糖尿病周围神经病变“络损”辨证属性的研究

[目的]采用益气法、养血法、养阴法、温阳法,观察其对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经Na~+-K~+-ATP酶活性变化的影响,反证DPN"络损"的辨证属性。[方法]采用STZ诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、益气组、养血组、养阴组、温阳组,另设正常对照组。益气组灌胃四君子汤;养血组灌胃四物汤;养阴组灌胃六味地黄汤;温阳组灌胃金匮肾气丸;模型组和正常对照组灌胃同容积的蒸馏水,连续8周,观察糖尿病大鼠坐骨神经Na~+-K~+-ATP酶活性、血糖等指标的变化。[结果]模型组较正常组大鼠坐骨神经Na~+-K~+-ATP酶活性明显降低(P<0.05),益气组、养阴组能明显提高Na~+-K~+-ATP酶活性,养血组、温阳组较模型组有所提高,但无统计学意义(P>0.05)。[结论]糖尿病周围神经病变"络损"的中医辨证属性以气阴两虚为主。     

加味黄连温胆汤对慢性肾衰竭模型大鼠脑组织MDA、SOD及Na~+-K~+-ATP酶的影响

目的:探讨加味黄连温胆汤对慢性肾衰竭(CRF)模型大鼠脑组织MDA、SOD、Na~+-K~+-ATP酶表达的影响。方法:将40只Wistar大鼠随机分为空白对照组、假手术组、CRF模型组、中药组,每组10只。空白对照组、假手术组、CRF模型组予以生理盐水灌服,中药组予加味黄连温胆汤灌胃。6周后检测各组大鼠脑组织MDA、SOD、Na~+-K~+-ATP酶水平。结果:与空白对照组、假手术组比较,CRF模型组、中药组MDA含量均明显升高(P0.05);与CRF模型组比较,中药组MDA含量明显降低(P0.05);与空白对照组、假手术组比较,CRF模型组SOD含量均明显降低(P0.05),中药组无明显差异;与CRF模型组比较,中药组SOD水平明显升高(P0.05);与空白对照组、假手术组比较,CRF模型组、中药组Na~+-K~+-ATP酶活性均明显降低(P0.05);与CRF模型组比较,中药组Na~+-K~+-ATP酶活性明显升高(P0.05)。结论:加味黄连温胆汤可显著降低5/6肾切除大鼠脑组织MDA含量、提高SOD、Na~+-K~+-ATP酶活性水平,改善肾功能衰竭大鼠脑组织的氧化应激。     

乌芪通络胶囊对实验性大鼠坐骨神经VEGF及ROS影响的实验研究

目的：观察乌芪通络胶囊对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经组织中血管内皮生长因子（VEGF） mRNA表达及活性氧簇（ROS）水平的影响,初步探讨乌芪通络胶囊治疗糖尿病周围神经病变的机制.方法：雄性SD大鼠80只,随机选择14只大鼠作为对照组,造模组66只,后者经腹腔注射链脲佐菌素（STZ）造模,造模成功51只.将模型组随机分为乌芪通络胶囊组、弥可保组及模型组,每组17只,分开饲养.连续给药8周后处死,取坐骨神经,提取总RNA,采取实时荧光定量PCR法及免疫荧光方法测定DPN大鼠的坐骨神经组织中VEGF mRNA的相对表达水平及活性氧簇（ROS）的变化.结果：DPN模型组大鼠的坐骨神经中VEGF mRNA表达明显高于正常组大鼠（P＜0.05）,弥可保组和乌芪通络胶囊组VEGF mRNA的表达显著低于模型组（P＜0.05）,但显著高于正常组（P＜0.05）.乌芪通络胶囊组表达低于弥可保组（P＜0.05）.DPN模型组大鼠的坐骨神经ROS水平较正常组大鼠明显增加（P＜0.05）,弥可保组和乌芪通络胶囊组显著低于模型组（P＜0.05）,但显著高于正常组大鼠（P＜0.05）.乌芪通络胶囊组ROS水平比弥可保组低（P＜0.05）.结论：ROS、VEGF mRNA在糖尿病大鼠坐骨神经中表达增高,乌芪通络胶囊可以促使糖尿病大鼠ROS、VEGF mRNA表达降低,该变化可能与乌芪通络胶囊治疗作用有关.     

丹红注射液对糖尿病大鼠肾脏NO和Na~+-K~+-ATP酶活性的影响

目的:探讨丹红注射液对糖尿病大鼠肾脏NO和Na~+-K~+-ATP酶活性的影响。方法:清洁雄性SD大鼠,STZ诱导糖尿病大鼠20只,随机分为糖尿病组和丹红治疗组,另设正常对照组10只,丹红治疗组腹腔注射2m L/kg丹红注射液,其余给予等量生理盐水。4周后,检测血糖、血肌酐、血尿素氮,放射免疫法检测24h尿白蛋白定量,测定肾组织NO水平、NOS和Na~+-K~+-ATP酶活性。结果:与正常组比较,糖尿病大鼠血糖、蛋白尿、血肌酐、血尿素氮升高,肾组织NO、NOS升高,Na~+-K~+-ATP酶活性降低;与DM组相比,丹红治疗组蛋白尿、血肌酐、血尿素氮减轻,NO、NOS降低,Na~+-K~+-ATP酶活性升高。结论:丹红注射液可能通过抑制NO水平和Na~+-K~+-ATP酶活性保护糖尿病大鼠的肾脏。     

甘草内生菌对痰浊阻肺模型大鼠炎症因子、Na~+-K~+-ATP酶、AQP1、AQP5表达的影响

目的:比较甘草内生菌与宿主甘草对痰浊阻肺模型大鼠的祛痰作用,筛选甘草内生菌有效菌株。方法:将Wistar大鼠70只随机分为7组,即正常对照组、模型组、复方贝母氯化铵阳性对照组、野生甘草水煎液组及甘草内生菌各组(JTYF023、JTYB006、JTYB029)。采用SO2烟薰、低温及冷风刺激诱导痰浊阻肺大鼠模型。造模10 d后,给予各组大鼠相应药物灌胃,连续7 d。进行证候学观察,检测酚红排泌量、肺功能指标4项、炎症相关因子(TNF-α、ICAM-1、COX-2)的含量、肺组织Na~+-K~+-ATP酶活性,并以免疫组化法测定水通道蛋白AQP1、AQP5的分布及表达,探讨药物的祛痰机制。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠酚红排泌量增加,肺功能4项指标显著降低,炎症各相关因子的含量显著升高,Na~+-K~+-ATP酶活性及水通道蛋白AQP1、AQP5表达显著降低(P0.01)。与模型组比较,水煎液组、JTYB029组酚红排泌量显著降低,肺功能4项指标显著升高,炎症各相关因子的含量显著降低,Na~+-K~+-ATP酶活性及水通道蛋白AQP1、AQP5表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:筛选出1株(JTYB029)与野生甘草水煎液祛痰作用相当的内生菌。     

木香顺气丸对脾虚胃溃疡模型大鼠能量代谢和物质代谢的影响

目的探讨木香顺气丸对脾虚胃溃疡模型大鼠能量代谢和物质代谢的影响。方法采用大黄法造脾虚模型,在此基础上采用醋酸涂抹法造脾虚胃溃疡模型。采用HE染色法观察胃组织形态学变化,通过测定Na~+-K~+-ATP酶、COX水平考察木香顺气丸对脾虚胃溃疡大鼠能量代谢的影响,测定SDH、α-OGDC、GP水平考察对物质代谢的影响,同时测定胃组织中SOD、MDA水平。结果与空白组比较,模型组大鼠肝组织Na~+-K~+-ATP酶、COX,以及胃组织SOD水平显著降低,肝组织α-OGDC、GP水平,胃组织MDA水平显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,木香顺气丸高剂量组能显著升高肝组织Na~+-K~+-ATP酶、COX水平,以及胃组织SOD水平,能显著降低肝组织α-OGDC、GP水平,以及胃组织MDA水平(P0.05,P0.01)。结论木香顺气丸能调节脾虚胃溃疡大鼠能量代谢和物质代谢紊乱,同时增强抗氧化能力而发挥抗溃疡作用。     

黄竹清脑口服液对脑出血大鼠脑组织SOD、Na~+-K~+-ATP酶的影响

目的:探讨黄竹清脑口服液对急性脑出血大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、Na~+-K~+-ATP酶的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组、造模组,造模组采用自体血脑内注入建立脑出血模型,造模成功大鼠分为脑出血模型组、西药对照组、中药黄竹清脑口服液高、中、低剂量组,灌胃给药7天后断头取脑组织,测定其中SOD、Na~+-K~+-ATP酶含量。结果:模型组与空白组相比,脑组织中SOD、Na~+-K~+-ATP酶活性明显降低,有统计学意义(P0.05);黄竹清脑口服液高、中剂量组明显优于西药对照组和中药低剂量组,有统计学意义(P0.05),而且高、中剂量组之间无显著性差异(P0.05);黄竹清脑口服液低剂量组与西药对照组之间无显著性差异(P0.05)。结论:在脑出血急性期,黄竹清脑口服液可显著增强SOD活力,提高Na~+-K~+-ATP酶活性,具有抗氧化、减轻细胞内水肿等作用,保护脑神经细胞。     

基于水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+ -K~+ -ATP酶活性变化研究湿阻中焦证的水液代谢机制

目的:以前期研究的水通道蛋白为平台,通过观察并分析水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+-K~+-ATP酶活性变化,揭示湿阻中焦致水液代谢紊乱及平胃散对其修复作用机制的科学内涵,为中医临床治疗本证型疾病提供实验参考;同时搭建中药复方水通道调节剂的研究平台。方法:模拟"外湿过盛,困阻脾胃、饮食不节,湿从内生、情志不遂,气机受阻、水湿不运三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。用蛋白定量法测定Na~+-K~+-ATP酶活性,用酶联免疫法(ELISA)测定肾脏组织KCC1,KCC3,KCC4,NKCC1的含量。结果:与空白组比较,模型组肾脏KCC1、KCC4含量升高,KCC3、NKCC1、Na~+-K~+-ATP酶活力降低,与模型组比较,自然恢复组肾脏KCC1、KCC3、NKCC1含量降低,Na~+-K~+-ATP酶活力明显升高(P0.01),KCC4含量有上升趋势,经药物干预后,各给药组KCC1含量均明显降低(P0.01),平胃散中剂量组KCC3、KCC4含量明显升高(P0.01),平胃散低剂量组NKCC1含量明显降低(P0.01);平胃散低剂量组肾脏Na~+-K~+-ATP酶活力明显升高(P0.01);呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+-K~+-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义(P0.01);与自然恢复组比较,平胃散中剂量组肾脏KCC1、KCC3、KCC4含量及Na~+-K~+-ATP酶活力有上升趋势,平胃散低剂量组NKCC1含量下降明显(P0.01),呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+-K~+-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:(1)湿阻中焦证模型不仅能够影响体内能量代谢,还能够影响KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量表达,这可能是湿阻中焦导致水代谢输布障碍的机制之一;(2)平胃散能够调整Na~+-K~+-ATP酶活性和KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量分布参与能量代谢和水液代谢调控,这可能是平胃散燥湿运脾、行气导滞、散中焦之湿阻治疗湿阻中焦证的分子机理之一;(3)水协同转运蛋白之间可能存在互补代偿机制。     

寒性中药对大鼠骨骼肌能量代谢相关因子的影响

目的:探讨6味寒性中药对大鼠骨骼肌能量代谢相关因子的影响.方法:6味寒性中药(苦参、栀子、黄柏、黄芩、黄连和龙胆草)的水提取物分别按6.0,7.0,8.4,6.0,7.0,4.0 g·kg~(-1)灌胃大鼠30 d,测定大鼠骨骼肌Na~+-K~+-ATP酶活性、Ca~(2+)-ATP酶活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性、骨骼肌糖原含量和骨骼肌解偶联蛋白3(UCP3)的mRNA表达水平.结果:6味寒性中药能显著降低Na~+-K~+-ATP酶活性和显著增加肌糖原含量;有降低Ca2+-ATP酶活性的趋势,但只有黄芩达显著水平(P＜0.05);有降低sDH活性的趋势,其中黄芩、黄柏和龙胆草达极显著水平(P＜0.01),黄连达显著水平(P＜0.05);除黄柏有降低UCP3 mRNA趋势外,其他5味中药都能极显著地降低UCP3 mRNA表达水平(P＜0.01).结论:寒性中药可能通过减少葡萄糖的利用和SDH的活性从而减少ATP的生成,降低Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性从而减少ATP的消耗,减少UCP3 mRNA的表达从而减少产热,起到调节骨骼肌能量代谢的作用.     

推拿对运动性疲劳大鼠腓肠肌肌浆网相关代谢酶的影响

目的探讨推拿对运动性疲劳大鼠腓肠肌肌浆网代谢相关酶活性的影响。方法 10周龄健康雄性Wistar大鼠60只,采用跑台运动的方法建立运动性疲劳模型,剔除不善运动大鼠30只,剩下30只随机分为空白组、模型组、推拿组各10只,推拿组每天跑台运动后推拿足三里、承山穴,每穴5 min,第28 d观察大鼠腓肠肌肌浆网Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果①模型组SOD与空白组比较,SOD活性明显降低(P0.05);推拿组与模型组比较,SOD活性显著提高(P0.05)。②Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-ATP酶组间比较,有上升趋势(P0.05)。结论推拿可以通过影响SOD、Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-ATP酶的活性达到缓解运动性疲劳的作用。