EFNB2对膀胱癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制

目的 研究EFNB2对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学功能的影响，探讨其作为免疫治疗的可能性。方法 以膀胱癌细胞系T24、5637、J82和UM-UC-3细胞为研究对象，选用人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞作为阴性对照。通过慢病毒载体转染shRNA-EFNB2进行敲低实验，然后分别采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中EFNB2的mRNA和蛋白表达水平；CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖活力；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力；Western blot检测Bcl2、Bax、Vimentin和E-cadherin的蛋白表达水平。结果 与人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1细胞相比，膀胱癌细胞系中EFNB2的表达水平显著增高,其中以T24细胞表达最高(P<0.01)。敲低T24细胞系EFNB2基因表达后，T24细胞增殖活力显著下降(P<0.05)；细胞周期虽然尚未有显著变化，但细胞凋亡率显著增高(P<0.05)，并且抗凋亡蛋白Bcl2表达显著下降（P<0.05）,促凋亡蛋白B...     

乙酰辅酶A羧化酶1对胶质瘤细胞系U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）对人胶质瘤细胞系U87细胞增殖、迁移及侵袭的作用。 方法 Western blotting检测人胶质瘤细胞系U87、U251及U373中ACC1的表达;构建ACC1过表达质粒载体,将过表达ACC1质粒载体瞬时转染至U87细胞中;Western blotting检测转染后U87细胞中ACC1表达情况;MTT实验检测过表达ACC1对U87细胞增殖的影响;Transwell迁移和侵袭实验分别检测过表达ACC1对U87细胞迁移和侵袭的影响;划痕实验检测过表达ACC1对U87细胞划痕愈合能力的影响;Western blotting检测相关蛋白表达变化。 结果 与人胶质瘤细胞系U251和U373相比,U87细胞中ACC1表达较低;ACC1过表达抑制U87细胞增殖（P<0.01）;ACC1过表达抑制U87细胞迁移、侵袭和划痕愈合能力（P<0.01）;ACC1过表达迁移和侵袭相关蛋白波形蛋白(vimentin)、纤维连接蛋白(fibronectin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)表达下调（P<0.01）,凋亡抑制蛋白Bcl-2和细胞周期蛋白(cyclin) B、cyclin D表达下调（P<0.01）,p-STAT3蛋白表达下调（P<0.01）,细胞周期蛋白P21表达上调（P<0.01）。 结论 过表达ACC1可能通过抑制STAT3活性,抑制人胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

RNA干扰抑制乙酰肝素酶对肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨抑制乙酰肝素酶表达对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 构建靶向人乙酰肝素酶基因短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达质粒(pshRNA-Hpa),用脂质体将其转入A549细胞,建立稳定转染细胞株系,经逆转录.PCR和Western blot法检测转染效率后,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验和流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI双染法)检测其对A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.采用Western blot法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB/Akt-Ser473)的表达.结果 转染pshRNA-Hpa的A549细胞乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达明显低于未处理A549细胞,抑制率分别为54.09%和48.26%,细胞增殖速度减缓,侵袭能力降低,流式细胞术显示早期细胞凋亡率达(12.53±0.34)%,较空白对照组、空载体转染细胞组和阴性对照组明显增加(P＜0.01).同阴性对照质粒相比,转染pshRNA-Hpa的A549细胞Akt-Ser473的磷酸化水平降低52.15%.结论 靶向乙酰肝素酶重组shRNA质粒pshRNA-Hpa能有效抑制A549细胞乙酰肝素酶的表达,并可能通过下调磷酸化蛋白激酶B途径抑制细胞的增殖侵袭、促进细胞的凋亡.     

MST1过表达抑制宫颈癌细胞系SiHa的增殖、迁移和侵袭

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)对子宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法Western blot检测正常宫颈上皮细胞H8与宫颈癌细胞SiHa中MST1的表达;构建p J3H-HA-MST1质粒并转染SiHa细胞系,Western blot检测MST1、Ki-67和MMP9的蛋白表达;MTS、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 SiHa细胞的MST1蛋白表达水平明显低于H8细胞(P0.05);SiHa细胞转染MST1质粒后,MST1蛋白表达明显升高,而Ki-67和MMP9蛋白表达水平显著下降(P0.05),SiHa细胞的增殖被明显抑制(P0.05),同时细胞的迁移和侵袭能力也显著降低(P0.01)。结论 MST1过表达可以抑制宫颈癌细胞SiHa的增殖、迁移和侵袭能力。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

红景天苷负向调控TACC2表达抑制NSCLC细胞增殖及上皮间充质转化

目的 探讨红景天苷(SAL)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖、凋亡以及上皮间充质转化(EMT)的影响,并明确其作用的分子机制。方法 收集22例肺癌患者的癌组织及癌旁组织;并体外培养肺癌细胞系(A549、H358、H1299、H1650);RT-qPCR分别检测肺癌组织以及肺癌细胞系中转化酸性卷曲螺旋蛋白2(TACC2)的表达。不同浓度SAL处理细胞(A549、H1299)后,流式细胞测量术、CCK-8法分别检测细胞凋亡、增殖;Western blot检测细胞(A549、H1299)内E-cadherin、N-cadherin、TACC2表达以及p38磷酸化水平。转染pcDNA3.0-TACC2质粒后,检测过表达TACC2对细胞增殖、凋亡水平以及EMT的影响。结果 肺癌组织中TACC2的相对表达量显著高于癌旁组织,肺癌细胞系TACC2表达水平显著高于人胚肺成纤维细胞系(HFL-1)(P<0.05)。不同浓度SAL处理后,细胞增殖水平显著降低,凋亡率显著上升(P<0.05)。SAL能够显著降低A549以及H1299细胞内TACC2的表达水平,细胞内E-cadherin表...     

CRNDE过表达促进人肝癌细胞系HepG2增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)结直肠差异性表达基因(CRNDE)对HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法构建CRNDE过表达质粒,进行慢病毒包装后感染HepG2细胞。实验分别设置阴性对照组(LV5/NC)和CRNDE过表达组(LV5/CRNDE)。应用2.5μg/mL嘌呤霉素干预4~5周,筛选出CRNDE过表达HepG2细胞系;CCK8和细胞划痕实验检测细胞的增殖及迁移能力变化;real-time PCR和Western blot检测两组细胞E-cadherin、N-cadherin、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白表达变化。结果与LV5/NC组相比,LV5/CRNDE组CRNDE表达显著升高(P<0.01),且LV5/CRNDE组细胞的增殖和迁移能力均显著提高(P<0.01);同时,LV5/CRNDE组细胞E-cadherin和Bax表达均明显降低(P<0.01),而N-cadherin和Bcl-2表达则明显升高(P<0.01)。结论CRNDE可通过促进N-cadherin和Bcl-2表达,抑制E-cadherin和Bax表达,进而增强HepG2细胞的增殖和迁移能力。     

RNA干扰环指蛋白2基因抑制胰腺癌细胞系PANC-1增殖和迁移

目的研究沉默环指蛋白2(RNF2)基因对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖、迁移、周期和凋亡的影响及可能机制。方法用siRNA-RNF2转染PANC-1细胞沉默RNF2表达,同时设立转染无义序列(siRNA-NC)的空转染组及不进行任何处理的空白对照组(mock)。荧光定量PCR检测RNF2 mRNA表达;Western blot检测RNF2和p53表达;MTS实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力;流式细胞计量术检测细胞转染率、凋亡率和细胞周期。结果相比正常胰腺导管上皮细胞,RNF2在胰腺癌细胞系中高表达(P<0.05)。转染siRNA-RNF2的PANC-1细胞与阴性对照组比较,RNF2 mRNA及蛋白表达下调;细胞增殖被抑制(P<0.05);细胞迁移能力下降(P<0.05);细胞凋亡率增高(P<0.05);G_0/G_1期细胞比例上升,S期和G2/M期细胞比例则降低(P<0.05)。此外,转染siRNA-RNF2显著下调PANC-1细胞中p53蛋白的表达。结论 siRNA-RNF2特异性下调胰腺癌细胞RNF2表达,显著抑制细胞增殖和迁移,结果提示RNF2可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

重组人源TNC诱导胰腺癌细胞系PANC1的EMT及迁移和侵袭

目的构建人肌腱蛋白C(TNC)真核表达质粒,利用稳定过表达TNC的胰腺癌细胞系以及探索TNC在胰腺癌转移中的作用及分子机制。方法采用独特的引物设计方法构建TNC表达质粒,经转染和G418筛选获得稳定过表达TNC的胰腺癌PANC1细胞系。通过RT-qPCR和Western blot对细胞系中TNC的表达进行鉴定。采用Transwell小室法和Western blot检测TNC对细胞迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(EMT)相关分子表达的影响。结果成功构建TNC质粒,稳定过表达TNC的PANC1细胞迁移、侵袭能力显著增强(P<0.05),上皮标志物E-cadherin表达减少而间质标志物N-cadherin表达增加(P<0.05)。结论TNC真核表达质粒以及TNC稳定表达胰腺癌细胞系的建立,可用于TNC对细胞EMT、迁移和侵袭等方面的机制研究,也是研究TNC生物学功能和胰腺癌发生发展机制的基础。     

VDUP1对乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移的影响

目的:探讨过表达/沉默维生素D3上调蛋白1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1)基因对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。方法:通过基因过表达/干扰技术上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;实时荧光定量PCR检测细胞中VDUP1的mRNA表达水平;CCK-8法、Brd U实验和Transwell细胞迁移实验分别用于检测细胞增殖和迁移能力;Western blot检测细胞中Akt、p-Akt、GSK3β和p-GSK3β的蛋白水平。结果:基因过表达/干扰技术可上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;过表达VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力显著降低(P0.05),而沉默VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力则显著升高(P0.05)。此外,过表达VDUP1基因可下调p-Akt和p-GSK3β的蛋白水平(P0.05),而沉默VDUP1基因的结果则相反。结论:改变VDUP1基因表达水平可影响MCF-7细胞的增殖和迁移能力,其作用机制可能与Akt/GSK3β信号通路有关。     

钩吻碱通过下调circ_001680抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和侵袭

目的探讨钩吻碱对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法体外分离培养RASFs。经50、100、200μg/mL的钩吻碱干预24 h或转染circ_001680的小干扰RNA或过表达载体至RASFs后,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;蛋白印迹法检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;RT-qPCR检测circ_001680表达。结果钩吻碱或干扰circ_001680表达可降低RASFs的增殖、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达(P<0.05),而促进E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。钩吻碱可降低RASFs中circ_001680的表达(P<0.05),过表达circ_001680减轻钩吻碱对RASFs增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论钩吻碱可抑制RASFs增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调circ_001680表达有关。     

黏蛋白16基因通过磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路调节胆囊癌细胞活力和迁移

目的 探讨黏蛋白16基因（MUC16）是否通过磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路调节胆囊癌细胞（GBC-SD）活力和迁移。 方法 过表达MUC16后,通过Real-time PCR筛选相关基质金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白质。其次,过表达MUC16、敲低MUC16和PI3K/Akt通路抑制剂BKM120处理后,通过免疫印迹法检测PI3K/Akt通路和MMP-9的蛋白水平。最后,过表达MUC16或敲低MUC16,通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）和刮伤实验检测GBC-SD的活力和迁移情况。 结果 过表达MUC16后,MMP-9 mRNA的相对表达量显著升高（P<0.05）。过表达MUC16后, MMP-9、p-Akt、PI3K的蛋白水平明显升高（P<0.05）,但是PI3K抑制剂BKM120可以避免这现象。而敲低MUC16后,发现MMP-9、p-Akt、PI3K的蛋白水平明显降低（P<0.05）。过表达MUC16后,GBC-SD的细胞活力和迁移能力明显增高（P<0.05）,而敲低了MUC16后,GBC-SD的细胞活力和迁移能力明显降低（P<0.05）。另外,敲低MMP-9后,GBC-SD的细胞活力和迁移能力也明显降低（P<0.05）。但是,在过表达MUC16的同时敲低MMP-9,发现GBC-SD的细胞活力和迁移能力与对照组相比差异无显著性（P>0.05）。 结论 MUC16激活PI3K/Akt通路促进MMP-9的蛋白表达,进而提升胆囊癌细胞GBC-SD的细胞活力和迁移能力。     

虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移

目的:探讨虫草素对胆囊癌细胞SNU-308增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:MTT法和平板集落形成实验检测不同浓度虫草素对胆囊癌SNU-308细胞活力和集落形成能力的影响;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白以及Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平;免疫荧光染色法检测细胞内LC3的表达水平;划痕愈合实验和Transwell实验检测虫草素对胆囊癌细胞迁移能力的影响;划痕实验检测Akt抑制剂和ERK1/2抑制剂及Ezrin基因沉默对细胞迁移能力的影响。结果:虫草素可显著抑制胆囊癌细胞的活力和集落形成能力(P0.05)。流式细胞术结果显示,虫草素可诱导胆囊癌细胞凋亡(P0.05)。Western blot结果显示,虫草素处理后Bcl-2表达降低,Bax、细胞色素C(Cyto C)、Fas、Fas L和cleaved caspase-3蛋白水平升高,自噬标识蛋白LC3-II/I比例和beclin 1表达上调(P0.05)。免疫荧光染色结果显示,虫草素处理后SNU-308细胞胞浆中LC3荧光颗粒的数量明显增多。划痕实验和Transwell实验结果显示虫草素可抑制细胞迁移(P0.05)。虫草素明显抑制Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平(P0.05)。Ezrin基因沉默及Akti-1/2和GDC-0994均可抑制胆囊癌细胞的迁移作用(P0.05)。结论:虫草素通过诱导凋亡和自噬抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与调控ERK1/2,Ezrin和Akt信号通路有关。     

E-钙黏蛋白siRNA促进胃癌细胞SGC7901耐药与增殖

目的 研究E-钙黏蛋门siRNA对胃癌细胞SGC7901化疗敏感性和增殖能力的影响,并对其相关机制进行初步探讨.方法 用Lipofectamine 2000将E-钙黏蛋白siRNA及阴性对照序列转入细胞SGC7901,用MTT法检测细胞对药物的敏感性并观察细胞增殖能力.Western印迹法检测细胞E-钙黏蛋白、PTEN...     

NUP88 基因变化对乳腺癌细胞系BT鄄20 增殖侵袭生物学行为的影响

目的：探讨NUP88基因表达量升高或降低对乳腺癌细胞系BT-20细胞增殖能力、凋亡能力与侵袭能力的影响。方法：构建NUP88重组腺病毒表达载体以及NUP88 RNA干扰腺病毒载体,分别转染乳腺癌BT-20细胞获得NUP88过表达BT-20细胞以及NUP88低表达BT-20细胞并检测NUP88 mRNA和蛋白表达情况,随后通过CCK-8检测各组BT-20细胞增殖能力,通过流式双染检测各组BT-20细胞凋亡情况及通过Transwell侵袭实验检测各组BT-20细胞侵袭能力,并通过Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白表达变化。结果：成功获得NUP88 mRNA及蛋白高表达和低表达BT-20细胞;NUP88基因过表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著高于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则降低(P＜0.05);NUP88基因低表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著低于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则升高(P＜0.05); NUP88基因过表达导致抗凋亡蛋白Bcl-2和黏附蛋白β-catenin水平显著高于正常BT-20细胞水平,而促凋亡蛋白Bax和黏附蛋白E-cadherin显著低于正常BT-20细胞水平(P＜0.05);NUP88基因低表达导致Bcl-2和β-catenin水平显著低于正常BT-20细胞水平,而Bax和E-cadherin显著高于正常BT-20细胞水平(P＜0.05)。结论：NUP88基因通过调控凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2和黏附蛋白E-cadherin与β-catenin水平调控BT-20细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。