸磷酸化水平;与模型组比较菩人丹含药血清(终体积分数10%)则能抑制INS-1细胞凋亡,增加细胞活力,下调FOXO1表达,促进BAD和FOXO1丝氨酸磷酸化。 结论: 菩人丹药物血清能够减少高糖诱导的INS-1细胞凋亡,这种作用与上调BAD和FOXO1蛋白丝氨酸磷酸化水平直接相关。     

中药对胰岛β细胞的保护机制研究概述

胰岛β细胞功能障碍及数量减少在2型糖尿病(T2DM)的发生发展过程中起着重要作用,目前,中药保护胰岛β细胞的疗效已经逐渐被认可,并在2型糖尿病防治中占有重要地位。通过对近几年中药提取成分,中药单体及复方对胰岛β细胞的保护机制进行总结发现,一些中药提取成分(如接骨木多糖、桑叶总黄酮等)、中药单体(如三丫苦、水蛭等)及中药复方(如清热降浊汤、津力达颗粒等)具有保护胰岛β细胞及治疗T2DM的作用。中药可促进胰岛β细胞增殖、减少胰岛β细胞凋亡,并且可间接通过改善血清及胰腺组织氧化应激、改善胰岛细胞胰岛素抵抗、提高血清、肝脏及肠道组织胰高血糖素样肽-1(GLP-1)水平、改善胰岛微循环、调节胰岛β细胞自噬水平等途径保护胰岛β细胞。中药因其成分的复杂性而对胰岛β细胞的保护作用涉及多种靶点及机制,并具有良好效果,而且基于中医整体观念的指导,中药在T2DM的治疗方面具有较高的安全性。因此,中药作为胰岛β细胞保护类药物具有广阔的前景,随着生物技术的发展,从中药及中药复方中筛选新型糖尿病治疗药物成为可能。     

慢性肾小球肾炎证治规律探讨

对慢性肾小球肾炎的证治规律进行了探讨 ,提出 :应注重宏观辨证和微观辨证的结合 ;补虚与泻实治法的结合 ;中药与西药用药的结合 ,包括中药辨证与西药对症治疗 ,针对中医病机的中西药联合运用 ,针对西医病理的中西药联合运用 ;重视活血化瘀药的运用     

微流控肠-肝-乳腺癌芯片的构建及其体外药物PK-PD分析

目的:基于微流控技术构建肠-肝-乳腺癌多器官芯片并将其用于药物的体外药物代谢动力学-药物效应动力学(PK-PD)研究。方法:利用微流控技术构建包含4层聚二甲基硅氧烷(PDMS)基板和2层聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)盖板的多器官芯片;分别使用Cell Tracker Red/Green和Hoechst对生长21 d的人结肠癌细胞株Caco-2细胞层和生长3 d的人脐静脉内皮细胞株HUVEC细胞层进行染色,考察细胞间的连接情况,通过测定2 g·L^-1荧光素钠和33.28 mg·L^-1普萘洛尔跨细胞层的透过率来验证所建肠模块的功能;通过比较125μmol·L^-1环磷酰胺经过常规孔板中人肝癌细胞株Hep G2细胞和芯片肝模块处理48 h后对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制率来考察肝模块的代谢水平;通过检测芯片中Hep G2细胞分泌白蛋白情况验证肝模块的合成功能;将Caco-2细胞层,HUVEC细胞层,Hep G2细胞层,MCF-7细胞层及透析膜组装在芯片上,在芯片上层通道中通入含55 mg·L^-1普萘洛尔的培养液4 h后换成正常培养液,检测72 h内各个时间点下层循环培养液中普萘洛尔的质量浓度,绘制药-时曲线;在芯片上层循环液中分别通入含125μmol·L^-1环磷酰胺,5μmol·L^-1紫杉醇,50μmol·L^-1卡培他滨的培养液,研究3种抗肿瘤药物在芯片上对MCF-7细胞层的72 h抑制率,并将该结果与96孔板结果进行比较。结果:构建的芯片运行良好,Caco-2和HUVEC细胞层均连接紧密,荧光素钠和普萘洛尔在细胞层间的透过率证明构建的肠模块具有良好的吸收转运功能;125μmol·L^-1环磷酰胺经孔板上的HepG2细胞代谢后对MCF-7的抑制率22.12%,未被代谢的环磷酰胺对MCF-7的抑制率1.84%;而125μmol·L^-1环磷酰胺从芯片肝模块上层注入后对MCF-7的抑制率提升至32.13%,而从芯片肝模块下层注入后对MCF-7的抑制率7.23%;测得普萘洛尔质量浓度在芯片上随时间变化的趋势与体内基本一致;125μmol·L^-1环磷酰胺在孔板上对MCF-7的抑制率比芯片上要低,而5μmol·L^-1紫杉醇和50μmol·L^-1卡培他滨在孔板上对MCF-7的抑制率则高于芯片结果。结论:构建的肠-肝-乳腺癌多器官芯片具有肠的吸收转运功能、肝的代谢功能;该芯片能够反映普萘洛尔在体内的药代动力学特性,同时可用于紫杉醇和卡培他滨的药效学研究。     

回心草对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究回心草水提液对心肌细胞缺氧损伤的保护作用,并从氧化应激角度探讨其作用机制.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,以3×105～5×105/mL密度接种于96孔板后第4天用无血清DMEM/F12培养48 h,然后置于缺氧环境(37℃,94％ N2,1％O2,5％ CO2)中继续孵育24h,建立体外心肌细胞缺氧损伤模型,并采用噻唑蓝(MTT)法测定1,2,3,4,5 g·L-1回心草水提液干预24h后细胞的活力;利用全自动生化分析仪测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量.结果:回心草水提液可提高缺氧损伤心肌细胞的活力,其中3,4 g·L-1组的吸光度(A)分别为(0.529±0.031),(0.534±0.024),与缺氧损伤组A值(0.498±0.012)比较差异显著(P ＜0.05,P＜0.01);能降低LDH,CK活性和MDA含量,提高SOD活性,其中以回心草水提液3 g·L-1组效果最佳.结论:回心草水提液能够保护缺氧损伤的心肌细胞,可能与其改善氧化应激有关.     

参草通脉颗粒对AngⅡ诱导的心衰心肌细胞ACE 2、MMP 2及TIMP 2影响的实验研究

目的研究参草通脉颗粒对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞ACE 2、MMP 2、TIMP 2的影响。方法取1~3 d的Wistar大鼠心脏并剪成1 mm3大小的组织块,经消化、振荡制成细胞悬液,离心分离心肌细胞,计数后接种于培养皿。将培养皿中心肌细胞加入6孔板,应用AngⅡ诱导心肌细胞。将36只Wister大鼠随机分为正常组、模型组、西药组和中药高、中、低剂量组,每组6只。正常组大鼠常规等容积蒸馏水灌胃,西药及中药组大鼠按人鼠剂量换算给予药物灌胃,用药5 d后心脏采血,自然分离血清。按组别加入AngⅡ诱导的心衰心肌细胞中。培养36 h后,Elisa法检测各组心肌细胞氨基末端脑钠尿肽(NT-proBNP)水平,Western Blot法检测各组心肌细胞基质金属蛋白酶2(MMP 2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP 2)、血管紧张素转化酶2(ACE 2)蛋白含量,实时荧光定量法(PCR)检测MMP 2 mRNA、TIMP 2 mRNA、ACE 2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组NT-proBNP、MMP 2蛋白含量、MMP 2 mRNA表达显著升高,TIMP 2、ACE 2蛋白含量及TIMP 2、ACE 2 mRNA表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,西药组、中药组NT-proBNP、MMP 2蛋白含量、MMP 2 mRNA表达显著降低,TIMP 2、ACE 2蛋白含量及TIMP 2、ACE 2 mRNA表达显著升高(P<0.05),具有统计学意义;与西药组比较,中药组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论参草通脉颗粒能调节AngⅡ诱导的大鼠心衰心肌细胞中MMP 2、TIMP 2、ACE 2表达。     

余甘子总酚酸和总黄酮配伍抑制肝癌细胞增殖及 对免疫功能的调节作用

目的: 观察余甘子总酚酸和总黄酮不同配伍比例对癌细胞的抑制作用及观察对免疫系统的影响。方法: 在96孔培养板中,每孔加入100 μL (含有5 000个／mL肿瘤细胞) RPMI 1640培养液,采用MTT法观察不同配伍比例的余甘子总黄酮和总酚酸对人肝癌细胞株HepG2的体外抑制作用; 将64只小鼠随机分成8组,分别为正常对照组和余甘子总酚酸总黄酮配伍后的给药组,每天ig给药1次,连续9 d,采用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞的转化增殖,测定小鼠血清白介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)含量,测定不同配伍比例的余甘子总酚酸和总黄酮的免疫调节作用。结果: MTT法测定的结果均显示,不同比例余甘子总酚酸+总黄酮的配伍,对肝肿瘤细胞的抑制作用明显,其中以总黄酮比总酚酸10∶1(110 mg · L^-1∶11 mg · L^-1)时抑制率最高,抑制率为60.35%。余甘子总黄酮与总酚酸配伍能促进小鼠脾淋巴细胞增殖,其中每天以总酚酸329.5 mg ·kg^-1总黄酮228 mg ·kg^-1对小鼠ig给药组脾淋巴细胞增殖率最高,刺激指数比空白组高了0.786。并且促进小鼠淋巴细胞分泌因子的生成。结论: 余甘子总酚酸和总黄酮对肝脏肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用,并且能增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能的作用。     

Differential growth inhibitory effects of W. somnifera root and E. officinalis fruits on CHO cells

The Chinese Hamster ovary (CHO) cell line is widely used for measuring drug cytotoxicity and resistance. Therefore, the effects of two major Ayurvedic drugs (W. somnifera root and E. officinalis fruits) on the short and long-term growth of these cells were investigated. A standard 96-well plate assay was used to measure short-term growth. For assessment of long-term growth, the colony formation assay (CFA) was used, which measures clonogenic potential. This assay is the best measure of the cytotoxicity of anticancer drugs and the radio-sensitivity of tumor cells. As reported by others, the aqueous extracts of both herbal drugs were found to have short-term growth inhibitory effects on CHO cells when added to cells at the time of cell plating. However, this is the first report showing that these two herbal drugs have significantly different effects on the long-term growth of CHO cells. Thus, extracts of W. somnifera root, but not E. officinalis fruit, caused a reproducible, dose dependent, inhibition of colony formation of CHO cells.     

益肾活血通络中药联合来氟米特和甲氨喋呤治疗类风湿关节炎30例疗效观察

目的：比较益肾活血通络中药联合来氟米特和甲氨喋呤与来氟米特和甲氨喋呤联合小剂量激素治疗类风湿关节炎的疗效和不良反应。方法：将60例活动性类风湿关节炎患者按随机数字表法分为两组：实验组30例,口服益肾活血通络中药3次/日,来氟米特（LEF）20mg,1次/日,甲氨喋呤（MTX）10mg,1次/周,泼尼松5mg,1次/日;对照组：口服LEF20mg,1次/日,甲氨喋呤（MTX）10mg,1次/周,泼尼松10mg,1次/日。观察：晨僵时间,握力,关节肿胀数（SJC）关节压痛数（TJC）及休息痛。C-反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、类风湿因子（RF）、肝、肾功、血常规及尿常规,血糖。不良反应：如出现不良反应,应随时详细记录。结论：益肾活血通络中药联合来氟米特及甲氨喋呤和泼尼松5mg,1次/日与来氟米特联合甲氨喋呤联合泼尼松10mg 1次/日疗效相仿,不良反应发生率相当。用益肾活血通络中药治疗组泼尼松用量小而可以达到同样效果,避免长期用较大剂量泼尼松的副反应。