白细胞介素34(IL-34)促进大鼠根尖牙乳头干细胞增殖并向成牙成骨分化

目的 探究白细胞介素34(IL-34)对大鼠根尖牙乳头干细胞(SCAP)成牙、成骨分化的影响。方法 采用酶消化法分离培养大鼠SCAP,实时荧光定量PCR检测IL-34在大鼠SCAP中的表达。采用噻唑蓝(MTT)法分析不同浓度IL-34对大鼠SCAP增殖活性的影响。茜素红染色观察矿化情况，划痕实验检测增殖能力，实时荧光定量PCR检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、 Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)的表达。应用Western blot法检测ALP、 DSPP、 RUNX2、 OSX蛋白的表达。结果 IL-34促进大鼠SCAP增殖的最大剂量为100 ng/mL,茜素红染色显示IL-34能够促进SCAP的矿化。100 ng/mL IL-34处理显著提高成骨相关基因ALP、 DSPP、 RUNX2、 OSX的表达。结论 IL-34能够促进大鼠SCAP的增殖并向成牙/成骨分化。     

FGF8辅助牙源性上皮诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞

目的:研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响。方法:首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过real-time PCR检测分化后的细胞中牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)和核心结合因子α1(Cbfa-1)在mRNA水平的表达;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8与hDPSCs细胞团重组,再将组织块种植于裸鼠肾囊膜下培养,通过DNA原位杂交鉴定成牙本质细胞及牙髓细胞的来源。结果:成功分离培养hDPSCs,其表面标志物CD29和CD90呈阳性表达;经FGF8诱导的hDPSCs形成较明显的矿化结节,并且牙本质特异性蛋白DSPP、BSP及Cbfa-1表达量上调;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8可以诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞。结论:FGF8能够辅助牙源性上皮定向诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞,并形成牙本质及牙髓腔结构。     

芦丁通过抑制TXNIP/TRX-ROS信号通路促进人脐带间充质干细胞成骨分化

目的 探究芦丁对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化的作用，并探究其机制。方法 不同浓度芦丁处理成骨分化的hUCMSCs,通过CCK-8检测细胞增殖活性，通过茜素红染色检测细胞矿化结节形成，通过碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶活性，通过Western blot检测细胞成骨相关蛋白和TXNIP/TRX信号通路蛋白表达，通过ROS探针检测细胞ROS水平。结果 芦丁剂量依赖的促进hUCMSCs增殖，能增加hUCMSCs矿化结节形成及ALP活性；芦丁处理增加hUCMSCs成骨相关蛋白RUNX2和OPN蛋白表达水平，降低hUCMSCs ROS水平和TXNIP蛋白表达，增加TRX蛋白表达。结论 芦丁促进hUCMSCs增殖及成骨分化，其机制可能与其抑制TXNIP/TRX-ROS信号通路有关。     

蛋白酪氨酸激酶6对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响北大核心CSCD

目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞活性;跨皮细胞组抗仪检测细胞跨皮细胞阻抗(TER);辣根过氧化物酶(HRP)流量法反应细胞通透性;RT-PCR检测ZO-1、Occludin mRNA水平;Western blot检测PTK6、ZO-1、Occludin、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(p-JNK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。结果:TNF-α刺激后,细胞ZO-1、Occludin转录及蛋白水平、TER值显著降低,细胞通透性增高,同时PTK6、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-p38蛋白水平显著增高(P<0.05);上调PTK6使ZO-1、Occludin转录及蛋白水平和TER值进一步降低,细胞通透性和p-JNK1/2、p-p38蛋白水平也进一步增高(P<0.05),但下调PTK6后上述指标呈相反变化(P<0.05);上调或下调PTK6对p-ERK1/2无明显影响。结论:下调PTK6可以降低JNK1/2、p38MAPK磷酸化水平,进而改善TNF-α诱导的气道上皮屏障功能减损。     

脂多糖改变牙髓干细胞的生物学特性

背景:龋病发生时,包括细菌在内的各种刺激沿牙本质小管传导至牙髓,牙髓组织中的牙髓干细胞受到刺激后增殖迁移至受损的牙本质下方,形成修复性牙本质以补充和修复受损组织。在此过程中,脂多糖作为细菌的主要毒力因子,是否可以影响牙髓干细胞增殖、迁移及成牙本质向分化等生物学行为,还有待研究。目的:观察脂多糖对牙髓干细胞增殖能力、迁移能力和成牙本质向分化能力的影响。方法:组织块酶消化法培养牙髓干细胞,给予0,0.1,1,10 mg/L脂多糖刺激后,采用MTT法检测牙髓干细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验检测牙髓干细胞的迁移能力;给予1 mg/L脂多糖和矿化诱导液刺激21 d后,茜素红染色检测细胞矿化结节形成能力,RT-PCR检测成牙本质相关基因的表达。结果与结论:①0.1,1,10 mg/L脂多糖组的吸光度值在第1,3,5,7天4个时间点均低于0 mg/L脂多糖组(P<0.01),迁移能力均高于0 mg/L脂多糖组;②牙髓干细胞矿化诱导21 d后,1 mg/L脂多糖刺激组所形成的矿化结节数量和面积明显小于0 mg/L脂多糖组(P<0.01),成牙本质相关基因OCN、BSP、ALP表达量显著低于0 mg/L脂多糖组(P<0.01);③结果表明,脂多糖刺激牙髓干细胞后其增殖能力和成牙本质向分化能力降低,迁移能力明显增强。     

蛋白酪氨酸激酶6对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响

目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞活性;跨皮细胞组抗仪检测细胞跨皮细胞阻抗(TER);辣根过氧化物酶(HRP)流量法反应细胞通透性;RT-PCR检测ZO-1、Occludin mRNA水平;Western blot检测PTK6、ZO-1、Occludin、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(p-JNK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。结果:TNF-α刺激后,细胞ZO-1、Occludin转录及蛋白水平、TER值显著降低,细胞通透性增高,同时PTK6、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-p38蛋白水平显著增高(P0.05);上调PTK6使ZO-1、Occludin转录及蛋白水平和TER值进一步降低,细胞通透性和p-JNK1/2、p-p38蛋白水平也进一步增高(P0.05),但下调PTK6后上述指标呈相反变化(P0.05);上调或下调PTK6对p-ERK1/2无明显影响。结论:下调PTK6可以降低JNK1/2、p38MAPK磷酸化水平,进而改善TNF-α诱导的气道上皮屏障功能减损。     

脂多糖调控Notch 信号通路作用于人牙髓干细胞增殖、分化、凋亡的实验研究

目的:探讨脂多糖调控Notch 信号通路对人牙髓干细胞增殖、分化、凋亡的影响及机制。方法:从牙髓组织中分离出人牙髓干细胞(hDPSCs),CCK8 实验检测0、0.1、1、10 μg/ ml 的脂多糖处理hDPSCs 1、3、5、7 d 后细胞的增殖情况;RT-PCR 检测1 μg/ ml 的脂多糖处理hDPSCs 0、3、7、14、21 d 后矿化相关基因ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达情况;流式细胞仪检测1 μg/ ml 的脂多糖处理hDPSCs 0、7、14、21 d 后的细胞凋亡情况;Western blot 检测Cleaved caspase3、Notch1、Hes1 的蛋白表达。结果:不同浓度的脂多糖刺激hDPSCs 1、3、5 d 后细胞的增殖均无显著差异,培养至第7 天时,0.1、1、10 μg/ ml 的脂多糖组细胞的增殖均显著低于0 滋g/ ml 的脂多糖组(P<0.01);脂多糖处理hDPSCs 3 d 时ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),7、14、21 d 时ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达均显著高于对照组(P<0.01);脂多糖处理hDPSCs 7、14、21 d 时细胞的凋亡率及Cleaved caspase3、Notch1、Hes1 蛋白表达均显著高于对照组(P<0.01),21 d 时ALP、DSPP、DMP1 的mRNA 表达及细胞凋亡率和Cleaved caspase3、Notch1、Hes1 蛋白表达均有下降趋势。结论:脂多糖可降低hDPSCs 的增殖,促进其矿化和凋亡,其机制与激活Notch 信号通路有关。     

罗格列酮通过抑制RANKL及p-ERK活化抑制类风湿关节炎破骨细胞的分化及功能

目的:探讨罗格列酮(RSG)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)介导的破骨细胞(Oc)分化及功能的影响及其可能机制。方法:活动期RA患者滑膜体外分离培养FLS,与健康人外周血单核细胞(MNC)共培养,不同浓度RSG(0、5、10和15μmol/L)干预,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定Oc并计数;甲苯胺蓝染色和图像分析系统计算骨吸收陷窝面积;Real-time PCR检测共培养体系RANKL和OPG的mRNA表达,Western blot检测RANKL、OPG、p-ERK、p-p38和p-JNK的蛋白含量。结果:与不加RSG组比较,15μmol/L RSG干预后Oc的数量明显减少(P0.01),骨吸收陷窝面积也减少(P0.05);共培养体系RANKL的mRNA及蛋白表达明显降低,OPG的mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);p-ERK的蛋白含量明显降低(P0.05),p-p38及p-JNK的蛋白含量则不受影响。结论:RSG通过抑制RANKL及p-ERK活化影响RA关节微环境中组织细胞与免疫细胞的相互作用,从而抑制Oc分化及骨吸收功能。     

力学刺激对MG-63成骨样细胞增殖分化的影响

为探讨力学刺激对成骨细胞增殖分化的影响,应用根据四点弯曲原理设计的加力装置对MG-63成骨样细胞进行力学刺激,观察不同大小和作用时间的机械应变对成骨细胞增殖分化的影响。本研究中蛋白表达、碱性磷酸酶(ALP)活性测定分别采用Western blot、α-磷酸奈酚法,采用茜素红染色观察矿化结节的形成。结果发现:⑴与对照组相比,加力组增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达、ALP活性均明显增加,但这种作用并不随着力刺激大小的增加而增加。⑵在适宜的力刺激(2 000μstrain)下,随着加力时间的增加,PCNA、Ⅰ型胶原(COLⅠ)蛋白表达及ALP活性逐渐增加,并且适宜的力刺激也促进了矿化结节的形成。该结果提示适宜的力学刺激能够促进成骨细胞的增殖分化。     

Natural mineralized scaffolds promote the dentinogenic potential of dental pulp stem cells via the mitogen-activated protein kinase signaling pathway

The selection of a suitable scaffold material is important for dentin tissue regeneration, as the characteristics of biomaterials can potentially influence cell proliferation and differentiation. We compared the effects of different scaffolds on dentin regeneration based on dental pulp stem cells (DPSCs) and investigated the regulatory mechanisms of odontogenic differentiation of DPSCs by these scaffolds. Five different scaffolds were tested: demineralized dentin matrix (DDM), ceramic bovine bone (CBB), small intestinal submucosa (SIS), poly-L-lactate-co-glycolate, and collagen-chondroitin sulfate-hyaluronic acid. DPSCs cultured on DDM and CBB exhibited higher levels of alkaline phosphatase (ALP) activity and mRNA expression of bone sialoprotein, osteocalcin, dentin sialophosphoprotein (DSPP), and dentin matrix protein-1 (DMP-1) than those cultured on the other three scaffolds. Further, the phosphorylation levels of mitogen-activated protein kinase (MAPK) ERK1/2 and p38 in DPSCs cultured on DDM and CBB were also significantly enhanced compared with the other three scaffolds, and their inhibitors significantly inhibited odontogenic differentiation as assessed by ALP activity and mRNA expression of DSPP and DMP-1. The implantation experiment confirmed these results and showed a large amount of regular-shaped dentin-pulp complex tissues, including dentin, predentin, and odontoblasts only in the DDM and CBB groups. The results indicated that natural mineralized scaffolds (DDM and CBB) have potential as attractive scaffolds for dentin tissue-engineering-promoted odontogenic differentiation of DPSCs through the MAPK signaling pathway.     

支气管哮喘豚鼠肺组织中丝裂原活化蛋白激酶对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶的作用

目的： 研究在支气管哮喘豚鼠肺组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）的影响。方法: 成年雄性豚鼠20只随机分成哮喘组和对照组，每组10只，以腹腔内注射联合雾化吸入卵蛋白复制哮喘模型。测支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数并进行分类计数；原位杂交和RT-PCR测肺组织中γ-GCS-h mRNA表达；免疫组化测γ-GCS、磷酸化细胞外激活蛋白激酶（p-ERK）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化 p38（p-p38）在肺组织中的表达;Western blotting 测 p-ERK、p-JNK和p-p38在肺组织中的表达；双酶法测γ-GCS的活性。结果: （1）哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞明显多于对照组 (P<0.01)。（2）免疫组化显示肺组织中p-ERK、p-p38、p-JNK和γ-GCS 蛋白质表达哮喘组明显高于对照组（P<0.01）；Western blotting 亦显示肺组织中p -ERK、p-JNK和p-p38 蛋白质表达哮喘组均明显高于对照组。（3)原位杂交和RT-PCR显示在肺组织中γ-GCS-h mRNA 表达哮喘组明显高于对照组(P<0.01)。（4) γ-GCS活性哮喘组明显高于对照组（P<0.01）。（5）直线相关性分析显示：在肺组织中p-ERK、p-p38与γ-GCS-h mRNA、γ-GCS蛋白质呈显著正相关，p-JNK与γ-GCS-h mRNA、γ-GCS蛋白质无明显相关性。结论: 支气管哮喘豚鼠肺中 p-ERK、p-p38、p-JNK和γ-GCS表达均增加；p-ERK和p-p38可能上调γ-GCS表达。     

维甲酸通过MAPKs信号通路减轻早产大鼠AECⅡ高氧性损伤

 目的： 探讨高氧暴露对原代培养的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）增殖和凋亡的影响以及维甲酸（RA）的保护作用机制。方法：建立原代培养的早产大鼠高氧暴露AECⅡ模型，采用流式细胞术（Annexin V-PI双标记）检测AECⅡ凋亡，Western blotting检测其磷酸化和总的ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及增殖细胞核抗原（PCNA）和caspase-3表达。结果：高氧暴露12 h，Annexin Ⅴ（+）PI（-）和Annexin Ⅴ（+）PI（+）标记的AECⅡ数均显著高于空气组（P<0.01），RA具有明显下调作用；同时，高氧暴露显著提高AECⅡ 磷酸化ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及caspase-3活性片段表达（P<0.01），明显降低其PCNA表达（P<0.01）；RA则显著下调高氧暴露下AECⅡ磷酸化JNK1/2和p38表达以及caspase-3活化片段表达（P<0.01），明显提高磷酸化ERK1/2和PCNA表达（P<0.01）。结论：高氧暴露，导致AECⅡ大量凋亡、坏死，增殖受到抑制；RA通过下调JNK1/2和p38磷酸化水平、上调ERK1/2磷酸化水平，降低AECⅡ坏死、凋亡，促进其增殖，从而发挥拮抗高氧肺损伤的作用。     

低氧化应激下肿瘤坏死因子α过表达对牙髓干细胞生物学性能的影响

目的 探讨低氧化应激下肿瘤坏死因子α(TNF-α)过表达对牙髓干细胞(DPSCs)生物学性能的影响.方法 实验分组为常氧DPSCs组、常氧空载转染组、常氧TNF-α过表达组、DPSCs 3％O2组、空载DPSCs 3％O2组、TNF-α过表达3％O2组.牙髓干细胞复苏并培养,然后将慢病毒TNF-α转染细胞置于37℃、C...     

枸橼酸铁铵通过提高ROS水平激活MAPK通路并诱导成骨细胞凋亡

 目的：探讨铁超载提高人成骨细胞(hFOB1.19)活性氧（ROS）水平在激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路和诱导细胞凋亡中的作用。方法：采用细胞贴壁法培养成骨细胞hFOB1.19,将不同浓度枸橼酸铁铵(100、300、500 μmol/L)加入细胞培养基,用MTT法检测成骨细胞增殖活性;DCFH-DA荧光探针检测成骨细胞ROS水平;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blotting检测MAPK通路相关蛋白。结果：枸橼酸铁铵处理成骨细胞后,细胞增殖活性明显降低,早期凋亡和总死亡率显著增加;不同浓度的枸橼酸铁铵处理成骨细胞后,其ROS水平分别增高至(35.73±2.52)%、(62.89±4.24)%和(76.06±3.55)%,MAPK通路相关蛋白的表达也明显增加并呈剂量效应关系,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以在降低ROS水平及MAPK通路相关蛋白表达的同时抑制枸橼酸铁铵所致的细胞凋亡。结论：枸橼酸铁铵能使成骨细胞增殖受到抑制,并且通过增加细胞内ROS水平,激活MAPK通路,诱导成骨细胞凋亡。     

转录因子Nrf2/Bach1及MAPK激酶调控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的： 研究转录因子红系衍生核因子相关因子-2(Nrf2)及 BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中的表达,探索其感受氧化应激调控谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的可能机制。方法: 复制慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型,通过免疫组化、Western blotting、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术研究肺组织Nrf2、Bach1、γ-GCS　mRNA及其蛋白和p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果： 免疫组化结果显示COPD组p-ERK、p-p38、γ-GCS、Nrf2蛋白水平较对照组升高（P<0.01）,而Bach1、p-JNK蛋白水平无差异（P>0.05）;Western blotting结果显示COPD组p-ERK、p-JNK、Nrf2核蛋白质水平较对照组升高（P<0.01）,Bach1、p-p38浆蛋白水平较对照组升高(P<0.01）而Bach1 核蛋白水平较对照组降低(P<0.01）;RT-PCR结果显示,COPD组Nrf2、 Bach1 mRNA水平较对照组无差异（P>0.05）, 而γ-GCS mRNA水平升高（P<0.01）;直线相关分析结果表明,γ-GCS mRNA表达水平与Nrf2、p-ERK、p-p38总蛋白质水平,Nrf2、p-ERK、p-JNK核蛋白水平和Bach1、p-p38浆蛋白质水平均呈正相关（P<0.01）,而与Bach1 核蛋白质水平呈负相关（P<0.01）;Nrf2 核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈正相关（P<0.01）,而Bach1 核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈负相关（P<0.01）。结论: 在慢性阻塞性肺疾病的发病过程中转录因子Nrf2 /Bach1可能在核内竞争反向调节抗氧化基因γ-GCS的表达; 信号转导蛋白p-ERK、p-JNK在调控Nrf2 /Bach1核内平衡中起重要作用,且调控主要发生在转录后水平;γ-GCS可能还存在其它转录调节机制。