日本血吸虫感染小鼠的脾脏CD8+PD-1+T细胞的功能特性

目的研究日本血吸虫感染后小鼠脾脏CD8+PD-1+T细胞含量及功能的变化情况。方法使用日本血吸虫感染5～6周的C57BL/6小鼠,分离脾脏,制备石蜡切片,HE染色,观察组织病变情况;分离淋巴细胞并计数,运用流式细胞术检测CD8+PD-1+T细胞的含量;使用细胞表面染色的方法观察CD8+PD-1+T细胞的CD25、CD69、CXCR5、CD40L的表达变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌情况。结果日本血吸虫感染后,小鼠体质量下降(P0.05),而脾脏质量和体积均明显上升(P0.01);脾脏中CD8+PD-1+T细胞的比例和绝对值数目增加(P0.01);感染组CD8+PD-1+T细胞高表达CD69(P0.05),而感染组CD8+PD-1+T细胞CXCR5分子表达显著下降(P0.05);经PMA与离子霉素刺激以后,CD8+PD-1+T细胞IFN-γ分泌增加(P0.05)。结论血吸虫感染5～6周小鼠脾脏中CD8+PD-1+T细胞为一群主要的活化细胞群可大量分泌IFN-γ,在血吸虫感染疾病发挥重要的免疫调节作用。     

补肾健脾方干预PPD 诱导小鼠T 细胞耗竭的实验研究

目的:研究结核分枝杆菌抗原持续刺激致T 细胞功能耗竭的机制,探究补肾健脾方对T 细胞功能耗竭的治疗作用。方法:利用BCG 初免,结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)持续刺激C57BL/6 小鼠,模拟结核分枝杆菌抗原在病人体内持续存在所造成的慢性感染病理过程,构建T 细胞耗竭模型。在T 细胞耗竭模型基础上,给予补肾健脾方灌胃治疗。治疗3 周后检测不同实验组细胞免疫水平,包括利用流式细胞术检测脾脏CD4+和CD8+ T 细胞数目,以及细胞表面抑制性受体PD-1 的表达水平;利用ELISA 检测脾脏淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-酌的水平;利用CFU 菌落计数检测肺脏BCG 攻击后的抗感染免疫能力。结果:与抗原短暂刺激组相比,免疫耗竭未治疗组CD4+和CD8+ T 细胞数目显著下降(P<0.05),细胞表面PD-1 表达水平显著增高(P<0.01);脾淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-γ明显降低(P<0.01);小鼠经BCG 攻击后,抗感染保护效果显著下降(P<0.01)。经补肾健脾方治疗后,脾脏CD4+和CD8+ T 细胞数目得到明显恢复(P<0.05),CD4+ T 细胞PD-1 的表达得到显著降低(P<0.01);脾淋巴细胞分泌IL-2 和IFN-酌的水平明显增高(P<0.05);小鼠抗感染的能力显著性增强(P<0.01)。结论:通过结核抗原PPD 持续刺激成功构建T 细胞耗竭模型;补肾健脾方能逆转抗原持续刺激导致的小鼠T 细胞功能耗竭,可为临床治疗肺结核T 细胞功能耗竭提供参考。     

塞来昔布抑制COX-2 和PD-1 发挥抗肝癌作用

目的:研究塞来昔布的抗肝癌作用及其潜在的分子机制。方法:选取2012 年2 月~2016 年6 月在我院进行手术治疗的原发性肝细胞癌(HCC)患者65 例作为研究对象,另选取肝胆外科提供的正常肝脏组织标本15 例作为对照。采用免疫组织化学法(IHC)检测肿瘤及正常组织样本中COX-2 与PD-1 的表达。采用Pearson 相关性分析HCC 患者COX-2 与PD-1 的相关性。建立H22 肝癌细胞BALB/ c 小鼠模型,随机分为对照组、塞来昔布组和PD-1 抗体组(每组15 只)。给药4 周后处死全部存活小鼠,取出肿瘤。绘制肿瘤生长曲线及小鼠生存曲线。采用IHC 分析各组肿瘤组织中COX-2、PD-1 的表达水平及CD8+ T 与Foxp3 阳性Treg 细胞数。流式细胞术检测外周血中CD8+ T 与CD4+ CD25+ Treg 细胞数量。分离正常BALB/ c 小鼠的外周血单核细胞(PBMC),分别转染PD-1 及对照siRNA,使用塞来昔布处理后,Western blot 检测COX-2、PD-1、CD8 及Foxp3水平。结果:IHC 结果显示HCC 患者肿瘤组织中COX-2 与PD-1 的表达水平均显著高于对照组(P<0.001)。Pearson 相关性分析显示HCC 患者肿瘤组织中COX-2 的表达水平与PD-1 呈显著正相关(R2 =0.673,P<0.001)。塞来昔布、PD-1 抗体治疗小鼠的肿瘤生长曲线和生存曲线均显著优于对照组(P<0.05),塞来昔布组、PD-1 抗体组小鼠的肿瘤生长曲线和生存曲线相比差异均无统计学意义(P>0.05)。IHC 与流式分析显示,塞来昔布能显著降低肿瘤组织中PD-1 的表达(P<0.05);塞来昔布与PD-1 抗体均能使肿瘤组织及外周血CD8+ T 细胞显著增多(P<0.05),使Treg 细胞显著减少(P<0.05)。Western blot 结果显示,塞来昔布能显著降低小鼠PBMC 的COX-2、PD-1、CD8 及Foxp3 水平,而不影响转染PD-1 siRNA 后PBMC 的CD8 及Foxp3水平。结论:HCC 患者肿瘤组织中COX-2 与PD-1 均显著增高,塞来昔布可能通过抑制COX-2 调节PD-1影响肿瘤免疫从而发挥抗肝癌的作用。     

细胞内钙信号对锌指转录因子及胚心标志基因的调控

目的：探讨心肌细胞内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）变化对锌指转录因子及胚心标志基因的影响。 方法: 以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及雷尼丁(RY)剌激心肌细胞跨膜钙内流及细胞内钙释放; Fura-2/AM比率荧光成像系统分析细胞内钙信号；免疫印迹(Western blotting)检测心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子（NFAT3）、锌指转录因子（GATA4）、α-actin蛋白表达，RT-PCR 检测心肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达。 结果: AngⅡ及RY均可使心肌细胞内［Ca2+］i增加，与对照组相比差异显著（P<0.01）。AngⅡ、RY刺激1、3 d，心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4、α-actin蛋白表达及β-MHC mRNA表达明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。 结论: 细胞内钙信号的变化可能通过影响CaN及ERK信号通路，增加心肌细胞胚心标志基因的表达,在心肌细胞肥大的病理过程中起重要作用。     

gp96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞内的Ca2+浓度变化

目的： 检测gp96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞特定亚群CD8+细胞内的钙离子浓度变化，从而进一步探讨gp96-肽复合物疫苗的免疫效应和机制。 方法： 以gp96-肽复合物免疫小鼠的脾淋巴细胞作为研究对象，用quantum-red标记的抗膜表面抗原CD8+进行膜表面染色的同时，进行Fluo-3/AM负载及细胞内Ca2+浓度的检测，以双色流式细胞术检测特定亚群淋巴细胞内的Ca2+浓度的变化，钙离子载体A23187、MnCl2和Con A作为小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞［Ca2+］i的刺激因素。 结果： 经gp96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞［Ca2+］i有一定水平的上调。与对照组相比，A23187和Con A可显著提高gp96-肽复合物免疫小鼠脾淋巴细胞CD8+细胞［Ca2+］i的水平。 结论： ［Ca2+］i浓度的上升可能与gp96-肽复合物促进淋巴细胞CD8+T淋巴细胞的活化及增殖有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+和CD8+T细胞PD-1的表达和意义

目的 探讨程序性死亡分子1 (PD-1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+和CD8+T细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血T细胞亚群表面PD-1表达水平,比较SLE稳定组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD4+和CD8+T细胞表面PD-1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性.结果 SLE活动组CD4+T细胞PD-1表达水平高于健康对照组和不活动组,差异均有统计学意义(P＜0.05).SLE活动组、稳定组CD8+T细胞PD-1表达水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).狼疮肾炎患者CD4+PD-1+和CD8+PD-1+T细胞分别高于无狼疮肾炎患者(P＜0.01).SLE患者中抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗核小体抗体阳性组外周血CD4+和CD8+T细胞PD-1表达水平均高于对应阴性组.SLE患者CD4+和CD8+T细胞PD-1表达百分率与SLE疾病活动度指数(SLEDAI)、尿蛋白定量呈正相关,与补体C3呈负相关.结论 SLE患者外周血CD4+和CD8+T细胞PD-1表达异常,与SLEDA1和自身抗体产生有明确的相关性.     

STING激动剂联合PD-1抗体通过激活T细胞的抗肿瘤活性抑制肺癌进展的研究北大核心CSCD

目的:探索STING激动剂联合PD-1抗体是否可以有效激活体内的T细胞,发挥抑制肺癌进展的作用。方法:通过CFSE检测T细胞的体外增殖情况;通过ELISA法检测T细胞的细胞因子分泌能力;利用小鼠皮下移植瘤模型验证STING激动剂联合PD-1抗体对肿瘤细胞的体内抑制作用;利用免疫荧光实验检测CD3+T细胞的肿瘤浸润情况;通过流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞IFN-γ分泌情况;利用免疫组化法检测肿瘤组织中PD-1的表达水平。结果:STING激动剂可以在体外显著增强T细胞的增殖能力(P<0.0001)以及分泌IL-2(P<0.01)和IFN-γ(P<0.01)的能力;STING激动剂联合PD-1抗体显著抑制路易斯肺癌细胞LLC在小鼠体内的生长(P<0.0001);STING激动剂联合PD-1抗体可以显著增强肿瘤组织中CD3+T细胞的浸润情况(P<0.0001),增加肿瘤组织中IFN-γ阳性的T细胞比例(P<0.0001),同时还可以显著降低肿瘤组织中PD-1的表达水平(P<0.0001)。结论:STING激动剂联合PD-1抗体可以有效激活体内T细胞的抗肿瘤免疫应答,抑制肺癌荷瘤小鼠模型的肿瘤进展,该研究对在肺癌的临床治疗中实践这一联合疗法具有重要意义。     

新生儿脐带血调节性T细胞比率及T细胞上PD-1表达的初步研究

目的探讨新生儿脐带血(CB)和母亲外周血(PB)中调节性T (Treg)细胞比率及T细胞上程序性死亡受体1(PD-1的表达差异。方法收集新生儿脐带血24例,母亲外周血20例。血常规检测白细胞计数及分类;流式细胞术检测新鲜血液中CD34+造血干细胞的含量、Treg细胞的比率及T细胞上PD-1的百分比;植物血凝素(PHA-L)体外刺激CB和PB后,检测T细胞上PD-1表达的变化。结果新鲜CB组中Treg细胞的比率高于新鲜PB组(P<0.05)。新鲜CB组中CD4⁺T细胞上PD-1的表达水平明显低于PB组(P<0.001)。PHA-L体外刺激CB发现,PD-1在CD3⁺CD4⁺T细胞和CD3⁺CD8⁺T细胞上表达均升高(P均<0.05);PHA-L体外刺激PB发现,PD-1在CD3⁺CD4⁺T细胞上表达升高(P<0.05),在CD3⁺CD8⁺T细胞上表达升高无统计学意义(P...     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

中国HIV/AIDS患者T细胞及调节性T细胞CTLA-4表达与疾病进展关系研究

目的 对中国HIV感染者T细胞及凋节性T细胞CTLA-4表达与HIV疾病进展的相关性进行研究,探讨CTLA-4在HIV感染中的作用.方法 选取58名HIV/AIDS患者(长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组),应用流式细胞仪胞内染色技术检测T细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞内CTLA-4表达水平,分析其与CD4+T细胞、病毒载量、淋巴细胞活化凋亡水平的相关性.结果 长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组CD4+T细胞内CTLA-4表达水平依次增岛(P<0.05);与CD+T细胞显著负相关(P<0.01),与CD8+T细胞活化(CD38表达)、凋亡水平(CD95表达)及CD4+T细胞凋亡水平显著相关(P<0.05),与病毒载量无显著相关性.长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组CD8+T细胞内CTLA-4表达水平差异无统计学意义;与CD4+T细胞、病毒载量、CD4,'+>、CD8+T细胞活化及凋亡水平均无显著相关性.CD4+CD25+Foxp3+T细胞内CTLA-4表达水平长期不进展组明显低于无症状HIV组及AIDS纽(P<0.05);与CD4+T细胞显著负相关(P<0.05);与CD4+、CD8+T淋巴细胞活化(HLA-DR表达)显著相关(P<0.01).结论 中国HIV感染者CD4+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞内CTLA-4表达水平与疾病进展及免疫活化状态显著相关,参与HIV感染免疫平衡的调节.     

程序性死亡蛋白配体-1/程序性死亡蛋白-1在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞中的表达及临床意义

目的 通过分析程序性死亡蛋白配体-1/程序性死亡蛋白-1(programmed death ligand-1/programmed death-1,PD-L1/PD-1)在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞中表达情况,探讨其临床意义.方法 选择同一时期90例老年胃癌患者(具有不同临床分期)及90例老年健康体检者,分别采取新鲜外周血后经流式细胞仪检测血中CD8+T淋巴细胞表面PD-L1/PD-1表达情况,结合老年胃癌患者的临床分期,分析PD-L1/PD-1在不同胃癌分期中的表达意义.结果 PD-L1/PD-1在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞呈高表达,相较于老年健康者差异具有统计学意义(t=7.043,P<0.05);外周血CD8+T淋巴细胞的PD-L1/PD-1阳性表达均随着临床分期的增加而增加,呈明显的正相关性(r=0.883,P<0.05);外周血CD8+T淋巴细胞的PD-1阳性表达随着临床分期的增加而增加,两者之间呈正相关性(r=0.811,P<0.05);临床分期较晚的老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-L1/PD-1表达比其他相对较早的临床分期老年胃癌患者显著上升(t=4.377,P<0.05).结论 PD-L1/PD-1信号通路异常在老年胃癌患者病变的发生发展过程中发挥了重要作用,外周血CD8+T淋巴细胞PD-L1/PD-1的表达对评判患者的预后具有指导作用.     

Programmed death-1 blockade enhances expansion and functional capacity of human melanoma antigen-specific CTLs

Negative co-stimulatory signaling mediated via cell surface programmed death (PD)-1 expression modulates T and B cell activation and is involved in maintaining peripheral tolerance. In this study, we examined the effects of a fully human PD-1-abrogating antibody on the in vitro expansion and function of human vaccine-induced CD8+ T cells (CTLs) specific for the melanoma-associated antigens glycoprotein 100 (gp100) and melanoma antigen recognized by T cells (MART)-1. PD-1 blockade during peptide stimulation augmented the absolute numbers of CD3+, CD4+, CD8+ and gp100/MART-1 MHC:peptide tetramer+ CTLs. This correlated with increased frequencies of IFN-gamma-secreting antigen-specific cells and augmented lysis of gp100+/MART-1+ melanoma targets. PD-1 blockade also increased the fraction of antigen-specific CTLs that recognized melanoma targets by degranulation, suggesting increased recognition efficiency for cognate peptide. The increased frequencies and absolute numbers of antigen-specific CTLs by PD-1 blockade resulted from augmented proliferation, not decreased apoptosis. Kinetic analysis of cytokine secretion demonstrated that PD-1 blockade increased both type-1 and type-2 cytokine accumulation in culture without any apparent skewing of the cytokine repertoire. These findings have implications for developing new cancer immunotherapy strategies.     

肺结核患者外周血CD4~+和CD8~+记忆性T细胞亚群、IL-17、IL-27表达的初步探讨

目的:探讨肺结核患者外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚群及白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17),IL-27的表达。方法:采用流式细胞术检测肺结核患者组外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞,患者组按治疗史分为初治组,复治组;按痰涂片抗酸染色分为痰涂阳性组,痰涂阴性组。初治组8例为凡既往未用过抗结核药物治疗或用药时间少于一个月的新发病例;复治组22例为凡既往应用抗结核药物一个月以上的新发病例、复发病例、初治治疗失败病例等;痰涂阳组9例为痰涂片抗酸染色阳性;痰涂阴组21例为痰涂片抗酸染色阴性。ELISA法检测IL-17,IL-27。结果:①与健康对照组比较:患者组CD4+效应型记忆性T细胞均显著增高(P<0.05),初治组与涂阴组CD8+效应型记忆性T细胞均显著降低(P<0.05),复治组IL-17显著降低(P<0.05),而IL-27显著增高(P<0.05)。②与初治组比较:复治组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),而CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),IL-17显著降低(P<0.05),IL-27显著增高(P<0.05)。③与涂阴组比较:涂阳组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),CD8+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05)。④Spearman相关性分析显示:IL-17与IL-27呈正相关(P<0.05),记忆性T细胞亚群与IL-17,IL-27水平无显著相关性(P>0.05)。结论:肺结核患者外周血CD4+效应型记忆性T细胞的表达可望作为TB初步诊断的观察指标,CD4+中央型记忆性T细胞和CD8+效应型记忆性T细胞的表达均可望作为TB患者的临床分组依据,TB外周血IL-17、IL-27水平可望用于判断TB的炎症程度。     

非结核分枝杆菌感染患者外周血免疫细胞改变及其临床意义

目的分析非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacterium,NTM)感染患者外周血免疫细胞表达率的改变以及临床意义.方法选择2016年4月至2017年4月期间苏州市第五人民医院住院的69例NTM感染患者作为病例组,选取同期本院健康体检者66例作为对照组.采用流式细胞术对健康对照组和NTM感染患者(NTM组)外周血免疫细胞表达率进行检测,并比较各组之间的差异.进一步根据感染部位的差异将NTM组分为单侧感染组(29例)和双侧感染组(40例),比较两组之间免疫细胞表达水平的差异.结果与对照组相比较,NTM组的总的T淋巴细胞表达率没有显著改变,而B淋巴细胞与单核细胞表达率出现显著上调[(10.50±0.56)%比(12.26±0.57)%,(5.61±0.24)%比(6.72±0.32)%,t值分别为2.209和2.774,P值均<0.05],自然杀伤(natural killer,NK)细胞表达率出现显著下调(21.87±0.98)%比(18.63±0.98)%,t=2.341,P<0.05).对T细胞亚群的分析发现,NTM组的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD8+CD28-T细胞的表达率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而CD4+CD25HT细胞的表达率较对照组显著上调[(8.05±0.35)%比(3.69±0.19)%,t=11.000,P<0.05],CD8+CD28+T细胞表达率较对照组显著下调[(23.76±0.90)%比(27.07±0.74)%,t=3.039,P<0.05].进一步依据患者感染部位比较分析发现,单侧感染组与双侧感染组的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞在外周血中表达率的差异均无统计学意义(P>0.05).T细胞亚群的结果分析显示,CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25HT细胞在单侧感染组与双侧感染组之间的表达率差异无统计学意义(P>0.05),而双侧感染组的CD8+CD28+T细胞表达比例较单侧感染组显著下降[(21.99±1.02)%比(26.21±1.52)%,t=2.397,P<0.05]、CD8+CD28-T细胞表达比率较单侧感染组显著上调[(24.48±1.90)%比(18.19±1.60)%,t=2.404,P<0.05].结论NTM感染患者外周血中一些免疫细胞的表达率出现了显著改变,可能对疾病的发生与发展产生了重要影响.     

HIV/AIDS患者CCR5、CXCR4的表达与疾病进展的关系

目的　了解HIV AIDS患者淋巴细胞表面第二受体CCR5、CXCR4的表达 ,分析其与疾病进展的关系 ,探讨HIV感染的免疫基础。方法　收集 33例HIV AIDS患者及 13例健康对照的抗凝全血 ,用流式细胞仪检测第二受体CCR5、CXCR4的表达 ,并分析第二受体表达与病毒载量、CD4 + T淋巴细胞绝对值及T淋巴细胞活化 (HLA DR+ CD38+ )的相关性。结果　艾滋病组CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞表面CCR5表达高于无症状HIV 1感染组及健康对照 (P <0 .0 0 1) ;艾滋病组CD8+ T淋巴细胞表面CXCR4表达低于健康对照 (P <0 .0 1)。HIV AIDS患者CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞表面CCR5的表达与病毒载量明显正相关 (P <0 .0 1) ;与CD4 + T淋巴细胞绝对值明显负相关 (P <0 .0 1) ,与T淋巴细胞活化(HLA DR+ CD38+ )水平明显正相关 (P <0 .0 0 1)。结论　HIV 1感染者第二受体CCR5的表达与机体对HIV的免疫反应及疾病进展密切相关。     

PD-1受体在HBV—ACLF患者外周血CD8^＋T细胞上的表达研究

目的探讨乙型肝炎病毒所致慢加急性肝衰竭（HBV—ACLF）患者外周血中CD8^＋T细胞上PD-1（Programmed death-1）的表达以及对CD8^＋T细胞的影响。方法收集60例HBV—ACLF患者外周血;应用流式细胞仪检测外周血中CD8^＋淋巴细胞上的PD-1、CD95、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、CD107a的表达以及CD14细胞上PD—L1的表达;根据不同病情分期和不同预后比较各分子的表达差异;设15名肝硬化患者及15名健康人为对照组。结果（1）HBV-ACLF患者CD8^＋T细胞上PD-1较肝硬化组和健康组表达上调（P〈0．05）;好转组PD-1表达率低于无效组（P〈0．05）;早、中、晚三期PD-1表达率呈上升趋势（P〈0．05）;（2）PD—L1在好转组及病情早期表达相对最低;（3）PD-1与CD95在死亡组表达明显升高;穿孔素、颗粒酶及CD107a在死亡组表达升高,但PD-1在这三类细胞上表达率非常低。结论PD-1在HBV．ACLF患者外周血CD8^＋T细胞上表达上调,且与病情严重程度呈正比。其上调表达可能促进总CD8^＋T细胞的凋亡,但对于具有杀伤活性的CD8^＋T细胞抑制作用相对较弱。     

Expression of Programmed Death-1 (PD-1) on CD4+ and CD8+ T cells in Rheumatoid Arthritis

Rheumatoid arthritis (RA) is characterized by chronic inflammatory process that targets the synovial lining of diarthrodial joints. Programmed death 1 (PD-1) plays a key role in the negative regulation of the immune response. In the current study, we investigated the expression of PD-1 on peripheral CD4+ and CD8+ T cells in RA patients. Percentage of PD-1+ cells was measured by flow cytometry in 82 RA cases and 90 healthy controls. Results showed that PD-1 expression was significantly decreased in both peripheral CD4+ and CD8+ T cells in RA (p?=?0.002 and p?<?0.001, respectively). Similarly, serum levels of soluble PD-1 were also downregulated in RA cases. When comparing PD-1 level in RA patients with different clinical parameters, patients with positive C-reactive protein (CRP) revealed lower proportion of PD-1 on CD4+ and CD8+ T cells than those with negative CRP. Also, disease activity score of RA patients was inversely correlated with PD-1 expression on peripheral CD4+ and CD8+ T cells. These data suggested that PD-1 may act as a negative regulator in the pathogenesis and progression of RA.     

系统性红斑狼疮患者T细胞TCR/CD3复合物介导的信号传导研究

目的：证实SLE患者T细胞功能异常是否与其生物化学信号转导异常有关。方法：用CD3单抗与羊抗鼠二抗IgG相关联刺激T细胞并用Thapsigargin和EGTA干预后，分别用粘附细胞仪连续观察10min T细胞[Ca^2 ]i的变化，并评价[Ca^2 ]i反应与CD3分子和InsP3生成量的相关性。结果：正常人和SLE患者T细胞[Ca^2 ]i反应的基准上似（P＝0．105）；SLE患者T细胞的[Ca^2 ]i反应高峰值、平台值明显高于正常对照（P＜0．001，P＜0．001）；加入Thapsigargin后二者[Ca^2 ]i反应无显著差异，而加入EGTA后二者[Ca^2 ]i反应有显著差异；二者的T细胞CD3阳性率和InsP3生成量无差异（P＝0．665，P＝0．537）。结论：SLE患者T细胞TCR／CD3介导的信号转导途径存在异常；SLE患者T细胞功能异常可能是因细胞内生物化学信号途径异常所致。