去铁胺通过抑制氧化应激反应促进小鼠深部组织压力性损伤创面愈合

目的:探讨去铁胺治疗小鼠深部组织压力性损伤(deep tissue pressure injury,DTPI)的效果和机制。方法:将去铁胺溶于无菌生理盐水中,通过CCK-8法检测不同浓度去铁胺对人永生化表皮细胞(HaCaT)活力的影响;利用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒测定去铁胺对HaCaT细胞内ROS含量的影响。构建DTPI小鼠模型,分别利用电感耦合等离子体质谱仪和普鲁士蓝染色检测肌肉组织中铁离子的含量和铁沉积情况。实验随机分为假手术组、模型组及去铁胺(2 g/L和20 g/L)组,每组6只小鼠,通过伤口愈合率、HE染色、Masson染色、免疫组化染色和Western blot方法评价组织修复情况。结果:去铁胺的细胞相容性良好,对HaCaT细胞无显著毒性,并显著抑制细胞中ROS的产生,且呈浓度依赖性。DTPI肌肉组织中铁离子异常沉积,其铁含量较正常组显著升高(P0.05)。去铁胺有效促进DTPI的伤口愈合,其中20 g/L去铁胺组愈合速度最快,其新生血管密度和胶原沉积显著优于模型组,且炎症细胞的浸润显著减少(P0.01)。Western blot结果表明去铁胺能上调血管内皮生长因子α(vascular endothelial growth factor-α,VEGF-α)、低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的表达,并抑制肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达(P0.01),且药物组之间无显著的差异性。结论:DTPI小鼠肌肉组织中铁离子异常沉积,存在铁超载现象,去铁胺通过抑制氧化应激反应促进DTPI伤口愈合。     

葛根素减轻KKAy小鼠血管内皮细胞炎性反应

目的 探究葛根素(PUR)对KKAy小鼠(2型糖尿病模型小鼠)血管内皮细胞炎性反应的干预机制。方法 将C57BL/6J小鼠作为对照组,KKAy小鼠随机分为糖尿病组、二甲双胍(MH)及葛根素(PUR)组,每组10只。检测各组糖代谢指标,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-1(IL-1)、血管内皮生长因子(VEGF)含量变化;TUNEL法检测血管组织细胞凋亡;RT-qPCR及Western blot检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及蛋白表达。结果 与对照组相比,糖尿病组糖代谢指标明显升高,细胞凋亡增加;血清中TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、IL-1、VEGF含量明显升高(P<0.05),血管组织中VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。与糖尿病组相比,MH组及PUR组糖代谢指标明显改善,细胞凋亡明显减轻;TNF-α、IFN-γ、TGF-β1、IL-1、VEGF含量明显降低(P<0.05);VCAM-1和I...     

ARA290增强巨噬细胞胞葬功能促进小鼠皮肤创面愈合

目的 探讨促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）衍生肽ARA290对小鼠皮肤创面愈合的作用及机制。方法 选用C57BL/6小鼠（SPF级）,在背部皮肤切创造模,分为PBS组,ARA290低剂量组（100μg/kg）和ARA290高剂量组（200μg/kg）,造模后每日创面周缘皮下注射100μl PBS或ARA290。每日创面拍照,记录创面愈合率。RT-PCR检测创面TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及TGF-β1表达,并用Tunel染色计算创面凋亡细胞数目。体外共培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW)和凋亡Jurkat细胞,流式细胞术检测巨噬细胞吞噬凋亡细胞的吞噬率;RT-PCR检测巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10及TGF-β1的表达。结果 ARA290高剂量组创面愈合快于ARA290低剂量组和PBS组,ARA290低剂量组创面愈合快于PBS组;ARA290高剂量组创面TNF-α、IL-6及IL-1β表达低于PBS组,而IL-10和TGF-β1表达高于PBS组,且凋亡细胞数目少于PBS组。ARA290组巨噬细胞吞噬凋亡细胞的吞噬率高...     

方格星虫水提物促小鼠皮肤创伤愈合及作用机制的研究

为探讨方格星虫水提物(SNE)促进小鼠皮肤创伤愈合的活性及其机制,测定SNE的止血作用,建立小鼠全皮层创伤模型,观察伤口愈合形态并测定愈合率;采用苏木素-伊红(HE)、马森(Masson)染色、透射电镜(TEM)观察创面的组织结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞因子及其相关蛋白的表达水平。结果显示,SNE具有止血作用,能明显提高小鼠创伤愈合率并缩短掉痂时间(P 0.05)。研究中,SNE组小鼠表皮生长完全、创面毛细血管和胶原纤维增生明显优于空白(NT)组;第7 d,SNE明显降低白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平(P 0.05);第28 d,相比于NT组,SNE组的Smad7表达水平上调,TGF-βII型受体(TGF-βRII)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平下调,差异具有统计学意义(P 0.05),而与云南白药组(PC组)的差异无统计学意义(P 0.05)。结果表明,SNE具有促进伤口愈合活性和抑制增生性瘢痕生成作用,其作用机制与止血、调节炎症因子、促进胶原纤维重塑以及调控TGF-β/Smads信号通路传导有密切关联。SNE作为皮肤创伤修复和抑制瘢痕制剂,具有潜在的临床应用价值。     

姜黄素减弱Aβ_(25-35)致大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应

目的:研究姜黄素(Cur)对β-淀粉样蛋白(Aβ)刺激下大鼠原代小胶质细胞活力及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:取新生SD大鼠大脑皮层行混合胶质细胞原代培养,摇床振摇法分离小胶质细胞并行Iba-1免疫细胞化学鉴定。在培养的小胶质细胞中加入Aβ_(25-35)作用24 h后,观察细胞形态并用CCK-8实验确定造模浓度及Cur的治疗浓度。将大鼠原代小胶质细胞分为5组:正常组、Aβ_(25-35)模型组、Cur组、Aβ_(25-35)+Cur治疗组、Aβ_(25-35)+DMSO组;用Western blot法检测细胞内HMGB1、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、NF-κB的表达情况,取上清液用ELISA检测HMGB1、IL-1β、TNF-α的表达。结果:Iba-1的阳性率在95%以上,培养的大鼠原代小胶质细胞可用于实验。Western blot实验结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显升高(P0.05),加入姜黄素后细胞内的HMGB1、RAGE和NF-κB表达明显减少(P0.05)。ELISA结果示Aβ_(25-35)活化诱导后,细胞上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显升高(P0.05),加入姜黄素后上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α明显下降(P0.05)。结论:姜黄素可明显抑制Aβ_(25-35)刺激下大鼠原代小胶质细胞的神经炎症反应。     

姜黄素对SiO_2诱导小鼠矽肺模型TNF-α、TGF-β1表达的影响

目的:研究姜黄素对SiO2所致小鼠矽肺模型血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:将实验小鼠随机分为5组, 即假手术组、模型组、姜黄素干预组(高、中、低剂量).于姜黄素干预第14天、 42天后分别每组各处死6、 9只, 采用ELISA法测定肺组织和血清中TNF-α、 TGF-β1的含量.结果:模型组的肺组织炎症反应、纤维化程度较明显;与假手术组比较, 肺组织匀浆、血清中TGF-β1、 TNF-α含量均明显升高( P < 0.01).给予姜黄素干预后, 可以不同程度地降低肺组织匀浆及血清中TGF-β1、 TNF-α的含量( P <0.05), 同时纤维化程度减轻.结论:姜黄素能降低SiO2致小鼠矽肺模型肺组织和血清中TNF-α、 TGF-β1水平, 可能通过下调上述细胞因子水平而发挥抗肺纤维化作用.     

阿托伐他汀对ApoE基因敲除小鼠血管外膜成纤维细胞表型的影响

目的:观察载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化斑块形成过程中血管外膜α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化,同时探讨阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:选择40只6周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组和阿托伐他汀干预组,给予高脂饲料喂养。阿托伐他汀干预组给予阿托伐他汀(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,模型组给予等量生理盐水灌胃。20只同龄C57BL/6小鼠给予普通饲料喂养作为正常对照组。各组小鼠喂养至10、15周龄,在各个时点处死动物,取升主动脉制备连续切片,通过Movat染色进行形态学观察,测量并计算血管外膜厚度及斑块相对面积;天狼星红染色检测胶原的表达;免疫组织化学染色检测不同时点血管外膜α-SMA及TGF-β1的表达变化。用实时荧光定量PCR检测胸主动脉外膜中TGF-β1 mRNA的表达水平,通过Western blot法检测主动脉外膜中TGF-β1蛋白的表达。结果:与模型组相比,阿托伐他汀干预组的斑块相对面积明显减小,血管外膜厚度及胶原合成明显下降;免疫组化结果显示15周龄模型组血管外膜α-SMA及TGF-β1的表达高于10周龄模型组;与模型组相比,阿托伐他汀干预组血管外膜α-SMA及TGF-β1的表达明显下降。各时点模型组的TGF-β1 mRNA和蛋白的表达明显高于对照组,给药干预后TGF-β1 mRNA和蛋白的表达明显降低。15周龄模型组血管外膜TGF-β1 mRNA和蛋白的表达高于10周龄模型组。结论:阿托伐他汀可能通过下调TGF-β1的表达调控血管外膜成纤维细胞表型的改变,进而延缓ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的进程。     

姜黄素对创面愈合作用的影响及其机制的初步探讨

目的 观察姜黄素(Curcumin,Cur)对大鼠皮肤创面愈合作用的影响及其机制.方法 取30只雄性SD大鼠,用6 mm打孔器在每只大鼠背部制作4个直径为6 mm大小创面模型.每只大鼠的每个创面每天施加不同浓度姜黄素(30、15、0mg/mL)及PBS干预创面的愈合.在术后第1、3、7、10、14 d随机取6只大鼠计算各创面愈合速率,采用免疫组织化学法检测各组中不同时间点各创面中血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达量,采用免疫荧光法检测各组中不同时间点各创面中M1型及M2型巨噬细胞含量.结果 溶媒剂对创面愈合未见明显影响;与对照组相比,Cur15组及Cur30组创面愈合明显增快;Cur15组及Cur30组术后第7天和第10天创面VEGF免疫组化平均光密度数值均多于相同时间点Cur0组及PBS组(P＜0.05);Cur15组术后第3、7和10天及Cur30组术后第7天和第10天bFGF免疫组化平均光密度数值均多于相同时间点Cur0组及PBS组(P ＜0.05);Cur15组及Cur30组术后第3和7天创面CD68与诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide sythase,iNOS)双阳性细胞百分比均少于相同时间点Cur0组及PBS组(P＜0.05);Cur15组术后第3和7天及Cur30组术后第3、7、10和14天创面CD68与精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)双阳性细胞百分比均多于相同时间点Cur0组及PBS组(P＜0.05).结论 Cur能够明显促进创面愈合,其机制可能与Cur对M1与M2型巨噬细胞的极化调节有关;Cur浓度为15 mg/mL时创面愈合速率最快.     

姜黄素抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞系表型转化

目的探讨姜黄素抑制TGF-β1诱导的肾纤维化的作用及分子生物学机制。方法应用10 ng/mL TGF-β1单独或联合姜黄素(Cur)(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)共同作用人肾小管上皮细胞系(HKCs)72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态,免疫组化检测纤维细胞特异蛋白-1(FSP-1)表达;同时,通过Western blot检测肾小管上皮细胞标志物E-cardhrin和细胞角化蛋白以及基质标志物波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的表达变化,以及AKT/mTOR信号通路关键蛋白的表达。结果HKCs贴壁增殖,呈铺路石样外观。TGF-β1单独刺激能明显促进细胞由上皮样形态向纤维样细胞形态转化。当TGF-β1与姜黄素联合作用于HKCs时,姜黄素在12.5~50μmol/L浓度时能明显对抗TGF-β1诱导的细胞形态转变而维持HKCs细胞铺路石样外观,同时,TGF-β1能明显抑制HKCs细胞E-cardhrin和角化蛋白基因表达(P<0.05,P<0.01),而促进FSP1阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01);上调波形蛋白、α-SMA和I型胶原的表达(P<0.05,P<0.01);并且,AKT/mTOR信号通路关键蛋白Akt、mTOR、p70S6K、4E-BP1和eIF4E的磷酸化水平表达也显著增加(P<0.05,P<0.01)。而姜黄素能抑制TGF-β1诱导的HKCs表型转化,同时下调TGF-β1诱导AKT/mTOR信号通路关键蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论姜黄素通过抑制Akt/mTOR信号通路对抗TGF-β1诱导的上皮细胞-间质细胞转化,可能是姜黄素抗肾纤维化的关键分子机制之一。     

蚓激酶对哮喘小鼠免疫相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3的影响北大核心CSCD

目的:观察蚓激酶对哮喘小鼠炎症因子IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平和免疫相关转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达的影响。方法:40只BALB/c雄性小鼠随机分为4组:空白对照组(空白组)、哮喘模型组(模型组)、地塞米松组(地米组)和蚓激酶组,每组10只。第1、14天模型组、地米组和蚓激酶组腹腔注射OVA+Al(OH)3致敏,21~27 d雾化吸入5%OVA建立哮喘模型,每次雾化激发1 h后,地米组、蚓激酶组分别灌胃给予地塞米松溶液、蚓激酶溶液治疗7 d,空白组、模型组灌胃等量生理盐水。末次给药24 h后处死取材,HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6、IL-1β、TGF-β、TNF-α水平,RT-PCR检测肺组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA水平,Western blot检测肺组织T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3蛋白表达。结果:肺组织病理观察显示,模型组小鼠管腔及周围炎症细胞浸润明显,黏膜水肿增厚,地米组和蚓激酶组小鼠肺部炎症浸润及黏膜增厚水肿均较模型组好转。与空白组相比,模型组IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平显著升高,GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组相比,地米组和蚓激酶组IL-6、TGF-β、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),T-bet、Foxp3 mRNA表达升高(P<0.01),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。结论:蚓激酶可降低炎症因子IL-6、TGF-β、IL-1β及TNF-α水平,抑制GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达,诱导T-bet、Foxp3 mRNA及其蛋白表达,且可能通过降低相关前炎症因子水平调节免疫细胞转录因子表达。     

TGF-β3基因转染成纤维细胞促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的实验研究

目的观察TGF-β3基因转染的成纤维细胞对深Ⅱ度大鼠烫伤模型创面愈合的影响。方法将90只Wistar成年大鼠随机分为模型对照组(C组)、表皮转化生长因子组(EGF组)和TGF-β3转基因成纤维细胞组(TGF-β3组),制作10% TBSA烫伤模型,各组给予对应治疗,检测各组大鼠的创面愈合率,HE染色观察烫伤创面组织变化,SP法观察烫伤皮肤组织中TGF-β3蛋白表达情况。结果烫伤后14d、21d,创面愈合率TGF-β3组最高,与EGF组及C组之间的差异有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);烫伤后14d及21d,C组、EGF组与TGF-β3组之间TGF-β1及TGF-β2蛋白表达差异有统计学意义(分别为P0.05,P0.01);烫伤后1d到21d,TGF-β3组与C及EGF组之间的TGF-β3蛋白表达的差异均有统计学意义(P0.01)。结论 TGF-β3转基因转染成纤维细胞可能通过在创面上持续分泌TGF-β3蛋白,降低TGF-β1及TGF-β2的水平,从而促进创面的愈合。     

莪术醇通过上调miR-214抑制TGF-β诱导的RL-95细胞生长及纤维化相关蛋白表达

目的:探讨莪术醇对转化生长因子β(TGF-β)诱导的子宫内膜癌RL-95细胞生长及纤维化相关蛋白表达的影响,并探讨其机制是否与调控微小RNA-214(miR-214)表达有关。方法:以TGF-β诱导RL-95细胞纤维化作为子宫内膜异位症细胞模型。设置对照(control)组、TGF-β组、TGF-β+低剂量莪术醇组、TGF-β+中剂量莪术醇组、TGF-β+高剂量莪术醇组、TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-NC组和TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-214组。运用CCK-8法、流式细胞术、RT-qPCR和Western blot检测细胞活力、细胞周期分布、miR-214表达以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col I)蛋白表达。结果:与control组比较,TGF-β组RL-95细胞活力、S期细胞比例及α-SMA和Col I蛋白表达显著升高,G₀-G₁期细胞比例和miR-214表达显著降低(P<0.05)。与TGF-β组比较,TGF-β+中剂量莪术醇组和TGF-β+高剂量莪术醇组RL-95细胞活力、S期细胞比例及α-SMA和Col I蛋白表达显著降低,G₀-G₁期细胞比例和miR-214表达显著升高(P<0.05)。与TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-NC组比较,TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-214组RL-95细胞活力、S期细胞比例及α-SMA和Col I蛋白表达显著升高,G₀-G₁期细胞比例显著降低(P<0.05)。结论:莪术醇通过上调miR-214表达抑制TGF-β诱导的RL-95细胞生长和纤维化相关蛋白表达,进而对子宫内膜异位症纤维化具有潜在治疗作用。     

大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤时姜黄素后处理对肝细胞凋亡的影响

背景:姜黄素预处理可减轻肢体缺血再灌注对肝脏的损伤,但姜黄素后处理对肝脏冷缺血再灌注损伤是否有保护作用及其机制目前研究甚少。目的:探讨大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤时姜黄素后处理对肝细胞凋亡的影响。方法:选取成年雄性SD大鼠80只,采用随机数字表法将其分成4组(n=20):假手术组、冷缺血再灌注组、姜黄素后处理组、地塞米松组。使肝脏血流处于完全阻断状态,随后以脾静脉作为流入道和右肾上腺静脉作为流出道注入0℃复方乳酸林格液,冷灌注30min;停止冷灌注后,结扎近端脾静脉和右肾上腺静脉,切除脾脏,随即恢复肝脏血流,完成制作冷缺血再灌注模型。在大鼠冷缺血30min后,姜黄素后处理组经尾静脉注射姜黄素60 mg/kg,地塞米松组尾静脉注射地塞米松0.5 mg/kg,其他组以等量的生理盐水替代。再灌注6 h时经下腔静脉取血,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转移酶水平,随后处死大鼠,取肝组织检测丙二醛水平;采用苏木精-伊红染色观察肝脏病理变化;Hoechst33258染色法检测肝细胞凋亡指数;Westernblot检测肝组织Bcl-2和Bax蛋白表达;RT-PCR检测肝组织促细胞凋亡基因Caspase-9m RNA表达;ELISA检测肝组织肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平。结果与结论:①与假手术组比较,冷缺血再灌注组天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转移酶、丙二醛和凋亡指数明显升高(P<0.05);苏木精-伊红染色切片可见肝血窦内有大量炎性细胞浸润,肝细胞嗜酸性变,胞浆内疏松化,肝细胞呈气球样变,偶可见斑片状坏死,散在点状坏死灶;Bcl-2表达下降,Bax表达明显升高(P<0.05);Caspase-9 mRNA表达、肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平明显升高(P<0.05);②与冷缺血再灌注组比较,姜黄素后处理组天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转移酶、丙二醛和凋亡指数明显下降(P<0.05);苏木精-伊红染色可见肝血窦内炎性浸润明显减轻,胞浆嗜酸性变和气球样变的肝细胞明显减少,但偶可见少量散在的点状坏死;Bcl-2表达升高,Bax表达明显下降(P<0.05);Caspase-9 mRNA表达、肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平明显下降(P<0.05);③姜黄素后处理组上述各指标与地塞米松组比较差异无显著性意义(P>0.05);④综上所述,姜黄素后处理可减轻大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤,其作用机制可能通过上调Bcl-2/Bax比值,抑制凋亡启动子Caspase-9mRNA的表达,减少炎性因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的释放,发挥抗凋亡的肝保护作用。     

缝隙连接在TGF-β1 诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨缝隙连接是否参与转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组:对照组、TGF-β₁组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸(18α-GA)组和TGF-β₁+18α-GA组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,免疫荧光技术观察细胞中缝隙连接蛋白(Cx)43和Cx40蛋白表达及定位,Western blotting法检测细胞中Cx43和Cx40蛋白表达, 染料示踪分子传递法(划痕标记染料传输法)检测细胞的缝隙连接功能。结果: (1)与对照组相比,TGF-β₁组MTT法测得A值及细胞周期S期比例增高 (P<0.05),细胞增殖活性增强。18α-GA组降低(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+ 18α-GA组A值及S值比例均降低(P<0.05),细胞增殖活性减弱。(2)免疫荧光技术检测细胞中Cx43与Cx40蛋白表达呈阳性,两者共定位于胞浆。(3)与对照组相比,TGF-β₁组Cx43蛋白表达增强(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05),18α-GA组Cx43和Cx40表达均减弱(P<0.05),与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组Cx43表达减弱(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05)。(4)与对照组相比,TGF-β₁组缝隙连接功能明显增强(P<0.05);18α-GA组缝隙连接功能明显减弱(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组缝隙连接功能显著降低(P<0.05)。结论: TGF-β₁主要通过上调SHR血管平滑肌细胞Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能增强,从而促进了SHR血管平滑肌细胞的增殖,而Cx40蛋白表达可能不起主要作用。     

姜黄素通过抑制内质网应激和JNK通路过度活化减轻小鼠肺缺血再灌注损伤

 目的:探讨姜黄素（curcumin,Cur）是否通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路过度活化来减轻小鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤。方法:采用C57BL/6J小鼠左侧肺原位I/R损伤模型。实验随机分为6组（每组10只）,包括假手术组（sham组）、I/R组、DMSO组（I/R+DMSO组）和Cur组（I/R+Cur低、中、高剂量组）。实验结束后处死小鼠,留取左肺,检测肺湿干重比（W/D）和总肺水含量（TLW）;光镜、电镜观察肺组织形态结构变化,并进行肺组织损伤评估（IQA）;RT-PCR检测JNK和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的mRNA表达;Western blotting检测磷酸化JNK（p-JNK）和GRP78的蛋白表达;原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测肺细胞凋亡指数（AI）。结果:与sham组相比,I/R组和DMSO组W/D、TLW、IQA及AI均明显升高（P<0.01）,JNK、GRP78 mRNA和p-JNK、GRP78 蛋白表达量上升（P<0.01）,光镜、电镜均显示肺组织结构出现明显损伤性变化。I/R组与DMSO组相比,上述各指标无显著差异（P>0.05）。与I/R组和DMSO组相比,I/R+Cur低、中、高剂量组各组GRP78 mRNA和蛋白表达量无明显变化（P>0.05）,W/D、TLW、IQA及AI下降（P<0.05或P<0.01）且肺组织损伤减轻,JNK mRNA和p-JNK蛋白质表达量亦下降,以I/R+Cur高剂量组下降最为明显（P<0.01）。结论: 缺血/再灌注引发肺组织细胞发生过度的内质网应激,损伤肺组织。Cur能减轻肺缺血/再灌注损伤,其机制可能与抑制JNK信号通路的过度活化有关。     

Suppressive effects of a pyrazole derivative of curcumin on airway inflammation and remodeling

To advance the control of airway epithelial cell function and asthma, we investigated the effects of a new curcumin derivative, CNB001, which possesses improved pharmacological properties. Normal human bronchial epithelial (NHBE) cells were stimulated with synthetic double-stranded RNA, Poly(I:C). CNB001 significantly suppressed IL-6, TNF-α, and GM-CSF production by NHBE cells, and did so more effectively than did curcumin or dexamethasone (DEX). CNB001 significantly inhibited the decrease of E-cadherin mRNA expression and increase of vimentin mRNA expression observed in NHBE cells induced by a combination of TGF-β1 and TNF-α, which are markers of airway remodeling. In NHBE cells stimulated by TGF-β1, CNB001 significantly downregulated the level of active serine peptidase inhibitor clade E member (SERPINE) 1, which is also reported to be related to airway remodeling. Whereas DEX alone significantly increased the active SERPINE1 level, the combination of DEX and CNB001 significantly suppressed active SERPINE1. In addition, CNB001 significantly suppressed neutrophil infiltration, IL-6, TNF-α, IL-13 and active SERPINE1 production in bronchoalveolar lavage fluid of the murine asthma model, which was not observed in the case of DEX. In conclusion, the curcumin derivative, CNB001, is a promising candidate to treat asthma associated with neutrophilic airway inflammation and remodeling.     

HSYA对骨关节炎大鼠膝关节软骨损伤的修复作用研究

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对骨关节炎(OA)大鼠膝关节及MMP-3、TGF-β1、Notch1的影响。方法将25只大鼠随机分为正常组(假手术)、OA组(模型大鼠)、低HSYA组(模型大鼠尾部注射2.5 mg/kg HSYA)、中HSYA组(模型大鼠尾部注射5.0 mg/kg HSYA)、高HSYA组(模型大鼠尾部注射10.0 mg/kg HSYA)。采用ELISA检测血清指标IL-1β、TNF-α,Pelletier评分评估膝关节软骨损伤情况,HE染色观察组织病理形态并以Mankin评分进行评估,免疫组化检测MMP-3阳性表达,Western blot检测TGF-β1、Notch1蛋白水平。结果OA组血清中IL-1β、TNF-α水平高于其余各组(P<0.05),高HSYA组IL-1β、TNF-α水平低于低HSYA组和中HSYA组(P<0.05)。各组大鼠Pelletier评分组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。OA组软骨和滑膜组织Mankin评分高于其余各组(P<0.05),高HSYA组Mankin评分低于低HSYA组、中HSYA组(P<0.05)。各组大鼠关节组织MMP-3阳性细胞率组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠关节组织TGF-β1、Notch1蛋白水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论HSYA能够降低OA大鼠血清炎性因子IL-1β、TNF-α水平,缓解滑膜组织损伤,且存在浓度依赖性,其机制与抑制MMP-3和Notch1表达、提高TGF-β1水平相关。     

PPAR-γ 过表达缓解肾缺血再灌注大鼠纤维化和炎性因子的 异常表达

目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体 γ (PPAR-γ) 过表达对大鼠肾缺血再灌注 (RI/ R) 损 伤的保护作用, 并探讨其作用机制。 方法 将 40 只 SD 大鼠随机分为对照组、 RI/ R 模型组、 RI/ R + LV 组 和 RI/ R + PPAR-γ 组, 10 只/ 组, 采用手术阻断双侧肾动脉血流构建 RI/ R 损伤模型; RI/ R + PPAR-γ 组于 恢复再灌注前经尾静脉注射 PPAR-γ 重组慢病毒载体, RI/ R + LV 组注射含有空质粒的慢病毒载体, RI/ R 模型组注射等量生理盐水。 再灌注结束后, 通过 HE 和 Masson 染色观察肾组织病理改变; 全自动生化分析 仪检测尿蛋白、 血肌酐 ( Scr)、 血尿素氮 ( BUN) 水平; ELISA 法检测血清和肾组织肿瘤坏死因子 α (TNF-α)、 白介素 6 ( IL-6) 含量; RT-PCR 检测肾组织 PPAR-γ mRNA 表达; 蛋白质印迹法检测肾组织 PPAR-γ、 转化生长因子 β (TGF-β)、 α 平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)、 纤维连接蛋白 (FN) 以及凋亡相关蛋 白 Bax、 Bcl-2、 caspase-3、 Cleaved caspase-3、 caspase-9、 Cleaved caspase-9 表达。 结果 与对照组比较, RI/ R 模型组 PPAR-γ 水平降低 (P< 0. 05), 尿蛋白、 Scr、 BUN、 TNF-α、 IL-6、 Bax / Bcl-2、 Cleaved caspase-3 / caspase-3、 Cleaved caspase-9 / caspase-9、 TGF-β、 α-SMA、 FN 水平升高 (P< 0. 05)。 与 RI/ R 模型组比较, RI/ R + PPAR-γ 组 PPAR-γ 水平升高 ( P< 0. 05), 尿蛋白、 Scr、 BUN、 TNF-α、 IL-6、 Bax / Bcl-2、 Cleaved caspase-3 / caspase-3、 Cleaved caspase-9 / caspase-9、 TGF-β、 α-SMA、 FN 水平降低 (P< 0. 05)。 结论 过表 达 PPAR-γ 可通过减少促炎细胞因子释放, 改善肾纤维化而减少 RI/ R 损伤。     

ROCK抑制剂对青光眼术后瘢痕形成的作用机制

目的：探讨Rho 相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）抑制剂对青光眼手术后瘢痕形成的影响,分析 ROCK抑制剂对瘢痕修复的作用机制。方法：健康大鼠分为模型组和ROCK抑制剂组（RR组）,采用MTT法测 定瘢痕组织中成纤维细胞增殖情况,RT-PCR 检测滤过道瘢痕组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、α 平滑肌肌动蛋 白（α-SMA）、ROCK mRNA表达,免疫组织化学检测白细胞介素（IL）-1β（IL-1β）、α-SMA 蛋白阳性表达,免 疫印迹检测IL-1β、IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）、α-SMA 蛋白表达。结果：模型组成纤维细胞的抑制率低 于RR组的抑制率,差异有统计学意义。RT-PCR 检测结果显示模型组TGF-β1、ROCK、α-SMA mRNA 的表达高 于RR组。免疫组织化学检测结果显示RR组IL-1β、α-SMA 的阳性表达显著低于模型组。免疫印迹检测结果显示 模型组IL-1β、IL-6、VEGF、α-SMA 的表达水平高于RR组,差异均有统计学意义。结论：ROCK抑制剂可通过 降低TGF-β1 mRNA、ROCK mRNA、IL-1β、IL-6、VEGF、α-SMA 蛋白的表达进而抑制成纤维细胞的增殖,阻 碍青光眼术后瘢痕的形成。